不同频率振动应力对RAW264.7细胞体外分化的影响

摘要 目的：观察不同频率振动应力对RAW264.7细胞诱导分化及活性的影响。 方法：应用复合振动仪将不同频段3—10Hz、15—35Hz、35—45Hz、50—70Hz和70—90Hz振动应变分别作用于体外诱导分化的RAW264.7细胞,振动应变加载6d时,通过抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色及鬼笔环肽染色检查破骨细胞形成情况,通过骨吸收陷窝分析比较各组破骨细胞活性的差异。 结果：不同振动频率组形成TRAP染色阳性多核细胞数量均低于对照组,骨吸收陷窝计数亦较对照组少,差异均有显著性意义（P<0.01）。 结论：不同频率振动应力均抑制RAW264.7细胞向成熟破骨细胞分化,且随着振动频率的增加抑制能力逐渐增强。     

瘦素对RAW264.7细胞肿瘤坏死因子α表达的影响

背景:瘦素是脂肪组织分泌的一种多肽激素,研究显示瘦素在动脉粥样硬化形成中发挥了一定重要的作用。目的:观察瘦素对鼠源性巨噬细胞系RAW264.7细胞肿瘤坏死因子α表达的影响,并从核转录因子κB活性变化角度探讨其可能机制。设计:对照观察实验。单位:华中科技大学同济医学院生物化学及分子生物学系。材料:实验于2005-04/2006-02在华中科技大学同济医学院生物化学及分子生物学系及附属协和医院普外科实验室完成。将培养的RAW264.7细胞分为不同浓度瘦素处理组(12.5,25,50,100μg/L)、IkappaB激酶抑制剂组及空白对照组。每组3瓶,重复实验3次。方法:将鼠源性巨噬细胞株RAW264.7细胞以1×109L-1密度接种于6孔板中,用含体积分数为0.1的小牛血清的RPMI-1640培养基培养。待RAW264.7细胞生长至80%时,换用无血清培养基Opti-MEM继续培养24h后,将细胞分为不同浓度瘦素处理组(12.5,25,50,100μg/L)及空白对照组,瘦素孵育4h后采用反转录-聚合酶链反应检测肿瘤坏死因子α在mRNA水平的表达。上述分组细胞经瘦素分别孵育1,3,6和9h后采用双抗夹心酶联免疫吸附实验检测肿瘤坏死因子α在蛋白水平的表达。上述分组细胞经瘦素孵育不同时间后采用凝胶迁移率实验检测细胞核内核转录因子κB活性。将RAW264.7细胞分为以下4组:空白对照组、IkappaB激酶特异性抑制剂PS1145(10μmol/L)处理组、瘦素(50μg/L)处理组、瘦素(50μg/L) PS1145(10μmol/L)组,各组孵育时间均为6h,分别检测细胞核内核转录因子κB活性及肿瘤坏死因子α在mRNA水平的表达。主要观察指标:①不同浓度瘦素对RAW264.7细胞肿瘤坏死因子α:mRNA表达水平的影响;蛋白分泌的影响。②不同浓度瘦素对RAW264.7细胞核内核转录因子κB活性的影响。③抑制IkappaB激酶活性对瘦素诱导RAW264.7细胞肿瘤坏死因子α的影响。结果:①RAW264.7细胞经不同浓度的瘦素处理后,肿瘤坏死因子α在mRNA水平呈瘦素剂量依赖性增加,50μg/L瘦素处理组达峰值。②蛋白水平的表达呈瘦素剂量时间依赖性增加,50μg/L瘦素处理6h即可达峰值。③核转录因子κB的活性亦与瘦素浓度正相关,50μg/L瘦素处理6h后核转录因子κB活性最高(P<0.05)。④抑制IkappaB激酶活性可部分抑制肿瘤坏死因子α的表达。结论:瘦素可直接促进RAW264.7细胞肿瘤坏死因子α的表达和分泌,并呈剂量时间依赖性,其机制可能与瘦素激活核转录因子κB有关。这可能是瘦素致动脉粥样硬化的机制之一。     

