乙型肝炎病毒转录体血清学检测及其在母婴垂直传播中的意义

目的: 探讨乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)转录体的检测在母婴传播中的意义.方法: 自HBV表面抗原(HBsAg)阳性母亲及其新生儿血清中提取核酸,经PCR及RT-PCR扩增HBV DNA,全长型RNA(Full-length RNA, fRNA)和顿挫型RNA(Truncated RNA, trRNA),琼脂糖凝胶电泳显示产物. 结果: HBeAg( )/HBeAg(-)母亲血样病毒DNA,fRNA和trRNA的阳性率分别为75%,65%,70%和37.5%,20.8%,58.3%,两组间前两项指标相差显著.44例新生儿血样HBsAg,病毒DNA和fRNA阳性率分别为9.1%,4.5%和6.8%,显著低于其母亲;儿血中trRNA阳性率达52.3 %,与其母亲trRNA的存在有一定关联.15例乙肝五项检测仅显示HBsAb阳性的新生儿血样中均未见到病毒DNA和fRNA,但其中11例(73.3%)可检测到trRNA. 结论: 与HBsAg、病毒DNA及fRNA相比,trRNA可能是HBV母婴传播过程中早期出现的血清学指标,这一指标的应用可能有助于更精确的确定新生儿HBV感染的状态.     

乙肝病毒转录体检测在母婴传播中的应用

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)转录体的检测在母婴传播中的意义。方法自母亲及其婴儿血清中提取核酸,经PCR及RT-PCR分别扩增HBVDNA和RNA,琼脂糖凝胶电泳显示产物,South-ern-blotting验证反应的特异性,取代表性产物克隆、测序。结果HBeAg(+)母亲的XDNA的表达(75.0%)和fRNA的表达(65.0%)显著高于HBeAg(-)的母亲(分别为37.5%和20.8%,P<0.05和P<0.005);所有表达fRNA的母亲也同时表达trRNA,在20例XDNA(-)、fRNA(-)的母亲中,仍有10例可检测到trRNA。新生儿XDNA的表达(4.6%)和fRNA的表达(6.8%)较其母亲显著降低;占优势表达的是trRNA(52.3%),且与其母亲trRNA的表达状态密切相关。母亲为trRNA(+)的新生儿trRNA的表达显著高于母亲为trRNA(-)者。15例HBsAb(+)的新生儿均未检出XDNA和fRNA,但11例仍可检测到trRNA。结论与HBVDNA及其表达产物相比,trRNA在HBV母婴垂直传播过程中有可能是一个出现更早期的可检测指标,它有助于更精确的确定新生儿HBV感染的状态。     

妊娠晚期抗病毒免疫阻断治疗对新生儿血清HBV转录体的影响

目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)转录体在早期诊断HBV母婴传播中的意义, 并观察母亲抗乙型肝炎病毒免疫球蛋白(HBIG)免疫阻断治疗对新生儿血清HBV转录体的影响.方法:治疗组46例HBV表面抗原(HBsAg)阳性孕妇自孕26 wk开始行抗HBV免疫治疗(HBIG im, 200 IU/4 wk;同时使用左旋咪唑涂布剂10 mg/wk);另23例HBsAg)阳性孕妇做为对照组未给予任何抗病毒治疗. 从孕妇治疗前血清及其新生儿血清中提取核酸,经PCR及RT-PCR扩增HBV DNA,全长型RNA (fRNA)和顿挫型RNA(trRNA),琼脂糖凝胶电泳显示产物,Southern杂交进一步验证扩增产物. 结果: HBV DNA阳性仅存在于未接受免疫治疗的母亲所生新生儿中;超过半数的新生儿血清中可检测到病毒转录体-RNA, 并与其母亲是否接受免疫阻断治疗无关. 但是,治疗组母亲所生新生儿中仅可检测到顿挫型病毒转录体-trRNA. 结论: 血清HBV转录体可早期诊断新生儿HBV感染的状态;新生儿血清中trRNA的转录模板可能为新生儿体内的病毒DNA;HBIG免疫阻断治疗不能阻断HBV宫内感染,但可以阻止高复制性感染的发生.     

