miR-29a靶向调控IFITM3表达对肝癌HepG2细胞生长、增殖和凋亡的影响

目的探究微小RNA-29a(miR-29a)靶向调控干扰素诱导跨膜蛋白3(IFITM3)表达对肝癌HepG2细胞生长、增殖和凋亡的影响。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测肝癌细胞HepG2和正常肝细胞株LO2中miR-29a的表达水平;采用脂质体法将miR-29a minmic及阴性对照转染至HepG2细胞,并分为过表达组和对照组,转染48 h后用QRCR法检测两组miR-29a水平;采用MTT法和流式细胞术检测各组细胞增殖及凋亡情况; Western blotting检测各组Bax、caspase-3凋亡相关基因及IFITM3的表达;采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-29a对IFITM3的靶向调控作用。结果肝癌HepG2细胞miR-29a水平低于正常LO2细胞(P 0. 05);过表达组HepG2细胞miR-29a表达低于对照组(P 0. 05);过表达组HepG2细胞增殖率低于对照组(P 0. 05),凋亡率及Bax、caspase-3、IFITM3表达高于对照组(P 0. 05); miR-29a可显著抑制野生型FITM3-3'UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性(P 0. 05),但其对突变型FITM3-3'UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性无显著影响(P 0. 05)。结论 miR-29a在肝癌中表达降低,可靶向调控IFITM3表达,抑制肝癌细胞生长、增殖,并促进其凋亡,可作为肝癌的潜在治疗靶点。     

黄芩苷诱导HL-60细胞凋亡的分子机制研究

本研究旨在探讨黄芩苷对急性髓系白血病HL-60细胞增殖及凋亡的影响及其作用机制。CCK-8法检测黄芩苷对HL-60细胞增殖抑制情况;普通光学显微镜和Hoechst 33342染色后荧光显微镜下观察细胞形态学变化;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR方法检测凋亡相关基因caspase-3、caspase-9、Bcl-2、Bax mRNA表达;Westernblot检测Bcl-2、Bax、caspase-8及caspase-3剪切片段的蛋白表达。结果表明,黄芩苷对HL-60细胞具有明显的增殖抑制作用,呈浓度和时间依赖性;在光学显微镜和荧光显微镜下细胞均呈凋亡的形态学改变;AnnexinⅤ/PI法检测到细胞早期凋亡;caspase-3、caspase-9、Bax基因mRNA表达水平呈上升趋势,Bcl-2 mRNA表达水平呈下降趋势,Bax、caspase-8及capsase-3剪切片段蛋白表达上调,同时Bcl-2蛋白表达下调,Bcl-2/Bax比值降低。结论:黄芩苷显著抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与降低Bcl-2/Bax比值,激活线粒体凋亡途径及死亡受体途径有关。     

LncRNA NORAD靶向抑制miR-363-3p对多发性骨髓瘤细胞生物学行为的影响及机制

目的:探索长链非编码RNA NORAD(lncRNA NORAD)对多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响及其与微小RNA-363-3p(miR-363-3p)的靶向关系。方法:RT-qPCR检测健康人成骨细胞h FOB1.19和多发性骨髓瘤细胞U266,LP-1,H929中NORAD和miR-363-3p表达。在U266细胞中转染si-NORAD,或共转染si-NORAD和anti-miR-363-3p,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达。star Base软件预测结合双荧光素酶报告实验分析NORAD与miR-363-3p的靶向结合。结果:多发性骨髓瘤细胞系U266,LP-1和H929中NORAD表达明显上调(P0.05),miR-363-3p表达显著下调(P0.05)。沉默NOR A D表达显著降低48,72h的U266细胞活性和c yclin D1,CDK4,Bcl-2蛋白水平(P0.05),明显提高细胞凋亡率和cleaved caspase-3,Ba x蛋白表达量(P0.05)。NOR AD靶向调控miR-363-3p表达。抑制miR-363-3p表达逆转沉默NOR AD表达对U266细胞增殖、cyclin D1,CDK4和Bcl-2表达的抑制作用,以及逆转沉默NORAD表达对细胞凋亡、cleaved caspase-3和Bax蛋白表达的促进作用。结论:Lnc RNANOR AD通过靶向miR-363-3p表达影响多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡。     

