肝细胞生长因子对人舌鳞癌 Tca8113细胞 VEGF-C 表达的影响及作用机制的初步研究

目的：研究 HGF 对人舌鳞癌 Tca8113细胞中 VEGF-C 表达的影响并探讨其作用机制。方法：体外培养 Tca8113细胞,应用 ELISA 方法测定不同浓度 HGF 作用下以及分别用 LY294002、U0126、SP600125、SB203580信号通路抑制剂阻断PI3K/Akt、P44/P22MAPK、JNK、P38MAPK 信号通路后 VEGF-C 的表达水平。结果：随着培养液中 HGF 浓度的增加,Tca8113细胞中 VEGF-C 的表达水平出现先增高后降低的趋势,当 HGF 浓度为40 ng/ml 时,VEGF-C 表达水平最高。PI3K/Akt 信号通路抑制剂（LY294002）和 P42/44MAPK 信号通路抑制剂（U0126）显著抑制了 HGF 刺激下 Tca8113的 VEGF-C 蛋白的表达（P ＜0．01）;而 JNK 信号通路抑制剂（SP600125）和 P38MAPK 信号通路抑制剂（SB203580）对 HGF 刺激下 Tca8113的 VEGF-C 蛋白的表达影响甚微（P ＞0．05）。结论：在人舌鳞癌 Tca8113细胞中,随着 HGF 浓度的增加,VEGF-C 的表达先增高后降低。PI3K/Akt 和 P44/P22MAPK 信号通路在口腔鳞状细胞癌淋巴转移中可能发挥作用。     

胰岛素样生长因子1经PI3K/Akt信号通道对人牙髓细胞凋亡的抑制调控

目的 研究PI3K/Akt信号通路中相关蛋白Akt、pAkt在磷脂壁酸（lipoteichoic acid,LTA）和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导引起的人牙髓细胞（human dental pulp cells,HDPCs）损伤中的表达情况及PI3K/Akt激活剂胰岛素样生长因子(IGF)-1对人牙髓细胞损伤的保护作用。方法 甲基噻唑基四唑（MTT）法检测LTA、LPS作用24、48、72 h后对HDPCs增殖的影响以及IGF-1对LTA、LPS引起的HDPCs增殖抑制的保护作用,蛋白免疫印迹法检测LTA、LPS刺激HDPCs 24 h后及使用IGF-1和脂磷壁酸、脂多糖共同处理HDPCs相关蛋白Akt、pAkt表达水平的变化。结果 LTA和LPS抑制HDPCs增殖具有浓度依赖性。IGF-1可降低LTA、LPS引起的HDPCs增殖抑制程度。使用IGF-1和脂磷壁酸、脂多糖共同处理HDPCs后pAkt（Ser473）蛋白表达上调,这种作用可被LY294002取消。结论 IGF-1对脂磷壁酸、脂多糖引起的hHDPCs增殖抑制有保护作用,这种保护作用可能通过激活PI3K/Akt信号通路发挥作用。     

三氧化二砷纳米粒对舌鳞癌细胞PI3K/AKT通路的影响

目的：探讨三氧化二砷固体脂质纳米粒对舌鳞癌Tca8113细胞作用前后PI3K/AKT信号通路关键因子表达情况。方法：使用MTT的方法观察三氧化二砷固体脂质纳米粒对舌鳞癌Tca8113细胞作用后的存活率情况,并用使用Western blot检测方法检测PI3K/AKT信号通路关键蛋白PI3K、p-AKT、AKT的表达和变化。结果：三氧化二砷固体脂质纳米粒对舌鳞癌细胞作用后,MTT显示舌鳞癌Tca8113细胞增殖抑制,且具有浓度依赖性,PI3K/AKT信号通路关键因子PI3K、p-AKT、AKT表达降低。结论：三氧化二砷纳米粒降低舌鳞癌细胞的PI3K/AKT通路信号传导。     

