再生障碍性贫血外周血Th17和CD4~+ CD25~+ Treg细胞表达情况研究

本研究旨在探讨成人再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)外周血Th17和CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)表达情况。45例初发AA患者分为轻型AA(n=25)和重型AA(n=25)两组,15例正常人作为对照。应用流式细胞术检测AA患者外周血中Th17和CD4+CD25+Treg的比例,ELISA检测血清及刺激后外周血单个核细胞(PBMNC)上清液中的白介素(IL-17)、γ干扰素(IFN-γ)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,并与正常对照组比较。结果表明:重型AA(SAA)组外周血Th17细胞比例,血清中IL-17及IFN-γ表达高于轻型AA(MAA)和正常人组,而重型AA组外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例降低。与轻型AA和正常对照相比,重型AA患者单个核细胞培养后上清液中IL-17及IFN-γ表达水平显著增加。AA患者血红蛋白计数与Th17细胞及血清IL-17表达呈负相关,与CD4+CD25+Treg表达成正相关。结论:重型AA患者外周血Th17细胞应答增强,而CD4+CD25+Treg细胞缺乏,贫血的严重程度与外周血Th17/Treg免疫应答失衡密切相关。     

桥本甲状腺炎患者外周血CD4~+ CD25~+ Foxp3~+调节性T细胞及IL-10的检测及临床意义

目的评价检测桥本甲状腺炎(HT)患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞(Treg)及白细胞介素-10(IL-10)的临床意义。方法选择30例临床确诊初次发病HT患者作为观察组,另选择30例同时期年龄、性别匹配的健康体检者作为对照组,均抽取空腹静脉血,采用流式细胞术测定外周血CD4~+CD25~+Treg占CD4~+T细胞的百分比、CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg占CD4~+T细胞的百分比以及CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg占CD4~+CD25~+Treg的百分比,采用酶联免疫吸附实验检测IL-10水平。结果两组的外周血CD4~+CD25~+Treg占CD4~+T细胞的百分比差异无统计学意义(P0.05);观察组的外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg占CD4~+T细胞的百分比、CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg占CD4~+CD25~+Treg的百分比均明显低于对照组(P0.05);观察组的IL-10水平显著低于对照组(P0.05)。结论桥本甲状腺炎患者的外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞比例、IL-10水平低于健康人群;推测CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg、IL-10可能参与了桥本甲状腺炎的发病。     

甲状腺乳头状癌患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞及T-钙粘蛋白的检测及临床意义

目的研究CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞(Treg)与T-钙黏蛋白在甲状腺乳头状癌(PTC)外周血中的水平及临床意义。方法采用回顾性研究方法,选取PTC患者40例(观察组)以及甲状腺腺瘤患者40例(对照组)。对比两组患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞比率及T-钙黏蛋白水平;对比不同病理特征下CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞比率及T-钙黏蛋白水平有无差异。结果 PTC组患者CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞比率及T-钙黏蛋白水平均明显高于对照组(P0.05),TNMⅢ、Ⅳ期与存在颈部淋巴结转移的PTC患者CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞与T-钙黏蛋白水平均明显升高(P0.05)。结论 CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞与T-钙黏蛋白可以作为PTC的标志物,同时与患者临床分期以及淋巴结转移有密切的相关性。     

