大鼠发育过程中海马星形胶质细胞与神经元细胞周期蛋白依赖性激酶的表达差异

目的:比较正常Wistar大鼠发育过程中海马星形胶质细胞与神经元细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)的表达差异。方法:40只大鼠按年龄分为出生后1d(P1d)组、出生后11d(P11d)组,成年鼠3月(P3m)组,老年鼠13月(P13m)组,每组10只。采用流式细胞术检测各组海马星形胶质细胞和神经元中CDK1、CDK2和CDK4的表达含量。结果:各年龄组星形胶质细胞中CDK1的表达在P1d组低于P11d、P3m及P13m组(P<0.05);CDK2和CDK4各年龄组并无明显差异。而神经元中CDK1的表达在P11d组时最高,P1d组低于P11d组(P<0.05);CDK2随增龄上调,P1d组与P13m组有统计学差异(P<0.05);CDK4各年龄组并无明显差异。P11d、P3m和P13m组的CDK1在星形胶质细胞与神经元表达有差异(P<0.05);P1d和P11d组的CDK4在星形胶质细胞与神经元表达有差异(P<0.05)。结论:CDK1、CDK2和CDK4在大鼠海马发育的各个时期星形胶质细胞和神经元中均有表达。     

骨髓增生异常综合征细胞周期调控基因表达谱的研究

目的研究骨髓增生异常综合征(MDS)细胞周期调控基因的异常表达。方法通过半定量RTPCR分析29名正常对照、27例MDS和19例原发性急性髓系白血病(AML)患者骨髓细胞周期素(cyclins)家族(cyclinD2,cyclinD3,cyclinA1和cyclinE)、细胞周期素依赖性激酶(CDKs)家族(CDK2,CDK4和CDK6)、CDKs抑制剂家族(p21,p27和p57)以及RbE2Fs通路中Rb和E2F1基因的表达率和表达量。结果MDS组cyclinD3和cyclinA1基因表达量(分别为0.65±0.17,0.48±0.04)均明显高于正常对照(0.49±0.04,0.32±0.06),且低于原发性AML组(0.84±0.15,0.65±0.09)(P值均<0.05)。MDS组cyclinD2和cyclinE基因表达率(表达量)分别为40.7%(0.78±0.21)和51.9%(0.52±0.10),均明显高于正常对照[13.8%(0.49±0.09);17.2%(0.33±0.13)]和原发性AML组[10.5%(0.38±0.08);21.1%(0.33±0.03)]。MDS组CDK2基因表达量(0.66±0.19)明显高于正常对照(0.42±0.04)(P<0.001),而且CDK6基因表达率(25.9%)明显高于正常对照(3.4%)(P<0.05)。MDS组、原发性AML组及正常对照组CDK4基因表达率和表达量差异无统计学意义。MDS组p21基因(77.8%;1.18±0.21)和p27基因(48.1%;1.14±0.40)有较高的表达率和表达量,明显高于正常对照和原发性AML组。MDS组p57基因表达量(0.69±0.06)明显高     

人脑胶质瘤CDK2干扰RNA新靶点的检验

目的 构建4个新靶点CDK2干扰RNA真核表达载体,转染人脑胶质细胞瘤SHG44细胞,经逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测mRNA表达,获得干扰效果最好的真核表达载体,为CDK2成为人脑肿瘤标志物提供有价值的资料.方法 (1)构建4个新靶点CDK2干扰RNA真核表达载体并用双酶切和测序鉴定;(2)用脂质体法瞬时转染上述4个载体到SHG44细胞株;(3)通过 RT-PCR 比较转染后CDK2 mRNA表达量,选出干扰效果最好的一个载体.结果 (1)成功构建了4个新靶点CDK2干扰RNA真核表达载体即pGPU6/GFP/Neo-CDK2-1、pGPU6/GFP/Neo-CDK2-2、pGPU6/GFP/Neo-CDK2-3、pGPU6/GFP/Neo-CDK2-4;(2)CDK2 mRNA表达明显受抑制,并获得效果最好的CDK2干扰RNA真核表达载体.结论 成功构建并筛选出效果最好的新靶点CDK2干扰RNA真核表达载体,使SHG44细胞的CDK2 mRNA表达明显降低.     