PI3K/AKT信号通路对体外人牙髓细胞增殖和成牙本质向分化能力的影响

目的 研究PI3K/AKT信号通路对人牙髓细胞（hDPC）体外增殖作用和成牙本质向分化能力的影响.方法 体外培养hDPC,采用PI3K通路抑制剂LY294002（LY）处理hDPC,CCK8法检测细胞增殖情况,Western blot蛋白印记检测PI3K/AKT通路下游蛋白AKT、磷酸化AKT（p-AKT）水平在6、12、24、48、72 h的改变,检测成牙本质向分化指标DSPP的蛋白水平变化;设立空白对照组、矿化诱导组、LY组、矿化诱导＋LY组共4组,成牙本质向矿化诱导14 d,茜素红染色检测矿化结节形成情况.结果 CCK8结果显示,LY294002在24、48和72 h可抑制hDPC的增殖（24 h：Z=-0.358,P＜ 0.05;48 h：t=11.674,P＜ 0.05;72 h：t=10.832,P＜ 0.05）;Western blot显示,LY294002抑制PI3K/AKT通路下游蛋白p-AKT活性,在24 h时作用最明显,成牙本质向分化指标DSPP蛋白水平降低;茜素红染色结果显示,矿化结节的数量B组最多、C组最少.结论 PI3K/AKT信号通路可促进hDPC的增殖和成牙本质向分化能力.     

Survivin基因在顺铂诱导Tca8113舌鳞癌细胞凋亡中的作用

目的体外观察顺铂（DDP）诱导Tca8113舌鳞癌细胞株凋亡的作用, 同时检测在此过程中凋亡蛋白抑制因子Survivin mRNA表达和蛋白表达的变化。方法将人Tca8113舌鳞癌细胞株进行传代培养,MTT法检测顺铂不同浓度和不同时间对Tca8113舌鳞癌细胞生长的抑制作用,通过RT- PCR检测凋亡过程中Survivin基因mRNA的表达,免疫细胞化学观察Survivin基因的蛋白表达,以及流式细胞术观察顺铂诱导各组Tca8113细胞的凋亡率。结果顺铂可明显抑制Tca8113舌鳞癌细胞的增殖, 其增殖抑制率呈浓度和时间依赖性,细胞凋亡率也呈同样的趋势,最高可达34.1%。1.0 μg/mL DDP处理Tca8113舌鳞癌细胞,Survivin mRNA和蛋白表达水平随时间的增加而降低,在24h达到最低,随后又升高。结论抗凋亡蛋白Survivin在Tca8113舌鳞癌细胞高表达,顺铂可有效诱导Tca8113舌鳞癌细胞凋亡, Survivin mRNA表达在化疗早期随作用时间的延长而降低,Survivin基因的抑制在顺铂诱导的Tca8113舌鳞癌细胞的细胞凋亡中起着重要的作用。     

Ptch和Smo在舌鳞状细胞癌Tca8113细胞中的表达及其意义

目的:研究Hedgehog(Hh)信号通路相关因子Ptch和Smo在舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株中的表达及其意义。方法:Hh信号通路抑制剂Cyclopamine处理Tca8113细胞后,采用MTT实验检测细胞增殖抑制率,再利用RT-PCR法和Western-Blot方法检测 Ptch和Smo的mRNA和蛋白表达情况。结果:Cyclopamine对Tca8113细胞增殖具有抑制作用。加药后的不同时间段中,显示Ptch、Smo的mRNA和蛋白在Cyclopamine药物组中的表达低于对照组。Smo的mRNA和蛋白分别在加药后24 h、72 h中的表达随着药物浓度增高而降低。结论:Cyclopamine可以抑制Tca8113细胞的生长,降低Smo mRNA和蛋白的表达,Hh信号通路可能在舌癌的发生、发展中起重要作用。[关键词] Hh信号通路 Tca8113细胞 Cyclopamine Ptch Smo     

塞来昔布对Tca8113细胞环氧化酶-2表达及诱导凋亡的作用

目的观察选择性环氧化酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布对人舌鳞癌Tca8113细胞的生长抑制、COX-2表达调节及诱导凋亡的作用。方法在Tca8113细胞中分别加入含有不同浓度塞来昔布的培养液,培养24、48、72 h后,采用MTT方法测定细胞生长抑制率,采用免疫组化方法观察COX-2蛋白在Tca8113细胞中的表达,应用荧光显微镜观察凋亡细胞的形态学特征,应用Annexin V-FITC/PI双标记法检测细胞的早期凋亡率,相对定量荧光定量PCR检测Tca8113细胞中COX-2 mRNA的表达。结果COX-2蛋白在Tca8113细胞中呈强阳性表达,塞来昔布在抑制细胞生长的同时,抑制Tca8113细胞COX-2蛋白的表达;Tca8113细胞经塞来昔布处理后凋亡细胞多见,与对照组相比,塞来昔布处理组早期凋亡细胞增多有统计学意义;塞来昔布调节COX-2 mRNA表达的作用与对照组相比无统计学意义。结论塞来昔布主要以剂量依赖的方式抑制Tca8113细胞生长,诱导细胞凋亡,其作用与抑制COX-2蛋白表达有关,而对COX-2基因作用较弱,其作用机制有待进一步研究。     