乙型肝炎病毒X基因在诊断HBV特殊感染状态中的应用

1材料和方法 第四军医大学唐都医院采集血清样本850例，其中临床检测HBsAg阳性而HBVDNA阴性血清标本200例、HBsAg阴性各类肝病（肝癌、肝硬化、丙型肝炎和隐源性肝病）血清标本150例、HBsAg阴性献血员血清标本500例．检测位于病毒基因复制早期阶段的HBVXDNA和RNA，以及目前临床商品化检测主要检测的位于病毒基因复制晚期的HBVCDNA和RNA．同时检测X基因转录体末端结构fRNA（全长型转录体）和trRNA（顿挫型转录体）．     

HBsAg和HBcAg在慢性乙肝病毒携带者肝组织中的表达

目的 观察慢性乙肝病毒携带者血清标志物与肝组织HBcAg表达的相关性.方法 对80例慢性乙肝病毒携带者行快速经皮肝穿刺术取肝组织,免疫组化染色检查HBsAg,HBcAg.荧光定量PCR法检测血清HBV DNA.ELISA法检测血清HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe和抗-HBc. 结果 血清HBsAg均阳性,血清HBeAg阳性者48例、HBeAg阴性者32例,血清HBV DNA阳性者50例、HBV DNA阴性者30例.肝组织HBsAg阳性者68例、肝组织HBcAg阳性者43例. 结论 慢性乙肝病毒携带者肝组织HBcAg表达与血清标志物HBV DNA、HBeAg有相关性.     

肝细胞癌癌组织、癌外肝组织内HBV标志的免疫组织化学研究

本文用PAP法观察50例早、中期肝细胞癌(HCC)癌组织,癌外肝组织和40例慢性肝病肝组织内HBsAg、HBcAg的检出率与表达方式。HCC癌外肝组织内HBsAg和HBcAg的检出率分别为76％和30％,癌组织内相应的检出率为14％和6％;癌外肝组织HBAg的检出率、表达方式与慢性肝病患者基本相同,提示乙肝病毒(HBV)感染与HCC有密切的关系。本文还观察了HCC患者HBV感染的类型、癌外肝组织内HBAg与病理变化的关系。     

隐匿性乙型肝炎抗病毒治疗的研究现状

HBsAg阴性的HBV感染常称为隐匿性HBV感染 ,指血清HBsAg阴性 ,而应用PCR技术检测血清和 (或 )肝组织中HBV DNA阳性。分为二类 ,其一 ,可检出血清HBV标志 ,包括抗 HBs(+ )、抗 HBc(+ )或抗 HBe(+ ) ;其二 ,所有HBV标志均阴性。我国HBV感染率高达 62 .5 % ,[1] 是隐匿感染存在的基础。 1991年骆抗先等应用PCR技术研究发现[2 ] ,HBsAg阴性的隐匿性HBV感染我国普遍存在 ,单纯性抗 HBc阳性人群中有 30 %～ 35 %血清HBV DNA阳性。因肝组织病理切片较临床更准确反映肝病变 ,对血清HBV DNA阴性的隐匿性乙型肝炎主张肝穿…     

肝组织病理检查对隐匿性慢性乙型肝病的诊断价值

目的 探讨肝组织病理检查对隐匿性慢性乙型肝病的诊断价值.方法 对98例血清HBsAg阴性、肝功能不明原因反复异常患者采用免疫组化Envision法和肝组织HBV DNA的原位杂交法检测肝组织中HBsAg、HBcAg水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQPCR)检测血清HBV DNA水平,并在光学显微镜下观察肝组织病理改变的情况.结果 肝组织病理检查示:98例患者中,隐匿性慢性乙型肝炎73例,隐匿性乙型肝炎后肝硬化20例,早期肝细胞癌5例;98例患者肝组织HBV DNA原位杂交法检测阳性率为74.49%(73/98),明显高于血清HBV DNA检测的阳性率7.14%(7/98)(P＜0.01)和免疫组化Envision法检测HBsAg、HBcAg的阳性率50.02%(50/98)、30.73%(36/98)(P＜0.05).结论 肝组织病理检查对隐匿性慢性乙型肝病有重要的诊断价值.     

