SrtA基因在金黄色葡萄球菌诱发的小鼠乳腺炎致病过程中的作用研究

目的研究分选酶A基因(SrtA)在金黄色葡萄球菌诱发的小鼠乳腺炎致病过程中的作用。方法金黄色葡萄球菌野生型菌株及SrtA基因缺失突变型菌株分别通过乳导管注射到相应组BALB/c小鼠乳腺中,构建小鼠乳腺炎模型。对照组小鼠注射等量的无菌生理盐水。用TUNEL法检测各组小鼠乳腺细胞凋亡情况,酶联免疫吸附(ELISA)实验检测乳腺组织中炎症细胞因子肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素8(IL-8)和IL-10的含量,Western blot检测乳腺组织中JAK-STAT信号通路p-JAK2、p-STAT3蛋白的表达和核因子(NF-κB)信号通路p-IκBα、p-p65蛋白的表达。结果与对照组相比,野生型菌株处理组乳腺细胞凋亡率显著升高(P0.01),炎症细胞因子TNF-α、IL-8和IL-10含量显著增加(P0.01),乳腺组织中p-JAK2、p-STAT3、p-IκBα、p-p65蛋白表达显著上调(P0.01)。与野生型菌株处理组相比,突变型菌株处理组乳腺细胞凋亡率显著降低(P0.01),炎症细胞因子TNF-α、IL-8和IL-10含量显著减少(P0.01),乳腺组织中p-JAK2、p-STAT3、p-IκBα、p-p65蛋白表达显著下调(P0.01)。突变型菌株处理组与对照组相比,各项检测无显著性差异(P0.05)。结论金黄色葡萄球菌SrtA基因的缺失突变可能通过抑制JAK-STAT和NF-κB信号通路的激活,从而减少乳腺细胞的凋亡和炎症细胞因子的释放,最终减弱金黄色葡萄球菌对乳腺炎的致病作用。     

透明质酸酶在细菌致病机制中的作用

透明质酸酶（hyaluronidase，HAase）是一种蛋白水解酶，能特异性地分解细胞外基质成分——透明质酸（hyaluronic acid，HA），其作用是协助细菌在组织内播散，是细菌致病的毒力因子之一，又称扩散因子；HAase还可通过作用于细胞外基质而影响细胞增殖、分化及迁移，并在胚胎发育和肿瘤发生发展过程中发挥作用。HAase在很多细菌特别是链球菌和葡萄球菌为主的革兰阳性菌的致病机制中起着重要作用，人们对其致病机制的认识也渐趋清楚。本文就其分类、成分、生物学功能及其在链球菌属及金葡菌相关疾病发病机制中的作用作一综述。     

铁调素在小鼠急性肝损伤过程中的保护作用研究

目的明确铁调素(hepcidin)在小鼠急性肝损伤过程中对于肝细胞的保护作用。方法首先在野生型C57BL/6小鼠(WT小鼠)与hepcidin敲除小鼠(HAMP~(-/-)小鼠)分别建立四氯化碳(CCl_4)诱导的急性肝损伤模型,分别以橄榄油处理组作为对照组。然后检测天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)的差异;通过苏木精-伊红染色法检测2种小鼠肝组织形态的变化;采用免疫组化的方法检测2种小鼠肝组织内肿瘤抑制基因P53与凋亡抑制基因Bcl-xl表达的差异;采用Real-time PCR(qPCR)检测2种小鼠肝组织内Fasl及Bcl-xl基因的表达情况;最后,采用流式细胞术检测hepcidin蛋白对于肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与放线菌素D(Act D)诱导的肝细胞系NCTC 1469凋亡的抑制作用。结果 CCl_4暴露的HAMP~(-/-)小鼠血清中AST和ALT含量较CCl_4暴露的WT小鼠更高(升高倍数分别为2. 7倍和3. 7倍),并且两组差异具有统计学意义(分别为P 0. 05和P 0. 01);苏木精-伊红染色结果显示,在CCl_4暴露的HAMP~(-/-)小鼠中炎症细胞浸润较WT小鼠严重;免疫组化显示,肿瘤抑制基因P53含量在CCl_4暴露的HAMP~(-/-)小鼠较WT小鼠升高,而凋亡抑制基因Bcl-xl含量在CCl_4暴露的HAMP~(-/-)小鼠较WT小鼠降低; q PCR结果显示,Fasl在WT小鼠和HAMP~(-/-)小鼠的CCl_4组较其对照组(Olive组)升高,但HAMP~(-/-)小鼠经CCl_4刺激后,Fasl表达量较WT小鼠CCl_4组升高了1. 2倍,而凋亡抑制基因Bcl-xl的表达量在HAMP~(-/-)小鼠的CCl_4组为WT小鼠的CCl_4组的0. 9倍;体外实验中流式细胞术结果显示,hepcidin蛋白可以有效抑制TNF-α与Act D诱导的肝细胞凋亡。结论Hepcidin可以通过调控凋亡相关基因的表达,抑制肝细胞凋亡,进而发挥对急性肝损伤的保护作用。     

