KLF8在骨肉瘤组织中的表达及对骨肉瘤细胞生物学特性影响

目的探讨Krüppel样转录因子8(KLF8)在骨肉瘤中的表达及对骨肉瘤细胞生物学特性的影响。方法通过RT-PCR和Western blot法分别检测骨肉瘤组织及配对的正常非肿瘤组织中KLF8 mRNA和蛋白水平。以骨肉瘤细胞F5M2为研究对象,细胞转染KLF8小干扰RNA(KLF8 siRNA组)及对照阴性序列(siRNA control组),同时以不做处理的细胞为对照组。RT-PCR和Western blot检测转染后细胞中KLF8 mRNA和蛋白水平。噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中信号转导与转录因子3(STAT3)、磷酸化的STAT3(pSTAT3)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)表达。结果 KLF8在骨肉瘤组织中的表达水平明显高于非肿瘤组织(P0.05)。siRNA control组细胞中KLF8、STAT3、p-STAT3、Cleaved Caspase-3水平及细胞存活率、凋亡率与对照组相比无显著差异(P0.05)。KLF8 siRNA组细胞存活率及细胞中p-STAT3、KLF8水平均明显低于对照组(P0.05)。KLF8 siRNA组细胞凋亡率及细胞中Cleaved Caspase-3水平均明显高于对照组(P0.05)。结论 KLF8在骨肉瘤组织中表达上调。干扰KLF8表达可能通过作用于STAT3信号通路抑制骨肉瘤细胞增殖,促进骨肉瘤细胞凋亡。     

沉默HDAC4抑制多发性骨髓瘤细胞增殖作用机制的研究

目的探究沉默组蛋白去乙酰化酶4(HDAC4)基因表达对多发性骨髓瘤LP-1细胞增殖、凋亡的影响以及作用机制。方法脂质体Lipofectamine 2000转入LP-1细胞中,实验分为对照组(不做任何处理)、阴性组(转入siRNA NC)、siRNA HDAC4组(转入siRNA HDAC4)。CCK-8法检测细胞的增殖活性,Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞的凋亡率,蛋白质印迹法(Western Blot)检测细胞中HDAC4、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(Cleaved Caspase-9)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)的表达量。结果转染siRNA HDAC4后,LP-1细胞中HDAC4蛋白的表达量显著低于对照组(P 0. 05);与对照组相比,siRNA HDAC4组细胞的增殖活性显著降低(P 0. 05);而凋亡率显著增加(P 0. 05); siRNA HDAC4组细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平显著高于对照组(P 0. 05),但Bcl-2蛋白水平显著降低(P 0. 05)。结论沉默HDAC4基因可抑制多发性骨髓瘤LP-1细胞增殖,诱导其凋亡,可能通过降低Bcl-2水平,促进Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9表达发挥作用。     

HMGB1对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的研究高迁移率蛋白1(HMGB1)对膀胱癌细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法膀胱癌细胞BIU-87分成对照组、siRNA control组、HMGB1 siRNA组共3组,siRNA control组、HMGB1 siRNA组细胞为感染siRNA control慢病毒和HMGB1 siRNA慢病毒的BIU-87细胞,对照组为不感染慢病毒的BIU-87细胞。用Realtime PCR和Western blot检测细胞中HMGB1表达水平。MTT检测膀胱癌细胞增殖活性,流式细胞术检测膀胱癌细胞凋亡,Western blot检测膀胱癌细胞中CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、活化型Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、活化型Caspase-12(Cleaved Caspase-12)、活化转录因子4(ATF4)蛋白水平。结果 HMGB1 siRNA可以下调膀胱癌细胞中HMGB1的表达和转录,siRNA control对膀胱癌细胞中HMGB1表达没有影响。沉默HMGB1后膀胱癌细胞增殖能力下降,细胞凋亡率升高,细胞中凋亡蛋白Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-12表达水平升高,内质网应激蛋白CHOP、ATF4表达水平也升高。结论 HMGB1沉默可以通过内质网途径诱导膀胱癌细胞凋亡,抑制膀胱癌细胞增殖。     