核酸检测技术在血液筛查中的应用研究

目的大样本、多方法调查深圳地区无偿献血人群中乙肝、丙肝和艾滋病病毒血清学阴性者的核酸阳性率,探讨在我国血液筛查中引进核酸扩增技术的必要性,了解和分析献血者血清学阴性核酸阳性感染状况。方法采用大样本数调查,应用ROCHE PCR-ELISA、PCR-微流芯片、实时荧光PCR方法和CHIRON TMA(转录依赖的扩增技术)多种方法对血清学检测阴性的献血者进行HBV DNA、HCV RNA和HIV-1RNA检测,对乙肝阳性献血者追踪检测ALT和乙肝两对半标志物,对丙肝核酸阳性献血者追踪检测ALT及抗-HCV及HBV DNA和HCV RNA病毒载量。结果共对141288人份血样进行了检测,检出HBsAg(-)、HBV DNA阳性28例,总阳性率为0.020%,其中21例为anti-HBc阳性,占0.015%。HIV-1RNA未检出阳性,17例HBsAg(-)、HBV DNA阳性样本追踪发现,9例发生了血清转换现象,4例呈窗口期特征,所有追踪的HBV DNA阳性献血者ALT检测结果正常。1例anti-HCV(-)、HCV RNA阳性献血者追踪发现为典型窗口期献血,ALT显著升高。结论应采用高灵敏度的核酸扩增技术筛查血液中的乙肝和丙肝病毒,可提高血液安全。     

新疆肝病患者HDV、HBV感染的免疫组化研究

作者以直接酶标法及过氧化物酶-抗过氧化物酶法(PAP法)对145例新疆各类肝病患者的肝组织进行HDV、HBV感染的免疫组化研究,各类标本中,HBsAg及HBcAg的合计检出率为39.3％,HDAg在HBV血清学标记阳性患者肝组织中的检出率为3.5％。胞浆型HBcAg表达多见于肝组织病变明显区域,HDAg在肝炎后肝硬化组的检出率明显高于HBV感染非肝硬化组(P<0.025),提示肝炎后肝硬化与HDV感染有关。     

血清乙型肝炎病毒核酸定量检测及临床意义

目的: 探讨血清HBV DNA水平与HBV标志物(HBVM)表现模式、肝损害程度的关系。方法: 采用荧光定量PCR分析系统检测126例乙肝病毒感染者HBV DNA,采用ELISA法检测HBVM。结果: 在HBsAg阳性+HBeAg阳性+抗HBc阳性的血清中HBV DNA阳性率和含量最高,血清HBeAg与HBV DNA含量有一定关系(P<0.01),血清丙氨酸氨基转移酶水平与HBV DNA含量亦有一定关系(P<0.05)。结论: HBV DNA含量与HBeAg有一定关系,肝脏损害程度与血清HBV DNA亦有一定关系。     

乙型肝炎病毒载量与血清免疫标志物及ALT的关系

目的探讨不同乙肝病毒（HBV）载量与其血清标志物模式及ALT的关系。方法采用荧光定量聚合酶链式反应（FQ-PCR）、酶联免疫吸附试验（ELISA）和速率法分别检测患者血清HBV-DNA载量、血清学标志及谷氨酸丙氨酸转移酶（ALT）活性。结果在605例患者样本中共检测出9种血清模式,HBeAg阳性模式,即HBsAg（＋）,HBeAg（＋）,抗HBc（＋）模式与HBsAg（＋）,HBeAg（＋）模式,其HBV-DNA阳性率分别为96.2%和100.0%,病毒平均含量106.53copies/mL,明显高于HBeAg阴性模式（P〈0.01）。HBV-DNA水平与ALT异常存在相关。结论 HBeAg阳性模式HBV载量显著高于HBeAg阴性模式,HBV载量越高,ALT异常的比例越大。     