二甲双胍诱导人胎盘绒毛癌细胞系JAR凋亡的机制初探

目的探索二甲双胍诱导人胎盘绒毛癌细胞系JAR凋亡的作用机制。方法将JAR细胞分为对照组和二甲双胍处理组(终浓度5、10、20、40、80mmol/L)处理24h后选取合适的药物浓度。激光共聚焦显微镜检测细胞凋亡,分别采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和免疫蛋白印记(Western blot)检测凋亡相关基因AMPK,p-AMPK,mTOR,Caspase-3,Bcl-2和Bax的变化趋势。结果 40mmol/L的二甲双胍处理能够引发JAR细胞凋亡,并且激活AMPK的磷酸化并下调mTOR的蛋白水平;同时上调Caspase-3和Bax的mRNA及蛋白水平,并且下调Bcl-2的mRNA和蛋白表达,降低Bcl-2和Bax的蛋白水平比例。结论二甲双胍可能是通过AMPK/mTOR和Caspase-3及Bcl-2/Bax两个通路的共同作用诱导JAR细胞发生凋亡。     

MiR-146b在白藜芦醇保护缺氧/复氧心肌细胞损伤中的作用及其机制

目的:探讨miR-146b在白藜芦醇保护缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)心肌细胞损伤中的作用及其机制。方法:将体外培养的心肌细胞分为正常组、H/R组、白藜芦醇组、白藜芦醇+antimiR-NC组和白藜芦醇+anti-miR-146b组。采用荧光定量PCR检测miR-146b的表达,ELISA法检测细胞上清液中IL-1β,TNF-α和IL-6含量,MTT法检测细胞存活率,比色法检测LDH漏出率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测Bcl-2,caspase-3,NF-κB和TRAF6蛋白的表达,双荧光素酶报告基因实验检测miR-146b和TRAF6的靶向关系。结果:与正常组相比,H/R组细胞中miR-146b和Bcl-2蛋白的表达水平、细胞存活率显著降低,而细胞上清液中IL-1β,TNF-α,IL-6含量和LDH漏出率、细胞凋亡率以及caspase-3,NF-κB蛋白的表达水平显著升高(P<0.05);与H/R组相比,白藜芦醇组中miR-146b和Bcl-2蛋白的表达水平、细胞存活率显著升高,而IL-1β,TNF-α,IL-6含量和LDH漏出率、细胞凋亡率以及caspase-3,NF-κB蛋白的表达水平显著降低(P<0.05);与白藜芦醇组相比,白藜芦醇+anti-miR-146b组中miR-146b和Bcl-2蛋白的表达水平、细胞存活率显著降低,而IL-1β,TNF-α,IL-6含量和LDH漏出率,细胞凋亡率以及caspase-3,NF-κB蛋白的表达水平显著升高(P<0.05);而白藜芦醇+anti-miR-NC组与白藜芦醇组相比差异无统计学意义(P>0.05)。双荧光素酶报告基因和蛋白质印迹法证实TRAF6是miR-146b靶基因,且miR-146b可靶向调控其表达。结论:miR-146b抑制心肌细胞凋亡和炎症反应是白藜芦醇减轻H/R心肌细胞损伤的调控机制,其作用原理可能与靶向调控TRAF6有关。     

