缺血预处理星形胶质细胞GDNF抑制p38MAPK信号通路减轻神经元凋亡

目的研究缺血预处理星形胶质细胞分泌GDNF抑制p38MAPK信号通路发挥脑保护作用。方法原代培养神经元及星形胶质细胞,给予缺血预处理,将星形胶质细胞培养基制备成条件培养基,沉默GDNF基因的培养基作为另一种条件培养基,将神经元分为对照组、预处理组、预处理+缺血组、缺血组,应用不同条件培养基孵育神经元,流式细胞术检测神经元凋亡,Western Blot法检测神经元p38MAPK及p-p38MAPK的表达。结果预处理+缺血组和缺血组神经元凋亡率明显增高(P<0.05),加入ACM2后凋亡率较ACM1和ACM3两组均减低(P<0.05)。每组神经元的p38MAPK蛋白表达均无明显变化(P>0.05);预处理+缺血组及缺血组p-p38MAPK的蛋白表达均明显高于对照组和预处理组(P<0.05),预处理+缺血组p-p38MAPK的蛋白表达均较缺血组低(P<0.05),加入ACM2组的p-p38MAPK蛋白表达低于ACM1和ACM3两组(P<0.05)。结论缺血预处理后星形胶质细胞分泌GDNF抑制p38MAPK信号通路的激活从而减少神经元凋亡,起到脑保护作用。     

olomoucine对星形胶质细胞增殖的影响及机制研究

目的:观察细胞周期抑制剂olomoucine对培养星形胶质细胞(AS)机械损伤后增殖的影响,并探讨其作用机制。方法:建立体外培养大鼠纯化的AS物理损伤模型(划痕损伤模型),随机分为对照组、划痕组和干预组,划痕组和干预组均继续培养,干预组给予olomoucine干预。利用免疫荧光细胞化学方法观察损伤后BrdU表达;利用Westernblot印迹分析损伤后PCNA、p27的表达。结果:划痕损伤刺激12h开始出现损伤边缘区AS胞体肥大、数目增加,BrdU阳性细胞比率和PCNA表达水平较对照组增高(P<0.05),p27表达水平较对照组下降(P<0.05);干预组的BrdU阳性细胞比率和PCNA表达水平较划痕组明显减少(P<0.05),p27表达上调(P<0.05)。结论:损伤刺激可促使AS发生反应性胶质增生,CDK选择性细胞周期抑制剂olomoucine可以通过调控细胞周期抑制其反应性增生。     

p38信号通路对单侧输尿管结扎大鼠RANTES的影响

目的探讨p38有丝分裂素激活蛋白激酶(MAPK)在单侧输尿管结扎(UUO)大鼠肾组织的表达及活化状态。方法采用免疫组织化学法和Western印迹分析法检测UUO大鼠肾组织p38MAPK的磷酸化水平和RANTES蛋白水平,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测RANTES mRNA的表达。结果RANTES蛋白和RANTES mRNA随着梗阻时间的延长,表达明显上调,同时p38MAPK蛋白活性增高,两者呈显著正相关(P＜0．05)。结论UUO大鼠肾组织中p38MAPK的活化可上调RANTES的表达。     

X射线对体外培养星形胶质细胞增殖的影响及机制研究

目的：观察X射线照射对培养星形胶质细胞（AS）增殖的影响,为X射线的广泛应用提供理论依据。方法：将体外培养80%汇合的AS,在AS无血清培养基继续培养48h后分为对照组和放疗组,对照组更换含10%FBS的DMEM-F12培养基,放疗组更换含10%FBS的DMEM-F12培养基,并同时给与X射线照射,利用western印迹分析各组PCNA、p53、cyclinE的表达。结果：X射线照射后能降低S期细胞比率,呈剂量依赖性,但并不增加AS的凋亡率。通过对AS无血清培养48h后,大部分细胞周期同步于G0期,对照组更换培养基后12h出现PCNA、cyclinE表达水平增高;放疗组p53表达水平较对照组显著增高,PCNA、cyclinE表达水平较对照组显著降低。结论：X射线照射可以通过调控细胞周期有效抑制AS的增生。     