miR-214对过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡的影响

目的探讨miR-214对过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡中的影响。方法以心肌细胞H9C2为研究对象,心肌细胞分为4组,依次为正常组、过氧化氢组、miR-214组、NC组,其中miR-214组、NC组细胞分别在转染miR-214模拟物和阴性对照序列后用过氧化氢处理,过氧化氢组用未转染的心肌细胞经过氧化氢处理,正常组用未转染的心肌细胞正常培养。RT-PCR检测细胞中miR-214表达,MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、信号转导与转录因子3(STAT3)、磷酸化信号转导与转录因子3(p-STAT3)水平。结果过氧化氢组细胞中miR-214、p-STAT3表达水平和细胞存活率与正常组相比明显下降,而细胞凋亡率及细胞中Cleaved Caspase-3表达水平与正常组相比明显升高(P0.01)。miR-214组细胞中miR-214、p-STAT3表达水平和细胞存活率与过氧化氢组相比明显升高,而细胞凋亡率及细胞中Cleaved Caspase-3表达水平与过氧化氢组相比明显降低(P0.01)。结论过氧化氢能够诱导心肌细胞凋亡,miR-214能抑制过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡,STAT3信号通路可能是其作用机制之一。     

MMP-2基因对前列腺癌细胞恶性表型的影响及其机制研究

目的探讨基质金属蛋白酶2(MMP-2)基因对前列腺癌细胞恶性表型的影响及其机制。方法 Western blot和RT-PCR检测人正常前列腺上皮RWPE-1细胞和前列腺癌PC3细胞中MMP-2的表达情况;以脂质体Lipfectamine 2000将MMP-2 siRNA和MMP-2 control质粒分别转染至siRNA MMP-2组和siRNA control组细胞中,以不做处理的细胞为对照组。Western blot和RT-PCR检测其转染效果;CCK-8法检测细胞增殖;Transwell法检测细胞的侵袭和迁移;FCM检测细胞凋亡;Western blot检测细胞中血管内皮生长因子(VEGF)和Cleaved Caspase-8蛋白的表达。结果与RWPE-1细胞相比,PC3细胞中MMP-2蛋白和mRNA的表达水平显著升高(P0.05)。MMP-2在siRNA MMP-2组细胞中的蛋白和mRNA表达显著低于对照组(P0.05),而siRNA control组与对照组间MMP-2的蛋白和mRNA表达水平差异无显著性(P0.05)。siRNA MMP-2组细胞的OD值、侵袭细胞数、迁移细胞数和VEGF蛋白的表达水平显著下降,而细胞凋亡率和Cleaved Caspase-8蛋白水平显著升高,差异均显著性(P0.05);对照组和siRNA control组间OD值、侵袭细胞数、迁移细胞数、细胞凋亡率、VEGF和Cleaved Caspase-8蛋白表达均未见显著差异(P0.05)。结论 MMP-2在前列腺癌PC3细胞中高表达,干扰其表达可抑制细胞的增殖、侵袭和迁移,并促进细胞凋亡,其作用机制可能与下调VEGF蛋白和上调Cleaved Caspase-8蛋白的表达有关。     

沉默Bax基因对TNF-α诱导肺泡上皮细胞凋亡的影响

目的探讨沉默Bcl-2相关X蛋白(Bax)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导肺泡上皮细胞凋亡的影响。方法用0 ng/ml、10 ng/ml的TNF-α作用于人A549细胞,RT-PCR和Western blot检测细胞中Bax表达水平。A549细胞转染Bax小干扰RNA(Bax siRNA)、小干扰RNA阴性对照(siRNA control),RT-PCR和Western blot检测细胞中Bax表达水平。细胞分为空白对照组(未转染细胞)、TNF-α组(未转染细胞,培养液中含有10 ng/ml的TNF-α)、阴性对照组(转染siRNA control后的细胞,培养液中含有10 ng/ml的TNF-α)、干扰组(转染Bax siRNA后的细胞,培养液中含有10 ng/ml的TNF-α)。流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Western blot检测细胞中p38、磷酸化的p38(p-p38)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)的表达。结果 10 ng/ml的TNF-α作用后的细胞中Bax mRNA和蛋白表达水平升高。转染Bax siRNA后细胞中Bax mRNA和蛋白水平均降低。空白对照组、TNF-α组、阴性对照组、干扰组细胞凋亡率依次为:(0.92±0.01)%、(7.94±0.19)%、(7.93±0.17)%、(4.62±0.13)%。TNF-α组、阴性对照组、干扰组细胞中p-p38、Cleaved Caspase-3表达水平均明显高于空白对照组(P0.01)。干扰组细胞中p-p38、Cleaved Caspase-3表达水平均明显低于TNF-α组(P0.01)。结论 TNF-α能够诱导肺泡上皮细胞凋亡,而沉默Bax能够部分逆转TNF-α促凋亡作用,作用机制可能与p38信号通路有关。     

