KLF8基因对胃癌细胞增殖凋亡的影响及机制研究

目的探讨Krüppel样转录因子8(KLF8)基因对胃癌细胞增殖凋亡的影响及机制。方法 Western blot检测胃癌组织及相应的癌旁组织中KLF8基因的蛋白表达;将NC-siRNA(阴性对照组)和KLF8-siRNA(RNA干扰组)转染至人胃癌SGC-7901细胞,未经任何处理的细胞作为空白对照组,转染48 h后,Western blot检测KLF8的蛋白表达;CCK8实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测Ki67、PCNA、Cleaved caspase3、Notch1、Hes1蛋白表达。结果与癌旁组织比较,胃癌组织中KLF8的蛋白表达显著升高(P0.01);与对照组比较,NC-siRNA组KLF8的蛋白表达无明显变化(P0.05),KLF8-siRNA组KLF8蛋白表达显著降低(P0.01);与对照组及NC-siRNA组比较,KLF8-siRNA组细胞存活率及Ki67、PCNA、Notch1、Hes1蛋白表达显著降低,细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著升高(P0.01)。结论 RNA干扰抑制KLF8的表达可显著降低SGC-7901细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制与Notch1信号通路的调控有关。     

Galectin-3调控Wnt信号通路影响骨肉瘤细胞增殖侵袭的实验研究

目的探讨沉默骨肉瘤细胞中半乳凝集素-3(Galectin-3)的表达对细胞增殖及侵袭的影响及机制。方法从骨肉瘤组织及相应的瘤旁组织中提取总蛋白,Western blot检测Galectin-3的蛋白表达;阴性对照组(NC-siRNA)和RNA干扰组(Galectin-3-siRNA)转染至人骨肉瘤MG63细胞,不经任何处理的细胞作为空白对照组,转染48 h后,提取细胞中的蛋白,Western blot检测各组细胞中Galectin-3的蛋白表达;CCK8实验和Transwell小室分别检测细胞增殖和侵袭能力;Western blot检测ki67、MMP-2、MMP-9、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达。结果转染Galectin-3-siRNA能显著降低MG63细胞中Galectin-3的蛋白表达;与对照组及NC-siRNA组比较,Galectin-3-siRNA组细胞存活率及细胞侵袭数显著降低,ki67、MMP-2、MMP-9、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著下调(P0.05)。结论 Galectin-3在骨肉瘤组织中的表达显著高于瘤旁组织,RNA干扰沉默Galectin-3的表达可显著降低细胞的增殖及侵袭能力,其机制与抑制wnt信号通路有关。     

lncRNA MEG3对肝癌细胞增殖凋亡的影响及机制研究

目的探讨lncRNA MEG3对肝癌细胞增殖凋亡的影响及机制。方法 RT-PCR检测人肝癌HepG2细胞转染48 h后MEG3的mRNA表达;CCK8实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测ki67、PCNA、Cleaved caspase3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达。结果与pc DNA3.1组比较,pc DNA3.1-MEG3组MEG3的mRNA表达显著上升,pcDNA3.1-MEG3组细胞存活率显著降低,细胞凋亡率显著升高,Cleaved caspase3蛋白表达显著上调,ki67、PCNA、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著下调(P0.01)。结论 lncRNA MEG3高表达可抑制肝癌细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制与Wnt/β-catenin信号通路的调控有关。     

miR-21在前列腺癌中的表达及抑制其表达对前列腺癌细胞增殖凋亡的影响

目的探讨抑制前列腺癌细胞中miR-21基因表达对癌细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法 RTPCR检测前列腺癌及癌旁组织中miR-21基因的mRNA表达;空白对照组(Control)、阴性对照组(NC)和miR-21 inhibitor组转染人前列腺癌PC-3细胞,48 h后RT-PCR检测各组细胞中miR-21基因的mRNA表达;CCK8实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测ki67、Cleaved caspase3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达。结果前列腺癌组织中miR-21的mRNA表达显著高于癌旁组织(P0.01);转染miR-21 inhibitor后miR-21的表达显著降低;NC组细胞存活率、细胞凋亡率及ki67、Cleaved caspase3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达与对照组,差异无统计学意义(P0.05),miR-21 inhibitor组细胞存活率及ki67、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著低于对照组,细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著高于对照组(P0.01)。结论抑制前列腺癌细胞中miR-21基因的表达可降低癌细胞的增殖及诱导细胞凋亡,其机制与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