核仁素反义寡核苷酸对RAW264.7细胞增殖与凋亡的影响

【目的】探讨核仁素反义寡核苷酸对RAW264．7细胞增殖与凋亡的影响。【方法】采用反义寡核苷酸技术以抑制RAW264．7细胞中核仁素的表达后,用MTT法检测细胞增殖状况,流式细胞术及DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。【结果】免疫印迹结果显示,反义寡核苷酸导入细胞后24h,核仁素的表达被显著抑制,同时反义寡核苷酸处理组细胞的增殖能力明显受到抑制,细胞凋亡百分率显著升高,并能检测到清晰的“梯状条带”。而正义及随机寡核苷酸导入细胞后不能降低核仁素的表达,对细胞增殖及凋亡均无明显影响。【结论】核仁素表达下调能抑制RAW264．7细胞增殖并能触发RAW264．7细胞凋亡。     

转染HSP70基因对过氧化氢所致RAW264.7细胞损伤的影响

[目的]观察HSP70基因过表达是否能减轻过氧化氢所致的RAW264.7巨噬细胞损伤.[方法]用脂质体包裹重组质粒pcDNA3.1-HSP70导入RAW264.7细胞株,经G418筛选阳性克隆,用Western blot方法检测HSP70的表达情况;通过测定细胞存活率、LDH释放率,观察了HSP70基因过表达对过氧化氢所致RAW264.7细胞损伤的影响.[结果]获得了HSP70过表达的RAW264.7细胞系;HSP70过表达组细胞的存活率及LDH释放率与对照组比有明显差异.[结论]转染HSP70基因对过氧化氢所致RAW264.7细胞损伤有明显的保护作用.     

粉防己碱对β-葡聚糖诱导的RAW264.7细胞增殖的作用

目的 观察粉防己碱对β-葡聚糖诱导的小鼠巨噬细胞(RAW264.7细胞)增殖的作用。方法 建立细胞模型。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同浓度粉防己碱对RAW264.7细胞增殖的影响,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定培养上清液中白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、前列腺素E2(PGE2)、IL-10的水平。结果 MTT法检测结果提示粉防己碱对RAW264.7细胞增殖表现为双相性作用;ELISA结果提示适当浓度的粉防己碱可抑制IL-6、TNF-α、PGE2的表达,同时促进IL-10的表达。结论 粉防己碱影响β-葡聚糖诱导的RAW264.7细胞增殖的作用,可能与抑制IL-6、TNF-α、PGE2的表达,同时促进IL-10的表达有关。     

转录因子Foxp3对RAW264.7细胞表型及免疫抑制相关基因的影响

目的 应用过表达转录因子Foxp3的小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞模型,探讨转录因子Foxp3对RAW264.7细胞表型及免疫抑制相关基因的影响,从而为移植排斥提供新的细胞治疗措施奠定基础.方法 采用脂质体转染重组质粒pIRES2-EGFP/mFoxp3及空载质粒pIRES2-EGFP至小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞系,经G418筛选后,免疫荧光显微镜及流式细胞术检测GFP表达、RT-PCR检测Foxp3表达以鉴定表达效果;采用RT-PCR检测转染重组质粒pIRES2-EGFP/mFoxp3、空载质粒pIRES2-EGFP以及未转染质粒组的RAW264.7细胞表面分子CTLA-4、GITR及GITRL的表达水平;采用RT-qPCR的方法检测各组RAW264.7细胞iNOS及Arg1的表达水平.结果 成功建立稳定表达Foxp3的巨噬细胞RAW264.7细胞模型;与转染空载质粒pIRES2-EGFP和未转染质粒的RAW264.7细胞相比,转染重组质粒pIRES2-EGFP/mFoxp3的RAW264.7细胞的表面分子CTLA-4、GITR及GITRL 的mRNA表达水平明显升高（P〈0.01）,免疫抑制相关基因iNOS及Arg1的 mRNA表达水平也明显升高（P〈0.01）.结论 转录因子Foxp3能够使RAW264.7细胞表面分子及免疫抑制相关基因的表达水平明显升高,可能发挥抑制免疫应答的作用,从而在治疗移植排斥中发挥作用.     

不同细胞来源外泌体对心血管疾病保护作用的研究进展

人体大多数细胞可分泌外泌体,外泌体作为一种小的脂质囊泡,在多种病理生理过程中发挥重要作用。多种不同来源的外泌体对心血管疾病具有保护作用,向体内注射干细胞分泌的外泌体对心血管疾病的治疗具有潜在价值。本文就不同细胞来源外泌体对心血管疾病保护作用的研究进展作一综述。     