沉默MADD基因诱导甲状腺癌细胞凋亡及机制研究

目的研究沉默有丝分裂原激酶活化死亡结构域蛋白(MADD)基因对甲状腺癌细胞SW579凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法体外培养人甲状腺癌细胞SW579,将MADD小干扰RNA(MADD siRNA)转染至甲状腺癌细胞,同时转染阴性对照(siRNA Control)。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)分别检测细胞中MADD的表达,确定转染效率。当细胞转染后48 h,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,采用Western blot检测细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白的表达情况。结果转染后甲状腺癌细胞中MADD的转录和表达水平显著降低,与对照组相比,差异具有统计学意义(P0.05);MTT法检测结果显示沉默MADD能够抑制甲状腺癌细胞增殖;流式细胞术检测结果显示,沉默MADD能够诱导甲状腺癌细胞凋亡;Western blot检测结果显示,沉默MADD能够上调甲状腺癌细胞中Cleaved Caspase-3和Bax蛋白的表达,差异有统计学意义(P0.05)。结论沉默MADD能够在体外抑制甲状腺癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,其作用机制可能与活化Caspase-3及上调Bax蛋白的表达相关。     

Wnt信号通路抑制剂对下调PKM2表达后的肺癌A549细胞增殖凋亡及ROS水平的影响

目的研究Wnt信号通路抑制剂对下调丙酮酸激酶M2亚型(PKM2)表达后的肺癌A549细胞增殖凋亡及活性氧(ROS)水平的影响。方法肺癌A549细胞转染PKM2小干扰RNA(PKM2 siRNA组)和小干扰RNA阴性对照(siRNA-NC组),以没有转染的A549细胞作为对照组。Real-time PCR和Western blot检测三组PKM2水平。用含有5μmol/L的Wnt信号通路抑制剂IWR-1的细胞培养液培养,设置为PKM2 siRNA+IWR-1组和IWR-1组,同时以不含有IWR-1的正常细胞培养液培养PKM2 siRNA组和对照组细胞。噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,二氯二氢荧光素二乙酸酯(H2DCFDA)法检测ROS水平,Western blot检测β-连环蛋白(β-catenin)、c-myc、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)水平。结果细胞转染PKM2 siRNA后的PKM2 mRNA和蛋白水平、细胞存活率明显下降,细胞凋亡率、ROS水平明显升高,细胞中β-catenin、c-myc水平下降,而Cleaved Caspase-3水平升高,与不转染的对照组细胞相比差异具有统计学意义(P0.01)。Wnt信号通路抑制剂处理A549细胞后,细胞存活率也下降,细胞凋亡增多,细胞中ROS水平升高,Cleaved Caspase-3水平升高,与正常培养的A549细胞相比差异具有统计学意义(P0.01)。Wnt信号通路抑制剂处理转染PKM2 siRNA后的A549细胞,细胞凋亡率最高,细胞存活率最低,细胞中ROS水平最高,与单纯Wnt信号通路抑制剂处理和单纯转染PKM2 siRNA后的细胞相比,差异具有统计学意义(P0.01)。结论 Wnt信号通路抑制剂和下调PKM2均能够抑制肺癌细胞增殖,促进肺癌细胞凋亡,ROS水平升高,并且二者共同作用后抑制肺癌细胞的作用更明显,下调PKM2可能通过抑制Wnt信号通路阻碍肺癌发生。     