p38 MAPK抑制物对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及凋亡信号通路的影响

目的探讨p38 MAPK抑制物SB20358(SB)对心肌缺血再灌注(I/R)损伤的保护作用及凋亡信号通路的影响。方法选择45只250~300 g雄性SD大鼠,通过阻断其左冠状动脉前降支(LAD)30 min再灌注180 min制备I/R损伤模型。随机分3组(n=15):溶剂对照组(Vehicle组)、低剂量SB预处理组(SB-L组)和高剂量SB预处理组(SB-H组);同时选取15只同周龄SD大鼠仅穿线但不结扎(Sham组)。SB-L组和SB-H组分别于LAD结扎前30 min注射50μg/kg、100μg/kg SB,其余两组注射等体积的生理盐水。分别在术前(T0)、缺血30 min后(T1)、再灌注60 min(T2)、120 min(T3)及180 min后(T4)检测各组血浆肿瘤坏死因子(TNF-α)水平及I/R后的心功能情况[舒张末期压力(LVEDP)、左室收缩期平均压(LVSP)、短轴缩短率(FS)和射血分数(EF)],处死大鼠并通过TTC染色分析缺血程度和梗死程度,将心脏组织包埋并采用HE染色观察各组的心肌形态学变化,同时采用Western blot检测心肌梗死区p38及其磷酸化形式的p-p38的蛋白水平。结果与Sham组相比,Vehicle组除T0外的I/R其余时间点的TNF-α水平均升高,LVSP、FS和EF均降低,LVEDP、心肌p-p38/p38值及缺血和梗死程度均升高(P0.05),心肌肌纤维出现断裂溶解及坏死,心肌间质出现水肿且间隙增大,出现坏死灶;给予SB处理后可减轻以上异常指标及心肌病理改变,与Vehicle组的差异均有统计学意义,但仍与Sham组有差异(P0.05)。SB-H组的改善效果优于SB-L组(P0.05)。结论 SB对大鼠心肌I/R损伤有改善作用,可降低心肌缺血及梗死程度,改善心功能和炎症反应并抑制p38 MAPK信号通路活化。     

高压氧对大鼠活化的星形胶质细胞增殖及神经生长因子基因表达的影响

目的研究通高压氧对大鼠活化的星形胶质细胞的增殖作用及对神经生长因子(NGF)mRNA表达的影响,为探究通高压氧治疗脊髓损伤提供细胞学研究基础。方法采用酶消化法分离培养大鼠星形胶质细胞,用胶质纤维酸性蛋白(GFAP)鉴定星形胶质细胞;取第4代细胞激活,将其暴露在不同的氧环境中,分四组:对照组(CO2温箱)、空气加压组(0.2 MPa空气加压舱)、纯氧组(85%以上氧浓度的纯氧舱)、高压氧组(0.2 MPa,85%以上氧浓度的高压氧舱),连续3 d,每天干预1 h,用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖水平,采用荧光定量PCR法测各组细胞NGF mRNA的相对表达量。结果经胶质纤维酸性蛋白鉴定,星形胶质细胞纯度达95%。高压氧组细胞较对照组、空气加压组和纯氧组增殖速度快,而纯氧组细胞较对照组和空气加压组增殖速度慢;荧光定量PCR测得NGF mRNA的相对表达量在通高压氧组高于对照组、空气加压组和纯氧组(P<0.05),而对照组、空气加压组和纯氧组之间两两比较差异无统计学意义。结论上述结果提示0.2 Mpa、85%的通高压氧可以促进星形胶质细胞增殖,提高NGF mRNA的相对表达量,为高压氧治疗脊髓损伤提供了细胞学研究基础。     