三种不同来源的植物化学物对RAW264．7细胞因子影响的比较

目的研究苹果多酚、蓝莓花色苷和天山雪莲总黄酮三种不同来源的植物化学物对巨噬细胞白血病细胞系RAW264．7的生长抑制作用及比较三种不同来源的类黄酮和多酚类植物化学物对细胞因子的影响。方法噻唑蓝（MTT）比色法检测不同作用剂量的三种物质对RAW264．7细胞的影响;逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测三种物质处理不同时间（24h、48h）对肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素6（IL-6）、环氧化酶2（COX-2）等细胞因子mRNA表达的影响;免疫印迹法检测三种物质对ERK1、2蛋白的影响。结果三种物质均能诱导TNF—dmRNA的表达,表达量与作用时间呈现正相关;天山雪莲总黄酮对IL-6mRNA诱导作用最明显,三种物质在48h作用点抑制COX-2mR—NA表达水平作用明显强于24h。同时天山雪莲总黄酮能减少RAW264．7细胞中ERK1、2蛋白表达量。结论天山雪莲总黄酮对RAW264．7细胞影响最为明显,而蓝莓花色苷和苹果多酚的影响程度弱于天山雪莲总黄酮。     

小白菊内酯对巨噬细胞系RAW264.7极化分型的影响

[目的]探讨小白菊内酯(PAR)对巨噬细胞系RAW264.7极化分型的影响.[方法]巨噬细胞系RAW264.7细胞分为对照组、模型组及实验组.对照组给予常规培养,模型组中加入100μg/L脂多糖,实验组分别加入低、中、高浓度PAR(2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L)处理,连续培养7 d后采用ELISA法检测RAW264.7两种极化分型(M1型和M2型)中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和单核细胞趋化蛋白-l(MCP-1)、转化生长因子-β1(TGF-β1)和白细胞介素-4(IL-4)水平;采用流式细胞计量术测定两种细胞表面分子CD16/32和表面分子CD206的表达;采用Western blot测定不同浓度PAR三组细胞中ApoE蛋白水平;采用实时荧光PCR(RT-qPCR)检测三组细胞中IL-10、精氨酸酶(Arg-1)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA水平.[结果]实验组TNF-α和MCP-1水平均显著低于对照组与模型组(P<0.05),TGF-β1、IL-4和ApoE蛋白水平显著高于对照组与模型组(P<0.05);实验组中高、中、低浓度PAR处理后,TNF-α和MCP-1水平依次降低,TGF-β1、IL-4和ApoE蛋白水平依次增高,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05).模型组M2/M1为0.47,显著低于对照组的0.85;而实验组低、中、高浓度M2/M1分别为0.61、0.69、0.73,显著高于模型组,其差异均有统计学意义(P<0.05);低、中、高浓度M2/M1依次升高,其差异具有统计学意义(P<0.05).与对照组相比,Arg-1 mRAN水平显著下降;IL-10、iNOS mRNA水平显著升高,其差异均有统计学意义(P<0.05);实验组高浓度中IL-10、iNOS mRNA水平均显著低于低浓度和中浓度;Arg-1 mRAN水平显著高于低浓度和中浓度,其差异均有统计学意义(P<0.05).[结论]PAR可能进而诱导RAW264.7从M1促炎表型向M2抗炎表型极化.     

胎儿骨髓基质细胞协同细胞因子对不同来源的CD_(34)~ 细胞的体外扩增作用

造血干细胞的有效扩增不仅可满足临床移植的需要 ,而且为大剂量放、化疗患者提供强有力的造血支持作用。而体外扩增的关键在于使造血干细胞有效扩增的同时抑制其分化。造血干 /祖细胞质培养模拟体内造血微环境可使造血前体细胞有限扩增 ;ＳＣＦ、ＦＬ可促进造血干 /祖细胞的增殖 ,是强有力的共刺激因子 ,而骨髓基质细胞产生的ｃ ｋｉｔ及ＦＬｋ 2水平很低 ,因此 ,基质细胞结合含有ＳＣＦ或ＦＬ的细胞因子组合可提高造血干 /祖细胞的扩增效率[1] 。我们拟联合这两者共同培养造血干 /祖细胞以提高其扩增效率。材料和方法1　细胞　脐血样品采自…     

