黄芩素对肝癌细胞HepG_2放疗增敏作用的机制研究

目的:探讨黄芩素在放疗增敏中的作用机制,从而为临床肝癌放疗增敏提供新的策略。方法:将HepG_2细胞分为空白对照组、放疗组、药物组、药物加放疗组、肝细胞加药物组,用MTT检测细胞增殖活性、使用流式细胞术检测细胞凋亡活性、检测细胞克隆形成率,并使用Western Blotting法及QRT-PCA检测p53水平。结果:药物加放疗组HepG_2细胞存活率显著低于其他组(P0.05);药物加放疗组HepG_2细胞克隆形成数及克隆形成率显著低于其他组(P0.05),但仍显著高于肝细胞加药物组(P0.05);药物加放疗组HepG_2细胞凋亡率显著高于其他组;药物加放疗组HepG_2细胞p-53/β-actin蛋白水平显著高于其他组;药物加放疗组HepG_2细胞p-53/β-actin mRNA水平显著高于其他组。结论:黄芩素可显著提高放疗增敏作用,提高HepG_2细胞凋亡率,并可有效调控p53蛋白及mRNA水平。     

复方苦参注射液对膀胱癌细胞增殖、侵袭的影响及相关机制分析

目的:探讨复方苦参注射液对膀胱癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)、细胞凋亡蛋白Caspase-3、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、干细胞标志物SOX-2及癌细胞增殖、侵袭的影响。方法:选用人膀胱癌细胞株S637,分为对照组(等体积DMSO)及复方苦参注射液0.25、0.5、1.0 mg/m L组,CCK-8法检测各组细胞增殖情况,FCM检测细胞凋亡情况,Transwell法检测细胞侵袭情况,RT-PCR检测VEGF、Caspase-3、HIF-1α及SOX-2 mRNA表达。结果:与对照组比较,复方苦参注射液各浓度组增殖率、侵袭能力及VEGF、HIF-1α、SOX-2 mRNA表达显著降低,凋亡率及Caspase-3 mRNA表达显著升高,且其作用呈浓度依赖性(P0.05)。结论:复方苦参注射液对膀胱肿瘤细胞的侵袭、增殖有抑制作用,其机制可能与降低VEGF、HIF-1α、SOX-2 mRNA表达,上调Caspase-3 mRNA表达有关。     

红芪超滤物对人肝癌HepG2细胞辐射敏感性的影响

目的观察红芪超滤物(UEMHP)对人肝癌HepG2细胞辐射增敏的作用,并探讨其可能机制。方法用CCK-8法检测UEMHP对HepG2细胞生长抑制的影响;克隆形成实验检测UEMHP对HepG2的辐射增敏作用;通过流式细胞仪检测HepG2细胞周期分布的变化和凋亡率;采用RT-PCR法检测Survivin mRNA表达。结果在5～50mg/L浓度范围内,UEMHP对HepG2细胞的生长抑制作用呈时间和剂量依赖性(P<0.05);加药辐射组与单纯辐射组比较,克隆存活曲线显示加药辐射组各剂量点的存活分数均低于单纯辐射组(P<0.05),UEMHP能抑制HepG2细胞克隆形成,对HepG2有辐射增敏作用;流式细胞仪检测显示UEMHP具有去G2/M周期阻滞效应,加药辐射组细胞凋亡率(21.42%±3.74%)高于对照组(5.35%±0.41%)、单纯药物组(10.36%±1.75%)和单纯辐射组(10.58%±2.01%,P<0.01);RT-PCR显示加药辐射组Survivin mRNA(0.31±0.02)表达低于对照组(0.82±0.06)和单纯辐射组(0.58±0.04),差异有统计学意义(P<0.01)。结论 UEMHP对人肝癌HepG2细胞具有辐射增敏作用,其辐射增敏机制可能通过下调SurvivinmRNA的表达与促进细胞凋亡有关。     

白藜芦醇对肝癌细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的:观察白藜芦醇对HepG2细胞血管内皮生长因子表达的影响,初步探讨Res抑制肝癌细胞侵袭转移的机制。方法:RT-PCR、WesternBlot实验检测Res对HepG2细胞VEGF mRNA和蛋白表达的影响。结果:不同浓度的Res作用于HepG2细胞后能明显下调VEGF mRNA及蛋白的表达。结论:Res能下调HepG2细胞VEGF的表达,可能具有抑制肝癌细胞侵袭转移的作用。     

