非小细胞肺癌患者外周血CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞检测及临床意义

[目的]探讨非小细胞肺癌患者外周血CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞（Treg）表达及临床意义。[方法]流式细胞术检测30例非小细胞肺癌组患者及12例健康志愿者外周血CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg百分比。[结果]肺癌组外周血CD4＋CD25＋Foxp3＋细胞百分比（6.24%±2.01%）高于健康对照组（4.83%±0.85%）（P〈0.05）,外周血CD4＋CD25＋Foxp3＋细胞百分比在肺癌患者不同性别、年龄、病理、KPS及肿瘤标志物正常与否之间比较无差异（P〉0.05）,Ⅳ期患者表达高于Ⅰ～Ⅲ期患者（P〈0.05）,带瘤患者表达高于无瘤患者（P〈0.05）,有气虚证、血瘀证患者高于无气虚证、血瘀证患者（P〈0.05）。[结论]检测肺癌患者外周血CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg表达在了解患者肿瘤进展情况和机体免疫功能状态方面有一定价值,其表达升高与患者出现气虚证和血瘀证有关。     

结直肠癌患者外周血CD4＋ CD25high调节性T细胞的作用

目的探讨结直肠癌患者外周血CD4＋CD25high调节性T细胞（Treg）的作用。方法采用流式细胞仪测定36例结直肠癌患者及30例健康对照者外周血中CD4＋CD25highFoxP3 Treg、CD4＋CD25highTreg、CD4＋CTLA-4 Treg及CD4＋T细胞水平。结果与健康对照组比较,结直肠癌组患者外周血CD4＋CD25highFoxP3 Treg显著增多（P〈0.01）,CD4＋CD25high Treg和CD4＋CTLA-4 T细胞也增多（P〈0.05）。结论CD4＋CD25highFoxP3 Treg可能在结直肠癌发展过程中起着重要作用。     

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在肿瘤免疫及化疗方面的研究进展

Treg（CD4^＋CD25^＋调节性T细胞）是具有独特免疫调节功能的T细胞亚群，抑制免疫反应，在机体免疫稳态维持、肿瘤免疫以及移植耐受等方面发挥着重要的作用影响其抑制作用的表面分子标记有Foxp3、CD127、GITR等越来越多的研究表明在实体肿瘤和血液恶性肿捕患者中Treg数目增多。在乳腺癌、卵巢癌、肺癌以及肝癌等多种实体肿瘤患者外周血和肿痛局部微环境中，Treg比例增高，且数目与患者肿瘸进展程度和预后、生存率呈负相关血液恶性肿瘤患者中Treg数目呈肿瘤发展阶段相关性增长。但是，Treg增高的机制尚不清楚。去除Treg或封闭其抑制功能，可以增强抗肿瘤免疫反应。化疗作为一种重要的治疗肿瘤的方法，对肿瘤患者外周血中的Treg数目可产生一定影响。化疗药物可能通过抑制肿瘤微环境中血管生成，促进Treg凋亡，从而起到有效控制肿瘤的作用，据报道环磷酰胺、多西紫杉醇和氟达拉滨等化疗药物均可使肿瘤明显退化，患者生存期延长但也有报道证明肿瘤患者接受化疗后，外周血中Treg数目增多。化疗究竞时Treg会产生怎样的影响，目前尚无定论，有待于进一步研究因此，Treg在肿瘤治疗方面的应用成为研究的热点，如何清除或逆转Treg的抑制作用是肿瘤免疫治疗的一个关键问题。     

