miR-21在前列腺癌中的表达及抑制其表达对前列腺癌细胞增殖凋亡的影响

目的探讨抑制前列腺癌细胞中miR-21基因表达对癌细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法 RTPCR检测前列腺癌及癌旁组织中miR-21基因的mRNA表达;空白对照组(Control)、阴性对照组(NC)和miR-21 inhibitor组转染人前列腺癌PC-3细胞,48 h后RT-PCR检测各组细胞中miR-21基因的mRNA表达;CCK8实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测ki67、Cleaved caspase3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达。结果前列腺癌组织中miR-21的mRNA表达显著高于癌旁组织(P0.01);转染miR-21 inhibitor后miR-21的表达显著降低;NC组细胞存活率、细胞凋亡率及ki67、Cleaved caspase3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达与对照组,差异无统计学意义(P0.05),miR-21 inhibitor组细胞存活率及ki67、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著低于对照组,细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著高于对照组(P0.01)。结论抑制前列腺癌细胞中miR-21基因的表达可降低癌细胞的增殖及诱导细胞凋亡,其机制与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

靶向沉默c-FLIPs基因表达对膀胱癌细胞增殖及凋亡的影响及机制

目的探讨抑制c-FLIPs基因表达对膀胱癌细胞增殖及凋亡的影响及机制。方法 RT-PCR及Western blot分别检测膀胱癌组织及细胞中c-FLIPs基因的表达;si-c-FLIPs转染人膀胱癌T24细胞,同时转染正常对照组(normal)和阴性对照组(si-control),48 h后Western blot检测c-FLIPs、Cleaved caspase 8、β-链蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白(Cyclin D1)蛋白表达;细胞计数试剂盒-8(CCK8)实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果膀胱癌组织及细胞中c-FLIPs基因的表达均显著高于癌旁组织(P0.01)。T24细胞中c-FLIPs基因的表达最高,选择作为研究对象;转染si-c-FLIPs后FLIPs的表达显著降低;si-c-FLIPs组细胞存活率及β-catenin和Cyclin D1蛋白表达显著低于normal组,细胞凋亡率及Cleaved caspase 8蛋白表达显著高于normal组(P0.01)。结论抑制膀胱癌中c-FLIPs基因表达可降低癌细胞的增殖及诱导细胞的凋亡,其机制与下调Wnt/β-catenin信号通路有关。     

RNA干扰Rac1基因表达抑制胃癌细胞增殖及促进凋亡的机制研究

目的 RNA干扰抑制Rac1基因的表达对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法 Western blot检测胃癌组织及相应的癌旁组织中Rac1基因的蛋白表达;将NC-siRNA、Rac1-siRNA转染至人胃癌SGC-7901细胞,不经任何处理的细胞作为空白对照组,48 h后,Western blot检测各组细胞中Rac1的蛋白表达;CCK8实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测ki67、PCNA、Cleaved caspase3、Notch1、Hes1蛋白表达。结果 Rac1在胃癌组织中的蛋白表达显著高于癌旁组织(P0.01);RNA干扰SGC-7901细胞中Rac1基因后能显著降低Rac1的蛋白表达;与对照组及NC-siRNA组比较,Rac1-siRNA组细胞存活率及ki67、PCNA、Notch1、Hes1蛋白表达显著降低,细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著升高(P0.01)。结论 Rac1基因在胃癌组织中高表达,RNA干扰抑制Rac1基因表达后能显著降低细胞的增殖及诱导细胞凋亡,其机制与抑制Notch1信号通路有关。     

丙泊酚对食管癌细胞增殖、侵袭、凋亡的影响及机制研究

目的探讨丙泊酚对食管癌细胞增殖、侵袭、凋亡的影响及机制。方法 CCK8实验检测5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L的丙泊酚处理人食管癌细胞EC9706 48 h及80μmol/L的丙泊酚处理细胞12h、24 h、48 h、72 h的细胞增殖情况;80μmol/L的丙泊酚处理细胞72 h后,Transwell小室和流式细胞仪分别检测细胞的侵袭及凋亡情况;Western blot检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-13、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase 3)、β-catenin、细胞周期蛋白(Cyclin D1)蛋白表达。结果 40μmol/L、80μmol/L的丙泊酚处理组细胞存活率显著低于0μmol/L组(P0.05),在24 h、48 h、72 h的细胞存活率显著低于对照组0 h(P0.05);丙泊酚组细胞侵袭数及MMP-2、MMP-13、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著低于对照组,细胞凋亡率和Cleaved caspase 3蛋白显著高于对照组(P0.05)。结论丙泊酚可通过下调Wnt/β-catenin信号通路抑制食管癌细胞增殖及侵袭能力,诱导细胞的凋亡。     