解毒消癥饮调控肝癌细胞HIF-1的表达抑制肝癌血管生成的机制研究

目的:解毒消癥饮(JXY)是应用于围手术期消化道肿瘤的临床验方。前期工作表明,其可抑制肝癌血管的生成,可能与下调缺氧诱导因子-1(HIF-1)及血管内皮生长因子(VEGF)的表达有关。但该方如何下调HIF-1及VEGF的表达进而抗肿瘤血管生成的机制尚不清楚。为探讨JXY抑制肝癌血管新生的作用机制,本文从表观遗传学角度出发,考察JXY对组蛋白乙酰基转移酶p300和CBP的表达情况,从分子水平研究该方调控VEGF表达的作用机制。方法:制备JXY乙酸乙酯提取物,体外建立常氧和乏氧条件下HepG2肝癌细胞的培养,MTT法检测不同乏氧时间下HepG2肝癌细胞的存活率,RT-PCR法检测HepG2肝癌细胞VEGF和HIF-1α mRNA水平,用以确定乏氧模型构建成功。MTT法检测不同浓度JXY对乏氧条件下HepG2肝癌细胞存活率的影响,RT-PCR法检测不同浓度JXY对乏氧条件下HepG2肝癌细胞VEGF和HIF-1α mRNA表达水平的影响,Western blot法检测不同浓度JXY对乏氧条件下HepG2肝癌细胞VEGF、HIF-1α、CBP和P300蛋白表达的影响。在体建立HepG2肝癌细胞裸小鼠皮下移植瘤动物模型,随机分为模型组和JXY组,模型组给予生理盐水,JXY组给予0.06 g/kg/d JXY。Western blot法和免疫组织化学法检测瘤体VEGF、VEGFR、HIF-1α蛋白表达的影响。结果:与常氧组比较,随着乏氧时间的延长,HepG2肝癌细胞存活率先降低后升高,在乏氧7h时达到波谷(P0.01)。此时间点HepG2肝癌细胞VEGF和HIF-1α mRNA的表达水平也明显升高。随着JXY浓度的升高,乏氧条件下HepG2肝癌细胞存活率逐渐降低,VEGF和HIF-1α mRNA和蛋白表达水平也受到抑制,呈现剂量依赖性(P0.05或P0.01)。在乏氧条件下HepG2肝癌细胞p300和CBP的蛋白表达水平明显高于常氧组,给予不同浓度JXY后, CBP、P300蛋白的表达量逐渐减弱,有剂量依赖性(P0.05或P0.01)。在体实验也观察到JXY对裸小鼠皮下移植瘤VEGF、VEGFR和HIF-1α蛋白表达水平呈现明显的抑制作用。结论:JXY可能通过抑制组蛋白乙酰基转移酶p300和CBP的表达水平,抑制其与HIF-1α结合形成HIF-1α/p300(CBP)低氧诱导复合物,进而抑制VEGF的转录,最终抑制肿瘤新生血管的生成。     

白花丹醌对肝癌细胞HepG2增殖及血管内皮生长因子表达的影响

目的研究白花丹醌对人肝癌细胞HepG2的增殖、克隆形成及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法 MTT法检测白花丹醌对人肝癌细胞HepG2的增殖抑制率;平板克隆形成实验检测白花丹醌对HepG2细胞克隆形成率的影响;RT-PCR及免疫荧光细胞化学检测白花丹酯对HepG2细胞VEGFmRNA和蛋白表达的影响。结果 MTT法结果显示白花丹醌对人肝癌细胞HepG2的增殖有抑制作用,且随着药物浓度增加(2、8、32、128μmol/L)和作用时间(24、48、72h)延长,其抑制作用逐渐增强,与细胞对照组相比有显著差异(P0.05);平板克隆形成实验显示白花丹醌对HepG2细胞克隆形成有显著抑制作用(P0.05);RT-PCR及免疫荧光细胞化学均显示随白花丹醌药物浓度增高,HepG2细胞VEGFmRNA及蛋白表达水平下调。结论白花丹醌对人肝癌细胞HepG2的增殖、克隆形成及VEGF表达均有显著抑制作用,其可能成为一种新的抗肿瘤药物。     