乙型肝炎病毒表面抗原阳性孕妇前S1抗原检测分析

目的检测乙型肝炎表面抗原(HbsAg)阳性孕妇血清乙型肝炎前S1抗原(PreS1Ag)与乙肝病毒DNA(HBV DNA)的结果,探讨PreS1Ag在妇幼保健工作的使用价值。方法对288名HbsAg阳性孕妇血清用酶联免疫吸附法检测PreS1Ag,用荧光定量PCR法检测HBVDNA。结果288名HbsAg阳性孕妇PreS1Ag总阳性率为76.4%(220/288)、PCR总阳性率为82.6%(238/288);HbeAg(-)血清学模式组PreS1Ag阳性率为73.4%(160/218)、HbeAg(+)血清学模式组PreS1Ag阳性率为85.7%(60/70),两组PreS1Ag阳性率无显著性差异(P>0.05);PCR(-)组PreS1Ag阳性率为26%(13/50)、PCR(+)组PreS1Ag阳性率为87%(207/238),两组PreS1Ag阳性率有显著性差异(P﹤0.05)。结论PreS1Ag与HBeAg无明确相关,与HBVDNA有较好的一致性,基层妇幼保健机构可通过检测PreS1Ag补充了解孕妇乙肝病毒的复制状态,做好防治措施。     

原发性肝癌行肝动脉化疗栓塞术后乙肝病毒再激活的危险因素分析

目的探讨原发性肝癌患者行肝动脉化疗栓塞术（TACE）后乙肝病毒（HBV）再激活的临床特点,并分析其危险因素。方法回顾性分析102例行TACE术后的中晚期肝癌患者并发HBV再激活的临床特点,并应用多因素Logistic回归分析HBV再激活的独立危险因子。结果TACE术后出现HBV再激活者27例,其中HBeAg和HBV—DNA阳性者18例;HBeAb和HBV—DNA阳性5例;HBeAb阳性,HBV—DNA阴性者2例;HBeAg阴性、HBV—DNA阳性者2例。单因素分析显示,HBsAg阳性、HBeAg阳性和HBV—DNA阳性是HBV再激活的危险因子,其比数比分别为8．66、26．44和58．03;95％可信区间分别为8．6～16．8（p〈0．05）、9．8～22,6（p〈0.01）和995～95．6（p〈0.01）;多因素Logistic回归分析显示,95％可信区间为995～2266（P〈0.01）,提示HBV—DNA阳性为HBV再激活的独立危险因子。结论HBV—DNA阳性、HBsAg阳性和HBeAg阳性为原发性肝癌患者行TACE术后HBV再激活的危险因素,其中HBV—DNA阳性为HBV再激活的独立危险因子。     

"大三阳"、"小三阳"患者血清中HBVC基因启动子和前C基因变异模式的研究

目的　研究“大三阳”、“小三阳”患者血清中HBVC基因启动子和前C基因变异模式。方法　通过基因序列分析检测 75例“大三阳”患者和 5 2例“小三阳”患者血清中HBVC基因启动子和前C基因序列。结果　 (1)“大三阳”患者血清中HBVnt1719、nt172 6、nt172 6 - 1730、nt1799和联变 (176 2 176 4 1896 )的变异率与“小三阳”患者间差别有显著性意义 (P <0 0 5 )。 (2 )“大三阳”患者血清中HBVnt1896终止变异率与“小三阳”患者间差别有非常显著性意义 (P <0 0 1)。 3 “大三阳”患者中 ,eAg高组nt1896终止变异率与eAg低组间差别有显著性意义 (P <0 0 5 )。结论　 (1)nt1896终止变异对eAg表达的影响高于CP双变异 (nt176 2 nt176 4 )。 (2 )nt172 6 - 1730CP聚集变异可能通过影响HBVX基因的表达产物HBx的结构变化 ,使HBx的调节作用发生改变 ,进而使其在顺式作用和或反式作用上影响HBV的复制、表达与致病     