双孔钾通道TREK-1活性对缺氧条件下星形胶质细胞增殖的影响

目的:研究双孔钾通道TREK-1对体外培养的星形胶质细胞缺氧条件下活化增殖的影响。方法:离体培养大鼠大脑皮质星形胶质细胞,采用流式细胞术和BrdU掺入法检测其在缺氧条件下及给予TREK-1通道阻断剂干预后的活化增殖特点。结果:缺氧导致处于S期的星形胶质细胞明显增加,缺氧6h增加最明显;抑制TREK-1活性可加剧缺氧条件下星形胶质细胞的活化增殖。结论:星形胶质细胞的TREK-1活性与缺血缺氧状态下细胞的活化增殖密切相关。     

JNK、p38MAPK信号通路与肿瘤细胞凋亡

JNK和p38MAPK通路是MAPK通路中至关重要的2条通路,这2条信号通路都在不同的应激反应中发挥重要的作用,随着如今对这2条信号通路研究的深入和认知的增强,人们发现JNK、p38MAPK信号通路的激活参与了不同刺激所致的一些常见的恶性肿瘤细胞凋亡的启动,例如胃癌、肺癌、乳腺癌以及白血病。探讨JNK、p38MAPK信号通路在肿瘤凋亡中的作用将有助于肿瘤细胞凋亡机制的研究,以及为恶性肿瘤的治疗提供重要的理论和实验基础。     

Wnt/β-catenin信号通路激活剂对过氧化氢诱导的星形胶质细胞凋亡的影响

目的探讨Wnt/β-catenin信号通路激活剂对过氧化氢诱导的星形胶质细胞凋亡的影响。方法分离培养大鼠星形胶质细胞,分为5组,依次为:对照组、模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,其中对照组用正常的细胞培养液培养,模型组用含有400μmol/L的过氧化氢孵育20 h,低剂量组、中剂量组、高剂量组先用10μM、20μM、40μM的Wnt/β-catenin信号通路激活剂LiCl处理20 h后再用400μmol/L的过氧化氢孵育20 h。用噻唑蓝(MTT)检测星形胶质细胞活力,流式细胞术检测星形胶质细胞凋亡,ELISA法检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)含量,硫代巴比妥酸法检测细胞中丙二醛(MDA)含量,Western blot检测细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、β-连环蛋白(β-catenin)、c-myc蛋白表达。结果过氧化氢处理后细胞活力降低,细胞凋亡率升高,细胞中MDA含量增加,细胞培养液中LDH含量也升高。低、中、高剂量的Li Cl预处理后经过氧化氢处理后的星形胶质细胞活力升高,细胞凋亡率降低,细胞中MDA水平降低,培养液上清中LDH水平也下降,细胞中凋亡相关蛋白Cleaved Caspses-3表达水平也明显降低,并且低剂量的LiCl对星形胶质细胞的影响作用最小,高剂量的LiCl对星形胶质细胞的影响作用最大。结论 Wnt/β-catenin信号通路激活剂能够通过减弱过氧化氢对星形胶质细胞的氧化损伤减少星形胶质细胞凋亡。     

