冠心病不同类型间T细胞增殖反应的比较研究

目的 研究T细胞增殖反应与冠心病斑块稳定性的关系。方法 采用MTS/PMS比色分析法测定13例急性心肌梗死、22例不稳定性心绞痛、15例稳定性心绞痛和16例对照者的T细胞对植物血凝素(PHA)、氧化低密度脂蛋白(oxLDL)及低密度脂蛋白(LDL)的增殖反应。结果 急性心肌梗死组和不稳定性心绞痛组的T细胞对PHA的增殖反应高于稳定性心绞痛组和对照组(P<0.05),急性心肌梗死组和不稳定性心绞痛组的T细胞对5和1 μg/ml oxLDL的增殖反应高于稳定性心绞痛组和对照组(P<0.05),急性心肌梗死组和不稳定性心绞痛组的T细胞对3种浓度(10、5和1 μg/ml)oxLDL的增殖反应均高于对同浓度的LDL的增殖反应(P<0.05)。结论 T细胞介导的细胞免疫,尤其是对特异性抗原oxLDL的免疫反应,在导致斑块的不稳定及急性冠状动脉综合征的发生中可能起着重要的作用。     

紫河车体外对黑素细胞增殖及酪氨酸酶活性的影响

目的 观察中药紫河车对黑素细胞和酪氨酸酶的影响。方法 采用MTT法测定黑素细胞增殖情况,Hunt法测定黑素合成,以蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法测定酪氨酸酶活性。结果 (1)紫河车对黑素细胞具有增殖作用,其最佳增殖浓度为0.1g/L(P<0.01);(2)紫河车可增强黑素合成能力,其最佳增强能力为0.1g/L(P<0.01);(3)紫河车对酪氨酸酶亦具有激活作用,其最佳激活浓度为1g/L(P<0.01)。结论 紫河车能激活黑素细胞增殖、黑素合成、酪氨酸酶活性。     

子宫内膜异位症患者血清中ENA-78的表达

目的 研究上皮细胞来源的中性粒细胞激活肽(ENA-78)在子宫内膜异位症发病中的作用。方法 应用ELISA法,检测42例子宫内膜异位症患者(Ⅰ~Ⅱ期20例、Ⅲ~Ⅳ期22例)血清ENA-78的浓度,并与25例非子宫内膜异位症患者(对照组)进行比较。结果 子宫内膜异位症组血清中ENA-78浓度明显高于对照组(2.97±1.91ng/ml vs 0.72±0.24ng/ml,P<0.001),Ⅲ、Ⅳ期比Ⅰ、Ⅱ患者血清中ENA-78增高更明显(4.48±1.25ng/mlvs1.30±0.74ng/ml,P<0.001)。增殖期与分泌期比较,两组血清ENA-78的表达均无显著差异。结论 子宫内膜异位症患者ENA-78明显升高,可能为子宫内膜异位症发病的因素之一。     

白凤菜总黄酮对多发性骨髓瘤U266细胞增殖和凋亡影响

目的 观察白凤菜总黄酮(TFG)对多发性骨髓瘤U266细胞的增殖和凋亡的影响。方法 MTT实验检测U266细胞增殖;倒置显微镜及荧光显微镜分别观察U266细胞经TFG处理24 h后细胞形态及凋亡的变化;流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期的变化。结果 TFG明显抑制U266细胞的增殖,P<0.05,且呈浓度和时间依赖性;100 μg /mLTFG作用组的U266细胞凋亡明显增加;TFG使U266细胞周期阻滞于S期。结论 TFG可抑制U266细胞增殖,可能同细胞周期的捕获和细胞凋亡的诱导相关。     

巨噬细胞移动抑制因子对血管平滑肌细胞胶原Ⅰ、Ⅲ mRNA体外表达的影响

目的 探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)与血管平滑肌细胞(VSMC)合成胶原之间的可能联系。方法 取大鼠主动脉中膜平滑肌进行原代细胞培养,用第4代传代细胞分为两组,用25、50、75、100ng/ml的MIF刺激VSMC生长为实验组,未用刺激VSMC生长为实验组,采用RT-PCR,PCR方法测定VSMC胶原Ⅰ、ⅢmRNA含量。结果 与正常对照组相比,除25ng/ml外,其他3种不同浓度的MIF刺激SMC,胶原ⅠmRNA相对含量都显著增加(P<0.05)。100ng/ml的MIF刺激SMC,胶原ⅢmRNA相对含量较对照组显著增加(P<0.05),而其余各浓度胶原ⅢmRNA相对含量与对照组比较均无显著性差异。结论 MIF与VSMC合成胶原之间有关,MIF刺激可以促进体外培养的VSMC胶原Ⅰ、ⅢmRNA表达。     