CDKs在大肠癌中的表达及意义

目的 探讨细胞周期依赖性蛋白激酶（CDKs）在大肠癌中的表达及临床意义。方法收集79例手术切除的大肠癌标本，同时取距癌灶5cm以外的癌旁组织及10cm以外的正常组织，采用免疫组织化学方法（链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶法，SP法）检测癌组织、癌旁组织及正常组织中CDKs的表达。结果 79例标本癌组织中CDKs表达的阳性率均明显高于癌旁组织及正常组织，差异有显著性（P＜0．01）。CDKs的表达与患者组织学类型之间均存在程度不同的统计学联系（P＜0．05），此外CDKz的表达与患者年龄、肿瘤大小之间；CDC2与患者浸润深度、肿瘤大小之间；CDK4与患者年龄之间均存在统计学联系（P＜0．05）。结论CDKs的过表达是大肠癌发生的早期事件，是影响大肠细胞正常细胞周期的重要途径之一。     

CDK2干扰RNA对人脑胶质瘤细胞质蛋白质组的影响

目的构建人CDK2的干扰RNA真核表达载体,稳定转染人脑胶质细胞瘤SHG44细胞,经RT-PCR检测后,运用双向电泳-图像分析-质谱技术研究人脑胶质瘤细胞质蛋白质组的改变,探讨CDK2在SHG44细胞中的作用,为人脑胶质瘤的发生、发展的研究及诊断与治疗提供有价值的资料。方法 (1)构建CDK2干扰RNA真核表达载体并用双酶切和测序鉴定。(2)G418筛选阳性转染细胞克隆,制备稳定转染的SHG44细胞系。(3)通过RT-PCR比较转染后CDK2mRNA的表达量。(4)双向凝胶电泳-质谱技术-数据库搜索,比较转染前后细胞质蛋白质组的变化。结果 (1)成功构建了CDK2干扰RNA真核表达载体PGPU6/GFP/Neo-CDK2-1。(2)获得稳定转染细胞系,命名为PCDK2-1-SHG44细胞。(3)通过双向电泳-图像分析-质谱技术得到细胞质未见表达的蛋白质5个,包括醛缩酶A、波形蛋白等蛋白质。结论成功建立稳定转染CDK2干扰RNA的SHG44细胞系。质谱鉴定得到的这些差异表达的蛋白质涉及细胞的增殖、细胞凋亡的信号转导调节、正常细胞的恶性转化及发育调控以及肿瘤的发生、发展和耐药性形成。     

CDK4在膀胱移行细胞癌中的表达及其临床意义

目的:探讨CDK4蛋白在膀胱移行细胞癌(BTCC)中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组化方法,测定10例正常膀胱黏膜及40例BTCC标本中的CDK4蛋白的表达。结果:CDK4蛋白在正常膀胱黏膜和BTCC中的阳性表达率分别为0.00%、52.50%(P<0.05)。CDK4蛋白在G1、G2、G3中的阳性表达率依次为36.84%、61.54%、75.00%,差异无显著性(P>0.05);在Tis～T1中CDK4阳性表达率为40.00%,明显低于T2～T4中的73.33%(P<0.05)。结论:CDK4的过度表达可能在BTCC的进展中发挥了重要作用,CDK4可成为一种新的预后判断的参考指标。     

KAT2A、CDK4/CDK6在儿童急性白血病患者中的表达及作用机制研究

目的:探讨组蛋白乙酰转移酶2A(KAT2A)、细胞周期蛋白D1依赖激酶4/6(CDK4/CDK6)在儿童急性白血病患者中的表达及作用机制。方法:选择2017年6月-2018年11月收治的71例儿童急性白血病患者作为儿童急性白血病组;选择同期健康体检者59例作为对照组。采用实时荧光PCR技术(组蛋白修饰基因定量PCR)芯片测定2组组蛋白修饰基因表达和CDK4、CDK6及CDK4/CDK6 mRNA的表达水平;对KAT2A阳性表达者给予Western blot验证;采用SPSS Pearson相关性分析软件对儿童急性白血病患者KAT2A表达与CDK4、CDK6、CDK4/CDK6表达相关性进行分析。结果:通过对已有芯片数据进行综合分析,儿童急性白血病组KAT2A表达阳性为78.87%,明显高于对照组阳性率(8.47%)(P 0.05);儿童急性白血病组CDK4、CDK6 mRNA水平明显高于对照组(P 0.05);儿童急性白血病组CDK4/CDK6 mRNA表达水平明显低于对照组(P 0.05); Western blot结果表明,KAT2A、CDK4和CDK6在儿童急性白血病患者中表达水平高于对照组,而CDK4/CDK6表达水平低于对照组。SPSS Pearson相关性分析结果表明,儿童急性白血病患者KAT2A阳性表达率与CDK4、CDK6 mRNA表达水平呈正相关性(r=0.673,r=0.559),与CDK4/CDK6 mRNA表达水平呈负相关性(r=-0.762)。结论:KAT2A在儿童急性白血病患者中呈高表达,而CDK4/CDK6呈低表达,二者存在明显相关性,有望成为儿童急性白血病治疗新的靶点。     