miR-204-3p靶向CYP2E1介导脂多糖诱导的肾小管上皮细胞损伤

目的探讨miR-204-3p靶向细胞色素P450家族2亚家族E成员1(CYP2E1)介导脂多糖(LPS)诱导的肾小管上皮细胞炎症反应及细胞凋亡的分子机制。方法体外培养人肾小管上皮细胞HK-2,qRT-PCR与Western blot分别检测miR-204-3p、CYP2E1的表达量;实验分组:Con组、LPS组、LPS+miR-NC组、LPS+miR-204-3p组、LPS+si-NC组、LPS+si-CYP2E1组、LPS+miR-204-3p+pcDNA组、LPS+miR-204-3p+pcDNA-CYP2E1组;ELISA检测IL-6、TNF-α的水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验验证miR-204-3p与CYP2E1的靶向结合关系;Western blot检测Bcl-2、Bax的表达量。结果与Con组比较,LPS组细胞中miR-204-3p的表达水平降低,CYP2E1的表达量升高,IL-6、TNF-α的水平升高,凋亡率和Bax蛋白水平升高,Bcl-2蛋白水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);与LPS+miR-NC组比较,LPS+miR-204-3p组IL-6、TNF-α水平降低,凋亡率和Bax蛋白水平降低,Bcl-2蛋白水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);与LPS+si-NC组比较,LPS+si-CYP2E1组IL-6、TNF-α的水平降低,凋亡率和Bax蛋白水平降低,Bcl-2蛋白水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-204-3p能够靶向结合CYP2E1;与LPS+miR-204-3p+pcDNA组比较,LPS+miR-204-3p+pcDNA-CYP2E1组IL-6、TNF-α的水平升高,凋亡率和Bax蛋白水平升高,Bcl-2蛋白水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-204-3p过表达可靶向调控CYP2E1的表达从而抑制LPS诱导的肾小管上皮细胞炎症反应及细胞凋亡。     

miR-23b-3p靶向PALM3对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎症因子表达的影响

目的研究miR-23b-3p对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡和炎症的作用及机制。方法将肺泡上皮细胞A549细胞分为对照组、感染组、转染组、感染组+转染组;对照组A549细胞常规培养,感染组用1×108 CFU/mL肺炎链球菌培养A549细胞,转染组转染不同载体,感染组+转染组在A549细胞被肺炎链球菌处理前48h进行转染。qRT-PCR检测细胞中miR-23b-3p和paralemmin-3(PALM3)mRNA的水平,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞中PALM3、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax),酶联免疫法(ELISA)检测肺炎链球菌诱导后细胞培养上清中白介素-6(interleukin 6,IL-6)和白介素-10(interleukin 10,IL-10)的含量;双荧光素酶报告系统验证miR-23b-3p与PALM3的关系。结果与对照组相比,感染组A549细胞中miR-23b-3p、IL-10、Bcl-2含量明显降低(P0.05),PALM3、IL-6、Bax水平及细胞凋亡率明显升高(P0.05);过表达miR-23b-3p和干扰PALM3表达均可抑制肺炎链球菌诱导的A549细胞凋亡和炎症;miR-23b-3p靶向负调控PALM3的表达;过表达PALM3逆转了过表达miR-23b-3p对肺炎链球菌诱导的A549细胞凋亡和炎症的作用。结论 miR-23b-3p靶向PALM3抑制肺炎链球菌诱导的A549炎症和细胞凋亡。     

miR-29a-3p调控COL1A1参与喉癌Hep-2细胞增殖及凋亡过程研究

目的研究miR-29a-3p是否调控COL1A1参与喉癌Hep-2细胞增殖及凋亡过程。方法前瞻性选取人喉癌Hep-2细胞,分为对照组、实验组1(miR-29a-3p过表达组)、实验组2(miR-29a-3p抑制组),对照组未进行任何处理,实验组1转染miR-29a-3p模拟剂,实验组2转染miR-29a-3p抑制剂。通过qRT-PCR法检测三组细胞miR-29a-3p及COL1A1基因表达,通过western blotting法检测三组细胞COL1A1蛋白表达。采用双荧光素酶报告基因分析法验证COL1A1是否是miR-29a-3p靶基因。采用MTT比色法检测三组细胞增殖能力,采用流式细胞术检测三组细胞凋亡情况。结果 miR-29a-3p模拟剂转染Hep-2细胞后miR-29a-3p表达升高,COL1A1表达降低;miR-29a-3p抑制剂转染Hep-2细胞后miR-29a-3p表达降低,COL1A1表达升高。双荧光素酶报告基因分析法证实COL1A1是miR-29a-3p靶基因。miR-29a-3p过表达能抑制Hep-2细胞增殖,增加细胞凋亡;miR-29a-3p抑制表达能增强Hep-2细胞增殖,抑制细胞凋亡。结论 miR-29a-3p调控COL1A1参与喉癌Hep-2细胞增殖及凋亡过程。     