LGR5对宫颈癌细胞上皮间质转化的影响及潜在机制研究

目的探讨富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体5(LGR5)对宫颈癌细胞上皮间质转化的影响及潜在机制。方法采用前瞻性研究,以宫颈癌细胞Hela为研究对象,构建过表达和敲低LGR5的细胞株,RT-PCR和Western blot检测LGR5表达。将转染pc DNA3.1-LGR5的Hela细胞作为LGR5组,以转染pc DNA3.1空载体的细胞记为pc DNA3.1组;将转染LGR5 siRNA细胞作为si LGR5组,以转染阴性对照siRNA细胞记为NC组。Western blot分别检测各组细胞中上皮间质标记物钙黏附蛋白E(E-cadherin)、钙黏附蛋白N(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)及Wnt/β-cadherin通路蛋白β链蛋白(β-catenin)和下游蛋白c-Myc、细胞周期蛋白(Cyclin D1)表达变化。Transwell实验检测各组细胞迁移侵袭能力变化。结果 Hela细胞中成功过表达和敲低了LGR5;与pc DNA3.1组相比,Hela细胞转染pc DNA3.1-LGR5后细胞中上皮标志物E-cadherin表达显著降低(P0.05),间质标记物vimentin、N-cadherin表达显著增加(P0.05)。与NC组相比,Hela细胞转染si LGR5后细胞中E-cadherin表达明显增加(P0.05),vimentin、Ncadherin表达明显下降(P0.05)。与pc DNA3.1组相比,Hela细胞过表达LGR5后细胞迁移侵袭能力、Wnt/β-catenin通路蛋白β-catenin及其下游基因c-Myc、Cyclin D1表达均显著增加(P0.05);而Hela细胞沉默LGR5后较NC组细胞迁移侵袭能力、Hela细胞中β-catenin、c-Myc和Cyclin D1表达均明显降低(P0.05)。结论过表达LGR5能够促进宫颈癌细胞Hela上皮间质转化和侵袭迁移,而干扰LGR5则抑制了细胞上皮间质转化和迁移侵袭,其中机制可能与LGR5调控Wnt/β-catenin信号转导有关。     

研究Cyp2j3基因对H9C2大鼠心肌细胞保护作用以及相关机制

目的探讨Cyp2j3基因通过STAT3信号通路对H9C2心肌细胞增殖凋亡的影响及机制。方法 H9C2大鼠心肌细胞分为正常对照组(对照组,常氧条件下培养)、pc DNA3.1组(转染空载体pcDNA3.1)、单纯缺氧复氧组(I/R+pcDNA3.1组,转染pc DNA3.1后,缺氧10 h后复氧2 h)和单纯缺氧复氧+pc DNA3.1-Cyp2j3组转染Cyp2j3的过表达载体后,缺氧10 h后复氧2 h)。Western bloting检测过表达Cyp2j3的效果;噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞活力;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测各组细胞的LDH活性;流式细胞术检测各组细胞的凋亡率;Western bloting检测增殖相关蛋白Ki67、凋亡相关蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)及信号转导与转录因子3(STAT3)信号通路STAT3和磷酸化的STAT3的蛋白表达。结果转染pc DNA3.1-Cyp2j3后的H9C2细胞Cyp2j3的蛋白表达显著升高;I/R+pc DNA3.1组和I/R+pcDNA3.1-Cyp2j3组细胞的OD值及Ki67、Bcl-2和pSTAT3的蛋白表达均显著低于pcDNA3.1组,LDH活性、细胞凋亡率及Caspase3蛋白表达均显著高于pcDNA3.1组(P0.05),而I/R+pc DNA3.1-Cyp2j3组细胞的OD值及Ki67、Bcl-2和p-STAT3的蛋白表达均显著高于I/R+pc DNA3.1组,LDH活性、细胞凋亡率及Caspase3蛋白表达均显著低于I/R+pcDNA3.1组(P0.05)。结论过表达Cyp2j3基因可通过激活STAT3信号减弱缺氧复氧引起的H9C2细胞增殖降低、LDH活性和凋亡增加,从而对心肌细胞起保护作用。     