Egr-1对机械力诱导人牙周膜细胞炎症反应的作用及机制研究

目的:研究早期生长转录因子(early growth responsive gene-1,Egr-1)对机械应力(mechanical stress,MS)介导人牙周膜细胞(human periodontal membrane cells,hPDLs)炎症因子分泌和表达的影响及可能机制.方法:以实时定量PCR和ELISA法检测MS加载不同时间(6、12、24和48 h)和不同形变率(3％、6％、12％和15％)时炎症因子IL-13、IL-6、IL-8和IL-11的分泌和表达水平.MS对Egr-1表达的影响采用实时定量PCR和Western印迹法检测,沉默Egr-1对炎症因子的作用采用实时定量PCR和ELISA检测.应用Western印迹法检测Egr-1下调对PTEN/PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达的影响.进一步采用20 μmol/L PI3K/Akt抑制剂LY294002预处理hPDLs 30 min,研究Egr-1沉默在MS介导炎症因子表达中的可能机制.采用SPSS 11.0软件包对数据进行统计学分析.结果:IL-1[β、IL-6、IL-8和IL-11的分泌和mRNA表达随着作用时间和形变率的增加而升高,12％的MS作用24 h后,其分泌程度和表达水平最高.12％的MS加载24 h显著上调Egr-1表达.沉默Egr-1显著抑制MS诱导炎症因子表达.Egr-1沉默下调PTEN表达,上调p-PI3K和p-Akt蛋白表达水平,LY294002预处理可部分阻断Egr-1沉默对炎症因子分泌及表达的抑制作用.结论:沉默Egr-1通过PETN/PI3K/Akt信号通路抑制MS诱导的炎症因子分泌和表达.     

RNA干扰XBP1基因表达对口腔鳞状细胞癌生物学特性的影响研究

目的:检测口腔鳞状细胞癌组织中X盒结合蛋白1(XBP1)的表达及观察抑制其表达后对人口腔鳞状细胞癌Tca8113增殖凋亡的影响,并探讨其机制。方法:RT-PCR检测42例口腔鳞状细胞癌及癌旁组织中XBP1基因的mRNA表达;NC-siRNA和XBP1-siRNA转染至Tca8113细胞内,不经任何处理的细胞作为空白对照组,48 h后,CCK8实验、流式细胞仪分别检测XBP1基因转染对细胞增殖、凋亡的影响;Western blot检测Cleaved caspase3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达的变化。结果:口腔鳞状细胞癌中XBP1基因的mRNA表达显著高于癌旁组织(P<0.01);转染XBP1-siRNA能够显著降低XBP1的蛋白表达,降低细胞的存活率,促进细胞的凋亡,上调Cleaved caspase3蛋白表达,下调β-catenin、Cyclin D1蛋白表达(P<0.01)。结论:RNA干扰沉默XBP1基因表达可通过抑制Wnt/β-catenin信号通路降低Tca8113增殖及诱导细胞凋亡。     

姜黄素和乳香酸对口腔鳞癌细胞系Tea8113抑制作用的研究

目的观察姜黄素和乳香酸对人口腔鳞癌细胞系Tca8113增殖和凋亡的影响及对炎症代谢通路中Cox-2、5-Lox的作用。方法培养人口腔鳞癌细胞系Tca8113,采用不同浓度的姜黄素和乳香酸及二者联合处理Tca8115细胞24、48、72h。MTY方法检测对细胞增殖的影响,AnnexinV-FITC／PI染色法流式细胞仪检测对细胞凋亡的影响,RT—PCR及Western—blotting法检测对Cox-2、5-Lox表达的影响。结果姜黄素和乳香酸均能抑制Tca8113细胞增殖,呈现一定的浓度和时间依赖关系。姜黄素和乳：香酸均能促进TcaSll3细胞凋亡,呈现一定的浓度依赖关系。两种药物联合应用抑制细胞增殖和促进凋亡的作用明显强于单独作用。姜黄素能抑制炎症代谢通路中限速酶Cox-2、5-Lox的表达,乳香酸可以抑制5-Lox表达,且有一定的剂量相关性,两者联合应用时对Cox-2、5．Lox的表达均有抑制作用,尤其是对5-Lox通路的抑制,联合应用较单独应用作用显著增强。结论姜黄素和乳香酸均能抑制口腔鳞癌细胞TcaS113的增殖,促进凋亡。姜黄素能抑制炎症代谢通路中Cox-2和5-Lox的表达。乳香酸能抑制5-Lox表达,天然植物药姜黄素和乳香酸可能通过抑制花生四烯酸代谢通路发挥口腔癌的化学预防作用。     