慢性阻塞性肺疾病患者外周血Th17/CD25+Foxp3+Treg比率的变化

目的:研究慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)患者外周血中CD25~+Foxp3~+Treg和Th17细胞介导的免疫失衡与该疾病进展之间的相关性。方法:选择2012年1月至2015年3月在上海市闵行区江川社区及复旦大学附属上海市第五人民医院接受门诊或住院治疗的稳定期和急性发作期COPD患者共69例,同时收集吸烟或不吸烟的健康对照者各20例。测定受试者的肺功能。采用流式细胞术测定受试者外周血中Th17和CD25~+Foxp3~+Treg占CD4~+细胞的百分比,分析Th17/CD4~+和CD25~+Foxp3~+Treg/CD4~+比率以及Th17/CD25~+Foxp3~+Treg比值在不同分组中的变化及其临床意义。结果:与健康对照组相比,稳定期COPD患者外周血中Th17/CD4~+和Th17/CD25~+Foxp3~+Treg明显升高(P0.05),而CD25~+Foxp3~+Treg/CD4~+明显降低(P0.05);急性发作期COPD患者的Th17/CD4~+、CD25~+Foxp3~+Treg/CD4~+和Th17/CD25~+Foxp3~+Treg均比对照组明显升高(P0.05)。轻度、中度、重度和极重度的COPD患者中Th17/CD4~+和Th17/CD25~+Foxp3~+Treg逐步升高(P0.05),而CD25~+Foxp3~+Treg/CD4~+逐步降低(P0.05);COPD患者的Th17/CD4~+和Th17/CD25~+Foxp3~+Treg与肺功能负相关(P0.05),CD25~+Foxp3~+Treg/CD4~+与肺功能正相关(P0.05)。结论:Th17/CD25~+Foxp3~+Treg失衡参与了COPD的疾病进展过程,提示Th17/CD25~+Foxp3~+Treg免疫调节治疗可能成为COPD治疗的新途径。     

Th9、Th17、CD4~+CD25~+FoxP3~+调节性T细胞在慢性淋巴细胞白血病患者外周血中的变化

目的探讨慢性淋巴细胞白血病患者外周血中Th9、Thl7和CD4~+CD25~+FoxP3~+调节性T细胞及相关细胞因子的表达水平及意义。方法采用流式细胞仪检测36例CLL患者和45例健康对照组外周血Th9、Th17和Treg细胞的表达率,采用酶联免疫吸附方法(ELISA)检测外周血中细胞因子IL-9、IL-17、TGF-β的表达水平。结果 1)CLL组患者外周血Th9、Th17细胞比例及细胞因子IL-9、IL-17浓度均明显高于健康对照组[(1.29±0.35)%vs(0.74±0.23)%,P0.05;(2.15±0.46)%vs(1.08±0.37)%,P0.05;(24.25±7.05)%vs(16.35±5.42)%,P0.05;(11.47±3.99)%vs(7.36±2.85%),P0.05]。CD4~+CD25~+FoxP3~+细胞比例及细胞因子TGF-β浓度明显低于对照组[(4.76±0.89)%vs(7.26±1.95)%,P0.05;(3.82±1.39)%vs(6.82±2.01)%,P0.05]。2)相关性分析:患者Th9、Th17细胞比例及IL-9、IL-17浓度与淋巴细胞计数负相关(γ_s=-0.374,P=0.034;γ_s=-0.382,P=0.032;γ_s=-0.445,P=0.011;γ_s=-0.413,P=0.024);患者Treg细胞比例及TGF-β浓度与淋巴细胞计数正相关(γ_s=0.416,P=0.023;γ_s=0.403,P=0.028)。结论慢性淋巴细胞白血病患者Th9、Th17与CD4~+CD25~+FoxP3~+调节性T细胞比例失衡,血清IL-9、IL-17和TGF-β水平变化,这些原因可能参与慢性淋巴细胞白血病的免疫发病过程。     