肝癌荷瘤小鼠调节性T细胞数量的改变及其与肿瘤生长的关系

目的研究肝癌荷瘤小鼠调节性T细胞数量的改变及其与肿瘤生长的关系。方法采用小鼠肝癌细胞系H22接种BALB／c小鼠,建立肝癌模型;采用流式细胞术方法检测CD4^＋ CD25^＋T／CD4^＋T细胞的比例;以RT-PCR和流式细胞术检测Foxp3基因的表达。以免疫磁珠分选法纯化CD4^＋CD25^＋T和CD4^＋CD25^-T细胞;在体外,用3H-TdR掺入法检测T细胞的增殖情况;在体内,观察荷瘤小鼠来源的CD4^＋CD25^＋T细胞对肿瘤生长的作用。结果（1）荷瘤小鼠在引流淋巴结中,CD4^＋CD25^＋T细胞占CD4＋T细胞（18．80％±0．06％）比例增高,与对照组（9．50％±0．03％）相比,差异有统计学意义（P〈0．01）;在非引流淋巴结（LN）和脾脏（SP）中,荷瘤小鼠CD4^＋CD25^＋T／CD4^＋T比例分别为16．28％±0．02％和17．28％±0．06％,与对照组9．50％±0．03％和11．08％±0．04％相比,差异有统计学意义（P〈0．01,P〈0．05）;同时,调节性T细胞特异性标志Foxp3 mRNA的表达也升高。在同一只荷瘤小鼠中,引流淋巴结中CD4^＋CD25^＋T细胞数量（18．8％±0．06％）较对侧非引流淋巴结（16．28％±0．02％）略有升高,但差异无统计学意义（P〉0．05）。（2）从荷瘤小鼠中纯化的CD4^＋CD25^＋T细胞,在体外对抗CD3单抗的刺激无反应,但能抑制CD4^＋CD25^-T细胞的增殖。（3）CD4^＋CD25^＋T／CD4＋T比例与肿瘤大小呈正相关,并且可以抑制CD4^＋CD25^-T细胞的抗肿瘤效应。结论肝癌细胞在小鼠体内的生长可以提高调节性T细胞的数量,其数量的高低与肿瘤的大小呈正相关,提示清除调节性T细胞将是肿瘤免疫治疗的策略之一。     

新辅助化疗对乳腺癌患者调节性T细胞的影响

目的探讨新辅助化疗对乳腺癌患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg细胞)的影响。方法采集68例乳腺癌患者新辅助化疗前1d和化疗后第10天的外周静脉血,应用流式细胞仪检测外周血中Treg细胞及CD3+、CD4+及CD8+T细胞占T淋巴细胞的百分比。定量资料分别采用独立样本或配对样本t检验进行统计分析。结果化疗前,乳腺癌患者外周血Treg细胞占T淋巴细胞的百分比较健康对照组明显增高[(4.77±0.76)%比(0.68%±0.36)%,t=21.176,P=0.000]。化疗后CD4+/CD8+较化疗前升高[(1.95±0.72)%比(1.19±0.43)%,t=8.280,P=0.000];化疗后Treg细胞较化疗前明显降低[(1.59±0.58)%比(4.77±0.76)%,t=19.041,P=0.000]。化疗有效组Treg细胞较无效组明显降低,差异有统计学意义(t=8.227,P=0.000)。结论新辅助化疗可调控乳腺癌患者机体的肿瘤免疫耐受,改善其免疫功能,从而达到治疗肿瘤的效果。     

化疗对肺癌患者外周血中CD4~＋ CD25~＋调节性T细胞数目的影响及意义

目的研究化疗药物对肺癌患者外周血中Treg（CD4＋ CD25＋调节性T细胞）的影响及意义。方法采集60例肺癌术后患者化疗前1天及化疗后第10天外周静脉血,应用流式细胞技术检测外周血中Treg细胞以及CD3＋、CD4＋、CD8＋T、NK细胞占T淋巴细胞百分比,CD4＋T/CD8＋T比值。结果化疗前NSCLC患者外周血CD4＋ CD25＋调节T细胞比率明显高于健康对照组（P〈0.05）;且Ⅳ期患者调节T细胞比率明显高于Ⅲ期患者（P〈0.05）。化疗后NSCLC患者外周血CD4＋ CD25＋调节T细胞较化疗前显著降低（P〈0.05）。化疗前后不同病理分型患者外周血中CD4＋CD25＋细胞变化差异无统计学意义。化疗后CD8＋T细胞占T淋巴细胞比例（28.129±10.900）%较化疗前（24.876±6.631）%升高（P〈0.05）。化疗后CD4＋/CD8＋（1.506±0.691）较化疗前（1.680±0.704）降低（P〈0.05）。结论肿瘤负荷可显著促进肺癌患者外周血Treg细胞分化,化疗后肺癌患者Treg细胞比例下降。     

CD4＋CD25＋调节性T细胞在血液病中的研究进展

CD4＋ CD25＋调节性T细胞是一类产生于胸腺,具有免疫无能性及免疫抑制性的细胞.以往的研究在再生障碍性贫血、白血病、特发性血小板减少性紫癜、非霍奇金淋巴瘤、骨髓增生异常综合征中进行了CD4＋ CD25＋T细胞、CD4＋ CD25hiT细胞、CD4＋ CD25＋ Foxp3、CD4＋ CD127等调节性T细胞相关抗体的测定,得出了调节性T细胞在自身免疫性血液病中减少、在肿瘤性疾病中增多的结论 .调节性T细胞在治疗自身免疫性疾病、变态反应性疾病、移植排斥、肿瘤及特异性疫苗接种方面具有巨大前景.     