RNA干扰MBP-1基因对胃癌细胞SGC-7901增殖影响

目的：探讨 MBP-1（c-myc promter binding protein 1,MBP-1）基因表达沉默对胃癌细胞株 SGC-7901细胞增殖影响。方法实验分3组：空白对照组（未转染胃癌细胞）、阴性对照组（转染错义序列）和干扰组（转染 MBP-1 shRNA）。设计2条针对MBP-1基因的小干扰 RNA 片段及1条阴性对照 siRNA,并构建入 pSIREN-retroQ 质粒。将构建的重组 pSIREN-retroQ 质粒通过 Lipofectamine 2000脂质体转染胃癌 SGC-7901细胞,嘌呤霉素筛选稳转株细胞。Real time PCR 和 Western blot 分别检测MBP-1表达。MTT 法对 MBP-1干扰后 SGC-7901细胞增殖进行检测。结果通过 PCR 扩增阳性克隆及测序,说明已成功构建MBP-1干扰及对照重组 pSIREN-retroQ 质粒。通过 Lipofectamine 2000脂质体将重组质粒转染胃癌 SGC-7901细胞,并通过嘌呤霉素筛选2周,说明已成功构建 MBP-1干扰及对照 SGC-7901稳转株细胞。Real time PCR 检测,干扰组 MBP-1 mRNA 相对表达量与空白对照组相比显著下调（P ＜0.05）。Western blot 检测 MBP-1蛋白表达,干扰组 MBP-1表达量与空白对照组相比也都显著下调。MTT 法检测结果表明,MBP-1干扰组细胞在48、72、96和120 h 增殖能力比空白对照组都有显著的升高（P ＜0.05）。结论下调 MBP-1基因表达能明显促进胃癌细胞 SGC-7901的增殖,从而为胃癌基因治疗提供了新靶点。     

姜黄素和Wortmannin联用对胃癌细胞增殖凋亡的影响及机制研究

目的 探讨姜黄素和Wortmannin联用对胃癌细胞增殖凋亡的影响及机制。方法 培养人胃癌SGC-7901细胞,CCK8实验检测10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L、160μmol/L姜黄素和10 nmol/L、50 nmol/L、100 nmol/L、500 nmol/L、1 000 nmol/L的Wortmannin分别作用于细胞24 h、48 h、72 h的细胞增殖情况,计算半数抑制浓度(IC50);根据IC50选择最佳的姜黄素及Wortmannin作用浓度;将接下来的试验分为对照组、姜黄素组、Wortmannin组、姜黄素+Wortmannin组,CCK8试验检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测Cleaved caspase3、PI3K、p-AKT蛋白表达。结果 不同浓度的姜黄素和Wortmannin处理细胞24 h、48 h、72 h后的细胞存活率均显著低于0 h细胞存活率(P0.05或P0.01),选择30μmol/L姜黄素和170 nmol/L的Wortmannin做后续研究。姜黄素组、Wortmannin组、姜黄素+Wortmannin组细胞存活率及PI3K、p-AKT蛋白表达显著低于对照组,细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著高于对照组(P0.01);姜黄素+Wortmannin组细胞存活率及PI3K、p-AKT蛋白表达显著低于姜黄素组和Wortmannin组,胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著高于姜黄素组和Wortmannin组(P0.01)。结论 姜黄素和Wortmannin均能抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,姜黄素和Wortmannin联用对细胞增殖凋亡的影响强于单独用姜黄素和Wortmannin。     