吉非替尼对肝癌Bel7402细胞株放射增敏作用机制的探讨

目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂Gefitinib对人肝癌Bel7402细胞株的放射增敏作用及机制。方法实验分四组:实验组(药物Gefitinib+放疗)、药物组、放疗组、对照组(无药物和放疗),采用流式细胞技术分别检测四组作用于肝癌Bel7402细胞株后细胞周期分布状况。细胞免疫化学方法从形态学上观察相关蛋白(Mre11、P53、CDK1)在各实验组的表达情况,Westernblot方法分别检测四组作用肝癌Bel7402细胞株后Mre11、P53、CDK1蛋白的表达情况。结果 (1)流式细胞技术显示:药物组G0/G1期细胞比例略有增长,S期细胞比例减少;放疗组G2/M期细胞比例呈上升趋势,而S期细胞比例下降;实验组G2/M期细胞比例显著增加,G0/G1期及S期细胞均呈现明显下降趋势,且其对S期细胞的比例减少更优于其他三组(P<0.05)。(2)细胞免疫化学法显示Mre11、P53、CDK1蛋白在肝癌Bel7402细胞中均有表达,P53实验组面密度、光密度值与其他三组比较均升高,有显著差异,Mre11、CDK1实验组面密度、光密度值均低于其他三组。(3)Westernblot结果显示,在对肝癌Bel7402细胞株Mre11、CDK1蛋白的表达中,药物组及对照组无明显变化,放疗组及实验组均可使其表达下降,而以实验组对其表达下降的趋势更加显著。实验组与其他组比较P53表达水平明显增高。结论 (1)Gefitinib与射线共同作用于肝癌Bel7402细胞株后放射敏感的G2/M期阻滞增加,放射耐受的S期比例下降。(2)实验组可使Mre11、CDK1蛋白表达下降,实验组下降更明显,实验组与其他组比较:P53表达水平明显增高,Gefitinib可能上调人肝癌Bel7402细胞放射敏感性。     

p27^kip1、Skp2与肿瘤

细胞周期的运行受多种因素所调控。有两个主要调控点 :一个处于G1/S转折点 ,是控制细胞进入S期的控制点(G1期检测点 ) ,另一个处于G2 /M转折点 ,是控制细胞进入M期的控制点 (G2 期检测点 )。参与细胞周期调控的主要因子有 :周期蛋白 (cyclin) ,周期蛋白依赖性激酶 (cyclindepen dentkinase,CDK ) ,周期蛋白依赖性激酶抑制剂 (CKI)。CDK与cyclin CDK复合物正性催化细胞周期过程 ,而CKI通过与cyclin ,CDK或cyclin CDK复合物结合抑制并阻断细胞周期进程。p2 7kip1就是一种新发现的CKI ,p2 7kip1活性的改变影响细胞周期进程 ,进而…     

细胞周期因子对乳腺癌生物学行为和预后判定的影响

目的:研究乳腺癌组织中细胞周期蛋白D2、细胞周期蛋白依赖性激酶4(cyclin-dependentkinase4,CDK4),探讨它们与P27kip1蛋白表达、与临床病理指标的关系及其预后意义。方法:对1996-01/2000-12在河北工程学院医学院病理教研室进行病理检查的乳腺癌标本用免疫组化S-P法,检测96例乳腺癌,18例癌旁正常乳腺组织石蜡切片中CyclinD2和CDK4的表达,比较它们与P27kip1蛋白表达,与临床病理学指标之间的关系。结果:①96例乳腺癌组织中CyclinD2,CDK4和P27kip1的表达率分别为42%,54%和38%,与正常乳腺组织相比差异有显著性意义(P<0.001)。②CyclinD2和CDK4的表达与乳腺癌的组织学分级,核分裂数有关(P<0.001),和局部复发有关(P<0.05),而与患者年龄,肿瘤大小、组织类型无关(P>0.05),CDK4的表达与乳腺癌的淋巴结转移,雌激素受体状态也有密切关系(P<0.01)。③P27kip1的表达缺失,与肿瘤大小、组织学分级,核分裂数,有无淋巴结转移以及局部复发均有关系(P<0.05),而且P27kip1的表达与CyclinD2和CDK4的表达呈显著负相关(P<0.01)。结论:CyclinD2和CDK4的表达与乳腺癌的发生、发展有关,而P27kip1的表达缺失和CDK4的异常表达与乳腺癌的侵袭、转移及复发有关,可作为判断乳腺癌生物学行为和预后的重要指标。     