SATB2基因siRNA对口腔鳞状细胞癌生长及STAT3信号的抑制作用

目的:探讨抑制SATB2基因表达对口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响及机制。方法:以LipofectaminTM2000为载体,将阴性对照siRNA(阴性组)与SATB2特异性siRNA(抑制组)转染人OSCC细胞株CAL-27,设置空白组,CCK-8法检测siRNA转染4 d的细胞增殖;siRNA转染CAL-27细胞48 h,Western印迹法检测E-cadherin,STAT3,p-STAT3和cleaved caspase-3蛋白表达。克隆形成实验、Transwell小室及流式细胞术分别检测细胞克隆形成率、细胞侵袭和迁移能力及细胞凋亡率。结果:转染siRNA的CAL-27细胞SATB2蛋白表达明显低于空白组(P0.05)。与空白组相比,抑制组细胞增殖、侵袭和迁移能力均明显降低,细胞凋亡率明显升高,E-cadherin和cleaved caspase-3蛋白表达明显升高,p-STAT3蛋白表达明显降低(P0.05)。结论:RNA干扰抑制SATB2基因表达可抑制OSCC细胞生长,机制与下调STAT3信号有关。     

黄连素对缺氧复氧诱导的心肌细胞凋亡的影响

目的研究黄连素对缺氧复氧诱导的心肌细胞凋亡的影响。方法以心肌细胞H9C2为研究对象,分为3组,依次为对照组、模型组、黄连素组,其中模型组和黄连素组进行缺氧复氧处理,黄连素组用黄连素预处理,对照组不做处理。MTT检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量,Western blot检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、信号转导与转录因子3(STAT3)、磷酸化的STAT3(p-STAT3)表达。结果模型组细胞存活率、p-STAT3水平、SOD含量均明显低于对照组,而细胞凋亡率、LDH含量、MDA含量和Cleaved Caspase-3水平均明显高于对照组(P0.05)。黄连素组细胞存活率、p-STAT3水平、SOD含量均明显高于模型组,而细胞凋亡率、LDH含量、MDA含量和Cleaved Caspase-3水平均明显低于模型组(P0.05)。结论黄连素能够部分抑制缺氧复氧诱导的心肌细胞凋亡,并且对缺氧复氧抑制心肌细胞活性具有拮抗作用,其作用机制可能与细胞中STAT3信号通路有关。     

PDCD4调控STAT3信号通路对肾癌细胞凋亡的影响

目的研究程序性细胞死亡因子4(PDCD4)对肾癌细胞凋亡和信号转导与转录因子3(STAT3)信号通路的影响。方法肾癌细胞RC-2中转染PDCD4过表达载体和空载体记为PDCD4组和空载体组,同时以不做转染的细胞作为对照组。在转染PDCD4过表达载体后的肾癌细胞培养液中添加STAT3抑制剂AG490记为AG490+PDCD4组,在不做转染的肾癌细胞培养液中添加STAT3抑制剂AG490记为AG490组。qRT-PCR和Western blot法分别测定细胞内PDCD4 mRNA和蛋白表达。用STAT3信号通路抑制剂处理肾癌细胞,MTT测定各组细胞存活率,流式细胞术测定各组细胞凋亡情况,Western blot测定细胞中STAT3、p-STAT3、剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、裂解后的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(Cleaved PARP)蛋白水平。结果转染PDCD4过表达载体可以提高肾癌细胞中PDCD4 mRNA和蛋白水平,而转染空载体对细胞中PDCD4 mRNA和蛋白水平无显著影响。PDCD4组、AG490组肾癌细胞存活率明显降低,细胞凋亡明显增多,细胞内STAT3磷酸化水平降低,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。AG490+PDCD4组肾癌细胞存活率降低更多,细胞凋亡率进一步增加,细胞内的Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP蛋白水平增加,与PDCD4组、AG490组细胞相比,差异具有统计学意义(P0.05)。空载体组细胞存活率、凋亡率与对照组比,差异无统计学意义(P0.05)。结论 PDCD4可以通过降低肾癌细胞中STAT3激活水平诱导肾癌细胞凋亡。     