胃癌CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞的异常增高与患者免疫抑制状态的相关性分析

目的:探讨CD4+CD25+Foxp3+调节性T(Treg)细胞在胃癌患者血清及腹腔冲洗液(或积液)中异常增高与机体免疫状态的关系。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测胃癌患者血清和腹腔冲洗液中IFN-γ、IL-4细胞因子的水平。利用多参数流式细胞仪分析56例胃癌患者术前的外周血和肿瘤组织浸润淋巴细胞(TIL)中Treg细胞及CD8+T细胞[又称细胞毒T淋巴细胞(CTL)]的比率。另检测12例胃癌患者手术前后外周血Treg细胞的比率变化。结果:相对于健康对照组,胃癌患者血清Th1/Th2比例降低,差异有统计学意义(P<0.05)。胃癌患者外周血中的Treg细胞比率明显高于健康对照组,晚期患者高于早期患者,差异有统计学意义(P均<0.05);TIL中Treg比率明显高于外周血(P<0.05)。12例患者肿瘤切除后Treg细胞比率明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:胃癌患者血清及肿瘤组织中Treg细胞的比率随肿瘤进展而升高;Treg细胞比率升高和CTL降低可能参与肿瘤细胞的免疫逃逸。     

慢性淋巴细胞白血病患者外周血Th17和Treg细胞比率的平衡关系研究

本研究通过检测慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者外周血中Th17和CD4+CD25+Foxp3+调节性T(Treg)细胞的比率及其平衡关系,探讨其在CLL发病机制中的作用及临床意义。CLL患者根据外周血淋巴细胞计数及治疗情况,分为初发组30例和治疗后缓解组15例,另设健康对照20例。用流式细胞术(FCM)检测CLL患者和健康对照者外周血中T细胞亚群及Th17和CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞占CD4+T细胞的比率。结果显示,初发组CLL患者外周血CD3+CD4+T细胞和Th17细胞的比率均明显高于健康对照组(P<0.05),CD3+CD8+T细胞和CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞表达率明显低于健康对照组(P<0.05),Th17/Treg细胞比值明显高于健康对照组(P<0.05);缓解组CLL患者Th17细胞比率与健康对照组相当,而CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞表达率明显低于健康对照组(P<0.05),Th17/Treg细胞比值明显高于健康对照组(P<0.05);缓解组CLL患者Th17细胞比率显著低于初发组(P<0.05)。结论:CLL患者外周血T细胞紊乱以CD4+T细胞的增加为主,Th17细胞比率增加和CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比率降低导致Th17/Treg细胞比率失衡,该免疫失衡在CLL的发生发展中可能起重要作用。     

外周血Th17及CD4~+CD25~+FoxP3~+调节性T细胞失衡与不明原因反复自然流产的相关性研究

目的观察不明原因反复自然流产(URSA)孕妇外周血Th17与CD4+CD25+FoxP3+调节性T细胞比例的变化,探讨Th17/T细胞比例失衡在URSA孕妇发病机制中的作用。方法选择36例URSA孕妇为实验组,健康早孕妇女40例为对照组,应用流式细胞仪检测Th17与CD4+CD25+FoxP3+T细胞的比例,应用ELISA法检测IL-6、TGFβ-和IL-17的水平。结果 URSA孕妇外周血中,CD3+CD8-IL-17+T细胞占CD3+T淋巴细胞的百分比高于对照组,P<0.05;CD4+CD25+FoxP3+T细胞占CD4+T淋巴细胞的百分比明显低于对照组,P<0.05。相关细胞因子测定结果显示,IL-6、IL-17水平在URSA孕妇血清中均明显升高,TGF-β水平在2组间比较,差异无统计学意义。结论外周血Th17与CD4+CD25+FoxP3+调节性T细胞的比例及相关细胞因子数量的异常可能下调母胎免疫耐受功能,参与URSA的发生。     