肿瘤患者CD4^＋CD25^＋调节性T细胞流式细胞术分析

目的：分析比较肿瘤患者和健康人外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的特点,为肿瘤免疫学研究及治疗探索新方法。方法：收集并分离30例肿瘤患者和32例健康人的外周血单个核细胞（PBMCs）,用荧光标记的抗人CD4及抗人CD25单抗标记肿瘤患者和健康人PBMCs细胞,FCM检测CD4^＋CD25^＋Treg细胞,分析CD4^＋CD25^＋Treg细胞在肿瘤患者和健康人中的差别。结果：肿瘤患者的CD4^＋CD25^＋Treg细胞百分数明显高于健康人（年龄〈55者62．4vs40．4;年龄≥55者53．1vs31．0,P〈0．05）。结论：肿瘤患者的CD4^＋CD25^＋Treg细胞高于健康对照,为肿瘤免疫治疗提供新策略,通过删除CD4^＋CD25^＋Treg细胞,有可能增强抗瘤免疫反应。     

CD4＋ CD25＋调节性T细胞在白血病中的表达及临床意义

目的：研究CD4＋CD25＋调节性T细胞（CD4＋CD25＋Treg细胞）在白血病中的表达及临床意义.方法：30例确诊的白血病患者在入院时各采静脉血2ml,予EDTA-K2抗凝后送流式细胞仪（FCM）检测CD4＋CD25＋调节性T细胞的表达水平.分别给予30例患者VCDP（长春新碱、环磷酰胺、柔红霉素、泼尼松）方案、DA、MA（柔红霉素、阿糖胞苷）或HA（高三尖杉碱、阿糖胞苷）方案静脉注射化疗,化疗后骨穿＋外周血示完全缓解或部分缓解,再次采取外周血样,流式细胞仪检测CD4＋CD25＋调节性T细胞的表达水平.结果：化疗缓解后患者外周血中CD4＋CD25＋Treg细胞下降明显.结论：外周血CD4＋CD25＋Treg细胞的表达水平对白血病的诊断和治疗具有一定的指导作用.     

CD4+CD25+调节性T细胞在Lewis肺癌移植鼠中的检测及临床意义

目的:研究Lewis肺癌移植鼠胸腺与脾脏CD4 CD25 调节性T细胞数量及其相关基因Foxp3 mR-NA的表达特点,探讨CD4 CD25 调节性T细胞在诱导肿瘤免疫耐受中的作用。方法:将传代培养的Lewis肺癌细胞接种于C57BL/6小鼠右腋皮下,建立Lewis肺癌模型。观测成瘤率、平均瘤重、肿瘤体积动态变化;采用MTT法检测胸腺及脾脏T淋巴细胞增殖功能;采用流式细胞术检测胸腺及脾脏CD4 CD25 调节性T细胞数量变化;采用半定量RT-PCR方法检测肺癌小鼠胸腺与脾脏Foxp3 mRNA表达水平。结果:Lewis肺癌的移植成瘤率为100%,平均瘤重(3.34±1.79)g;胸腺T淋巴细胞增殖功能略有降低,但降低不显著(P>0.05),而脾脏T淋巴细胞增殖功能明显降低(P<0.05);胸腺及脾脏CD4 CD25 调节性T细胞数量均明显升高(P<0.05);Foxp3 mRNA在肺癌模型组的胸腺表达明显增高(P<0.05),在肺癌模型组脾脏Foxp3 mRNA表达中也略有增加,但增高不显著(P>0.05)。结论:CD4 CD25 调节性T细胞可能在肿瘤免疫耐受中发挥重要作用。     