高雄激素对性成熟前小鼠颗粒细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察高浓度雄激素对性成熟前小鼠卵巢颗粒细胞增殖、凋亡的影响,初步探讨其机制,为研究多囊卵巢综合征(PCOS)病理生理机制积累更多的实验资料.方法 体外培养21 d 龄小鼠卵巢颗粒 细胞,用不同浓度的睾酮(10 -5,10 -6,10 -8 mol/L)作用24、48、72 h,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力,流式 细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,Realtime PCR 检测Caspase-3/9、Bcl-2、Bax 等凋亡因子的变化.结果 10 -5 mol/L睾酮显著增加颗粒细胞的细胞活力;10 -5 mol/L 睾酮作用48 h,细胞周期由G1 期进入S 期,细胞早期凋亡率减少1.36%,Caspase-3 活性降低,Caspase-3/9、Bcl-2、Bax mRNA 水平表达均下降.结论高浓度雄激素增加性成熟前的卵巢颗粒细胞的细胞活力,促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,其作用可能 通过抑制线粒体通路相关的凋亡因子的表达.本研究提示,性成熟前的高雄激素作用,可能是导致青春期 PCOS发生的原因之一.     

凋亡相关基因在金黄色葡萄球菌感染人脐静脉内皮细胞的表达

目的研究凋亡相关基因Bcl-2、Bax和caspase-3在金黄色葡萄球菌(S.aureus)感染人脐静脉内皮细胞株ECV-304内的表达,探讨其对人脐静脉内皮细胞的凋亡作用。方法采用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫印迹(Western-blot)法检测S.aureus感染后人脐静脉内皮细胞Bcl-2、Bax和caspase-3的mRNA及蛋白表达水平。结果 S.aureus感染人脐静脉内皮细胞后,其细胞内与抗凋亡相关的细胞因子Bcl-2mRNA水平及蛋白表达量下降,感染12小时差异有统计学意义(P0.01),而促凋亡的细胞因子Bax和caspase-3表达上升,感染6小时差异有统计学意义(P0.01)。结论凋亡相关细胞因子Bcl-2、Bax和caspase-3可能在S.aureus感染所致的脐静脉内皮细胞凋亡中起重要的作用。     

IL-21诱导SUDHL-4细胞凋亡的作用及其机制

目的 探讨IL-21对弥漫大B淋巴瘤(DLBCL)细胞系SUDHL-4细胞凋亡的影响及其相关机制.方法 用不同浓度IL-21(终浓度1、10、100、1000 ng/m1)处理SUDHL-4细胞不同时间(24、48、72 h),用CCK-8试剂盒检测细胞增殖抑制率,绘制细胞增殖抑制曲线,计算Ic50值;用流式细胞术检测细胞凋亡;用Western blot法检测IL-21处理后SUDHL-4细胞caspase-9、caspase-3、cleaved caspase3、Bcl-2、Bcl-XL、Bid、Bax和c-myc蛋白表达.用RT-PCR法检测Bcl-2、Bcl-XL、Bid、Bax、c-myc和Survivin基因mRNA表达.结果 IL-21可明显抑制SUDHL-4细胞增殖,且呈时间.剂量依赖性,其48 h半数抑制浓度(1C50)为140.9 ng/ml.流式细胞术分析发现100.g/ml IL-21处理的SUDHL-4细胞48 h凋亡率(Annexin V-FITC+细胞率)明显增加[(19.7±2.3)%],同时caspase-9、caspase.3、Bcl-2和Bcl-XL蛋白表达减低,均呈时问依赖性.cleaved caspase-3从48 h开始出现明显的剪切带;Bax和c-myc蛋白表达明显增高,而Bid蛋白表达变化不明显.RT-PCR检测显示IL-21上凋c-myc和Bax基因mRNA的表达,下调Bcl-2和Bci-XL基因mRNA的表达,Bid和Survivin基因mRNA表达变化不明显.结论 IL-21可抑制SUDHL-4细胞增殖,诱导细胞凋亡,其作用可能是通过c-myc和Bcl-2基因调节的线粒体途径实现.     