CTGF在多囊卵巢综合征中的表达及对卵巢颗粒细胞增殖凋亡的影响研究

目的探讨多囊卵巢综合征中结缔组织生长因子(CTGF)的表达及对卵巢颗粒细胞增殖凋亡的影响及机制。方法 60只SD大鼠随机分为正常组和实验组,每组各30只。实验组大鼠肌肉注射脱氢表雄酮(DHEA)(6 mg/100 g体重)和0.2 ml的注射用油,正常组大鼠肌肉注射0.2 ml的注射用油。摘取多囊卵巢综合征大鼠模型的卵巢组织,提取组织中的总RNA和总蛋白,Western blot检测CTGF的mRNA和蛋白表达;原代分离培养卵巢颗粒细胞,将NCsiRNA、CTGF-siRNA转染至细胞内,不经任何处理的细胞作为对照组。48 h后CCK8实验和流式细胞仪分别检测细胞的增殖及凋亡情况;Western blot检测Cleaved caspase3、PI3K、p-AKT蛋白表达。结果卵巢组织中CTGF的mRNA和蛋白表达均显著高于正常组(P0.01);转染siRNA后能显著降低CTGF的蛋白表达;CTGF-siRNA组细胞存活率及PI3K、p-AKT蛋白表达显著低于对照组和NC-siRNA组,细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著高于对照组和NC-siRNA组(P0.01)。结论 CTGF在多囊卵巢综合征中的表达升高,抑制其表达可降低颗粒细胞的增殖及诱导凋亡,其机制与PI3K/AKT信号通路的调控有关。     

替吉奥胶囊对胃癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响及机制研究

目的探讨替吉奥胶囊对胃癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响及机制。方法 6.25μg/ml、12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml的替吉奥处理人胃癌BGC823细胞,不加药物处理的作为空白对照组,48 h后,CCK8实验检测细胞增殖;Transwell小室检测细胞侵袭能力;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测Cleaved caspase3、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、Notch1、Hes1蛋白表达。结果 6.25μg/ml、12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml的替吉奥处理的细胞的抑制率均显著高于对照组,且具有浓度依赖性(P0.01),选择115μg/ml的替吉奥作为后续实验的研究对象;与对照组比较,替吉奥组细胞抑制率显著升高,细胞侵袭数显著降低,细胞凋亡率显著升高,Cleaved caspase3蛋白表达显著上调,MMP-2、MMP-9、Notch1、Hes1蛋白表达显著下调(P0.01)。结论替吉奥胶囊可降低胃癌细胞的增殖及侵袭能力,促进细胞的凋亡,其机制与抑制Notch1信号通路有关。     

靶向沉默c-FLIPs基因表达对膀胱癌细胞增殖及凋亡的影响及机制

目的探讨抑制c-FLIPs基因表达对膀胱癌细胞增殖及凋亡的影响及机制。方法 RT-PCR及Western blot分别检测膀胱癌组织及细胞中c-FLIPs基因的表达;si-c-FLIPs转染人膀胱癌T24细胞,同时转染正常对照组(normal)和阴性对照组(si-control),48 h后Western blot检测c-FLIPs、Cleaved caspase 8、β-链蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白(Cyclin D1)蛋白表达;细胞计数试剂盒-8(CCK8)实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果膀胱癌组织及细胞中c-FLIPs基因的表达均显著高于癌旁组织(P0.01)。T24细胞中c-FLIPs基因的表达最高,选择作为研究对象;转染si-c-FLIPs后FLIPs的表达显著降低;si-c-FLIPs组细胞存活率及β-catenin和Cyclin D1蛋白表达显著低于normal组,细胞凋亡率及Cleaved caspase 8蛋白表达显著高于normal组(P0.01)。结论抑制膀胱癌中c-FLIPs基因表达可降低癌细胞的增殖及诱导细胞的凋亡,其机制与下调Wnt/β-catenin信号通路有关。     