TNFα-在小鼠叶酸诱导肾病中的致病作用及其机理研究

目的研究TNF-α在小鼠叶酸诱导肾病中的致病作用及其机制。方法建立小鼠叶酸诱导肾病模型，运用抗TNF-α多克隆抗体及对照抗体干预治疗，检测小鼠血清以及肾组织中TNF-α水平，肾小管上皮细胞凋亡情况以及凋亡相关蛋白的表达水平。结果在CD1小鼠叶酸诱导肾病模型中，尿素氮水平显著升高，肾小管上皮细胞坏死和凋亡增加，小鼠血清以及肾组织中TNF-α水平显著升高，肾皮质组织中Bcl-xL表达水平显著下降，运用抗TNF-α多克隆抗体干预治疗可保持Bcl—xL在肾组织中的表达水平，减少肾小管上皮细胞凋亡，有效减轻小鼠肾功能损害。结论TNF-α在小鼠叶酸诱导肾病发病机制中具有重要作用，阻断TNF-α是治疗急性肾衰的一种潜在有效手段。     

TNFα-在小鼠叶酸诱导肾病中的致病作用及其机理研究

目的研究TNF-α在小鼠叶酸诱导肾病中的致病作用及其机制。方法建立小鼠叶酸诱导肾病模型,运用抗TNF-α多克隆抗体及对照抗体干预治疗,检测小鼠血清以及肾组织中TNF-α水平,肾小管上皮细胞凋亡情况以及凋亡相关蛋白的表达水平。结果在CD1小鼠叶酸诱导肾病模型中,尿素氮水平显著升高,肾小管上皮细胞坏死和凋亡增加,小鼠血清以及肾组织中TNF-α水平显著升高,肾皮质组织中Bcl-xL表达水平显著下降,运用抗TNF-α多克隆抗体干预治疗可保持Bcl-xL在肾组织中的表达水平,减少肾小管上皮细胞凋亡,有效减轻小鼠肾功能损害。结论TNF-α在小鼠叶酸诱导肾病发病机制中具有重要作用,阻断TNF-α是治疗急性肾衰的一种潜在有效手段。     