Nicotine inhibits apoptosis induced by cisplatin in human oral cancer cells

Oral cancer demonstrates a strong epidemiological association with smoking, but little is known about the effect of nicotine on oral cancer cell apoptosis. Nicotine, a major component of cigarette smoke, can regulate cell proliferation and angiogenesis and suppress apoptosis induced by chemotherapeutic drugs. The main aim of this study was to investigate the effects of nicotine on apoptosis induced by cisplatin, which is commonly used to treat advanced oral cancers, in the human oral cancer cell line Tca8113. The cells were stimulated with nicotine in the presence or absence of cisplatin, and apoptosis was assayed. The results showed that nicotine inhibited apoptosis induced by cisplatin. It was also observed that survivin played a role in the inhibitory effect of nicotine on apoptosis. Depletion of survivin reduced the protective effect of nicotine against cisplatin-induced apoptosis. Akt, a physiological survivin kinase, is activated by nicotine. Treatment of Tca8113 cells with the phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) inhibitor LY294002 blocked nicotine-induced survivin expression and enhanced cell apoptosis. These studies suggest that exposure to nicotine might negatively impact on the apoptotic potential of chemotherapeutic drugs, and that survivin plays a key role in the anti-apoptotic effect of nicotine. The Akt pathway may be required for nicotine function.     

蛋白激酶C-δ在热诱导舌鳞癌Tca8113细胞凋亡中的作用研究

目的探讨热诱导舌鳞癌Tca8113细胞凋亡过程中蛋白激酶C-δ（PKC-δ）的作用。方法应用PKC-δ活化抑制剂Rottlerin和等体积的Rottlerin溶剂二甲基亚砜（DMSO）分别预处理Tca8113细胞30 min后,43 ℃水浴法热诱导Tca8113细胞0、40、80、120 min,流式细胞仪检测细胞凋亡率、线粒体膜电位强度变化,酶标仪比色法检测Caspase-3活性,Western杂交分析PKC-δ的活化。结果Rottlerin抑制热诱导的PKC-δ裂解活化;抑制热诱导Tca8113细胞凋亡、降低线粒体膜电位及Caspase-3活性。相同40、80、120 min加热时间,经Rottlerin与未经Rottlerin预处理的Tca8113细胞相比,两者凋亡率、线粒体膜电位及Caspase-3活性在统计学上有显著性差异（P<0.01）。结论活化的PKC-δ可促进热诱导Tca8113细胞凋亡,PKC-δ裂解活化是热诱导Tca8113细胞凋亡的机制之一。     

核因子-κB/p65 siRNA介导的舌鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡及相关分子机制

目的：研究下调核因子κB（nuclear factor-kappa B,NF-κB）/p65基因的表达对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡的影响,并探讨Tca8113细胞凋亡可能的分子机制。方法：利用脂质体2000将终浓度为100nmol/L的p65 siRNA转染舌鳞状细胞癌Tca8113细胞,通过RT-PCR检测0、24、48和72hp65 mRNA的表达,并通过流式细胞术检测转染前后细胞凋亡变化,通过Caspase-Glo○R-3/7,-8和-9检测试剂盒分析caspase-3/9活性,用Western blotting技术检测p65、bcl-2和bax蛋白表达。结果：Tca8113细胞转染p65siRNA后,在48hp65 mRNA的相对表达量为0.181±0.028,显著低于未处理组0.595±0.038和对照siRNA组0.613±0.067（P〈0.05）。流式细胞术结果显示,p65 siRNA能促使Tca8113细胞凋亡,其早期凋亡比率为（23.16±1.72）%,显著高于未处理组和对照siRNA组（P〈0.01）。转染48h后,p65和bcl-2蛋白的相对表达水平明显下调,而促凋亡蛋白bax的表达显著上升,并伴随着caspase-3/9活性的显著上升。结论：NF-κB信号途径中的p65亚基可能在舌鳞状细胞癌凋亡中发挥重要作用,该研究有望为舌鳞状细胞癌的分子靶向治疗提供理论依据。     