SH2B1沉默对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT通路的影响

目的研究沉默SH2B1基因表达对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡及3-磷酸肌醇激酶(PI3K)/蛋白质丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(AKT)通路的影响。方法体外培养胃癌SGC-7901细胞,采用SH2B1 siRNA转染SGC-7901细胞作为研究组,采用国际通用的与所有基因均无同源序列的non-target siRNA转染作为阴性对照组(NC组),以未经处理的胃癌SGC-7901细胞作为空白对照组(BC组),48h后收集各组转染成功细胞,采用荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测SH2B1 mRNA表达情况,采用蛋白质印迹法(Western Blot)检测SH2B1蛋白表达情况;采用细胞计数试剂盒(CKK-8)检测细胞增殖情况,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,同时检测Ki67、增殖细胞核抗原(PCNA)、Caspase-9、PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达情况。结果研究组SGC-7901细胞SH2B1蛋白及mRNA表达量较BC组和NC组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);转染后,siRNA组SGC-7901细胞增殖明显受到抑制、平板克隆形成率较BC组和NC组明显降低,凋亡率明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与BC和NC组比较,研究组SGC-7901细胞PI3K、p-AKT蛋白、Ki67及PCNA蛋白呈低表达,差异有统计学意义(P<0.05),Caspase-9蛋白呈高表达,AKT蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论沉默SH2B1基因表达可能通过抑制PI3K/ATK信号通路激活,抑制SGC-7901细胞增殖,促进凋亡。     

青蒿琥酯对人胃癌SGC-7901细胞生长的影响

目的:研究青蒿琥酯诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡作用及其可能机制.方法:应用流式细胞术(FCM)、透射电镜(TEM)等方法检测不同浓度下青蒿琥酯对人胃癌SGC-7901细胞生长的影响,并应用Western Blot法检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达水平.结果:经青蒿琥酯处理后,人胃癌SGC-7901细胞凋亡率升高,并具有时间浓度依赖性(P＜0.05),癌细胞被阻滞于G0/G1期;电镜观察肿瘤组织中散在凋亡细胞及凋亡小体;Western Blot法检测到凋亡相关基因Bcl-2表达减弱,Bax表达增强(P＜0.05).结论:青蒿琥酯能有效抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与下调凋亡相关基因Bcl-2、上调Bax表达有关.     

β-咔啉类生物碱对人胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡的影响及机制探讨

目的观察β-咔啉类生物碱对体外培养的人胃癌SGC-7901细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法不同浓度β-咔啉类生物碱处理人胃癌SGC-7901细胞48 h后,检测细胞增殖、凋亡情况,并以荧光定量聚合酶链反应(RTPCR)和蛋白印迹法(Western blot)分别测定细胞中抑癌基因PTEN、蛋白激酶B(AKT)基因mRNA及其蛋白表达。结果不同浓度的β-咔啉类生物碱均能抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖,其中40μg/m L浓度的抑制效果较其他浓度及5-Fu干预组更显著(P0.01),并可诱导细胞凋亡。不同浓度β-咔啉类生物均可引起PTEN mRNA和蛋白表达增加,AKT mRNA和蛋白表达减少,其中40μg/m L浓度的调节效果较其他浓度及5-Fu干预组更显著(P0.01)。结论β-咔啉类生物碱可抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,诱导凋亡,其作用机制可能是通过上调PTEN及下调AKT蛋白的表达实现。     

靶向沉默Pax6基因表达抑制视网膜母细胞瘤增殖侵袭的机制研究

目的探讨抑制Pax6基因表达对视网膜母细胞瘤增殖侵袭的影响及机制。方法 RT-PCR检测视网膜母细胞瘤及瘤旁组织中Pax6基因的mRNA表达;Control组(不经任何处理)、阴性对照组(转染NC-siRNA)和Pax6沉默组(转染Pax6-siRNA)转染人视网膜母细胞瘤HXO-RB44,转染48 h后Western blot检测各组细胞中Pax6、ki67、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化丝氨酸苏氨酸激酶(p-AKT)蛋白表达;CCK8和Transwell小室分别检测细胞的增殖及侵袭能力。结果视网膜母细胞瘤中Pax6基因的mRNA表达显著高于瘤旁组织(P0.01);转染Pax6-siRNA后HXO-RB44细胞中Pax6的蛋白表达显著降低(P0.01);与Control组及NC-siRNA组比较,Pax6-siRNA组细胞存活率及细胞侵袭数显著降低,ki67、MMP-2、PI3K、p-AKT蛋白表达均显著下调,差异有统计学意义(P0.01)。结论抑制Pax6基因表达可显著降低视网膜母细胞瘤增殖和侵袭能力,其机制与PI3K/AKT信号通路的调控有关。     