朗格汉斯组织细胞增生症中CyclinD1、CDK4和MDM2的表达

目的通过探讨CyclinD1、CDK4、MDM2在朗格汉斯组织细胞增生症(LCH)中的表达情况,为其诊断提供参考。方法运用免疫组织化学技术,检测20例LCH、7例皮肤组织中的cyclinD1、CDK4、MDM2的表达情况。结果超过90%的LCH,其Langerhans细胞表达CyclinD1(95%,19/20)、CDK4(90%,18/20)、MDM2(90%,18/20),表达模式为中到高强度的核阳性染色。对照皮肤组织内的Langerhans细胞CyclinD1、CDK4、MDM2表达均为(-)。结论 Cyclin D1、CDK4、MDM2在LCH中有中至高强度的表达,可能用于Langerhans细胞增生和肿瘤性Langerhans细胞增生的辅助鉴别诊断。     

三氧化二砷对前列腺癌PC-3细胞周期的阻滞作用

目的:研究三氧化二砷As2O诱导前列腺癌PC-3细胞生长抑制、周期()3阻滞的作用。方法:实验于2003-10/2004-05在解放军第四军医大学唐都医院中心实验室完成。应用体外细胞生长抑制试验(MTT比色法)研究As2O3对细胞生长的影响;流式细胞仪检测细胞周期分布的情况;Westernblotting检测细胞周期调节分子周期素依赖性激酶CDKs)、周期素依赖(性激酶抑制素(CDKI)和周期素的变化。结果:As2O抑制人前列腺癌细胞系PC-3生长具有时间、剂量依赖性,3MTT比色试验显示1,2,5μmol/L的三氧化二砷处理1～6d,各组之间吸光值差异有显著性意义(F=22.220,P<0.001);流式细胞术检测细胞周期分布见As2O(1,2,5μmol/L)处理72h后,随着浓度的增加,3聚集G1期的细胞增加犤(51.8±2.4)%～(58.8±2.3)%犦,各组之间比较,差异有显著性意义(χ2=15.846,P=0.01),说明可诱导PC-3细胞G1期阻滞;免疫印迹试验提示As2O可诱导PC-3细胞Cip1/p21和3Kip1/p27呈计量依赖性增加,而CDK2,6和周期素E,A下调。结论:As2O通过调节细胞周期调节素的表达来阻滞前列腺癌PC-3细3胞周期进程、抑制细胞生长,有必要进一步研究,为其在临床上用于治疗前列腺癌提供依据。     

他克莫司对人肾小球系膜细胞细胞周期相关蛋白表达的影响

目的探讨他克莫司对体外培养的人肾小球系膜细胞细胞周期相关蛋白cyclin D1、cyclin E及p27kip1的影响及可能机制。方法设正常对照组和他克莫司处理组,他克莫司组设为三个组(浓度分别为10μmol/L、25μmol/L、50μmol/L)。四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测他克莫司组处理12h后肾小球系膜细胞的增殖情况;流式细胞仪检测他克莫司组分别作用12、24、48h后系膜细胞的上述三种蛋白质及与其结合的CDK2和CDK4的表达情况;选择有明显抑制作用的时间点(12h),Westernblot检测上述三种蛋白质的表达情况。结果 (1)作用12h,他克莫司组均能抑制系膜细胞的增殖。(2)作用12、24、48h,与对照组相比,浓度为10μmol/L他克莫司对细胞周期蛋白cyclin D1、cyclin E及抑制因子p27kip1的表达无明显影响,而浓度为25、50μmol/L时,cyclin D1及cyclin E明显降低,p27kip1表达明显升高,呈一定的剂量效应关系;且相同浓度的他克莫司在作用三个时间点后,cyclin D1、cyclin E及p27kip1的表达无明显差异。(3)作用12h,与对照组相比,浓度为10μmol/L他克莫司对周期蛋白依赖性激酶CDK2、CDK4的表达无明显影响,而浓度为25、50μmol/L时,CDK2、CDK4的表达明显降低。结论一定浓度的他克莫司可抑制系膜细胞的增殖,其作用机制至少部分与其影响细胞周期相关蛋白的表达有关。     