miR-338-3p通过靶向PPM1B促进口腔癌细胞凋亡

目的 探讨miR-338-3p在口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的作用及其调节细胞增殖、迁移和凋亡的机制。方法 以正常口腔组织或成人牙龈成纤维细胞(HGF)作为对照组,RT-qPCR法检测OSCC组织或OSCC细胞(TSCCA,CAL-27,Tb3.1)中miR-338-3p和PPM1B mRNA的表达情况;免疫组化法检测OSCC组织与正常组织PPM1B表达量;过表达miR-338-3p后,MTT法检测OSCC细胞增殖、Annexin V-FITC-PI双染试剂盒检测OSCC的凋亡;Western blot法检测PPM1B与凋亡相关蛋白Bax和Claved-caspase 3、Bcl-2的表达;采用生物信息学软件Target scan网站和荧光素酶检测法探索miR-338-3p和PPM1B潜在的靶向关系。通过敲除和过表达PPM1B探索其对OSCC细胞增殖、迁移和凋亡的影响。结果 OSCC组织和细胞中miR-338-3p表达下调,而PPM1B mRNA与蛋白水平均升高(P<0.05)。过表达miR-338-3p可抑制OSCC细胞的增殖并诱导细胞凋亡(P<0.05)。Western...     

microRNA-185下调AKT1信号通路对淋巴母细胞淋巴瘤细胞增殖和凋亡的影响及相关的分子机制的研究

目的探讨miR-185对淋巴母细胞淋巴瘤(T-LBL)细胞增殖和致肿瘤性的影响及相关的分子机制。方法 q PCR检测人T-LBL组织和正常的胸腺组织中miR-185表达水平。miR-185模拟物及NC-miRNA转染Jurkat细胞,MTT法测定细胞增殖情况,q PCR和MTT法分别检测miR-185表达水平和细胞增殖情况,细胞流失术检测细胞凋亡。生物信息学软件Target Scan预测miR-185的靶作用位点,并通过q PCR、Western blot和荧光素酶活性实验证实miR-185的靶作用位点。慢病毒介导的miR-185过表达Jurkat细胞分别通过皮下注射的方式注射入裸鼠左右侧,皮下注射后4 d、8 d、12 d、16 d、20 d、24 d、28 d、32 d分别测量肿瘤体积,以探讨miR-185对体内肿瘤生长的影响。结果与人正常胸腺组织相比,T-LBL组织中miR-185表达显著下调(P0.05);MTT检测细胞增殖结果表明,与NCmiRNA转染组相比,miR-185转染组Jurkat细胞增殖速率显著下降(P0.05),且转染miR-185后,Jurkat细胞凋亡比例显著升高(P0.05);Target Scan生物学软件预测表明AKT1为miR-185潜在的靶基因,实验结果进一步证实AKT1的3'非翻译序列(3'UTR)是miR-185的直接靶点;裸鼠移植瘤试验结果表明,miR-185能抑制体内肿瘤生长。结论miR-185通过靶向作用于AKT1基因抑制Jurkat细胞增殖,其可能为T-LBL的临床治疗提供新的靶标。     

MiRNA-326抑制人椎间盘退变髓核细胞活力和凋亡的机制

目的:探讨过表达miRNA-326对椎间盘退变(intervertebral disc degeneration,IDD)髓核(nucleus pulposus,NP)细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:构建miRNA-326慢病毒表达载体,在293T细胞中获得重组慢病毒,经感染NP细胞得到稳定过表达细胞系GV369-miRNA-326-NP,同时设置空载体GV369-NP组与空白组。荧光显微镜观察慢病毒载体的标签蛋白[绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)]的表达,实时荧光定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)方法检测miRNA-326的表达,流式细胞术检测细胞凋亡,荧光素酶报告基因分析验证miRNA-326与FasL的靶向关系,蛋白质印迹法检测细胞中凋亡相关蛋白FADD,caspase-3,Bcl-2及Bax的表达,使用试剂盒检测细胞线粒体膜电势的变化情况。结果:荧光显微镜下示,经慢病毒感染的过表达细胞系和空载体细胞系均出现绿色荧光,而空白组未见绿色荧光。与空白组相比,GV369-miRNA-326-NP组中miRNA-326的表达水平、Bcl-2表达水平和线粒体膜电位明显升高,而细胞凋亡率,FADD,caspase-3和Bax的表达水平明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05);GV369-NP组与空白组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。荧光素酶报告基因分析证实miRNA-326与FasL存在靶向关系。结论:MiRNA-326可抑制IDD NP细胞发生凋亡,既可通过靶向性调控外源性FasL/Fas通路参与caspase-3和FADD介导的细胞凋亡,也可通过线粒体途径对细胞凋亡发挥作用。     