淋巴瘤细胞EL-4培养上清液对CD4＋CD25＋调节性T细胞比例的调节作用

目的探讨肿瘤细胞是否能上调CD4＋CD25＋调节性T细胞（Treg细胞）的比例。方法将小鼠淋巴瘤细胞株EL4培养上清液与正常小鼠脾脏淋巴细胞混合培养72h,流式细胞仪检测其中CD4＋CD25＋Treg细胞含量,RT—PCR检测Foxp3mRNA的表达,实验重复3次。结果和EL-4培养上清液混合培养的正常小鼠脾脏淋巴细胞中CD4＋CD25＋Treg细胞的比例高于对照组（P〈0．05）,在CD3单抗刺激的同时加入EL-4培养上清液后,小鼠脾脏中CD4＋CD25＋Treg细胞仍呈同步增加（P〈0．05）;且Foxp3mRNA的表达增加。结论淋巴瘤细胞分泌的免疫调节因子能诱导CD4＋CD25＋Treg细胞的增生,提示肿瘤可以上调CD4＋CD25＋Treg细胞比例。     

Proliferation of CD4+CD25high+Foxp3+ regulatory T lymphocytes in ex vivo expanded ascitic fluid from primary and recurrent ovarian carcinoma

Objective

Regulatory T lymphocytes evoke the immune tolerance by suppressing and inactivating cytotoxic T lymphocytes. The objective of this study was to compare the proportion of regulatory T lymphocytes, precisely defined as CD4⁺CD25^high+Foxp3⁺ T lymphocytes, in primary and recurrent ovarian carcinoma before and after ex vivo expansion of ascites with interleukin-2 (IL-2).

Methods

Ascitic fluid samples were obtained from 26 patients with ovarian carcinoma. Lymphocytes were isolated from ascites and cell markers were analyzed by flow cytometry using anti-CD3/CD4/CD8/CD16/CD56/CD25 and anti-Foxp3 antibodies. Lymphocytes were incubated for 2 to 3 weeks and expanded ex vivo by IL-2 stimulation and their phenotypes were analyzed by flow cytometry.

Results

Following ex vivo expansion, ascitic fluid lymphocytes increased by a greater extent in the recurrent group than in the primary group. The proportion of ex vivo-expanded lymphocytes changed as follows; CD4⁺ T lymphocytes increased, CD8⁺ T lymphocytes decreased, and the proportion of CD3^-CD16⁺56⁺ NK cells was unchanged. The proportion of CD4⁺CD25^high+Foxp3⁺ regulatory T lymphocytes in CD4⁺ T lymphocytes increased after ex vivo expansion in both groups, but to a greater degree in the recurrent group.

Conclusion

This study showed that regulatory T lymphocytes, neither cytotoxic T lymphocytes nor NK cells, were extensively increased after ex vivo expansion, especially in recurrent ovarian carcinoma. These results may provide information that helps to guide the future development of adoptive immunotherapy against ovarian carcinoma.     

食管癌患者CD4+CD25+调节性T细胞的检测及意义

目的:探讨CD4+CD25+调节性T细胞在食管癌局部及全身免疫中的作用.方法:流式细胞仪检测97例食管癌患者外周血和20例肿瘤组织的CD4+CD25+调节性T细胞比例,比较不同病理类型、不同分期等食管癌患者外周血及肿瘤局部组织的CD4+CD25+调节性T细胞的分布变化.结果:食管癌患者肿瘤组织CD4+CD25+调节性T细胞比例为(18.97±2.38)%,高于患者外周血比例[(17.57±3.99)%],差异无统计学意义,t=1.511,P＞0.05;食管癌患者肿瘤组织及外周血中CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T淋巴细胞的比例,均高于同期健康对照组患者外周血的比例(9.35±1.41)%,差异有统计学意义,t值分别为12.111和8.332,P值均＜0.01.CD4+CD25+调节性T细胞水平与临床分期(F=9.384)、有无淋巴结转移(t=2.326)有关,P值均＜0.05.结论:食管癌患者全身及肿瘤局部均存在免疫异常,推测CD4+CD25+调节性T细胞可能参与了食管癌的发生与发展.     