Rac1基NRNAi慢病毒载体的构建与鉴定

背景：Rac1是通过信号转导来调节癌细胞的侵袭、增殖,它在各种肿瘤中都有表达。目的：构建RAC1基因RNA干扰慢病毒载体,并检测其干扰效率。方法：应用Western blot检测Rac1基因在舌癌细胞中的表达。针对筛选确定的Rac1基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经AgeI和EcoRI双酶切后的pMagic4.1载体连接产生短发卡RNA慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定后将质粒分别和包装质粒混合物共转染293T细胞,采用Real-Time PCR筛靶,将筛靶成功的质粒进行慢病毒包装,再感染Tca8113细胞。荧光定量PCR和Western blot检测鉴定Rac1基因表达的干扰效果以确定其生物活性。结果与结论：成功构建了RAC1干扰载体,Western blot检测显著抑制Rac1蛋白表达,经Real-time PCR检测pLVT447的抑制率达70%。成功的构建了Rac1基因RNAi慢病毒载体,为RNAi用于靶向Rac1的基因治疗舌癌（Tca8113）提供了有效的siRNA靶序列。     

Rac1基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定

背景:Rac1是通过信号转导来调节癌细胞的侵袭、增殖,它在各种肿瘤中都有表达。目的:构建RAC1基因RNA干扰慢病毒载体,并检测其干扰效率。方法:应用Western blot检测Rac1基因在舌癌细胞中的表达。针对筛选确定的Rac1基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的OligoDNA,退火形成双链DNA,与经AgeI和EcoRI双酶切后的pMagic4.1载体连接产生短发卡RNA慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定后将质粒分别和包装质粒混合物共转染293T细胞,采用Real-TimePCR筛靶,将筛靶成功的质粒进行慢病毒包装,再感染Tca8113细胞。荧光定量PCR和Western blot检测鉴定Rac1基因表达的干扰效果以确定其生物活性。结果与结论:成功构建了RAC1干扰载体,Western blot检测显著抑制Rac1蛋白表达,经Real-time PCR检测pLVT447的抑制率达70%。成功的构建了Rac1基因RNAi慢病毒载体,为RNAi用于靶向Rac1的基因治疗舌癌(Tca8113)提供了有效的siRNA靶序列。     

β-二氢青蒿素-大黄素复合物对人胃癌细胞株SGC-7901作用的实验研究

目的探讨β-二氢青蒿素-大黄素复合物能否诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡及相关作用机制。方法四唑盐(MTT)比色法检测β-二氢青蒿素-大黄素复合物对SGC-7901细胞的抗增殖及细胞毒作用、Hoechst33258荧光染色和HE染色观察细胞凋亡的形态学改变、AnnexinV-PI双染法检测凋亡、Western Blotting方法检测CyclinD1和Ki-67蛋白的表达变化。结果 MTT结果β-二氢青蒿素-大黄素复合物对SGC-7901细胞抑制作用显著,且呈浓度和时间依赖性(P0.05);镜下观察可见明显的细胞凋亡形态;流式细胞仪检测结果显示,β-二氢青蒿素-大黄素复合物能诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡,且呈浓度依赖性(P0.05);Western Blotting方法发现β-二氢青蒿素-大黄素复合物明显下调了CyclinD1和Ki-67的表达水平。结论β-二氢青蒿素-大黄素复合物可抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖,诱导其凋亡,其作用机制可能与细胞周期阻滞有关。     

ADAM10抑制剂GI254023X对H929细胞增殖与凋亡的作用及其机制研究

目的:探讨解聚素金属基质蛋白酶10(ADAM10)抑制剂GI254023X对多发性骨髓瘤H929细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制。方法:选择不同浓度GI254023X处理H929细胞,CCK-8法检测并绘制增殖抑制曲线,Annexin V/7-AAD双染流式细胞术检测细胞存活与凋亡,Western blot检测切割后的Notch1蛋白(Cleaved Notch1),定量PCR检测Notch1靶基因Hes-1的转录变化。结果:GI254023X能明显抑制H929细胞增殖,随着药物浓度的增大及时间的延长,细胞的增殖能力逐渐下降;GI254023X能够诱导H929细胞凋亡;Western blot检测结果显示,Cleaved Notch1在GI254023X作用后水平下降;GI254023X能够使Hes-1基因的表达减低。结论:GI254023X能抑制H929细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与抑制Notch1活化有关。     