转化生长因子-β1对脐血单个核细胞增殖周期及凋亡的影响

通过检测转化生长因子 β1 (TGF β1 )对脐血单个核细胞增殖周期及凋亡的作用 ,探讨其对造血进行负调控的机制。采用 5′ 溴脱氧尿嘧啶核苷 (BrdU)掺入法检测TGF β1 对细胞DNA合成的影响 ;应用Westernblot检测TGF β1 对G1 期细胞周期蛋白cyclinA ,cyclinD1,CDK2和CDK4表达的影响 ;用姬姆萨染色和流式细胞分析法检测TGF β1 对细胞凋亡的作用。结果表明 :①培养细胞加入 10 %胎牛血清 (FBS)和 1,2及 5ng ml的TGF β1 12小时后 ,BrdU的OD值与对照 (10 ?S)组相比有显著性差异 (P <0 .0 1) ;继续培养 2 4小时后 ,1ng mlTGF β1组的BrdU检测OD值与 10 ?S组相比无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,而 2ng ml和 5ng mlTGF β1 组的OD值与10 ?S组相比差异有显著性 (P <0 .0 5 )。②与对照组相比 ,2ng mlTGF β1 还可明显抑制cyclinA ,cyclinD1,CDK2和CDK4的表达。③与 2ng mlTGF β1 共培养 12和 2 4小时后 ,细胞出现凋亡特征性改变 ,凋亡率分别为14 .4 2 %和 31.98% ;而对照组未见明显形态变化 ,凋亡率分别为 4 .71%和 5 .76 %。结论 :TGF β1 可通过抑制造血细胞DNA的合成和G1 期细胞周期蛋白的表达 ,从而阻止细胞进入S期 ,抑制细胞增殖。TGF β1 还可促进造血细胞凋亡 ,因而是一个重要的造血负性调控因子。     

P53、P21~(WAF-1)和CDK1在乳腺癌组织中的表达及意义

目的探讨p53、p21~(WAF-1)蛋白、CDK1在正常乳腺组织和乳腺癌组织中的表达及临床意义。方法收集正常乳腺组织120例和乳腺癌组织480例,通过免疫组化EnVision方法检测p53、p21~(WAF-1)和CDK1蛋白的表达情况,并进行统计学分析。结果 p53、p21~(WAF-1)和CDK1蛋白在正常乳腺组织与乳腺癌组织中的阳性率比较差异显著(P0.05);且乳腺癌中P53表达率与p21~(WAF-1)表达率呈负相关(r=-0.364,P0.05),P53表达率与CDK1表达率呈正相关(r=0.626,P0.05);p21~(WAF-1)表达与CDK1表达呈负相关(r=-0.218,P0.05)。p53、p21~(WAF-1)表达乳腺癌临床分期、组织学分级、病理类型及淋巴结转移有相关性(P0.05),与患者年龄无相关性(P0.05);CDK1表达乳腺癌组织学分级、病理类型及淋巴结转移有相关性(P0.05),与患者临床分期和年龄无关(P0.05)。结论 p53、p21~(WAF-1)蛋白和CDK1的表达与乳腺癌的发生发展相关,且p53蛋白与CDK1的表达呈正相关,与p21~(WAF-1)蛋白表达呈负相关,可推断乳腺癌的p53—p21~(WAF1)—CDK1信号通路调节G_2/M检验点机制,参与乳腺癌的发病过程。     