鼠尾草酚通过PPARγ信号通路调节膀胱癌T24 细胞增殖及侵袭机制研究

目的：探讨鼠尾草酚调节膀胱癌T24 细胞增殖及侵袭的分子机制。方法：将膀胱癌T24 细胞分为T24 细胞组、5-氟尿嘧啶组及鼠尾草酚低、高剂量组（低、高剂量组）。5-氟尿嘧啶组加入50.0 μg/mL 的5-氟尿嘧啶,低、高剂量组分别加入50.0 μg/mL、100.0 μg/mL 的鼠尾草酚,培养72 h。测定各组细胞增殖情况、克隆形成数目、侵袭迁移水平、凋亡水平及过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）、β-连环蛋白（β-catenin） mRNA 与蛋白水平。结果：与T24 细胞组比较,其余各组细胞凋亡率、PPARγ mRNA 及蛋白表达水平升高（P＜0.05）,OD 值、存活率、细胞克隆形成数目、穿膜数、β-catenin mRNA 及蛋白表达水平降低（P＜0.05）。与5-氟尿嘧啶组比较,低剂量组细胞凋亡率、PPARγ mRNA 及蛋白表达水平降低（P＜0.05）,OD 值、存活率、细胞克隆形成数目、穿膜数、β-catenin mRNA 及蛋白表达水平升高（P＜0.05）;高剂量组细胞凋亡率、PPARγ mRNA及蛋白表达水平升高（P＜0.05）,OD 值、存活率、细胞克隆形成数目、穿膜数、β-catenin mRNA 及蛋白表达水平降低（P＜0.05）。与低剂量组比较,鼠尾草酚高剂量组细胞凋亡率、PPARγ mRNA 及蛋白表达水平升高（P＜0.05）,OD 值、存活率、细胞克隆形成数目、穿膜数、β-catenin mRNA 及蛋白表达水平降低（P＜0.05）。结论：鼠尾草酚能抑制膀胱癌T24 细胞增殖、侵袭迁移,促进膀胱癌T24 细胞凋亡;其机制可能与鼠尾草酚能促进PPARγ mRNA 及蛋白表达,激活PPARγ 信号通路进而抑制β-catenin mRNA 和蛋白表达有关。     

黑蒜提取液对Lewis肺癌细胞株的放疗增敏作用

目的 探讨黑蒜提取液（black garlic extract,BGE）对肺癌Lewis细胞放射敏感性的影响。方法 采用MTT法测定BGE作用后肺癌Lewis细胞增殖率,平板集落形成实验观察BGE联合放疗对细胞克隆形成率的影响,Hoechst荧光染色观察细胞形态的变化,流式细胞仪检测BGE作用后细胞周期的变化,Real time-PCR检测B淋巴细胞瘤－2（bcl-2）、凋亡促进蛋白（bax）mRNA的表达。结果 BGE对肺癌Lewis细胞株生长有明显的抑制作用。BGE联合60Co γ射线照射能够促进Lewis细胞凋亡,诱导Lewis细胞的G2/M期阻滞,明显降低bcl-2表达,促进bax高表达。结论 黑蒜提取液对肺癌Lewis细胞具有放射增敏作用,其增敏机制可能与其改变细胞周期及影响bcl-2、bax蛋白表达有关。     

白杨素调控Wnt/β-catenin 通路对前列腺癌PC-3 细胞株侵袭和迁移的影响

目的：探讨白杨素调控Wnt/β-连环蛋白（β-catenin） 通路对前列腺癌PC-3 细胞株侵袭和迁移的影响。方法：设PC-3 细胞组、5-氟尿嘧啶组、白杨素低剂量组、白杨素高剂量组。5-氟尿嘧啶组加入5-氟尿嘧啶使最终浓度为80.0 μg/mL,白杨素低、高剂量组加入白杨素使最终浓度分别为60.0 μg/mL、120.0 μg/mL,培养72 h。四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT） 及结晶紫染色测定细胞存活率及克隆形成数目,Transwell 法测定细胞侵袭水平,annexinV-FITC/PI 试剂盒测定细胞凋亡水平,逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR） 法及蛋白质印迹法（Western blot） 测定细胞β-catenin 基因和蛋白水平。结果：与PC-3 细胞组比较,其余3 组细胞存活率、克隆形成数目、穿膜数、β-catenin mRNA 和蛋白表达水平均降低（P＜0.05）,凋亡率升高（P＜0.05）。与白杨素低剂量组比较,白杨素高剂量组细胞、存活率、克隆形成数目、穿膜数、β-catenin mRNA 和蛋白表达水平降低（P＜0.05）,凋亡率升高（P＜0.05）。与5-氟尿嘧啶组比较,白杨素低剂量组细胞、存活率、细胞克隆形成数目、穿膜数、β-catenin mRNA 和蛋白表达水平升高（P＜0.05）,凋亡率降低（P＜0.05）;白杨素高剂量组细胞、存活率、细胞克隆形成数目、穿膜数、β-catenin mRNA 和蛋白表达水平降低（P＜0.05）,凋亡率升高（P＜0.05）。结论：白杨素能抑制前列腺癌PC-3细胞株增殖、侵袭,诱导前列腺癌PC-3 细胞株凋亡,其机制与白杨素可通过抑制β-catenin mRNA 及蛋白的表达进而抑制Wnt/β-catenin 通路有关。     