MTDH基因沉默对B淋巴瘤细胞增殖及侵袭的影响

目的探讨异黏蛋白(MTDH)基因沉默对B淋巴瘤细胞增殖及侵袭能力的影响。方法在B淋巴瘤细胞Raji中转染MTDH siRNA和siRNA对照,分别命名为MTDH siRNA组和siRNA对照组,将没有转染的细胞作为对照组。qRT-PCR和Western blot方法检测细胞中MTDH表达水平,MTT方法检测细胞增殖和黏附能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室检测细胞侵袭及迁移能力,Western blot检测细胞中波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、活化的Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白水平。结果MTDH siRNA细胞中MTDH mRNA和蛋白水平均明显低于对照组和siRNA对照组(P<0.05)。与对照组和siRNA对照组比较,MTDH siRNA细胞增殖和黏附能力降低,细胞凋亡率升高,细胞侵袭和迁移能力也降低,细胞中Vimentin、MMP-2、MMP-9蛋白水平降低,Cleaved Caspase-3蛋白水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论MTDH基因沉默下调B淋巴瘤细胞增殖能力,抑制B淋巴瘤细胞侵袭和迁移。     

Xklp2靶蛋白对肺癌细胞裸鼠成瘤能力的影响及机制研究

目的探讨Xklp2靶蛋白(TPX2)对肺癌细胞裸鼠成瘤能力的影响及机制。方法慢病毒感染肺癌细胞A549,以感染TPX2小干扰RNA(siRNA TPX2)和siRNA阴性对照慢病毒的细胞作为siRNA TPX2组和siRNA-NC组,同时以不做处理的细胞为Control组,RT-PCR和Western blot检测感染后细胞中TPX2水平,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,将各组细胞接种到裸鼠皮下,检测各组裸鼠肿瘤体积和重量,Western blot检测肿瘤组织中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、TPX2、p53水平。结果 siRNA-NC组细胞中TPX2 mRNA和蛋白水平、细胞增殖活性、凋亡率及Cleaved Caspase-3、TPX2、p53水平与Control组比较,差异无统计学意义(P0.05)。siRNA TPX2组细胞中TPX2mRNA和蛋白均明显低于Control组(P0.05)。siRNA TPX2组细胞增殖活性明显降低,凋亡率明显升高,与Control组比较差异有统计学意义(P0.05)。接种siRNA TPX2组细胞的裸鼠肿瘤体积和重量均低于Control组,而肿瘤组织中Cleaved Caspase-3、p53水平均高于Control组,TPX2水平低于Control组(P0.05)。结论下调TPX2抑制肺癌细胞增殖,促进肺癌细胞凋亡,抑制肺癌细胞裸鼠成瘤能力,这可能与促进p53表达和促进Caspase-3活化有关。     

HDAC1对喉癌细胞侵袭、迁移及血管内皮生长因子水平影响

目的研究组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)对喉癌细胞侵袭、迁移及血管内皮生长因子(VEGF)水平影响。方法喉癌细胞Hep2中转染HDAC1 siRNA和siRNA对照记为HDAC1 siRNA组和siRNA-NC组,同时以不做转染的细胞为对照组。qRT-PCR测定细胞中HDAC1 mRNA水平,Western blot检测细胞中HDAC1蛋白水平,Transwell小室检测细胞侵袭,细胞划痕实验检测细胞迁移,ELISA检测培养液上清中VEGF和碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)水平,Western blot检测细胞中信号转导与转录因子3(STAT3)、磷酸化的STAT3(p-STAT3)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)水平。结果 HDAC1 siRNA组细胞中HDAC1 mRNA和蛋白水平均明显低于对照组(P0.05)。siRNA-NC组细胞中HDAC1 mRNA和蛋白水平与对照组相比无显著差异(P0.05)。siRNA-NC组细胞迁移率、侵袭数目及培养液上清中VEGF、b FGF含量均明显降低,细胞中MMP-2、p-STAT3/STAT3水平也下降,与对照组相比差异有显著性(P0.05)。siRNA-NC组细胞迁移率、侵袭数目、MMP-2水平、p-STAT3/STAT3水平及培养液上清中VEGF、b FGF含量与对照组相比无显著差异(P0.05)。结论下调HDAC1表达可降低喉癌细胞侵袭和迁移能力,降低细胞分泌VEGF、b FGF水平,作用机制可能与抑制STAT3信号通路有关。     