清道夫受体A在实验性小鼠糖尿病发病中的作用研究

目的:研究清道夫受体A(SR-A)在小鼠糖尿病发病中的作用。方法:取雄性野生型(SR-A(+/+))小鼠和清道夫受体A敲除(SR-A(-/-))小鼠各60只,分别随机分成两组。采用链脲左菌素(STZ)50mg/(kg·d)连续5d腹腔注射诱导糖尿病模型,以血糖超过16.7mmol/L为糖尿病模型,分别于造模后0w,4w,8w测血糖、体重和24h尿白蛋白排泄率;于注射STZ后0,10d,4w,8w杀检。并留取胰腺和肾组织,测肾重、计算肾重/体重比值,并测定肾小球体积。结果:注射STZ的小鼠均有不同程度的多饮、多食、多尿和体重下降等糖尿病症状。SR-A(+/+)小鼠血糖水平、肾重、肾重/体重比值、肾小球体积、24h尿白蛋白排泄率和死亡率较SR-A(-/-)小鼠明显增高。SR-A(+/+)小鼠的胰岛、血管周围、导管周围、小叶间隔及胰岛周围区域有大量单个核细胞和CD68阳性细胞的浸润,而SR-A(-/-)小鼠的胰腺组织几乎无炎性细胞浸润。结论:SR-A在STZ诱导的实验性小鼠糖尿病模型的发生发展中可能起重要作用,可能通过促进巨噬细胞和单个核细胞在胰岛的局部浸润而诱导胰岛B细胞的损伤。     

肺炎链球菌神经氨酸酶A的研究进展

肺炎链球菌神经氨酸酶A(neuraminidase A,NanA)是由1035个氨基酸组成的多肽蛋白,是肺炎链球菌感染过程中的重要毒力因子。该蛋白在肺炎链球菌3种同源神经氨酸酶(NanA、NanB、NanC)中活性最强、保守性最高。文章从NanA的结构以及NanA在促进肺炎球菌黏附与定植、生物膜形成、引发侵袭性感染和与流感病毒协同作用、疫苗应用等方面阐述了肺炎链球菌NanA的功能。     

酶联免疫吸附试验检测A群链球菌

A链的诊断主要靠细菌分离培养和生化反应,此法费时,培养条件要求高,给及时确诊带来一定困难.我们建立了ELISA 法来诊断A 链感染.一、材料和方法     

抗DNA酶B在小儿A型溶血性链球菌感染中的诊断意义

目的探讨抗脱氧核糖核酸酶B(抗DNA酶B)在小儿A型溶血性链球菌感染所致疾病中的诊断价值.方法用抗DNA酶B微量法,测定126例A型溶血性链球菌感染所致疾病的小儿血清抗DNA酶B抗体,同时检测抗链球菌溶血素O(ASO),对两种检测方法的阳性率进行比较.结果肾炎皮损组、咽炎痊愈及肾炎恢复组抗DNA酶B阳性率100%.0及63.3%,显示高于ASO阳性率20.0%及23.3%,两者联合检测阳性率均在70.0%以上;不典型风湿热组,肾炎上感组及咽炎组抗DNA酶B阳性率分别为100.0%、87.5%和62.0%,虽和ASO(80.0%、50.0%和72.0%)无显著性差异(P＞0.05),但两者联合检测阳性率可达100%及84.0%,提示抗DNA酶B对急性肾小球肾炎诊断有重要的临床价值.结论 ASO联合抗DNA酶B检测可提高A型溶血性链球菌感染的检出率.     

肌红蛋白在挤压综合征中的致病作用

挤压综合征是指四肢或躯干肌肉丰富的部位,受外部重力长时间压榨、挤压或长期固定体位而造成肌肉组织的缺血性坏死,出现受压部位的肿胀、麻木或瘫痪,并有肌红蛋白尿及高血钾为特点的急性肾功能衰竭(ARF)。如不积极抢救,死亡率高达40%。肌红蛋白属于血红素蛋白     