β-榄香烯抗肝癌的促凋亡机制研究

目的：研究中药莪术提取物β-榄香烯对人肝癌HepG2 细胞增殖抑制及诱导凋亡,以及小鼠肝癌H22 荷瘤小鼠凋亡相关蛋白表达的作用。方法:体外培养人肝癌HepG2 细胞,MTT 法检测β-榄香烯对细胞增殖的影响,Annexin V-FITC/PI 双染检测细胞凋亡。通过建立H22 小鼠肝癌荷瘤模型,观察β-榄香烯对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用及凋亡相关蛋白的表达。结果：β-榄香烯对HepG2 细胞具有抑制增殖的作用,呈剂量和时间的依赖性;Annexin V-FITC/PI 法检测到早期凋亡细胞。不同实验组对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用程度不同,各药物浓度组Caspase-3 蛋白均上调（P<0.05）,P65 蛋白均下调。结论：β-榄香烯可有效抑制人肝癌HepG2 细胞的增殖,其抑制癌细胞增殖的途径是通过诱导细胞发生凋亡,并且与上调凋亡相关蛋白Caspase-3、下调NF-κB P65 相关。     

柞蚕雄蛾提取液对荷瘤大鼠放疗后肿瘤组织缺氧诱导因子-1α表达的影响

目的探讨柞蚕雄蛾提取液对放疗后荷瘤大鼠肿瘤组织缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响。方法制备W256荷瘤模型,常规放疗后,柞蚕雄蛾提取液16.53 mg/kg连续ig给药10 d。采用免疫组化染色检测肿瘤组织中HIF-1α和血管内皮生长因子(VEGF)的表达;原位杂交法检测肿瘤组织中HIF-1αmRNA表达。结果免疫组化结果显示,与模型组比较,放疗组肿瘤组织HIF-1α和VEGF蛋白表达有增强趋势(P>0.05);放疗联合柞蚕雄蛾提取液(联合组)和柞蚕雄蛾提取液组肿瘤组织HIF-1α和VEGF的表达均显著减弱(P<0.05),且HIF-1α与VEGF呈明显正相关(r=0.649,P<0.01)。原位杂交结果显示,放疗组较模型组HIF-1αmRNA表达无统计学意义(P>0.05);联合组及柞蚕雄蛾提取液组肿瘤组织HIF-1αmRNA表达均降低(P<0.05)。结论柞蚕雄蛾提取液对放疗后及未实施放疗的肿瘤组织HIF-1α的表达有下调作用。     