青心酮对RAW264.7细胞可溶性Toll样受体4表达及炎症相关因子的影响

目的:观察活血化瘀中药秃毛冬青叶中有效成分青心酮对RAW264.7细胞炎症反应时可溶性Toll样受体4mRNA及蛋白表达、血红素氧和酶1mRNA表达、肿瘤坏死因子α分泌的影响。方法:①实验于2004-03/2005-01在华中科技大学同济医学院病理生理教研室完成。②采用RAW264.7巨噬细胞株建立细胞炎症反应模型。观察下述4种情况下培养液血红素氧和酶1mRNA的变化:脂多糖刺激;青心酮[青心酮注射液,3,4-二羟基苯乙酮40mg/支(2mL),实验用,北京制药三厂]预处理3h后加脂多糖刺激;青心酮和脂多糖同时加入;脂多糖刺激3h后加入青心酮。其他指标测定实验分为3组:空白对照组(正常细胞培养,加入等数量的培养基,不加入任何药物);青心酮预处理组(先加入溶有青心酮1×10-7mol/L的培养基培养3h,再加入脂多糖10μg/L刺激4,8h);未处理组(加入等数量的培养基3h,再加入脂多糖10μg/L刺激4,8h)。③采用反转录聚合酶链反应分析可溶性Toll样受体4、血红素氧和酶1mRNA的变化;Westernblot方法检测可溶性Toll样受体4蛋白水平的改变,用ELISA方法检测培养液肿瘤坏死因子α分泌的变化。④组间数据处理采用配对t检验。结果:①可溶性Toll样受体4mRNA表达:青心酮预处理脂多糖刺激4h后明显高于未处理组(P<0.01)。未处理组经脂多糖刺激4h后,明显低于空白对照组(P<0.05)。②可溶性Toll样受体4蛋白表达:青心酮预处理组脂多糖刺激8h后明显高于未处理组(P<0.05),但与空白对照组比较,差异不明显(P>0.05);未处理组脂多糖刺激8h后,明显低于空白对照组(P<0.05)。③血红素氧和酶1mRNA表达:青心酮预处理后加脂多糖刺激和青心酮、脂多糖同时加入后明显高于脂多糖刺激后(P<0.05)。④培养液中肿瘤坏死因子α:脂多糖刺激后明显增加(P<0.01);青心酮预处理脂多糖刺激后明显低于未处理组(P<0.01)。结论:青心酮预处理能有效的抑制炎症反应,可能与其上调可溶性Toll样受体4mRNA及蛋白表达,增加血红素氧和酶1mRNA表达,减少肿瘤坏死因子α分泌有关。     

TLR4基因的shRNA对内毒素刺激下RAW264.7细胞TLR2表达的影响及机制

目的 观察针对Toll样受体4的发夹结构RNA(short hairpin RNA,shRNA)对内毒素刺激后小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞Toll样受体2表达的影响,并探讨其机制.方法 将携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)及shRNA克隆位点的质粒pEGFP/TLR4-siRNA,运用脂质体Lipofectamine2000转染至小鼠巨噬细胞系RAW264.7.转染24 h后予新霉素(G418)筛选获取稳定转染细胞株.然后将细胞分为三组:空白组(Blank group),未转染细胞LPS刺激组(LPS group)和稳定转染细胞LPS刺激组(LPS-TLR4-siRNA group),采用荧光定量PCR及流式细胞学方法检测各组细胞TLR2 mRNA和蛋白的表达,Western blot检测NF-κB p65的表达,同时用ELISA方法检测细胞分泌的TNF-α水平的变化.结果 将pEGFP/TLR4-siRNA转染至RAW264.7细胞后,增强型荧光蛋白的表达为(45.25±9.23)%.LPS-TLR4-siRNA组细胞的TLR2mRNA及蛋白的表达均明显低于LPS组(P＜0.05),同时NF-κB p65表达下调及分泌TNF-α的水平下降(P＜0.01).结论 针对TLR4 mRNA的shRNA能降低LPS刺激下的RAW204.7细胞TLB2的表达.     