三氧化二砷对前列腺癌PC—3细胞周期的阻滞作用

目的：研究三氧化二砷(As2O3)诱导前列腺癌PC-3细胞生长抑制、周期阻滞的作用。方法：实验于2003-10／2004-05在解放军第四军医大学唐都医院中心实验室完成。应用体外细胞生长抑制试验(MTT比色法)研究As2O3对细胞生长的影响；流式细胞仪检测细胞周期分布的情况；Western blotting检测细胞周期调节分子周期素依赖性激酶(CDKs)、周期素依赖性激酶抑制素(CDKI)和周期素的变化。结果：As2O3抑制人前列腺癌细胞系PC-3生长具有时间、剂量依赖性，MTT比色试验显示1，2，5μmol／L的三氧化二砷处理1～6d，各组之间吸光值差异有显著性意义(F=22．220，P&;lt;0．001)；流式细胞术检测细胞周期分布见As2O3(1，2，5μmol／L)处理72h后，随着浓度的增加，聚集G1期的细胞增加[(51．8&;#177;2．4)％～(58．8&;#177;2．3)％]，各组之间比较，差异有显著性意义(x^2=15．846，P=0．01)，说明可诱导PC-3细胞G1期阻滞；免疫印迹试验提示As2O3可诱导PC-3细胞Cip1／p21和Kip1／p27呈计量依赖性增加，而CDK2，6和周期素E，A下调。结论：As2O3通过调节细胞周期调节素的表达来阻滞前列腺癌．PC-3细胞周期进程、抑制细胞生长，有必要进一步研究，为其在临床上用于治疗前列腺癌提供依据。     

基于多数据库分析脂肪肉瘤中CDK1的表达及其临床意义

目的通过深度挖掘Oncomine、TCGA、GTEx及STRING数据库,探索CDK1在脂肪肉瘤(LPS)中的表达及其临床意义。方法从Oncomine数据库中检索CDK1在LPS组织和癌旁正常组织中的表达数据,并对其进行比较分析。使用Oncomine数据库分析CDK1与LPS患者预后的相关性。使用STRING在线工具建立CDK1的共表达网络。结果CDK1在LPS组织中的表达明显高于正常组织(P<0.05)。CDK1的表达与LPS患者的预后呈负相关(P<0.05)。CDK1的共表达网络图显示,AURKA、NCAPG和CCNB1等蛋白是CDK1的共表达分子。结论与正常组织相比,CDK1在LPS组织中呈高表达。CDK1高表达患者的预后较低表达患者差,并进一步发现了与CDK1有相关性的共表达基因,可为LPS的临床治疗及新的基因靶向药物的研制提供依据。     

竞争性定量PCR检测恶性血液病造血干细胞移植术后克隆性TCRVγI-Jγ基因重排

目的 :为提高恶性血液病患者微小残留病 (MRD)检测的临床意义。方法 :构建竞争性定量聚合酶链反应 (PCR)检测技术并定量分析 3 1例恶性血液病患者 (包括 12例急性淋巴细胞白血病 ,10例急性非淋巴细胞白血病 ,6例非霍奇金淋巴瘤和 3例慢性粒细胞白血病 )造血干细胞移植术后TCRVγI Jγ基因重排。结果 :建立定量PCR方法的灵敏度为 10 -5水平 ;3 1例恶性血液病造血干细胞移植术后 1个月MRD的水平为 (3 16± 2 74)× 10 -5,移植后 1个月MRD水平显著低于移植前 [(4 2 1± 3 2 7)× 10 -5] (P <0 0 2 5 ) ;2 2例自体造血干细胞移植术后MRD为(3 47± 2 91)× 10 -5水平 ,显著高于 9例异基因造血干细胞移植术后 [(2 63± 2 2 1)× 10 -5] (P <0 0 5 ) ;MRD >40 0×10 -5的 13例病人中 2年内复发率为 5 3 8% (7/13 ) ,而MRD <40 0× 10 -5的 18例病人中仅有 2例 (11 1% )出现复发。MRD >40 0× 10 -5患者 2年内的复发率显著高于MRD <40 0× 10 -5患者 (P <0 0 1)。结论 :所构建竞争性定量PCR技术简便、快速、灵敏 ;定量检测恶性血液病造血干细胞移植术后MRD水平有利于预后预测。     