miR-125a对宫颈癌CaSki细胞紫杉醇化疗和放疗敏感性的影响

目的探讨miR-125a对宫颈癌CaSki细胞紫杉醇化疗敏感性和放疗敏感性的影响及其潜在机制。方法 Western blot检测miR-125a在正常宫颈上皮细胞和宫颈癌细胞系CaSki、c-33A、Si Ha、Hela中的表达。以宫颈癌CaSki细胞CaSki为研究对象,转染miRNA mimic建立过表达miR-125a细胞,用不同浓度(0、2. 5 nM、5 nM、10 nM、20nM、40 nM)紫杉醇处理细胞。过表达miR-125a的CaSki细胞记为miR-125a组,联合紫杉醇处理记为miR-125a+紫杉醇组,以转染miR-NC细胞为对照组,联合紫杉醇处理为紫杉醇组。MTT检测细胞增殖变化,流式细胞仪检测细胞凋亡变化。将过表达miR-125a细胞联合放射照射,细胞克隆形成实验检测放疗敏感性变化。Targetscan预测miR-125a潜在靶基因,双荧光素酶报告基因实验、Western blot、q PCR验证miR-125a对其靶基因Bcl-2调控作用。结果在正常宫颈上皮细胞和CaSki、c-33A、SiHa、Hela宫颈癌细胞中miR-125a表达量分别为0. 99±0. 08、0. 20±0. 02、0. 41±0. 04、0. 51±0. 04、0. 72±0. 03,miR-125a在宫颈癌细胞中表达明显低于正常宫颈上皮细胞。在CaSki细胞中过表达miR-125a联合紫杉醇处理能够显著抑制细胞增殖能力,其中对照组IC50为51. 79 nM,miR-125a组IC50为8. 01nM。与对照组相比,miR-125a组、紫杉醇组、miR-125a联合紫杉醇组均能显著促进细胞凋亡(P 0. 05),miR-125a联合紫杉醇组较miR-125a组、紫杉醇组细胞凋亡率明显增加(P 0. 01)。过表达miR-125a能够增加CaSki细胞对放疗的敏感性,其增敏比为1. 931。Bcl-2是miR-125a的潜在靶基因,对照组与miR-125a组Bcl-2荧光素酶活性分别为0. 995±0. 087、0. 297±0. 032,Bcl-2蛋白表达量为0. 997±0. 102、0. 331±0. 044,Bcl-2 mRNA表达量为1. 023±0. 109、0. 304±0. 026,过表达miR-125a可显著抑制Bcl-2荧光素酶活性及蛋白和mRNA表达。结论在宫颈癌CaSki细胞中miR-125a能够通过靶向抑制抗凋亡基因Bcl-2表达增加CaSki细胞对紫杉醇化疗及放疗的敏感性。     