p38MAPK信号通路与应力介导成肌细胞的凋亡

背景：在体内条件下,细胞力学的功能研究因其所处生理环境的复杂性、实验条件的不易控制而很难得到满意结果。目的：在成功构建成肌细胞体外培养-力学刺激模型的基础上,研究p38MAPK信号通路在成肌细胞凋亡中的作用及其机制。方法：将体外培养的C2C12细胞分为对照组和SB203580组,SB203580组中加入20mmol/L的p38MAPK抑制剂SB203580。应用细胞应力加载装置FlecellStrainUnit-5000T给细胞提供15%的力值,分别施加0,6,12,24h的周期性张应力。每分钟10个循环,每循环包括3s牵张,3s松弛。Hoechst33258染色观察细胞的形态学变化;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;RT-PCR法检测促凋亡基因baxmRNA的表达;Westernblot检测信号通路中p38MAPK和p-p38MAPK蛋白的表达。结果与结论：随着加力时间的延长,细胞逐渐出现核固缩及凋亡小体,凋亡率增加（P〈0.05）,baxmRNA表达增多（P〈0.05）;细胞p38MAPK和p-p38MAPK蛋白均在加力6h达到最低,此后逐渐升高。p38MAPK抑制剂SB203580可抑制加力引起的细胞凋亡,减少baxmRNA及p38MAPK和p-p38MAPK蛋白的表达（P〈0.05）。说明p38MAPK信号通路在应力介导的成肌细胞凋亡中起到重要的作用。     

基于IRAK4/ERK/p38信号通路雷公藤红素对多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨雷公藤红素对人多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响,并揭示IRAK4/ERK/p38信号通路与雷公藤红素调控H929、ARP-1细胞增殖和凋亡的关系,探究雷公藤红素联合硼替佐米是否具有协同作用。方法:采用CCK-8法检测多发性骨髓瘤细胞株H929、ARP-1细胞经不同浓度雷公藤红素、硼替佐米以及二者联用后的细胞活力,并利用金氏公式判定协同药效。Annexin V/PI法检测H929细胞凋亡率和ARP-1细胞坏死率。蛋白免疫印迹法检测雷公藤红素对IRAK4/ERK/p38信号通路中关键蛋白和凋亡蛋白表达的影响。结果:雷公藤红素能够呈时间-浓度依赖性地显著抑制H929、ARP-1细胞的增殖(r=0.9018,0.9244),并诱导细胞的凋亡;与对照组比较,雷公藤红素能够明显上调H929、ARP-1细胞内PARP、cleaved caspase-3表达,下调p-IRAK4、p-ERK、p-p38表达。雷公藤红素、硼替佐米单用对H929、ARP-1细胞均有增殖抑制作用,而联合用药与单药相比,前者细胞存活率更低,凋亡率更高(P<0.05)。结论:雷公藤红素能抑制H929和ARP-1细...     

miR-155对结肠癌细胞增殖及线粒体凋亡信号通路的影响

目的探讨miR-155对结肠癌细胞增殖和线粒体凋亡信号通路的影响,为明确miR-155在结肠癌发生发展中的作用提供理论依据。方法收集临床结肠癌以及癌旁组织,体外培养人结肠癌细胞,RT-qPCR检测组织中miR-155表达,结肠癌细胞给予miR-155抑制剂,CCK8检测细胞增殖率的改变,流式细胞术检测凋亡率的改变,Western blotting检测线粒体凋亡相关蛋白的表达。结果与癌旁组织相比,结肠癌组织中miR-155表达水平明显升高,miR-155抑制剂可以明显的降低结肠癌细胞增殖率,诱导凋亡的发生;同时可以增加线粒体凋亡相关蛋白Bax和cytochrome C表达。结论 miR-155在结肠癌组织中呈现高表达,抑制miR-155可以明显的降低结肠癌细胞的增殖率,诱导线粒体凋亡信号通路的活化。     

阻断p38MAPK信号通路对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的影响

【目的】探讨阻断p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）信号通路对大鼠急性肾缺血再灌注损伤（IRI）的影响。【方法】sD大鼠24只,随机分为3组,每组8只。对照组（S组）：仅结扎右侧肾蒂,左肾蒂游离;缺血再灌注组（IR组）：结扎右侧肾蒂,夹闭左侧肾蒂60min后,开放灌注24h;p38MAPK抑制剂组（SB组）：静脉注射p38MAPK特异抑制剂SB203580（10mg／kg）,余同IR组。检测三组血清尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）、肿瘤坏死因子（TNF）-α、白介素（IL）-I水平和p38MAPK蛋白表达、组织病理评分并比较。【结果】与S组比较,IR组血BUN、Cr、TNF—α、IL-1水平、p38MAPK蛋白表达量及组织病理评分均显著增加（P〈0．05）;上述指标SB组较IR组显著下降（P〈0．05）。【结论】SB203580能阻断p38MAPK信号通路,减少p38MAPK表达,抑制炎症细胞因子的释放,减轻肾缺血再灌注损伤。     