miR-145-3p通过下调CDK1抑制骨肉瘤MG-63细胞系的增殖、侵袭与凋亡

目的研究mircoRNA-145-3p(miR-145-3p)对骨肉瘤细胞系MG-63细胞的增殖、侵袭与凋亡的调控作用。方法通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别测定miR145-3p在MG-63细胞与人成骨细胞系hFOB1.19细胞中的表达水平。将MG-63分成实验组和对照组,通过人工合成miR145-3p-mimic(miR-145-3p类似物),使用慢病毒载体将miR-145-3p-mimics转入实验组MG-63细胞内,同时使用慢病毒载体将空质粒转入对照组细胞内。通过CCK-8方法检测两组细胞增殖能力;流式细胞仪分析两组细胞的细胞周期及凋亡情况; Transwell实验测定细胞侵袭能力; RT-PCR测定两组细胞miR-145-3p和周期素依赖性蛋白激酶1(CDK1)的表达情况;通过Targetscan数据库和荧光素酶实验确定CDK1是否为miR-145-3p的靶基因; Western印迹法检测基因的表达水平。结果 miR-145-3p在骨肉瘤细胞系MG-63细胞中的表达量为(0. 59±0. 24),较人成骨细胞系hFOB1. 19细胞中的表达量(1. 46±0. 21)明显降低,差异具有统计学意义(P 0. 05)。CCK-8结果显示,在48 h、72 h、96 h、120 h时,实验组细胞增殖能力较对照组明显降低,差异具有统计学意义(P 0. 05)。流式细胞周期结果显示,处于G1期细胞数量为(69. 92±0. 13)%,较对照组(49. 43±0. 09)%明显增多(P 0. 05),而处于S期细胞数量(26. 01±0. 08)%,较对照组(40. 67±0. 11)%明显减少,差异具有统计学意义(P 0. 05)。凋亡实验结果显示,实验组细胞的凋亡比率为(31. 3±4. 7)%,较对照组(9. 35±1. 9)%明显增高,差异具有统计学意义(P 0. 05)。转染野生型CDK1后,实验组荧光素酶活性较对照组明显降低,差异有统计学意义(P 0. 05);而转染突变型CDK1后,实验组荧光素酶活性较对照组无明显变化,差异无统计学意义(P 0. 05)。Western印迹实验结果显示,实验组中CDK1的表达量较对照组明显降低,且表达水平较对照组也明显降低(P 0. 05)。结论 miR-145-3p通过下调节CDK1表达,抑制骨肉瘤细胞系MG-63细胞的增殖、侵袭能力,并促进其凋亡。     

载脂蛋白B基因EcoRI、XbaI、MspI及载脂蛋白AI基因-75bp、+83bp位点多态性与哈萨克族血脂异常的关系

目的:分析载脂蛋白B(apoB)基因EcoRI、XbaI、MspI位点和载脂蛋白AI(apoAI)基因-75bp、+83bp位点多态性与哈萨克族(哈族)人血脂异常的关系。方法:采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析法检测275例哈族血脂异常患者(血脂异常组)和252例哈族血脂正常对照者(对照组)的apoB基因EcoRI、XbaI、MspI位点和apoAI基因-75bp、+83bp位点多态性。检测甘油三酯、血浆总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、apoB、apoAI的水平。结果:(1)各个位点各基因型及等位基因频率在两组之间差异无显著性。(2)血脂异常组和对照组各基因型联合的总体分布不同(χ2=19.26,P<0.05)。E+-/X--/Ms++/M1/M2(联合10)的比率在血脂异常组(45/275)显著高于对照组(22/+-++252,χ2=5.37,P<0.05)。E++/X+-/Ms+-/M1/M2(联合11)的比率在血脂异常组(30/275)显著高于对照组+-++(13/252,χ2=4.94,P<0.05)。(3)血脂异常组中基因型联合10和11(基因型联合10～11)的TC均值显著高于本组中除基因型联合10及11(基因型联合1～9)的均值,apoAI/apoB均值显著低于本组中基因型联合1～9的均值。对照组中基因型联合10～11的apoAI/apoB水平也显著低于本组中基因型联合1～9。(4)E++/X+-/Ms++/M1/M2(基因型联合2)的TC在两组中都分别低于基因型联合10～11,apoAI/apoB在两组+-+-中都分别高于基因型联合10～11。(5)apoAI/apoB无论在血脂异常组还是在对照组都与TC、LDL-C负相关,与HDL-C正相关。结论:apoB基因EcoRI、XbaI、MspI位点和apoAI基因-75bp、+83bp各位点基因型多态联合中,基因型联合10及11与哈族人血脂异常相关。基因型联合2可能是预防血脂异常的因素。其中的机制可能与载脂蛋白基因变异引起apoAI/apoB的改变进而引起血脂的变化有关。