外周血CD4~+CD25~(high) Treg比例变化对ALL预后判断的价值

目的探讨急性淋巴细胞白血病(ALL)患者治疗前、后外周血CD4~+CD25~(high)调节性T细胞(Treg)比例的变化。方法采用流式细胞术检测22例ALL患者治疗前及用长春新碱+柔红霉素+环磷酰胺+泼尼松(VDCP)方案治疗后的外周血CD4~+CD25~(high)Treg比例。对所有患者随访5年,将13例持续完全缓解(CR)者作为CR组,将9例未缓解(NR)或缓解后5年内复发者作为NR组,以20名体检健康者作为正常对照组。结果与正常对照组比较,ALL组治疗前、后外周血CD4~+CD25~(high )Treg比例均升高(P0.05),CR组治疗前外周血CD4~+CD25~(high)Treg比例明显升高(P0.001),NR组治疗前则差异无统计学意义(P0.05)。ALL组治疗后外周血CD4~+CD25~(high)Treg比例稍低于治疗前,但差异无统计学意义(P0.05)。CR组治疗后外周血CD4~+CD25~(high)Treg比例明显低于治疗前(P0.01),接近于正常对照组(P0.05)。NR组治疗后外周血CD4~+CD25~(high)Treg比例明显高于治疗前(P0.01),且明显高于正常对照组(P0.001)。结论外周血CD4~+CD25~(high)Treg或许可作为ALL患者疗效监测的指标。     

肿瘤微环境中CD4~+Foxp3~+Treg对鼻咽癌患者预后影响

目的探讨肿瘤微环境中CD4~+Foxp3~+Treg对鼻咽癌患者的预后影响。方法选取2011年2月-2013年2月于我院收治的127例鼻咽癌患者为研究对象,应用流式细胞仪检测两组血清CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+以及Th17在CD4~+T细胞比例等指标,依据CD4~+/CD8~+值分为正常组以及异常组,并应用免疫组化法检测患者癌组织CD4、Foxp3以及IL-17,另依据CD4~+Foxp3~+Treg表达水平划分为低表达组与高表达组,应用Kaplan-Meier法比较生存情况并进行预后的多因素分析。结果异常组CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+、Th17在CD4~+T细胞比例显著低于正常组,CD8~+显著高于正常组(P0.05);CD4~+Foxp3~+Treg与患者无瘤生存时间呈显著正相关(P0.05),与总体生存时间呈正相关,但无统计学意义(P0.05);CD4~+/CD8~+异常患者的5年总生存率67.95%显著低于正常患者5年总生存率89.80%(P0.05);T分期、CD4~+/CD8~+表达水平以及Th17是影响鼻咽癌预后的独立影响因素(P0.05);CD4~+Foxp3~+Treg与肿瘤转移复发密切相关(P0.05)。结论鼻咽癌患者CD4~+/CD8~+、Th17水平明显降低,其水平异常表达可严重影响患者预后,肿瘤间质中CD4~+Foxp3~+Treg细胞数量增多与预后呈正相关,并与肿瘤转移复发密切相关。     

麻风溃疡患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞水平及临床意义

目的探讨CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞(Treg)在麻风溃疡发病中的作用。方法选取60例麻风溃疡患者作为试验组,同期匹配麻风病未合并溃疡的患者57例作为对照组及体检健康者68例为健康人组,采用流式细胞仪检测在治疗前(或入组时)、治疗后4周(对照组和健康人组为入组后4周)3组研究对象外周血的CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg占CD4~+T细胞的百分比。结果试验组在治疗后4周的CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg比例明显低于治疗前,差异有统计学意义(P0.05),在治疗前和治疗后4周试验组的CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg比例均明显高于同时间点的对照组和健康人组,差异均有统计学意义(P0.05),对照组的CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg比例也明显高于健康人组,差异均有统计学意义(P0.05)。合并复杂性溃疡的麻风患者其外周血的CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg比例在治疗前和治疗后均显著高于合并单纯性溃疡的麻风患者,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg的表达失衡可能参与了麻风溃疡的发生、发展。     