塞来昔布对Tca8113细胞侵袭性影响的体外研究

目的:探讨环氧化酶-2(cyclooxygenease-2,COX-2)抑制剂——塞来昔布(celecoxib)对Tca8113细胞侵袭性的抑制作用。方法:用划痕实验检测Tca8113细胞的迁移能力;不同浓度的塞来昔布处理人舌鳞癌Tca8113细胞后,用MTT法检测细胞-基质黏附力的变化;用Transwell小室结合Matrix胶检测肿瘤细胞侵袭能力的变化。结果:10、20μmol/L的塞来昔布作用24 h后,细胞的侵袭能力分别下降了54%和73%(P<0.001),细胞-基质黏附力也明显降低(P<0.001)。结论:Tca8113细胞是高侵袭性细胞,塞来昔布对Tca8113细胞侵袭的抑制作用呈剂量依赖性。     

塞来昔布抑制Tca8113细胞释放PGE_2及抑制细胞增殖的作用

目的研究选择性环氧化酶2抑制剂塞来昔布对人舌鳞癌Tca8113细胞生长抑制、诱导细胞凋亡与释放前列腺素E2（PGE2）的影响。方法采用四唑氮蓝（MTT）法检测细胞增殖,AnnexinV-FITC/PI双标记法检测细胞凋亡,酶联免疫吸附实验（ELISA）检测PGE2含量,AO/EB荧光双染观察凋亡细胞的形态学变化。结果塞来昔布以剂量依赖方式抑制Tca8113细胞生长及释放PGE2,其抑制PGE2释放与抑制细胞生长及诱导细胞凋亡均呈负相关,AO/EB荧光双染观察发现经塞来昔布处理24h后,细胞出现典型的凋亡变化,凋亡细胞多见。结论塞来昔布抑制人舌鳞癌Tca8113细胞生长及诱导细胞凋亡与其抑制PGE2释放密切相关。     

尼古丁上调口腔鳞状细胞癌抗氧化蛋白Prx1的表达

目的：探讨口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma,OSCC）中抗氧化蛋白Prx1与烟草诱导的氧化应激的相关性。方法：采用RT-PCR、Western Blot方法,观察尼古丁作用相同时间（48h）不同浓度（0.1、1、10、100μmol/L）及同一浓度（1μmol/L）不同时间（24、48、72h）对Tca8113细胞Prx1mRNA及蛋白表达的影响。结果：尼古丁可诱导Tca8113细胞Prx1mRNA和蛋白表达增加。结论：Prx1表达增高可能与烟草诱导的氧化应激有相关性,在烟草诱导的OSCC发生发展中可能发挥重要作用。     

SOX2通过PI3K/AKT通路调控口腔鳞癌细胞迁徙的机制研究

目的:研究过表达SOX2通过PI3K/AKT通路促进口腔鳞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞迁移及上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)的作用及机制.方法:收集OSCC组织及正常口腔黏膜组织,培养OSCC细胞株Tca83、SC...     

Tca8113-4-1BBL细胞联合CD28单抗在口腔鳞癌免疫治疗中的作用

目的:探讨转4-1BBL肿瘤细胞联合抗CD28单抗体外诱导抗肿瘤活性的能力.方法:通过脂质体法将重组载体pEGFP/neo-h4-1BBL转染人舌鳞癌细胞Tca8113,经G418(400μg/mL)筛选及有限稀释后,获得稳定高表达克隆,分别用RT-PCR和Western印迹检测转染细胞中h4-1BBLmRNA和蛋白的表达.将转染与未转染4-1BBL基因的Tea8113细胞用丝裂霉素C(MMC)处理后,制成肿瘤细胞瘤苗.联合抗CD28单克隆抗体与经体外抗CD3mAb诱导的人外周血T淋巴细胞共同培养,测定T细胞增殖、CTL杀伤活性及产生细胞因子(IL-2和IFN-γ)的能力.实验数据以SPSS12.0软件包进行方差分析.结果:h4-1BBL基因真核表达载体在Tca8113细胞中获得稳定表达.转染h4-1BBL基因的Tca8113细胞联合抗CD28单抗能显著刺激T细胞活化、增殖(P(0.01),促进IL-2、IFN-γ分泌(P<0.01),并能有效地诱导CTL的特异性杀伤活性(P<0.01).结论:转4-1BBL肿瘤细胞联合抗CD28抗体能显著增强肿瘤细胞的免疫原性,诱导T细胞产生有效的抗肿瘤免疫应答.