丹参酮ⅡA对脓毒症大鼠肺损伤及p38MAPK/ERK信号通路的影响

目的探讨丹参酮ⅡA对脓毒症大鼠肺损伤及p38MAPK/ERK信号通路的影响。方法将30只SD大鼠随机分为对照组、模型组和丹参酮ⅡA组各10只,模型组和丹参酮ⅡA组采用盲肠结扎穿孔手术法制作大鼠脓毒症模型。丹参酮ⅡA组于术后即刻腹腔注射20 mg/kg的丹参酮ⅡA注射液,连续治疗48 h。治疗后,HE染色观察肺组织的病理变化,测定肺组织湿/干质量(W/D)和内毒素(LPS)水平,采用ELISA法测定肺组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素(IL)-6、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)水平,Western blot检测p38MAPK/ERK信号通路的磷酸化水平。结果与对照组相比,模型组和丹参酮ⅡA组肺组织W/D显著升高(P 0. 05),SOD酶活性和GSH水平显著下降(P 0. 01),LPS、MDA、IL-6和TNF-α水平显著升高(P 0. 01),p-p38和p-ERK1/2蛋白的表达显著上调(P 0. 01);与模型组相比,丹参酮ⅡA组肺组织W/D显著下降(P 0. 05),SOD酶活性和GSH水平显著升高(P 0. 01),LPS、MDA、IL-6和TNF-α水平显著下降(P 0. 01),p-p38和p-ERK1/2蛋白的表达显著下调(P 0. 01); HE染色显示肺组织的病理变化明显减轻。结论丹参酮ⅡA可能通过抑制p38MAPK/ERK信号通路,降低脓毒症大鼠炎症因子和氧化应激水平,保护大鼠肺损伤。     

抑制p38/p53信号通路对癫痫大鼠神经元损伤的保护作用

目的 探讨p38/p53信号通路在癫痫持续状态大鼠海马神经元的活化规律,及对癫痫后神经元损伤的保护作用.方法 40只大鼠随机分为正常对照组、癫痫组、抑制剂组、二甲亚枫溶剂对照组,建立氯化锂?匹鲁卡品癫痫大鼠模型,HE染色观察大鼠海马CA1区的神经元病理改变,免疫组化染色观察p38/p?p38、p53/p?p53阳性细胞...     

何首乌苷对奥沙利铂诱导大鼠星形胶质细胞凋亡的影响

目的探讨何首乌苷保护大鼠星形胶质细胞免于奥沙利铂诱导凋亡的作用及可能机制。方法原代培养大鼠星形胶质细胞,并利用流式检测所培养细胞胶质纤维酸性蛋白的表达情况。利用10μmol/L奥沙利铂处理胶质细胞24 h建立凋亡模型,加入浓度梯度的何首乌苷预处理胶质细胞24 h后与奥沙利铂共同作用24 h,台盼蓝染色法观察细胞存活。随后通过Annexin V-FITC/PI双染法流式检测各组凋亡率和检测Caspase-3的活性水平。进而利用JC-1染色法流式检测细胞线粒体膜电位,并利用实时定量RT-PCR与免疫印迹检测BAX与BCL2的m RNA水平和蛋白表达量。结果培养的大鼠星形胶质细胞表达胶质纤维酸性蛋白率达95%以上。奥沙利铂处理诱导凋亡24 h后,对照组胶质细胞凋亡率及Caspase-3活性上升并降低线粒体膜电位,加何首乌苷处理后凋亡率及Caspase-3活性下降而线粒体膜电位上升。相对于对照组,加入何首乌苷处理后BAX基因的m RNA及蛋白表达水平降低,BCL2基因的m RNA及蛋白表达水平上升。结论何首乌苷能恢复凋亡相关基因BAX与BCL2的平衡,保护大鼠皮质星形胶质细胞的线粒体膜电位,并使胶质细胞免于奥沙利铂诱导的凋亡作用。     