WWOX对胰腺癌细胞活性、凋亡及ATP含量影响及机制初步研究

目的研究含WW域的氧化还原酶(WWOX)对胰腺癌细胞增殖活性、凋亡及细胞中三磷酸腺苷(ATP)含量影响。方法在胰腺癌SW1990细胞中转染WWOX过表达质粒,同时转染对照质粒作为阴性组,设置只加入转染试剂的细胞为对照组。荧光定量PCR和Western blot法检测各组胰腺癌细胞中WWOX的表达水平,用MTT法测定胰腺癌细胞增殖活性,用流式细胞术测定胰腺癌细胞凋亡情况,用JC-1法检测胰腺癌细胞线粒体膜电位,用荧光素酶法测定ATP含量,用Western blot法检测胰腺癌细胞线粒体和胞质中细胞色素C(Cyt C)及细胞中剪切型Caspase-9(Cleaved Caspase-9)、剪切型Caspase-3(Cleaved Caspase-3)蛋白表达。结果 WWOX过表达质粒转染后的SW1990细胞中WWOX mRNA和蛋白水平高于对照组(P0.05)。高表达WWOX后的SW1990细胞增殖活性降低,细胞凋亡率升高,细胞中ATP含量降低,线粒体膜电位降低,线粒体中Cyt-C蛋白水平降低,胞质中Cyt-C蛋白水平升高,细胞中Cleaved Caspase-9、Cleaved Caspase-3蛋白水平升高,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。阴性组细胞WWOX mRNA和蛋白水平、细胞增殖活性、凋亡率、ATP含量、线粒体膜电位、胞质和线粒体中Cyt-C蛋白水平、细胞中Cleaved Caspase-9和Cleaved Caspase-3蛋白水平与对照组相比均无显著差异(P0.05)。结论 WWOX可以抑制胰腺癌细胞增殖活性,诱导胰腺癌细胞凋亡,减少细胞中ATP合成,这可能与减少线粒体释放Cyt-C和线粒体膜电位有关。     

石见穿总甾醇调控乳腺癌细胞增殖分化凋亡的研究

目的研究石见穿总甾醇对乳腺癌细胞增殖分化凋亡的作用及机制。方法以MDA-MB-231细胞为研究对象,用不同浓度(0,50μg/ml,100μg/ml,150μg/ml,200μg/ml)的石见穿总甾醇作用后,MTT检测细胞增殖,计算半数抑制浓度。用半数抑制浓度的石见穿总甾醇作用于MDA-MB-231细胞,流式细胞术检测细胞凋亡,ELISA检测培养液上清中粘蛋白1(MUC-1)含量,Western blot检测细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、信号转导与转录因子3(STAT3)、磷酸化的STAT3(p-STAT3)表达水平。结果不同浓度的石见穿总甾醇作用后细胞的增殖能力下降,且呈浓度依赖型。半数抑制浓度的石见穿总甾醇作用后乳腺癌细胞的凋亡率从(8.99±1.05)%升高至(23.58±2.59)%,细胞分泌的MUC-1含量由(53.68±3.12)U/ml下降至(39.52±2.15)U/ml,细胞中Cleaved Caspase-3蛋白水平从0.16±0.05升高至0.65±0.06,p-STAT3水平由0.22±0.05降低至0.05±0.01。结论石见穿总甾醇可能通过STAT3信号通路和Cleaved Caspase-3蛋白水平抑制乳腺癌细胞增殖,诱导乳腺癌细胞的分化和凋亡。     