Increase in circulating Foxp3+CD4+CD25(high) regulatory T cells in nasopharyngeal carcinoma patients

Nasopharyngeal carcinoma (NPC) is an Epstein–Barr virus-associated disease with high prevalence in Southern Chinese. Using multiparametric flow cytometry, we identified significant expansions of circulating naïve and memory CD4+CD25^high T cells in 56 NPC patients compared with healthy age- and sex-matched controls. These were regulatory T cells (Treg), as they overexpressed Foxp3 and GITR, and demonstrated enhanced suppressive activities against autologous CD4+CD25− T-cell proliferation in functional studies on five patients. Abundant intraepithelial infiltrations of Treg with very high levels of Foxp3 expression and absence of CCR7 expression were also detected in five primary tumours. Our current study is the first to demonstrate an expansion of functional Treg in the circulation of NPC patients and the presence of infiltrating Treg in the tumour microenvironment. As Treg may play an important role in suppressing antitumour immunity, our findings provide critical insights for clinical management of NPC.     

肝癌患者CD4+CD25+调节性T细胞的检测及其临床意义

背景与目的CD4 CD25 调节性T细胞(CD4 CD25 regulatoryTcells)在自身免疫耐受、移植和抗肿瘤应答中起着重要的作用,它们在肿瘤患者中的作用机制尚未阐明。本研究分析、探讨肝癌患者肿瘤组织和外周血CD4 CD25 调节性T细胞频率的临床意义。方法应用流式细胞仪分析肝癌患者的肿瘤组织、外周血和非肝癌对照组中单个核细胞(PBMCs)的CD4 CD25 调节性T细胞频率。结果肝癌患者外周血CD4 CD25 T细胞占PBMCs(6.9±2.8)%,肝癌组织CD4 CD25 T细胞占(6.7±1.6)%,均较对照组显著增高。并且CD4 CD25 T细胞的阳性率与淋巴结转移率和TNM分期存在相关性。淋巴结转移阳性和TNM分期越晚,CD4 CD25 T细胞的阳性率越高。结论CD4 CD25 调节性T细胞在肝癌患者中比例升高,可能是肝癌患者细胞免疫功能削弱的机制之一。     

HDAC5 controls the functions of Foxp3+ T‐regulatory and CD8+ T cells

Histone/protein deacetylases (HDACs) are frequently upregulated in human malignancies and have therefore become therapeutic targets in cancer therapy. However, inhibiting certain HDAC isoforms can have protolerogenic effects on the immune system, which could make it easier for tumor cells to evade the host immune system. Therefore, a better understanding of how each HDAC isoform affects immune biology is needed to develop targeted cancer therapy. Here, we studied the immune phenotype of HDAC5^–/– mice on a C57BL/6 background. While HDAC5^–/– mice replicate at expected Mendelian ratios and do not develop overt autoimmune disease, their T‐regulatory (Treg) cells show reduced suppressive function in vitro and in vivo. Likewise, CD4⁺ T‐cells lacking HDAC5 convert poorly to Tregs under appropriately polarizing conditions. To test if this attenuated Treg formation and suppressive function translated into improved anticancer immunity, we inoculated HDAC5^–/– mice and littermate controls with a lung adenocarcinoma cell line. Cumulatively, lack of HDAC5 did not lead to better anticancer immunity. We found that CD8⁺ T cells missing HDAC5 had a reduced ability to produce the cytokine, IFN‐γ, in vitro and in vivo, which may offset the benefit of weakened Treg function and formation. Taken together, targeting HDAC5 weakens suppressive function and de‐novo induction of Tregs, but also reduces the ability of CD8⁺ T cells to produce IFN‐γ.     

晚期非小细胞肺癌患者外周血CD4~+ CD25~+ FOXP3~+调节性T细胞的表达及临床意义

目的探讨晚期非小细胞肺癌患者外周血CD4~+ CD25~+ FOXP3~+ 调节性T(Treg)细胞的表达及其临床意义。方法采用免疫荧光术及流式细胞仪检测50例晚期非小细胞肺癌患者及50例健康对照组外周血中CD4~+ CD25~+ FOXP3~+ Treg细胞、CD4~+ CD25~+ Treg细胞、CD4~+ T细胞和CD4~+ CTLA-4~+ T细胞的表达。结果晚期非小细胞肺癌患者外周血中CD4~+ CD25~+ FOXP3~+ Treg细胞、CD4~+ CD25~+ Treg细胞和CD4~+ CTLA-4~+ T细胞的比例均高于健康对照组(均P<0.05),CD4~+ T细胞的比例均低于健康对照组(均P<0.05)。结论晚期非小细胞肺癌患者外周血CD4~+ CD25~+ FOXP3~+ Treg细胞比例高于健康对照者,可能与肺癌患者的免疫抑制和肿瘤进展相关。