Galectin-3调控Wnt信号通路影响骨肉瘤细胞增殖侵袭的实验研究

目的探讨沉默骨肉瘤细胞中半乳凝集素-3(Galectin-3)的表达对细胞增殖及侵袭的影响及机制。方法从骨肉瘤组织及相应的瘤旁组织中提取总蛋白,Western blot检测Galectin-3的蛋白表达;阴性对照组(NC-siRNA)和RNA干扰组(Galectin-3-siRNA)转染至人骨肉瘤MG63细胞,不经任何处理的细胞作为空白对照组,转染48 h后,提取细胞中的蛋白,Western blot检测各组细胞中Galectin-3的蛋白表达;CCK8实验和Transwell小室分别检测细胞增殖和侵袭能力;Western blot检测ki67、MMP-2、MMP-9、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达。结果转染Galectin-3-siRNA能显著降低MG63细胞中Galectin-3的蛋白表达;与对照组及NC-siRNA组比较,Galectin-3-siRNA组细胞存活率及细胞侵袭数显著降低,ki67、MMP-2、MMP-9、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著下调(P0.05)。结论 Galectin-3在骨肉瘤组织中的表达显著高于瘤旁组织,RNA干扰沉默Galectin-3的表达可显著降低细胞的增殖及侵袭能力,其机制与抑制wnt信号通路有关。     

食管癌细胞Vasohibin-1基因表达对癌细胞生物学特性的影响研究

目的探讨上调食管癌细胞Vasohibin-1(VASH-1)表达对癌细胞活力、凋亡率的影响及机制。方法将人食管癌EC9706细胞分为空白对照组、pc DNA3. 1组和pc DNA3. 1-VASH-1组。未转染的细胞为空白对照组,pc DNA3. 1组和pc DNA3. 1-VASH-1组转染pc DNA3. 1及pc DNA3. 1-VASH-1参照脂质体Lipofectamine TM2000试剂盒说明。转染48 h,通过Western blotting检测VASH-1、血管内皮因子A(VEGF-A)、ki67、Bax、丝苏氨酸蛋白激酶(AKT)和磷酸化丝苏氨酸蛋白激酶(p-AKT)蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡率; CCK-8法检测转染0～96 h的细胞活力。结果 pc DNA3. 1-VASH-1组VASH-1表达明显高于空白对照组(P 0. 05)。与空白组对照组比较,pc DNA3.1-VASH-1组细胞活力明显降低,凋亡率明显升高,VEGF-A、ki67和p-AKT蛋白表达均明显降低,Bax蛋白表达明显升高(P 0. 05)。结论上调食管癌细胞VASH-1表达可抑制细胞活力和血管生成,诱导细胞凋亡,机制与下调PI3K/AKT信号通路有关。     

KLF8基因对胃癌细胞增殖凋亡的影响及机制研究

目的探讨Krüppel样转录因子8(KLF8)基因对胃癌细胞增殖凋亡的影响及机制。方法 Western blot检测胃癌组织及相应的癌旁组织中KLF8基因的蛋白表达;将NC-siRNA(阴性对照组)和KLF8-siRNA(RNA干扰组)转染至人胃癌SGC-7901细胞,未经任何处理的细胞作为空白对照组,转染48 h后,Western blot检测KLF8的蛋白表达;CCK8实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测Ki67、PCNA、Cleaved caspase3、Notch1、Hes1蛋白表达。结果与癌旁组织比较,胃癌组织中KLF8的蛋白表达显著升高(P0.01);与对照组比较,NC-siRNA组KLF8的蛋白表达无明显变化(P0.05),KLF8-siRNA组KLF8蛋白表达显著降低(P0.01);与对照组及NC-siRNA组比较,KLF8-siRNA组细胞存活率及Ki67、PCNA、Notch1、Hes1蛋白表达显著降低,细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著升高(P0.01)。结论 RNA干扰抑制KLF8的表达可显著降低SGC-7901细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制与Notch1信号通路的调控有关。     