自噬体在肺炎链球菌感染过程中的保护作用机制探讨

目的:检测微管相关蛋白轻链-3(LC3)在肺泡Ⅱ型上皮细胞A549上的表达情况,及3-甲基腺嘌呤(3MA)刺激后对其表达的影响,为研究自噬体在抵抗肺炎链球菌感染过程中的保护作用奠定基础.方法:体外培养肺泡Ⅱ型上皮细胞A549,在肺炎链球菌感染A549细胞12h时用倒置显微镜拍照并提取RNA,采用RT-PCR的方法检测LC3 mRNA的表达情况.同时检测对照组、3MA组、Spn组和3MA+ Spn组上清液乳酸脱氢酶(LDH)的OD值.结果:RT-PCR检测LC3 mRNA有明显表达,3MA可以抑制LC3的表达.LDH检测显示Spn组和3MA+ Spn组上清液LDH的OD值数据两两比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:LC3在肺泡Ⅱ型上皮细胞中显著表达,3MA可以抑制细胞的自噬作用.加3MA后,肺炎链球菌感染肺泡Ⅱ型上皮细胞坏死增加,提示自噬体在抵抗肺炎链球菌的感染过程中起一定的保护作用.     

流式细胞术在小鼠造血干细胞分析分选中的应用

造血干细胞是目前研究最深入的成体干细胞,具有极大的临床应用价值.但是由于造血干细胞以极低比例存在于小鼠骨髓中,这给其分离纯化及功能研究带来了一定的难度.目前最常用的小鼠造血干细胞分选手段是流式细胞术.     

超抗原在金黄色葡萄球菌致病中的作用

近几十年来,随着抗生素的广泛临床应用,尽管医院内外感染的病原菌种类发生很大的变迁,但金黄色葡萄球菌(以下简称金葡菌)仍是医院内、外感染的重要而危险的致病菌,尤其是耐甲氧西林金葡菌(MRSA)出现以后,给治疗带来了严峻挑战.     

幽门螺杆菌尿素酶的特性和致病作用

尿素酶在临床实验室已被广泛地用作细菌分类鉴定的依据.近年来认识到它在人类许多疾病的发病机理中具有重要地位,特别是发现幽门螺杆菌(Helicobacter pylori 简称HP)是慢性胃炎的病因,给尿素酶的研究带来了新的活力.现将近年来有关HP尿素酶的研究作一综述.     

儿童侵袭性肺炎链球菌血清型分布的调查研究

目的调查分析儿童侵袭性肺炎链球菌血清型分布情况,便于肺炎链球菌感染的预防和临床用药。方法从2010年2月至2013年8月间该院因侵袭性肺炎链球菌感染患儿76例分离获得肺炎链球菌菌株,行荚膜肿胀试验确定其血清型。结果76株菌株中,2株呈阴性,其余74株分属于19F、19A、14、9v、7F等8个血清型,以19F和19A最为常见,而血清型8最为少见;同时,PCV7覆盖率仅为68.4%,而对于PCV13的覆盖率达94.7%。结论肺炎链球菌血清分型检测有助于肺炎链球菌感染的预防,PCV13应作为疫苗接种的首选,从而降低感染的发生。     

幽门弯曲菌的致病作用和尿素酶试验

近年来科学家们对幽门弯曲菌(CP)与慢性胃炎的关系进行了大量研究,在细菌学检查鉴定和致病     

芳香化酶P450A在子宫内膜异位症中的表达及其作用

目的 研究卵巢巧克力囊肿异位内膜腺上皮、间质细胞及其在位内膜P450芳香化酶蛋白和mRNA表达，探讨其在子宫内膜异位症发病中的作用及其临床意义。方法 采用逆转录聚合酶联反应（RT-PCR）和免疫组化技术检测45例巧囊壁、32在位内膜和35例正常内膜中P450芳香化酶（P450A）mRNA及蛋白的表达。结果 巧囊壁异位内膜P450A mRNA表达量高于在位内膜（P﹤0.01）； 35例正常内膜中仅有2例表达；免疫组化检测巧囊壁P450A蛋白其表达特征与mRNA一致。结论 子宫内膜异位症异位灶有P450A表达，这种雌激素的合成酶能在异位灶局部合成异常的雌激素；在位内膜有P450A表达，提示在位内膜本身局部有雌激素的合成，其保护机制劣于正常内膜。子宫内膜异位症P450A的表达在其发病中起到重要作用。