紫金牛三萜皂苷TSP02抑制人肝癌细胞增殖和侵袭作用机制研究

目的:研究紫金牛三萜皂苷类化合物TSP02体外诱导人肝癌细胞HepG2凋亡和侵袭迁移的作用及其分子机制.方法:采用MTT比色法,检测不同时间、不同浓度的TSP02对人肝癌HepG2细胞和人正常肝HL-7702细胞的增殖抑制作用.采用流式细胞术检测药物处理后HepG2和HL-7702细胞周期和凋亡变化情况.进一步用Westem blot法检测TSP02对周期调控蛋白CDK1,2和4,细胞凋亡相关蛋白Caspase-8,以及细胞迁移侵袭相关蛋白TGF-β1和E-cadherin表达水平的影响.最后通过细胞划痕实验和Transwell小室体外侵袭实验检测HepG2细胞经过TSP02处理后迁移侵袭能力的变化.结果:TSP02显著抑制人肝癌细胞HepG2的生长,抑制效果有明显的时间依赖性和浓度依赖性,而对人正常肝细胞HL-7702的作用不明显.与对照组比较,TSP02处理24 h在造成HepG2细胞S期细胞消失,细胞凋亡率明显增加的同时,还能够显著降低HepG2细胞中CDK1,2,4的表达,提高促凋亡蛋白Caspase-8的表达和活化,而对正常肝HL-7702细胞无论在周期和凋亡率上均无明显影响.此外,TSP02处理后的HepG2细胞移动和侵袭性下降的同时,分别下调和上调了肝癌侵袭相关蛋白TGF-β1和E-cadherin的表达.结论:TSP02选择性促进入肝癌细胞HepG2凋亡并抑制肝癌细胞的迁移和侵袭能力.TSP02的这些体外抗肿瘤活性与其改变周期和凋亡调控蛋白,并影响侵袭相关TGF-β1和E-cadherin的表达有关.     

紫草素对人肝癌HepG2细胞顺铂增敏作用的研究

目的研究紫草素对人肝癌HepG2细胞顺铂增敏作用并初探其可能的作用机制。方法取对数生长期人肝癌HepG2细胞,设空白对照组、紫草素(0.5μg/ml)组、顺铂(40μg/ml)组和联合(紫草素0.5μg/ml+顺铂40μg/ml)组,均设10个复孔;检测细胞增殖抑制率,细胞周期和细胞凋亡状况,Bax mRNA、bcl-2 mRNA表达,caspase-3蛋白表达。结果与顺铂组比较,联合干预组HepG2细胞增殖抑制率显著升高,细胞周期G_0/G_1期显著延长,细胞凋亡率显著升高,Bax/bcl-2比值显著升高,caspase-3蛋白表达上调。结论紫草素具有提高人肝癌HepG2细胞顺铂敏感性的作用,其机制可能与紫草素阻滞细胞周期及调节凋亡相关基因和蛋白表达有关。     

大黄对脂多糖致RAW264.7细胞炎症模型mTOR/HIF-1α/VEGF信号通路的影响

目的观察大黄对脂多糖致RAW264.7细胞炎症模型mTOR/HIF-1α/VEGF信号通路的影响,探讨其作用机制。方法实验细胞分为正常组、模型组、雷帕霉素组和大黄低、中、高剂量组,MTT法检测细胞毒性后,ELISA检测白细胞介素(IL)-6、IL-1β和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,实时荧光定量PCR检测缺氧诱导因子-lα(HIF-1α)、p70S6K1和eIF4E mRNA表达,Western blot检测雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、HIF-1α、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达。结果与正常组比较,模型组细胞TNF-α、IL-6、IL-1β含量明显升高(P<0.05,P<0.01),HIF-1α、eIF4E和p70S6K1 mRNA表达明显升高(P<0.05,P<0.01),HIF-1α和VEGF蛋白表达明显升高(P<0.05);与模型组比较,大黄各剂量组细胞TNF-α、IL-6和IL-1β含量降低,HIF-1α、p70S6K1和eIF4E mRNA表达降低,HIF-1α、VEGF蛋白表达降低。结论大黄可下调炎症因子水平,其机制可能与其下调HIF-1α、VEGF蛋白表达及HIF-1α、eIF4E、p70S6K1 mRNA表达水平有关。     