甲状旁腺激素用于预防脊髓损伤后骨质疏松的实验研究

目的探讨甲状旁腺激素对预防脊髓损伤(SCI)后骨质疏松的作用及机制。方法建立SCI模型,将实验分为空白对照组、SCI模型组、SCI甲状旁腺激素组和SCI阿伦磷酸钠组。空白对照组及SCI模型组不做处理,SCI甲状旁腺激素组每3天按照60μg/kg注射甲状旁腺激素一次,SCI阿伦磷酸钠组术后1 h开始灌服阿伦磷酸钠药液。BBB评分法记录术后的1 d、3 d、7 d、14 d、28 d、42 d、56 d大鼠的行为学运动评分;血钙和碱性磷酸酶试剂盒分别检测4和8周大鼠血钙(Ca)和碱性磷酸酶(ALP)含量,X线骨密度仪测定股骨和胫骨的骨密度;原位DNA片段法(TUNEL)检测细胞凋亡指数;Western blot检测Cleaved caspase3、β-catenin、GSK-3β蛋白表达。结果在各个时间点SCI模型组BBB评分均显著低于空白对照组(P0.05),SCI甲状旁腺组和SCI阿伦磷酸钠组在各个时间点BBB评分均显著高于SCI模型组(P0.05);SCI模型组在4周和8周ALP含量、股骨和胫骨骨密度及β-catenin蛋白表达均显著低于空白对照组,Ca含量、细胞凋亡指数及Cleaved caspase3和GSK-3β蛋白表达均显著高于空白对照组(P0.05);SCI甲状旁腺激素组和SCI阿伦磷酸钠组在4周和8周ALP含量、股骨和胫骨骨密度及β-catenin蛋白表达显著高于SCI模型组,Ca含量、细胞凋亡指数及Cleaved caspase3和GSK-3β蛋白表达显著低于SCI模型组(P0.05);SCI甲状旁腺激素组和SCI阿伦磷酸钠组在8周的ALP含量、股骨和胫骨骨密度及β-catenin蛋白表达显著高于4周,Ca含量、细胞凋亡指数及Cleaved caspase3和GSK-3β蛋白表达显著低于4周(P0.05)。结论甲状旁腺激素可通过调控Wnt/β-catenin信号通路对脊髓损伤后骨质疏松有一定的治疗作用。     

β-catenin特异性抑制剂XAV939对套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞增殖抑制的实验研究

目的:通过短发夹RNA(shRNA)干扰β-catenin基因的表达及使用β-catenin特异性抑制剂XAV939作用于套细胞淋巴瘤(MCL)Jeko-1细胞株,了解特异性抑制β-catenin活性对Jeko-1细胞增殖及细胞凋亡的影响。方法:将构建β-catenin shRNA真核表达载体转染Jeko-1细胞,应用RT-PCR和Western blot的方法鉴定干扰效果,用不同浓度XAV939处理MCL细胞株Jeko-1;应用MTT法绘制细胞生长曲线,流式细胞术分析细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白BCL-2、BAX、Cyclin D1、C-MYC、caspase-3表达水平的变化。结果:shRNA转染48 h后,RTPCR、Western blot检测发现,Jeko-1细胞的β-catenin的mRNA、蛋白表达下降;无论使用shRNA或抑制剂处理,均可抑制Jeko-1细胞增殖,促进其凋亡;Western blot检测显示,凋亡相关蛋白BCL-2、Cyclin D1、C-MYC的表达下降,而BAX、caspase-3表达上升。结论:特异性抑制β-catenin活性能有效地抑制Jeko-1细胞的增殖,并诱导细胞凋亡。     