shRNA干扰AKT基因对Jeko-1细胞增殖、凋亡及Notch1信号通路的影响

目的:探讨RNA干扰沉默AKT基因对套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞株的增殖、凋亡及Notch1信号通路的影响。方法:设计针对AKT基因短发夹RNA,将其连入pGPU6/GFP/Neo质粒中,构建AKT shRNA真核表达载体,经脂质体转染入Jeko-1细胞,应用RQ-PCR及Western blot鉴定其干扰效果,MTT法绘制细胞生长曲线,流式细胞术检测细胞凋亡的变化,Western blot检测凋亡相关蛋白信号及通路相关蛋白p-AKT、Notch1、HES1的变化。结果:AKT shRNA转染Jeko-1细胞后,AKT的mRNA和蛋白表达均明显下降,有统计学意义(P0.05);转染组细胞增殖率明显低于Neg-shRNA组和空白对照组(P0.05),AKT shRNA传染48 h后,凋亡率为(37.72±4.39)%,而NegshRNA组和空白对照组分别为(2.62±1.53)%、(1.57±0.42)%,差异有统计学意义(P0.01);凋亡相关蛋白BCL-2表达下降,而BAX、caspase-3、caspase-9表达上升;PI3K/AKT信号通路相关蛋白p-AKT磷酸化水平下降、Notch1信号通路相关蛋白Notch1、HES1表达下调。结论:干扰沉默AKT基因可抑制套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能是特异性抑制PI3K/AKT信号通路也能下调Notch1信号通路的活性。     

荷包牡丹碱对人胃癌 SGC-7901细胞生长的作用及机制初探

目的探讨荷包牡丹碱对人胃癌SGC-7901细胞生长的抑制作用及其可能的机制。方法体外培养人胃癌SGC-7901细胞,MTT法测定细胞增殖情况;Hoechst33258染色观察细胞凋亡形态学变化;West-ern blot法检测Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达。结果 MTT法显示：不同浓度的荷包牡丹碱作用于胃癌SGC-7901细胞不同的时间之后,SGC-7901细胞呈现时间及浓度依赖性的生长抑制;流式细胞仪方法显示：荷包牡丹碱可以促进胃癌SGC-7901细胞的凋亡;行Hoechest33258染色可见细胞核出现固缩、边集,形成凋亡小体等凋亡现象;Western blot法检测显示：与对照组相比,药物作用后Bcl-2表达降低,Bax、Caspase-3表达升高, Bcl-2/Bax比例失调。结论荷包牡丹碱在体外对胃癌细胞的增殖与生长具有抑制作用,可促进其凋亡,其作用可能与Bcl-2/Bax降低导致Caspase-3活化有关。     

c-FLIP调节TRAIL诱导胃癌细胞凋亡敏感性的研究

目的探讨凋亡抑制蛋白c-FLIP对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导胃癌细胞SGC7901凋亡的影响。方法采用RNAi技术干扰c-FLIP的表达,MTT法测定细胞活力、采用Hoechst 33258染色及流式细胞仪检测细胞凋亡,定量PCR和Western blot法检测c-FLIP,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-8(caspase-8)的表达。结果特异性的RNAi能够显著抑制c-FLIP mRNA和蛋白的表达。单独使用不同浓度TRAIL处理SGC7901细胞24 h后,发现细胞的存活率有所降低,但没有显著差异。在干扰c-FLIP表达的同时用TRAIL 100 ng/ml作用胃癌细胞SGC7901不同时间(6 h,12 h,24 h),发现作用24 h后,细胞的存活率为对照组的62.8%,显著降低(P0.05),而处理后不同时间的对照组细胞存活率无显著差异(P0.05)。凋亡实验显示在二者共同作用SGC7901细胞24 h后,能够促进细胞的凋亡。Western blot结果显示二者共同作用24 h后,c-FLIP显著降低、caspase-8及激活型caspase-8(p-18)的表达均显著升高。结论抑制c-FLIP的表达增强了TRAIL诱导胃癌细胞SGC7901的凋亡。