EV71感染对小鼠脑组织p38MAPK信号通路影响的研究

目的研究肠道病毒71(EV71)感染对小鼠脑组织p38MAPK信号通路的影响。方法利用实验室筛选出的具有较强致病能力的EV71-GZCH43-3株,采用不同的病毒滴度(103PFU/ml,105PFU/ml,107PFU/ml)感染2周龄的ICR幼鼠,建立轻、中、重三种不同程度的幼鼠感染模型,病理切片观察其肺组织病理变化;利用流式细胞术检测感染模型幼鼠中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的变化情况;反转录酶-聚合酶链式扩增反应(RT-PCR)方法检测p38MAPK信号途径基因的表达变化;酶联免疫分析法(ELISA)检测小鼠血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素(IFN-γ)水平的变化情况。结果成功建立轻、中、重三种不同感染滴度的EV71感染幼鼠模型,其肺组织明显充血;流式细胞术结果显示随着病毒感染滴度的增加,Treg细胞的数目明显增加;ELISA结果表明随病毒滴度增加IFN-γ表达量增加,高滴度组大约是对照组的30倍;TNF-α先随病毒滴度增加而略有降低,随后在高滴度组又明显升高。结论表明EV71感染可能通过影响p38MAPK信号途径基因的表达而间接调节TNF-α和IFN-γ体内表达,诱导宿主病理性免疫反应,引起宿主免疫功能的紊乱。     

大承气汤对脓毒症大鼠p38MAPK信号转导通路的影响

目的 观察大承气汤对脓毒症大鼠肝脏p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)表达水平的影响,进一步揭示大承气汤治疗脓毒症的机制.方法 将60只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组(n=20)、脓毒症组(n=20)、大承气汤组(n=20),应用大鼠盲肠结扎穿孔(CLP)复制脓毒症模型.假手术组开腹轻扰肠管后关腹,脓毒症组、大承气汤组均为脓毒症模型.大承气汤组在术前2 h和术后每4 h予以大承气汤灌胃.分别于术后2、6、12、24 h每组取5只大鼠,腹主动脉采血,用ELISA方法 检测大鼠血浆IL-6、TNF-α浓度,取肝组织进行免疫组化检测及观察p38MAPK表达.结果 与脓毒症组比较,大承气汤组大鼠肝脏p38MAPK表达水平受到抑制,炎症因子释放减少(P<0.05).结论 大承气汤对脓毒症大鼠的肝脏产生保护作用,可能是由于抑制大鼠肝脏p38MAPK表达来实现的.     

p38MAPK对肿瘤细胞ATM、ATR和p53信号通路的影响

目的 研究p38MAPK对细胞周期信号转导通路中重要蛋白激酶ATM、ATR、P53的影响并探讨其可能的机制.方法 采用人类结肠癌细胞株HT-29和肺癌细胞株SPAC-1进行研究,分别使用紫外线（UV）刺激和p38MAPK特异性抑制剂SB203580抑制肿瘤细胞中的p38MAPK,通过Western blot技术检测ATM、ATR、P53蛋白磷酸化情况,同时用real-time PCR技术检测细胞中相应基因的表达情况.结果 紫外线能上调ATM、ATR、p53和p38MAPK基因的表达,使用p38MAPK特异抑制剂SB203580能够使ATM、ATR和p53的表达降低.结论 P38MAPK可以调控ATM、ATR和p53的表达,ATM-Chk2信号通路和p38MAPK信号通路之间可能存在交互联系.