过继妊娠诱导的CD4+CD25+调节性T细胞治疗不明原因复发性流产

目的 观察过继转输正常妊娠诱导的CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)对不明原因流产的作用机制及妊娠预后的影响.方法 以雌性CBA/J×雄性BALB/c为正常妊娠模型,以雌性CBA/J×雄性DBA/2J为自然流产模型,磁珠分选雌性CBA/J小鼠脾脏CD4+CD25+Treg细胞并流式细胞术(flow cytometry,FCM)分析细胞纯度.将未孕CD4+CD25+Treg细胞和正常妊娠孕14d的CD4+CD25+Treg分别转输至流产模型孕4d(着床期)的雌性CBA/J孕鼠,于孕14d分别观察宿主孕鼠的胚胎吸收率并测定宿主外周血和母胎界面组织体外培养上清液中Th1Th2/Th3型细胞因子(IFN-γ/TGF-βI/IL-10)水平.结果 与对照组比较,过继转输正常妊娠诱导的CD4+CD25+Treg细胞的宿丰孕鼠的胚胎吸收率(11.32%)显著下降;外周血TGF-β 1/IFN-γ中位数(438)和IL-10/IFN-γ中位数(14)显著增加;母胎界而上TGF-β 1中位数(5899.02pg/mL)和IL-10中位数(158.85pg/mL)显著增加,IFN-γ中位数(18.46 pg/mL)显著下降.结论 孕早期过继转输正常妊娠诱导的CD4+CD25+Treg细胞疗法能诱导宿主母胎免疫耐受并调节细胞因子表达,有利于妊娠维持的Th2、Th3应答偏移.     

外周血CD4~+CD25~+Treg、CD3~+、NK+Caspase-8~+在免疫性血小板减少性紫癜患者中的检测意义

目的探究外周血CD4~+CD25~+Treg、CD3~+、NK+Caspase-8~+在免疫性血小板减少性紫癜(ITP)患者中的检测意义。方法选取2019年10月～2020年1月我院收治30例ITP患者设为观察组。同期纳入30例健康志愿者设为对照组,比较两组外周血CD4~+CD25~+Treg、CD3~+、NK+Caspase-8~+水平,并采用Pearson法分析上述指标与血小板计数相关性。结果观察组外周血CD4~+CD25~+Treg、CD3~+低于对照组,NK+Caspase-8~+水平高于对照组(P0.05);经Pearson相关性分析提示,血小板计数与外周血CD4~+CD25~+Treg、CD3~+水平呈正相关,与NK+Caspase-8~+水平呈负相关(P0.05)。结论 ITP患者外周血CD4~+CD25~+Treg、CD3~+水平降低,NK+Caspase-8~+呈高表达状态,提示ITP的发生发展与细胞免疫调控异常、凋亡信号异常密切相关,为临床治疗提供有力依据。     

致敏小鼠CD4~+ CD25~+调节性T细胞磁珠分选及体外扩增

本研究探讨致敏小鼠CD4+ CD25+调节性T细胞的分选及体外扩增。流式细胞术检测致敏小鼠及正常小鼠体内CD4+ CD25+ Treg细胞水平,免疫磁珠分选方法从小鼠脾细胞中分选出CD4+T细胞、CD4+ CD25+ Treg细胞和CD4+ CD25-T细胞,负载抗CD3/CD28单克隆抗体MACSiBead联合IL-2共同刺激CD4+ CD25+ Treg细胞进行体外扩增培养,用0.4%台盼蓝染色并计数检测细胞的活性,流式细胞术检测分选后细胞纯度、主要表面标记及Foxp3基因的表达。结果表明:致敏小鼠体内CD4+ CD25+ Treg水平较正常小鼠升高(P<0.05)。分选出CD4+ CD25+ Treg细胞纯度平均达到87%,细胞活性大于97%,高表达Foxp3基因。体外扩增2周后细胞数扩增倍数能够达到42倍,CD4+ CD25+ Treg细胞所占比例为85.32%,Foxp3表达由(76.92±1.72)%稍下降至(75.33±2.11)%(P>0.05)。结论:免疫磁珠分选法能够分选出高纯度的CD4+ CD25+ Treg细胞,该分选方法不影响分选靶细胞的细胞活力;体外成功扩增了CD4+ CD25+ Treg细胞,扩增后的CD4+ CD25+ Treg细胞表面标记及Foxp3基因表达无明显改变。     