利多卡因通过调控STAT3对小儿急性髓系白血病细胞增殖、凋亡的分子机制

目的:探讨利多卡因对小儿急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法:用终浓度分别为0.2 mmol/L,0.5 mmol/L,0.75 mmol/L的利多卡因处理AML细胞HL-60和K562,以未经任何处理的正常细胞作为对照组(Con组);将si-NC,si-STAT3转染至HL-60细胞,记为si-NC组、si-STAT3组;将pc DNA3.1,pc DNA3.1-STAT3转染至HL-60细胞后用0.5mmol/L的利多卡因处理,分别记为LID0.5mmol/L+pc DNA3.1组、LID0.5mmol/L+pc DNA3.1-STAT3组,转染均采用脂质体法。蛋白质印迹法检测蛋白质表达;MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡。结果:利多卡因抑制Cyclin D1和Bcl-2的表达,促进p21和Bax的表达;抑制细胞HL-60和K562的增殖,促进细胞凋亡。利多卡因还抑制STAT3的表达,抑制STAT3表达可抑制细胞HL-60增殖,促进细胞凋亡。STAT3过表达逆转了利多卡因对细胞HL-60的增殖抑制和凋亡促进作用。结论:利多卡因可抑制细胞HL-60的增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与调控STAT3有关,或可为AML的治疗提供新思路和新靶点。     

组蛋白去乙酰化酶1对肝癌细胞增殖凋亡的影响

目的探讨组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)对肝癌细胞增殖凋亡的影响。方法肝癌细胞SNU-449转染HDAC1小干扰RNA(HDAC1 siRNA)和小干扰RNA阴性对照(siRNA control),同时设置不转染的细胞为对照。采用RT-PCR检测细胞中HDAC1mRNA的表达水平,Western blot检测细胞中HDAC1、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、信号转导与转录因子3(STAT3)、磷酸化的STAT3(p-STAT3)蛋白表达水平,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果肝癌细胞转染siRNA control后,细胞存活率、凋亡率及细胞中HDAC1、Cleaved Caspase-3、STAT3、p-STAT3表达水平与对照细胞相比无显著差异(P0.05)。肝癌细胞转染HDAC1 siRNA后,细胞中HDAC1mRNA和蛋白表达水平与对照细胞相比均受到抑制,并且细胞存活率只有(63.74±8.37)%,而细胞凋亡率升高为(32.84±6.92)%,细胞中Cleaved Caspase-3蛋白水平升高,p-STAT3蛋白水平降低。结论干扰HDAC1表达能够促进肝癌细胞凋亡,抑制肝癌细胞增殖,作用机制可能与STAT3信号通有关。     

miR-142-3p靶向Wnt/β-链蛋白通路对结直肠癌细胞增殖的影响

目的探究miR-142-3p靶向Wnt/β-链蛋白(β-catenin)通路对结直肠癌(CRC)细胞增殖的影响。方法选取2018年1月—2020年10月收治的66例CRC的肿瘤组织及其相邻正常组织。同时培养正常人结肠上皮细胞NCM460和CRC细胞系(HT29、LoVo、HCT116、Caco2、SW480细胞)。通过qRT-PCR检测CRC肿瘤组织、正常组织、正常人结肠上皮细胞与CRC细胞系中miR-142-3p表达水平;经免疫蛋白印迹法检测CRC细胞系中β-catenin表达水平;采用CCK-8法和流式细胞术检测miR-142-3p过表达后对CRC细胞增殖的影响;经免疫蛋白印迹检测过表达miR-142-3p对Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的影响;采用双荧光素酶报告基因检验miR-142-3p与β-catenin编码基因CTNNB1的靶向关系。结果miR-142-3p在CRC肿瘤组织和CRC细胞系中的表达显著下降(P<0.05);β-catenin在CRC细胞系中的表达显著升高(P<0.05);过表达miR-142-3p可靶向结合CTNNB1,显著抑制Caco2、LoVo和HT29细胞的增殖和Ki67+细胞比例,抑制β-catenin、c-myc和Cyclin D1的表达(P<0.05)。结论miR-142-3p可通过靶向调节β-catenin的表达,干扰Wnt/β-catenin通路,抑制CRC细胞的增殖。     