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4阻断剂对糖尿病神经病变大鼠坐骨神经凋亡的影响

目的探讨糖尿病周围神经病变(DPN)大鼠坐骨神经烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(Nox4)表达改变及Nox4阻断剂VAS2870对DPN大鼠坐骨神经凋亡的影响。 方法40只8周龄雄性SD大鼠,平均体重( 203.5±6.4)g,30只大鼠一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ),其中20只患糖尿病,余10只大鼠淘汰;其余大鼠腹腔注射等体积柠檬酸溶液作为对照组(n＝10)。8周后糖尿病大鼠建立DPN模型,采用随机数字表法将DPN大鼠分为2组,VAS2870组(n＝10,尾静脉注射VAS2870 1 mg/kg,每日1次,共7 d)和DPN组(n＝10,尾静脉注射等体积0.9%无菌NaCl溶液,每日1次,共7 d)。用PowerLab数据记录分析系统检测坐骨神经运动神经传导速度(MNCV)和感觉神经传导速度(SNCV),用荧光实时定量聚合酶链反应(PCR)检测坐骨神经Nox4、半胱氨酸天冬酶-3(caspase-3)、B细胞淋巴瘤因子-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA表达,用蛋白印迹检测坐骨神经Nox4、caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达水平,采用单因素方差分析比较各组间的差异,用Tukey检验进行两两比较。 结果DPN大鼠坐骨神经MNCV[(41.21±7.36)m/s]及SNCV[(30.39±7.66)m/s]均低于VAS2870组[(49.14±8.67)m/s,(38.95±6.24)m/s],VAS2870对MNCV及SNCV的下降具有减轻作用(q＝3.58,4.53;均P<0.05)。DPN大鼠坐骨神经Nox4(4.72±0.42)、caspase-3(5.02±0.43)、Bax(5.63±0.82) mRNA(q＝7.02,6.40,7.65;均P<0.05)及蛋白水平(0.86±0.10,0.78±0.17,0.95±0.13,q＝7.83,9.15,6.87;均P<0.05)较对照组mRNA(5.79±0.53,6.90±0.79,7.39±0.67)及蛋白水平(0.59±0.13,0.45±0.14,0.64±0.14)表达上调,Bcl-2 mRNA(6.81±0.60,q＝6.31,P<0.05)及蛋白水平(0.44±0.12,q＝6.20,P<0.05)表达下调。VAS2870组Nox4、caspase-3、Bax mRNA(5.31±0.44,5.71±0.60,6.41±0.95)(q＝3.66,2.98,4.02,3.38;均P<0.05)及蛋白水平(0.72±0.13,0.60±0.18,0.79±0.15)(q＝4.24,5.78,3.83;均P<0.05)均低于DPN组,Bcl-2 mRNA(6.29±0.47)的及蛋白水平(0.56±0.12)表达均高于DPN组(q＝3.38,2.81;均P<0.05),VAS2870部分逆转了Nox4、caspase-3、Bax、Bcl-2 mRNA及蛋白的表达水平。 结论DPN大鼠坐骨神经Nox4表达水平增高,通过调节凋亡相关蛋白caspase-3、Bax及Bcl-2表达促进坐骨神经凋亡;Nox4阻断剂通过减轻坐骨神经凋亡发挥恢复DPN大鼠坐骨神经传导速度的作用。     

miR-497-5p靶向WWP1调控人瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖和凋亡

目的探讨微小RNA-497-5p(miR-497-5p)是否通过靶向含有WW结构域的E3泛素蛋白连接酶1(WWP1)调控人瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖和凋亡。方法实时荧光定量PCR(qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)测定瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFB)和正常皮肤成纤维细胞(NFB)中miR-497-5p、WWP1 mRNA和蛋白表达。TargetScan预测miR-497-5p和WWP1的靶向关系,双荧光素酶报告和Western blot进一步验证。构建miR-497-5p过表达或抑制WWP1表达的细胞,Western blot检测WWP1、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p21、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。共转染miR-497-5p和pcDNA-WWP1,观察WWP1过表达对miR-497-5p过表达诱导的KFB细胞增殖和凋亡的影响。结果与NFB相比,KFB内miR-497-5p表达量明显下调(P0.05),WWP1mRNA和蛋白表达量显著上调(P0.05)。miR-497-5p靶向调控WWP1的表达。miR-497-5p过表达明显降低KFB 48h、72h的细胞活性、CyclinD1、Bcl-2蛋白表达,提高细胞凋亡率、p21、Bax蛋白水平(P0.05),与抑制WWP1表达结果相同。WWP1过表达逆转了miR-497-5p过表达对KFB增殖、WWP1、CyclinD1、Bcl-2蛋白表达的抑制作用,以及对细胞凋亡、p21、Bax蛋白表达的促进作用。结论过表达miR-497-5p通过靶向调控WWP1抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖,并诱导其凋亡。     