甘草素对非小细胞肺癌细胞放疗敏感性的影响

【目的】 探讨甘草素对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞放疗敏感性的作用及机制。【方法】 体外培养NSCLC细胞株A549。使用不同浓度甘草素处理,筛选20%抑制浓度（IC20）的甘草素浓度。经甘草素处理后,克隆形成实验观察细胞放疗敏感性,选择半数细胞存活分数（SF）对应的放射线剂量进行后续实验。A549细胞随机分为对照组、甘草素组、miR-21 mimics-NC组、miR-21 mimics组、甘草素+miR-21 mimics组。miR-21 mimics-NC组转染miR-21模拟物阴性对照,miR-21 mimics组、甘草素+miR-21 mimics组转染miR-21模拟物,24 h后观察转染效果,甘草素组、甘草素+miR-21 mimics组加入0.2 mmol/L 甘草素作用24 h、4 Gy 6 MV-X射线照射3 h进行后续实验。细胞计数试剂盒8（CCK-8）法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;定量聚合酶链反应（qPCR）检测miR-21、蛋白络氨酸磷酸酶MEG2 mRNA相对表达量;双荧光素酶报告基因实验验证 miR-21 与 MEG2 的靶向关系;蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测 MEG2 蛋白相对表达量。【结果】 选取甘草素浓度为0.2 mmol/L,甘草素处理后,A549细胞SF降低（P＜0.05）,放射增敏比＞1。与对照组比较,甘草素组细胞相对活力、miR-21相对表达量降低,细胞凋亡率、MEG2 mRNA和蛋白相对表达量升高（P＜0.05）,miR-21 mimics组细胞相对活力、miR-21相对表达量升高,细胞凋亡率、MEG2 mRNA和蛋白相对表达量降低（P＜0.05）;与甘草素组比较,miR-21 mimics 组、甘草素+miR-21 mimics 组细胞相对活力、miR-21 相对表达量升高,细胞凋亡率、MEG2 mRNA 和蛋白相对表达量降低（P＜ 0.05）;与miR-21 mimics-NC组比较,miR-21 mimics组细胞相对活力、miR-21相对表达量升高,细胞凋亡率、MEG2 mRNA和蛋白相对表达量降低（P＜0.05）;与miR-21 mimics组比较,甘草素+miR-21 mimics组细胞相对活力、miR-21相对表达量降低,细胞凋亡率、MEG2 mRNA和蛋白相对表达量升高（P＜0.05）。双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-21直接靶向MEG2。【结论】 甘草素可以抑制NSCLC细胞增殖,促进细胞凋亡及增强放疗敏感性,其机制可能与调控miR-21对MEG2转录和翻译的抑制有关。     

姜黄素对缺氧诱导的人原发性肝癌细胞HepG2上皮细胞间充质转化的影响

目的 探讨姜黄素对缺氧诱导下人原发性肝癌细胞HepG2上皮细胞间充质转化的影响及其可能机制。方法 将HepG2细胞分3组：正常对照组、氯化钴（CoCl2）组和CoCl2加10 μmol/L姜黄素组。采用MTT法检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Real-time RT-PCR检测缺氧诱导因子－1α（hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α） mRNA表达,Western blot检测HIF-1α蛋白、E-钙黏蛋白（epithelial-cadherin,E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）表达。结果 HepG2细胞被CoCl2诱导缺氧后,细胞增殖及迁移能力增强,HIF-1α蛋白表达上调,上皮标志蛋白E-cadherin表达下降而间质标志蛋白Vimentin表达上调,与正常对照组比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。姜黄素干预缺氧HepG2细胞后,其增殖与迁移能力被明显抑制,同时HIF-1α蛋白表达下降,E-cadherin蛋白表达上调,Vimentin蛋白表达下降,与CoCl2组比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。3组HIF-1α mRNA表达比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论 缺氧诱导肝癌细胞HepG2增殖和迁移能力的增强可被姜黄素逆转,可能与姜黄素抑制缺氧诱导的HIF-1α蛋白上调和上皮细胞间充质转化有关。     

佐太对柔红霉素的增效作用

目的考察佐太对柔红霉素在癌细胞中吸收富集、促癌细胞凋亡的增效作用。方法选择HN4、K562、HepG2细胞,设置佐太给药组、柔红霉素给药组、佐太联合柔红霉素给药组。给药后24、48、72 h,采用HPLC-MS法检测3种癌细胞内柔红霉素浓度,MTT、AnnexinV-FITC/PI双染实验对比柔红霉素单独给药、联合给药后癌细胞凋亡情况。结果佐太联合柔红霉素给药48、72 h后,3种癌细胞中药物浓度与单独给药比较有所增加;给药48、72 h后,佐太能增加柔红霉素对癌细胞的促凋亡效果。结论佐太可促进柔红霉素进入癌细胞内部,从而达到药物增效的作用。     