单纯酶和复合酶消化液对成猪胰岛细胞分离的作用及其机制

背景近来,从大动物获得大量存活的胰岛细胞技术已经日趋成熟,并且已经应用到了临床.然而大量研究表明,同小动物相比,猪胰岛细胞的收获量,还是相对过低,究其原因,是否与猪胰腺外分泌组织生化成分有关?此研究旨在为糖尿病患者提供可靠的胰岛细胞来源.目的探讨单纯酶和复合酶消化液对成猪胰岛细胞分离的作用及其机制,为糖尿病患者的二级康复措施介入提供理论依据.设计以动物为研究对象,随机对照实验研究.单位一所大学医院的普外科和老年病科.材料实验于2003-06/2004-05在哈尔滨医科大学附属第二医院完成.哈尔滨市哈达屠宰厂提供成年杂种活猪20头,猪龄12～24个月,体质量100 kg左右.干预屠宰放血后在相对无菌情况下,仔细取出胰腺脾部放在冷RP-MI1640液内,迅速送到实验室.快速去除胰周组织,脂肪、血管等.用15 000洗必泰浸泡3 min,然后用冷RPMI 1640液冲洗,4℃条件下在平皿中用眼科剪剪成1 mm×1 mm×1 mm左右的碎片,均分成两份,分别放入含有单纯酶溶液和和复合酶溶液的锥形瓶中,分级消化获得胰岛细胞.主要观察指标经双硫腙染色计数胰岛细胞,并做椎虫蓝染色测定胰岛细胞活性,胰岛素释放试验观察胰岛细胞的功能;电子显微镜对胰岛细胞团检查,检验其结构的完整性.结果复合酶消化制备物在平均产量上与单纯酶制备物相比有显著差异[(1 782±427)IE/g比(1 293±451)IE/g,P＜0.05],但在形态学及生物学活性方面无明显差异(P＞0.05).结论复合酶消化法有利于在稳定胰岛细胞活性基础上提高胰岛细胞产量,移植此种胰岛细胞可以用于有效控制糖尿病患者并发症的发生和发展.     

单纯酶和复合酶消化液对成猪胰岛细胞分离的作用及其机制

背景：近来，从大动物获得大量存活的胰岛细胞技术已经日趋成熟，并且已经应用到了临床。然而大量研究表明，同小动物相比，猪胰岛细胞的收获量，还是相对过低，究其原因，是否与猪胰腺外分泌组织生化成分有关?此研究旨在为糖尿病患者提供可靠的胰岛细胞来源。目的：探讨单纯酶和复合酶消化液对成猪胰岛细胞分离的作用及其机制，为糖尿病患者的二级康复措施介入提供理论依据。设计：以动物为研究对象，随机对照实验研究。单位：一所大学医院的普外科和老年病科。材料：实验于2003—06／2004—05在哈尔滨医科大学附属第二医院完成。哈尔滨市哈达屠宰厂提供成年杂种活猪20头，猪龄12—24个月，体质量100kg左右。干预：屠宰放血后在相对无菌情况下，仔细取出胰腺脾部放在冷RPMI1640液内，迅速送到实验室。快速去除胰周组织，脂肪、血管等。用1：5000洗必泰浸泡3min，然后用冷RPMI1640液冲洗，4℃条件下在平皿中用眼科剪剪成1mm&;#215;1mm&;#215;1mm左右的碎片，均分成两份，分别放入含有单纯酶溶液和和复合酶溶液的锥形瓶中，分级消化获得胰岛细胞。主要观察指标：经双硫腙染色计数胰岛细胞，并做椎虫蓝染色测定胰岛细胞活性，胰岛素释放试验观察胰岛细胞的功能；电子显微镜对胰岛细胞团检查，检验其结构的完整性。结果：复合酶消化制备物在平均产量上与单纯酶制备物相比有显著差异[(1782&;#177;427)IE／g比(1293&;#177;451)IE／g，P&;lt;0．05]，但在形态学及生物学活性方面无明显差异(P&;gt;0．05)。结论：复合酶消化法有利于在稳定胰岛细胞活性基础上提高胰岛细胞产量，移植此种胰岛细胞可以用于有效控制糖尿病患者并发症的发生和发展。     

利奈唑胺与万古霉素对小鼠巨噬细胞RAW 264.7吞噬功能的影响

目的探讨利奈唑胺和万古霉素对金葡菌肽聚糖(PG)刺激的小鼠巨噬细胞系RAW264.7吞噬功能的影响。方法在激光共聚焦显微镜和荧光显微镜下观察巨噬细胞吞噬荧光微球的过程。将小鼠巨噬细胞系分为3组:对照组、PG组和抗菌药组(低、中、高剂量),用流式细胞仪计算吞噬率和吞噬指数。结果异硫氰酸荧光素(FITC)标记的微球可被吞入巨噬细胞内。与对照组相比,经PG刺激后,小鼠巨噬细胞吞噬功能明显上升(P<0.01)。对比PG组,各剂量利奈唑胺组吞噬能力降低(P<0.05),中、高剂量万古霉素组吞噬能力增高(P<0.05),低剂量万古霉素组吞噬功能无明显变化(P>0.05)。结论亚MIC和治疗浓度的利奈唑胺能抑制金葡菌PG刺激引起的吞噬功能的增高,而治疗浓度的万古霉素能增强其吞噬功能。2种药物对吞噬功能不同影响的临床意义尚待阐明。     