胸腺基质淋巴细胞生成素诱导重症肌无力患者胸腺CD4~+CD25~-T细胞向CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞分化

目的:探索胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)对重症肌无力(MG)合并胸腺异常患者胸腺CD4+CD25-T细胞诱导生成CD4+CD25+Foxp3+调节性T(Treg)细胞的研究。方法:以磁珠分选的方法得到胸腺CD4+CD25-T细胞及树突状细胞(DC)细胞,通过不同浓度(0.1、1、10、20 ng/m L)的TSLP活化DC后诱导CD4+CD25-T细胞向CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞分化,以流式细胞术检测CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞/CD4+T细胞比率;RT-PCR检测Foxp3 m RNA表达;Western blot法检测上调的CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的Foxp3蛋白表达;ELSIA法检测培养上清IL-10的含量。结果:10 ng/m L TSLP组、20 ng/m L TSLP组经诱导后CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞/CD4+T细胞比例均明显升高,Foxp3的表达水平也相应增加,IL-10水平升高,与PBS对照组相比差异有统计学意义(P0.05)。结论:TSLP可以诱导MG合并胸腺异常患者胸腺CD4+CD25-T细胞向CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞分化,并促进Foxp3的表达。     

CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞增龄性变化及其与老年肺癌的关系

目的探讨CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)的增龄性变化及其与老年肺癌发生、发展的关系。方法肺癌患者70例和体检健康者60例,分别按年龄(青年18~45岁、中年45~60岁、老年60岁)分为青年肺癌组21例、中年肺癌组25例、老年肺癌组24例和青年健康组20例、中年健康组20例、老年健康组20例。采用流式细胞分析法测定各组外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg占CD4~+T细胞的百分率,采用实时荧光定量PCR法测定功能基因Foxp3 mRNA的相对表达量;分析肺癌患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞百分率与临床特征的关系。结果老年肺癌组外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞占CD4~+T细胞百分率[(11.81±2.40)%]及Foxp3 mRNA相对表达量(3.14±1.30)高于中年肺癌组[(11.25±1.84)%、2.53±1.16]和青年肺癌组[(9.05±2.14)%、2.28±1.21],中年肺癌组高于青年肺癌组(P0.05);老年健康组外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞占CD4~+T细胞百分率[(9.82±1.19)%]及Foxp3mRNA相对表达量(2.67±0.99)高于中年健康组[(7.81±1.16)%、1.76±0.80]和青年健康组[(6.23±0.91)%、1.17±0.51],中年健康组高于青年健康组(P0.05);相同年龄段,各肺癌组中CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞占CD4~+T细胞百分率及Foxp3 mRNA相对表达量均明显高于各健康组(P0.05);肺癌患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞占CD4~+T细胞百分率在肺癌分期、有无淋巴结转移上差异有统计学意义(F=28.660,P=0.002;t=21.084,P0.001),在不同性别、病理类型上差异无统计学意义(t=2.330,P=0.120;F=0.020,P=0.980)。结论 CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞的增龄性变化可能是导致老年肺癌发生、发展的原因之一。     