NF-κB/IκB在和厚朴酚对磷酯酰乙醇胺诱导肝癌HepG2细胞凋亡中的表达变化

目的 探讨和厚朴酚(Honokiol)对磷脂酰乙醇胺诱导肝癌HepG2细胞凋亡及对核因子κB(NF-κB)、NF-κB抑制因子(IκB)基因表达的影响.方法 体外培养肝癌HepG2细胞,实验分为对照组、Honokiol组,采用Hoechst 33258染色观察细胞凋亡形态,MTT法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR检测NF-κB与IκB mRNA表达,Western blot检测NF-κB p65、IκB蛋白表达.结果 与对照组比较,PE组凋亡细胞数增多,细胞凋亡率增加,细胞增殖降低;NF-κB mRNA和蛋白表达增加,IκB mRNA和蛋白表达降低,差异均有显著性(P＜0.01).经Honokiol预处理后,细胞的增殖率较PE组增加,细胞凋亡率减少.NF-κB mRNA和蛋白表达减少,IκB mRNA和蛋白表达增加(P＜0.01).结论 和厚朴酚能抑制PE诱导的肝癌HepG2细胞凋亡,其作用机制可能与调节NF-κB/IκB表达有关.     

斑蝥素对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡的影响及其可能机制

目的:探讨不同浓度斑蝥素(cantharidin,CTD)对肝癌细胞HepG2细胞增殖、凋亡以及其可能机制。方法:应用长时间细胞观察及功能分析系统(IncuCyte~(TM) ZOOM)以及克隆形成实验,分析药物处理后肝癌细胞HepG2细胞增殖的影响。应用流式细胞术检测CTD对肝癌细胞HepG2凋亡的影响。采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测技术,检测CTD处理后,HepG2细胞pro半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)及聚二磷酸腺苷核糖多聚酶(PARP)蛋白表达的变化以及细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2),蛋白激酶B(Akt)磷酸化水平的变化。采用长时间细胞观察及功能分析系统检测ERK1/2抑制剂(PD98059),磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂(Wortmannin)与CTD共处理对HepG2细胞抑制作用的变化。结果:CTD在2.5μmol·L~(-1)时就能够明显抑制HepG2细胞的生长,但不出现明显凋亡。CTD 5μmol·L~(-1)时HepG2的生长几乎完全受到抑制,流式细胞术结果显示,HepG2细胞凋亡率达40.4%。同时Western blot结果显示CTD 5μmol·L~(-1)组细胞pro Caspase-3蛋白表达明显降低,Cleaved PARP蛋白表达明显上升,说明CTD 5μmol·L~(-1)组会出现细胞凋亡,与流式结果相符。CTD能够促进ERK磷酸化,但不能促进Akt磷酸化。结论:CTD 2.5μmol·L~(-1)具有抑制HepG2细胞生长的作用,5μmol·L~(-1)时能够促进HepG2细胞凋亡,提示CTD既具有抑制细胞生长作用,也具有一定的细胞毒作用。CTD能够促进ERK磷酸化,但不能促进Akt磷酸化。     

二氢青蒿素联合放疗对肺癌GLC-82细胞凋亡的影响及机制研究

目的研究二氢青蒿素（dihydroartemisinin,DHA）联合放疗对人肺腺癌GLC-82细胞周期和凋亡的影响及其机制。方法 MTT法检测不同浓度DHA分别在24、48、72 h对GLC-82细胞的抑制作用;克隆形成实验分析,多靶单击拟合模型方程计算放射增敏比,评价增敏效果;流式细胞术检测DHA联合放疗对GLC-82细胞周期和凋亡的影响;Western blot检测P53、P21、Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果不同浓度DHA（4、8、16、32、64、128μg/mL）作用24、48和72 h的IC50值分别为：38.25、20.58、10.36μg/mL,对GLC-82细胞的毒性有明显剂量和时间依赖性,抑制率较空白对照组明显增加（P〈0.01,P〈0.05）;DHA对GLC-82细胞具有放射增敏作用,其增敏比为1.4。DHA联合放疗可使GLC-82细胞周期的构成发生明显的变化并诱导细胞凋亡,凋亡率为21.5%,与空白对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。Western blot表明,DHA联合放疗作用GLC-82细胞后P53和P21的蛋白水平表达增加,同时下调Bcl-2蛋白表达（P〈0.01,P〈0.05）。结论 DHA对肺腺癌GLC-82细胞有较强的细胞毒性和放射增敏作用,其作用机制可能是使GLC-82细胞生长停滞在G0/G1期并诱导细胞凋亡,使S期细胞比例降低;使P53功能恢复,通过抑制Bcl-2蛋白的表达促使凋亡,从而起到杀伤肿瘤的作用。