一例隐源性肝硬化的分子基础

目的　探讨一例表面抗原阴性的隐源性肝硬化的病原及其分子基础。方法　定性、定量测定患者血清中的乙型肝炎病毒 (HBV)抗原、抗体和DNA ,进行HBVS基因的扩增、克隆和序列分析。结果　HBsAg (- ) ,定量测定结果 (S/N) :0 77(阳性参考值S/N≥ 2 0 0 )。HBeAg (+) ,定量测定结果 (S/N) :5 6 4 3(阳性参考值≥ 2 10 )。抗 HBc (+) ,定量测定结果 (S/CO) :0 0 3(阳性参考值S/CO≤1 0 )。抗 HBs (+) ,抗 HBe (- ) ,HBVDNA (+) ,定量 :1 5 4× 10 9拷贝 /ml。S基因克隆和序列分析发现第 336位核苷酸由C变为A ,导致第 6 1位密码子由UCA(丝氨酸 )变为UAA(终止子 ) ,HBsAg合成受阻。结论　HBV是本例肝硬化的病原 ,S基因终止突变是其分子基础 ,这一发现具有重要的临床意义和病毒学意义。     

HBx基因的克隆和序列分析及其真核表达载体的构建

目的：通过HBx基因的克隆、序列对比和进化树分析以及peDNA3．1（＋）-HBx真核表达载体的构建，为进一步研究HBx基因与肝癌发生发展的关系打下基础。方法：用Oliga6．0结合Primer Premier5．0软件设计特异性引物，通过PCR方法从广西HBsAg阳性病人血清中（血清型Adrq^＋）分离得到的病毒株构建的HBxAg质粒中扩增HBx基因。用DNA star5．01和Vector NTI Suite8．0软件进行序列对比分析和进化树构建。经双酶切将HBx基因定向插入到pcDNA3．1（＋）质粒中。结果；成功克隆了基因型C型突变型HBx基因，并构建出真核表达载体pcDNA3．1（＋）HBx。新基因被GeneBank接受，在GeneBank上登录号为AY839630。序列对比和进化树分析表明．新克隆的基因与野生基因型C型有高度的同源性（97．80A），2．2％的变异。结论：从广西HBsAg阳性病人病毒株（血清型Adrq^＋）中发现了新的基因型C型突变型HBx基因（mutantgenotypeC）。peDNA3．1（＋）-HBx真核表达载体的构建，将为进一步研究HBx基因在树鼩实验性肝癌诱发过程中所起的作用打下基础。     

血清HBV RNA在慢性乙型肝炎抗病毒治疗过程中的动态变化及其临床意义

目的:探讨血清HBV RNA在慢性乙型肝炎（CHB）抗病毒治疗过程中的动态变化及其临床意义。方法:慢性乙型肝炎患者62例采用恩替卡韦抗病毒治疗,分别在第0、7、14、30天以及第2、3、6、9、12个月来本院进行随访,TaqMan探针法定量检测HBV RNA水平,采用实时荧光定量PCR法进行HBV DNA水平检测,采用化学发光法进行HBsAg和HBeAg检测,采用酶法进行ALT及AST检测。结果:血清HBV RNA水平随着治疗时间的延长呈下降趋势,治疗3个月后下降速度趋缓,从9个月后变化不大。血清HBV RNA水平从0 d到6个月间,各个相邻监测点间变化均有统计学意义（均P<0.05）,在治疗6～12个月两个时间点间差异无统计学意义（P>0.05）。HBeAg（+）患者基线血清HBV RNA与HBV DNA（rs =0.68,P<0.05）、HbsAg（rs =0.64,P<0.05）、HBeAg（rs=0.77,P<0.05）均强相关。在治疗前6个月各时间点,HBV RNA与HBV DNA呈强相关（rs＞0.5,P<0.05）。HBV RNA与HBsAg在治疗前3个月呈强相关（rs＞0.5,P<0.05）,治疗6～9个月时为弱相关（rs=0.23,P=0.31;rs=0.28,P=0.23）。HBV RNA与HBeAg水平在各治疗时间点均为强相关（rs＞0.5,P<0.05）。HBeAg（-）患者在治疗30 d时血清HBV RNA与HBV DNA 呈正相关（rs=0.62,P<0.05）,在治疗14 d时HBV RNA与HBsAg水平呈正相关（rs=0.60,P<0.05）。结论:抗病毒治疗时,慢性乙型肝炎患者血清HBV RNA水平随着治疗时间的延长呈下降趋势。患者血清HBV RNA水平与血清HBV DNA、HBsAg、HBeAg在治疗前和治疗初期有明显相关性,随着治疗时间延长,其相关性逐渐减弱。