CD4~+及CD8~+T淋巴细胞预测人类免疫缺陷病毒感染患者抗反转录病毒治疗效果的价值

目的探讨人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染患者接受抗反转病毒治疗(antiretroviral therapy,ART)前CD4~+及CD8~+T淋巴细胞表达水平在免疫重建效果预测中的价值。方法 HIV感染患者48例,分别于ART治疗前及治疗6个月后采用实时荧光定量PCR技术检测HIV-RNA,观察HIV-RNA转阴情况;采用流式细胞技术检测CD4~+T淋巴细胞、CD8~+T淋巴细胞,观察CD4~+T淋巴细胞上升情况;比较治疗6个月后HIV-RNA转阴与未转阴组,CD4~+T淋巴细胞上升与未上升组治疗前Th1、Th2、Th17、调节性T(regulatory,Treg)细胞、CD4~+T淋巴细胞、CD8~+T淋巴细胞百分比及Th1/Treg、Th2/Treg、Th17/Treg、Th1/Th17、Th2/Th17、Th1/Th2、CD4~+/CD8~+淋巴细胞比值等指标;绘制ROC曲线,分析治疗前CD4~+T淋巴细胞组成预测ART治疗6个月后HIV-RNA阴转、CD4~+T淋巴细胞上升的效能。结果 ART治疗6个月后失访22例,余26例中HIV-RNA转阴22例、未转阴4例,CD4~+T淋巴细胞上升22例、未上升4例;HIV-RNA转阴组治疗前Th17细胞百分比[(6.89±5.23)%]、CD4~+/CD8~+(0.44±0.29)高于HIV-RNA未转阴组[(1.47±1.26)%、0.14±0.09],Th2/Th17(1.80±1.32)低于HIV-RNA未转阴组(4.22±0.63)(P0.05);CD4~+T淋巴淋巴细胞上升组治疗前Th17细胞百分比[(6.62±5.24)%]、CD4~+/CD8~+(0.47±0.29)高于CD4~+T淋巴细胞未上升组[(2.05±1.68)%、0.13±0.08],Th2/Th17(1.66±0.88)低于CD4~+T淋巴细胞未上升组(4.81±1.27)(P0.05);治疗前Th17细胞百分比、Th2/Th17、CD4~+/CD8~+预测治疗后6个月HIV-RNA转阴的AUC分别为0.850(95%CI:0.688~1.000,P0.001)、0.933(95%CI:0.827~1.000,P0.001)、0.817(95%CI:0.614~1.000,P0.001),最佳截断值分别为3.06%、2.45、0.628,灵敏度分别为97.0%、66.7%、98.0%,特异度分别为72.3%、90.9%、71.4%;预测治疗后6个月CD4~+T淋巴细胞上升的AUC分别为0.768(95%CI:0.567~0.969,P0.001)、0.976(95%CI:0.918~1.000,P0.001)、0.875(95%CI:0.730~1.000,P0.001),最佳截断值分别为3.35%、2.45、0.268,灵敏度分别为56.2%、91.3%、77.3%,特异度分别为96.8%、96.2%、97.1%。结论 Th17细胞百分比、Th2/Th17、CD4~+/CD8~+在预测ART治疗短期内免疫重建效果中有一定价值。     