RNA干扰HDAC1提高人宫颈癌HeLa细胞化疗敏感性研究

目的探讨体外应用RNA干扰技术抑制组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)表达,提高人宫颈癌HeLa细胞对顺铂敏感性的作用及机制。方法体外合成针对HDAC1的小干扰RNA(siRNA),脂质体法转染HeLa细胞,将其分为正常对照组(无干预措施)、阴性对照组(转染阴性对照siRNA)及siRNA干扰组(转染HDAC1基因siRNA)。采用Western blot法检测各组细胞HDAC1蛋白和乙酰化组蛋白H4(Ac-H4)的表达,采用聚合酶链反应(PCR)法检测HDAC1基因和NF-κB基因mRNA表达。HeLa细胞经不同浓度顺铂作用后,采用四甲基偶氮唑蓝比色法检测对顺铂的敏感性,以及采用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果与正常对照组及阴性对照组比较,siRNA干扰组HeLa细胞HDAC1基因mRNA和蛋白表达均降低(P0.05或P0.01),细胞内Ac-H4表达增加(P0.05),同时NF-κB基因mRNA表达降低(P0.05)。经不同浓度顺铂作用后,与正常对照组及阴性对照组比较,siRNA干扰组HeLa细胞对顺铂的50%抑制浓度降低(P0.05或P=0.01),细胞凋亡率增加(P0.01)。结论 HDAC1基因siRNA能够提高宫颈癌HeLa细胞对顺铂的敏感性,增加组蛋白乙酰化水平、抑制HDAC1基因及NF-κB基因表达可能是其作用机制。     

下调STAT3基因调控腺样囊性癌细胞生长的实验研究

目的:探讨RNA干扰技术沉默STAT3基因调控腺样囊性癌细胞生长的实验研究。方法:人腺样囊性癌生长细胞株ACC 2常规培养,分别采用A组为空白转染组,B组转染阴性对照siRNA(NC),C组转染特异性的siRNA(siRNA组)转染进ACC2,采用qRT PCR和Western blot法检测转染后STAT3 mRNA和蛋白表达水平的变化。MTT检测转染后腺样囊性癌细胞增殖。结果:ACC2细胞转染STAT3 siRNA 48 h后,STAT3 mRNA和蛋白的表达均受到明显抑制(P0.05)。ACC 2生长72 h细胞转染后细胞增殖受到抑制,较对照组有显著性差异(P0.05)。结论:STAT3基因有可能成为腺样囊性癌细胞生长基因治疗中重要的靶基因。     

IncRNA MT1JP抑制乳腺癌细胞增殖并促进乳腺癌凋亡研究

目的探讨长链非编码RNA金属硫蛋白1J(IncRNA MT1JP)对乳腺癌细胞增殖凋亡的影响。方法收集人乳腺癌组织及对应的癌旁组织,体外培养乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231、HCC1569和人乳腺正常的上皮细胞MCF10A,RT-PCR检测组织和细胞中MT1JP水平。乳腺癌细胞转染MT1JP过表达载体和空载体分别命名为MT1JP组和NC组,同时以只加入转染试剂的细胞为对照组,RT-PCR检测细胞中MT1JP表达水平。噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中蛋白激酶B(Akt)、磷酸化的蛋白激酶B(p-Akt)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)表达水平。结果 MT1JP在乳腺癌组织中的表达水平明显低于癌旁组织(P0.05)。MT1JP表达水平由高到低为:MCF10A、HCC1569、MDA-MB-231、MCF-7,后续选用MCF-7细胞继续研究。MT1JP组细胞存活率及p-Akt水平明显低于对照组,而凋亡率和Cleaved Caspase-3水平明显高于对照组(P0.05)。结论 MT1JP在乳腺癌中表达下调,MT1JP能够抑制乳腺癌细胞增殖,促进乳腺癌细胞凋亡,作用机制可能与Akt信号通路有关。     

lncRNA MEG3对肝癌细胞增殖凋亡的影响及机制研究

目的探讨lncRNA MEG3对肝癌细胞增殖凋亡的影响及机制。方法 RT-PCR检测人肝癌HepG2细胞转染48 h后MEG3的mRNA表达;CCK8实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测ki67、PCNA、Cleaved caspase3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达。结果与pc DNA3.1组比较,pc DNA3.1-MEG3组MEG3的mRNA表达显著上升,pcDNA3.1-MEG3组细胞存活率显著降低,细胞凋亡率显著升高,Cleaved caspase3蛋白表达显著上调,ki67、PCNA、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著下调(P0.01)。结论 lncRNA MEG3高表达可抑制肝癌细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制与Wnt/β-catenin信号通路的调控有关。