长链非编码RNA NR2F1-AS1靶向微小RNA-493-5p表达调控卵巢癌细胞增殖及凋亡的机制研究

目的 探讨长链非编码RNA NR2F1-AS1(LncRNA NR2F1-AS1)靶向微小RNA-493-5p(miR-493-5p)的表达调控卵巢癌细胞增殖及凋亡的机制。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测NR2F1-AS1与miR-493-5p在不同卵巢癌细胞株中的表达水平;采用双荧光素酶报告基因检测NR2F1-AS1与miR-493-5p的相互作用;采用MTT增殖实验检测干扰NR2F1-AS1表达或miR-493-5p过表达后卵巢癌细胞增殖能力的变化;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用Western blot检测CyclinD1、p21、p27、Bcl-2、Bax、cleaved-caspase 3蛋白表达。结果 与正常卵巢上皮细胞比较,NR2F1-AS1在卵巢癌细胞中的表达水平升高,而miR-493-5p的表达水平则降低,差异有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶实验证实NR2F1-AS1能与miR-493-5p特异性结合,并可负性调控miR-493-5p的表达及活性。干扰NR2F1-AS1表达或miR-493-5p过表达后可抑制卵巢癌细胞增殖能力,...     

MiR-30b通过靶向CCL22调控人NK/T细胞淋巴瘤细胞株SNK-6和YTS顺铂耐受的研究

目的:探讨miR-30b对人NK/T细胞淋巴瘤(NKTCL)SNK-6和YTS细胞对顺铂耐受的调控及其作用机制。方法:培养正常NK细胞以及SNK-6和YTS细胞,应用real-time PCR法和Western blot分别检测miR-30b和巨噬细胞来源的趋化因子(CCL22)mRNA和蛋白的表达。以miR-30b过表达和miR-30b抑制剂分别转染SNK-6和YTS细胞,MTT法检测SNK-6和YTS细胞对顺铂耐受性的影响;caspase-3试剂盒检测caspase-3活性;流式细胞术检测细胞凋亡水平。双荧光素酶报告基因检测miR-30b与CCL22的靶向关系。Western blot法检测CCL22表达,评估CCL22对细胞耐受性和caspase-3活性的影响。结果:与正常NK细胞相比,SNK-6和YTS细胞中miR-30b表达均显著降低(P 0.01),CCL22 mRNA表达均显著升高(P 0.01)。miR-30b过表达可降低细胞活性,顺铂耐受性显著降低(P 0.05),细胞凋亡比例显著增高(P 0.05),Caspase-3活性增加(P 0.05)。miR-30b抑制剂作用与miR-30b过表达作用相反。荧光素酶活性分析显示,miR-30b过表达显著降低荧光素酶报告基因的荧光强度,而结合位点突变后荧光素酶活性不变,表明CCL22是miR-30b的直接靶分子。此外,miR-30b过表达显著降低CCL22表达(P 0.05)。而CCL22过表达可增加SNK-6细胞活性,降低Caspase-3活性,逆转miR-30b的作用,增加对顺铂的耐受性。结论:miR-30b可通过靶向CCL22抑制人NKTCL SNK-6和YTS细胞的顺铂耐受性。     

Cyclopamine对人前列腺癌PC-3细胞增殖凋亡及Bcl-2,Bax,caspase-9蛋白表达的影响

目的研究cyclopamine对人前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的作用及对Bcl-2,Bax,caspase-9蛋白表达的影响,并探讨其机制。方法体外培养的PC-3细胞应用cyclopamine处理后,通过MTT测定细胞增殖抑制情况;电镜下观察肿瘤组织形态学变化;流式细胞仪检测凋亡率;Western印迹技术检测Bcl-2,Bax,caspase-9蛋白的表达变化。结果MTT法结果显示4μmol/L,8μmol/L及12μmol/L浓度的cyclopamine对PC-3细胞增殖有显著抑制作用,与对照组相比差异有显著性(P0.05或P0.01),抑制效果都随着浓度的增大及时间的增加而增强。电镜下可观察到典型的凋亡细胞;流式细胞仪检测结果表明cyclopamine诱导PC-3细胞发生凋亡;Western印迹技术的结果:经培养72h后,随着药物浓度增大,Bcl-2蛋白表达呈逐渐减少,而Bax,有活性的caspase-9蛋白表达逐渐增多。结论Cyclopamine抑制PC-3细胞增殖,在一定剂量和时间范围内呈时间、浓度依赖关系,并可诱导其凋亡。Cyclopamine诱导PC-3细胞凋亡可能通过Bcl-2,Bax,caspase-9介导。