CD4~+CD25~(high)CD127~(low)调节性T细胞促进上皮性卵巢癌转移机制的初步探讨

目的探讨CD4~+CD25~(high)CD127~(low)调节性T细胞(Treg)在上皮性卵巢癌(EOC)转移中的作用及相关细胞因子涉及的信号机制。方法采用流式细胞术检测34例EOC患者(EOC组)、26例卵巢良性肿瘤患者(卵巢良性肿瘤组)和34名体检健康者(正常对照组)外周血CD4~+CD25~(high)CD127~(low)Treg的比例。收集所有患者的临床资料,包括年龄、病理类型、国际妇产科联合会(FIGO)分期、组织学分化情况、淋巴结转移情况。建立正常对照者CD4+T细胞与EOC细胞株OVCAR3的共培养模型,并采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素10(IL-10)和转化生长因子β1(TGF-β1)水平。采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测OVCAR3细胞中基质金属蛋白酶(MMP)-2 mRNA和基质金属蛋白酶抑制因子(TIMP)-2 mRNA的表达。采用抗IL-10受体抗体和抗TGF-β1受体抗体作为阻断剂,预处理OVCAR3细胞后再进行共培养,并检测MMP-2 mRNA和TIMP-2 mRNA的表达。结果 EOC组外周血CD4~+CD25~(high)CD127~(low)Treg明显高于卵巢良性肿瘤组和正常对照组(P0.05),而卵巢良性肿瘤组与正常对照组之间差异无统计学意义(P0.05)。淋巴结转移阳性EOC患者外周血CD4~+CD25~(high)CD127~(low)Treg比例明显高于淋巴结转移阴性患者(P0.05),而不同年龄、病理类型、FIGO分期及组织学分化情况的EOC患者之间CD4~+CD25~(high)CD127~(low)Treg比例差异均无统计学意义(P0.05)。共培养后CD4+T细胞分泌的IL-10和TGF-β1水平明显高于CD4+T细胞单独培养(P0.05)。与OVCAR3细胞单独培养相比,共培养后的OVCAR3细胞中MMP-2 mRNA表达明显升高(P0.05),TIMP-2 mRNA明显降低(P0.05)。采用阻断剂预处理后共培养的OVCAR3细胞MMP-2 mRNA表达下调(P0.05)、TIMP-2 mRNA表达上调(P0.05)。结论 CD4~+CD25~(high)CD127~(low)Treg可增强IL-10和TGF-β1的表达,并作用于EOC细胞的相关受体,可能对EOC侵袭、转移起重要作用。     

宫颈癌患者外周血CD4~+CD25~+调节性T淋巴细胞与白细胞介素-17水平及其相关性研究

目的探讨外周血CD4~+CD25~+调节性T淋巴细胞(Tr细胞)和白细胞介素-17(IL-17)水平在宫颈癌患者中的变化及其相关性。方法选取2014年1月至2015年3月该院确诊宫颈癌患者60例(宫颈癌组)和查体的健康女性60例(健康对照组),采用流式细胞仪检测外周血Tr细胞数量及占CD4~+细胞百分比,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清IL-17水平。结果宫颈癌组外周血Foxp3~+Tr、Tr、CD4~+T淋巴细胞百分比,Foxp3~+Tr/Tr、Tr/CD4~+T淋巴细胞比值及血清IL-17水平均较健康对照组明显升高,而IL-17/Tr比值明显下降,差异有统计学意义(P0.05)。宫颈癌组患者外周血CD4~+CD25~+Tr细胞水平与血清IL-17水平呈正相关(r=0.768,P0.05)。结论宫颈癌患者存在细胞免疫功能紊乱,IL-17与Tr细胞比值失衡可能在宫颈癌发病机制中起一定的作用。     

CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞与急性移植物抗宿主病的关系

背景：CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞具有免疫抑制作用,推测可能减少异基因造血干细胞后急性移植物抗宿主病的发生率。目的：观察粒细胞集落刺激因子动员前后,供者外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞比率变化,并探讨CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞与异基因造血干细胞移植后发生急性移植物抗宿主病的关系。方法：以异基因造血干细胞移植受者90例及其供者为研究对象,供者皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子(5μg/kg),1次/12 h,连续5 d后,采集干细胞;分别于动员前后采集供者外周血,流式细胞仪检测其中CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞含量,及受者接受移植物中此类细胞含量;根据接受CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞数分为高剂量组(细胞比例≥5%)及低剂量组(细胞比例<5%),比较两组移植后急性移植物抗宿主病的发生率。结果与结论：供者在应用粒系集落刺激因子动员前后CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞比例分别为11.3%和1.5%,差异有显著性意义(P<0.05);急性移植物抗宿主病阳性组所接受移植物中该群细胞比例为3.4%,阴性组为15.7%,差异有显著性意义(P <0.05);移植造血重建后高剂量组急性移植物抗宿主病的发生率为18.4%,低剂量组急性移植物抗宿主病的发生率为48.1%,二者差异有显著性意义(P<0.05)。因而,粒系集落刺激因子应用能降低正常人外周血中CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞比例;CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞增加可以降低急性移植物抗宿主病的发生率。