lncRNA MEG3通过miR-208在颈动脉粥样斑块形成过程中对血管平滑肌细胞的调控及机制研究

目的 人动脉血管平滑肌细胞(HAVSMCs)异常增殖和迁移是颈动脉粥样硬化的重要原因。差异表达的lncRNAs在颈动脉粥样硬化中的重要作用已经有许多报道,但lncRNA MEG3的作用机制尚未完全清楚。方法 ox-LDL处理HAVSMCs体外模拟颈动脉粥样硬化细胞模型;qRT-PCR检测lncRNA MEG3和miR-208的相对表达水平;CCK8实验检测细胞活力;划痕实验检测细胞迁移能力;Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验和免疫沉淀实验证实了lncRNA MEG3能够吸附miR-208,以及TRIM13是miR-208的直接靶点;western blot检测TRIM13蛋白表达。结果 本研究收集了颈动脉粥样硬化患者斑块组织,发现颈动脉粥样斑块组织中lncRNA MEG3水平显著下调(P<0.05)。同时,ox-LDL处理的HAVSMCs中lncRNA MEG3水平呈ox-LDL浓度依赖性下降(P<0.05)。过表达lncRNA MEG3抑制ox-LDL处理的HAVSMC细胞增殖和迁移,促进凋亡(P<0.05)。并且研究证明了Inc...     

姜黄素和Wortmannin联用对胃癌细胞增殖凋亡的影响及机制研究

目的 探讨姜黄素和Wortmannin联用对胃癌细胞增殖凋亡的影响及机制。方法 培养人胃癌SGC-7901细胞,CCK8实验检测10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L、160μmol/L姜黄素和10 nmol/L、50 nmol/L、100 nmol/L、500 nmol/L、1 000 nmol/L的Wortmannin分别作用于细胞24 h、48 h、72 h的细胞增殖情况,计算半数抑制浓度(IC50);根据IC50选择最佳的姜黄素及Wortmannin作用浓度;将接下来的试验分为对照组、姜黄素组、Wortmannin组、姜黄素+Wortmannin组,CCK8试验检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测Cleaved caspase3、PI3K、p-AKT蛋白表达。结果 不同浓度的姜黄素和Wortmannin处理细胞24 h、48 h、72 h后的细胞存活率均显著低于0 h细胞存活率(P0.05或P0.01),选择30μmol/L姜黄素和170 nmol/L的Wortmannin做后续研究。姜黄素组、Wortmannin组、姜黄素+Wortmannin组细胞存活率及PI3K、p-AKT蛋白表达显著低于对照组,细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著高于对照组(P0.01);姜黄素+Wortmannin组细胞存活率及PI3K、p-AKT蛋白表达显著低于姜黄素组和Wortmannin组,胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著高于姜黄素组和Wortmannin组(P0.01)。结论 姜黄素和Wortmannin均能抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,姜黄素和Wortmannin联用对细胞增殖凋亡的影响强于单独用姜黄素和Wortmannin。     

熊果酸联合Wnt信号通路抑制剂影响急性白血病细胞增殖和凋亡的实验研究

目的采用前瞻性研究探讨熊果酸联合Wnt信号通路抑制剂对急性白血病细胞增殖和凋亡的影响。方法用不同浓度的熊果酸作用急性白血病细胞U937后,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,计算半数抑制浓度。U937细胞分为对照组、熊果酸组、抑制剂组和联合组,联合组细胞用半数抑制浓度的熊果酸和Wnt信号通路抑制剂FH-535共同处理,熊果酸组用半数抑制浓度的熊果酸处理,抑制剂组用Wnt信号通路抑制剂FH-535处理,MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、β-连环蛋白(β-catenin)、Wnt信号通路下游靶基因(c-myc)蛋白水平。结果 0、4、8、16、32μmol/L的熊果酸作用后的U937细胞存活率依次降低。熊果酸组、抑制剂组、联合组细胞存活率、β-catenin和c-myc表达水平明显低于对照组,而细胞凋亡率和Cleaved Caspase-3水平明显高于对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。联合组细胞存活率、β-catenin和c-myc表达水平明显低于熊果酸组和抑制剂组,而凋亡率和Cleaved Caspase-3水平明显高于熊果酸组和抑制剂组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论单纯使用熊果酸或者Wnt信号通路抑制剂均能够抑制白血病细胞增殖,促进急性白血病细胞凋亡,并且熊果酸和Wnt信号通路抑制剂联合使用对白血病细胞增殖抑制作用和凋亡促进作用更大。     