藤黄酸对K562细胞的凋亡诱导及其作用机制研究

本研究探讨藤黄酸（gambogi cacid,GA）对K562细胞的抑制作用及机制。以不同浓度的藤黄酸处理K562和K562／A02细胞;用四甲基偶氮唑盐（MTF）法检测GA对细胞增殖的影响;碘化丙啶（PI）染色分析细胞周期;AnnexinV／PI双染法检测细胞的凋亡;JC-1染色法检测线粒体跨膜电位水平;流式细胞仪检测荧光素激活的caspase-3、caspase-8、caspase-9阳性细胞水平。结果显示：藤黄酸呈时间和浓度依赖性抑制K562细胞增殖。K562／A02细胞（GA〉2μg/ml）比K562细胞（GA〉0．5μg／ml）需要更高的藤黄酸浓度才显示增殖抑制作用。藤黄酸呈浓度依赖性诱导K562细胞凋亡。藤黄酸0、0．5、1．0、2．0μg／ml浓度对K562细胞周期未显示明显影响。藤黄酸作用后的K562细胞的线粒体跨膜电位明显降低。藤黄酸2μg/ml作用24小时激活的caspase3、caspase8、caspase9阳性细胞比例与对照相比分别上升2．19％、-1．95％、34．01％;作用48小时分别上升60．4％、71．3％、77．7％。结论：藤黄酸对K562细胞株有显著的抑制作用,该作用是通过诱导细胞凋亡实现的。藤黄酸不影响K562细胞的细胞周期。藤黄酸通过线粒体跨膜电位途径和胞浆激活途径诱导K562细胞的凋亡。     

骨髓瘤细胞来源外泌体对NK细胞表面活化受体的影响

目的:考察多发性骨髓瘤细胞系来源外泌体对NK细胞表面活化受体的影响,从外泌体水平探讨骨髓瘤患者中NK细胞功能缺陷的机制。方法:采用超速离心法提取多发性骨髓瘤细胞系RPMI 8226、U266培养上清液中外泌体,并采用电子显微镜鉴定外泌体的大小;提取人原代NK细胞,将40μg/ml外泌体与NK细胞共培养后,于0、1、4和24 h用流式细胞术检测NK细胞表面活化受体NKp30、NKG2D和NKp46的表达。结果:在电子显微镜下外泌体呈现囊泡状,大小30-100 nm;骨髓瘤细胞来源外泌体与NK细胞共培养后,NK细胞表面活化受体表达均有不同程度下降。结论:多发性骨髓瘤来源外泌体可以抑制NK细胞表面活化受体的表达。     

生物材料和细胞因子对人牙周膜细胞的影响

牙周组织再生的基础是牙周膜细胞,牙周膜细胞的来源非常有限,以致牙周组织很难有效再生和重建,而组织工程技术有望解决这一难题.文章分别介绍了几种常见的生物材料和细胞因子对牙周膜细胞的影响,以探讨组织工程技术对牙周组织再生、修复的影响和意义,为组织工程在牙周领域的应用奠定实验基础.     

白血病细胞K562来源的外体对人脐带间充质干细胞作用的研究

目的探讨白血病细胞株(K562)来源的外体(exosomes)对人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stemcells,hucMSCs)的影响。方法用离心超滤和蔗糖密度梯度超速离心法从K562细胞的培养上清液中分离并纯化exosomes。透射电子显微镜观察其形态;将exosomes与hucMSCs共育,细胞计数板法检测exosomes对hucMSCs增殖的影响;实时荧光定量PCR检测肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)相关基因FAP、α-SMA和IL-6的表达;western blot检测exosomes标志性蛋白CD9、CD81及CAFs相关蛋白FAP,α-SMA的表达。结果透射电镜下观察分离的exosomes呈椭圆或碟状的囊泡结构,直径在30～100 nm;细胞计数板法检测结果表明,不同浓度的exosomes均能抑制hucMSCs细胞增殖且呈剂量依赖性(P均<0.05);荧光定量PCR结果表明,不同浓度的exosomes作用于hucMSCs,其FAP、α-SMA和IL-6表达量明显增加(P均<0.05);western blot结果表明,exosomes可表达标志性蛋白CD9、CD81,且exosomes作用hucMSCs后FAP、α-SMA蛋白表达量增加。结论 K562细胞来源的exosomes能抑制hucMSCs增殖,且能诱导hucMSCs向CAFs的分化。