CTGF在多囊卵巢综合征中的表达及对卵巢颗粒细胞增殖凋亡的影响研究

目的探讨多囊卵巢综合征中结缔组织生长因子(CTGF)的表达及对卵巢颗粒细胞增殖凋亡的影响及机制。方法 60只SD大鼠随机分为正常组和实验组,每组各30只。实验组大鼠肌肉注射脱氢表雄酮(DHEA)(6 mg/100 g体重)和0.2 ml的注射用油,正常组大鼠肌肉注射0.2 ml的注射用油。摘取多囊卵巢综合征大鼠模型的卵巢组织,提取组织中的总RNA和总蛋白,Western blot检测CTGF的mRNA和蛋白表达;原代分离培养卵巢颗粒细胞,将NCsiRNA、CTGF-siRNA转染至细胞内,不经任何处理的细胞作为对照组。48 h后CCK8实验和流式细胞仪分别检测细胞的增殖及凋亡情况;Western blot检测Cleaved caspase3、PI3K、p-AKT蛋白表达。结果卵巢组织中CTGF的mRNA和蛋白表达均显著高于正常组(P0.01);转染siRNA后能显著降低CTGF的蛋白表达;CTGF-siRNA组细胞存活率及PI3K、p-AKT蛋白表达显著低于对照组和NC-siRNA组,细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著高于对照组和NC-siRNA组(P0.01)。结论 CTGF在多囊卵巢综合征中的表达升高,抑制其表达可降低颗粒细胞的增殖及诱导凋亡,其机制与PI3K/AKT信号通路的调控有关。     

抗肿瘤药物雷帕霉素调控子宫内膜癌细胞增殖、分化、凋亡的研究机制

目的雷帕霉素对子宫内膜癌细胞增殖、分化、凋亡的影响及机制。方法 5 nmol/L、10 nmol/L、20 nmol/L、40 nmol/L、80 nmol/L、160 nmol/L的雷帕霉素作用于子宫内膜癌HEC-1B细胞24 h、48 h、72 h后,CCK8检测细胞增殖,计算IC50;36 nmol/L的雷帕霉素作用于HEC-1B细胞0 d、1 d、3 d、5 d、7 d后,RT-PCR检测细胞中ALP的mRNA表达;36 nmol/L的雷帕霉素作用于HEC-1B细胞48 h,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测Cleaved caspase3、m TOR、p-p70S6K蛋白表达。结果随着时间及浓度的增加,10 nmol/L、20 nmol/L、40 nmol/L、80 nmol/L、160 nmol/L的雷帕霉素组细胞存活率均显著低于对照组(P0.01),根据IC50值选择36 nmol/L的雷帕霉素作为后续研究对象;ALP在1 d、3 d、5 d、7 d的mRNA表达均显著高于对照组(P0.01);与对照组比较,细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达均显著升高,m TOR、p-p70S6K蛋白表达显著下调(P0.01)。结论雷帕霉素能显著抑制子宫内膜癌HEC-1B细胞增殖,诱导细胞分化及促进细胞凋亡,其机制与抑制m TOR/p70S6K信号通路有关。     

靶向STAT3的decoy核酸抑制膀胱癌细胞生长的实验研究

目的观察特异性靶向STAT3的decoy寡核苷酸（0DNs）对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响，并探讨其作用机理。方法通过体外细胞培养技术，将STAT3 decoy ODNs转染入膀胱癌T24细胞内，台盼蓝排斥试验检测细胞活力，MTT法检测细胞增殖状态，Hoechst33258／PI荧光双染检测细胞凋亡特征，流式细胞仪检测细胞周期和早期凋亡，凝胶阻滞电泳检测STAT3的DNA结合活性，RT-P（、R检测STAT3下游靶基因Cyclin D1和Bcl—xL的mRNA表达水平。结果STAT3 decoy ODNs使膀胱癌细胞生长速度减慢，细胞增殖抑制率达75．0％；使细胞周期阻滞，S期细胞比率明显减少，由29．83％下降至1626％，而G0～G1期细胞比率明显增多，由50．82％上升至71．20％；促进膀胱癌细胞凋亡，细胞早期凋亡率高达50．75％；使STAT3的DNA结合活性下降，并使Cyclin D1、Bcl—xL的mRNA表达水平明显下降。结论STAT3 decoy ODNs可特异性靶向作用于STAT3蛋白，阻断STAT3的过度激活效应，通过下调Cyclin D1和Bel—xL的表达抑制膀胱癌细胞增殖，促进其凋亡。