整合素avβ3单克隆抗体对小鼠子宫内膜异位病灶的抑制作用

目的 研究整合素avβ3单克隆抗体对SCID小鼠子宫内膜异位病灶生长和微血管形成的影响。方法 建立人子宫内膜异位症小鼠皮下移植病灶模型。治疗组尾静脉注射整合素avβ3单克隆抗体Lm609(250μg/只),对照组给予相应体积的PBS,1周2次。4周后处死动物,测量病灶,采用免疫组化法检测病灶微血管密度(MVD)及整合素avβ3的表达。结果 治疗组与对照组皮下移植病灶质量分别为(0.82±0.09)g和(0.51±0.93)g(P<0.05),病灶组织中MVD则分别为31.2±4.4和14.4±1.8(P<0.05),治疗组病灶受到显著抑制。结论 整合素avβ3单克隆抗体通过抑制微血管形成而抑制子宫内膜异位病灶的生长。     

丙泊酚对结肠癌细胞增殖、迁移及Wnt1和β-catenin表达的影响

目的 探讨丙泊酚对不同分化程度人结肠癌细胞体外增殖、迁移及肿瘤细胞中Wnt1、β-catenin mRNA表达的影响。 方法 选取2株分化程度不同的人结肠癌细胞株Caco-2(高分化)和LoVo(低分化),分别按丙泊酚浓度分为P₀(0 μg/mL)、P_6.25(6.25 μg/mL)、P₂₅(25 μg/mL)、P₁₀₀(100 μg/mL)组,CCK-8法检测丙泊酚对Caco-2和LoVo细胞生长增殖的影响,Transwell迁移实验检测丙泊酚对Caco-2和LoVo细胞迁移的影响,比较不同分化程度结肠癌细胞对丙泊酚的敏感性。Real-time PCR检测丙泊酚处理后Caco-2和LoVo细胞中Wnt1和β-catenin基因mRNA的表达。 结果 CCK-8检测结果显示,对于高分化Caco-2细胞,P₁₀₀组处理24 h与P₀组相比细胞存活率差异有统计学意义(P<0.001),P₂₅组处理48 h与P₀组相比,差异有统计学意义(P<0.05);对于低分化LoVo细胞,P₁₀₀组处理24 h与P₀组相比,细胞存活率差异有统计学意义(P<0.05),P₂₅组处理48 h与P₀组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。Transwell迁移实验结果表明,Caco-2细胞系P_6.25、P₂₅、P₁₀₀组与P₀组OD_{570 nm}值比较,差异有统计学意义(P<0.001);LoVo细胞系P₂₅、P₁₀₀组与P₀组OD_{570 nm}值比较,差异有统计学意义(P<0.001)。Real-time PCR结果表明,Caco-2细胞系P₂₅、P₁₀₀组与P₀组Wnt1 mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05),LoVo细胞系P₂₅、P₁₀₀组与P₀组Wnt1 mRNA表达差异有统计学意义(P<0.001);Caco-2细胞系P₂₅、P₁₀₀组与P₀组β-catenin mRNA表达差异有统计学意义(P<0.001),LoVo细胞系P₁₀₀组与P₀组β-catenin mRNA表达差异有统计学意义(P<0.001)。 结论 丙泊酚呈剂量和时间依赖性抑制人结肠癌细胞Caco-2和LoVo的生长增殖及迁移。Caco-2较LoVo对丙泊酚的抑制作用更敏感。     

C-反应蛋白抑制缺氧状态下人脐静脉内皮细胞表达低氧诱导因子-1α

目的 研究C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)对低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)表达的影响。方法 利用COCl₂(浓度为100μmol/L)模拟缺氧环境,使其分别与4个试验组的CRP(浓度分别为5,10,50,100μg/ml)同时作用于脐静脉内皮细胞,以仅加CoCl₂(100μmol/L)组为对照;同时设空白对照组。刺激24h后提取蛋白。用Western-blotting半定量检测HIF-1α的蛋白表达量,数据用SPSS11.0软件进行统计分析。结果 CRP在5μg/ml水平即减少HIF-1α表达(P<0.001),在100μg/ml水平达到最大作用,其作用效果呈剂量反应关系(P<0.001)。结论 CRP抑制缺氧状态下人脐静脉内皮细胞表达HIF-1α。此结果证实CRP直接作用于血管,抑制缺氧组织血管新生。     

钩吻素子对免疫磁珠分离纯化的小鼠CD4+T细胞体外增殖的影响

目的 探讨小鼠脾脏CD4⁺T细胞的分离方法,观察钩吻素子(Kou)对小鼠脾脏CD4⁺T细胞体外增殖的影响.方法 以免疫磁珠分选法从小鼠脾脏细胞中分离CD4⁺T细胞,流式细胞术检测所得细胞的纯度,台盼蓝法检测细胞活力.将10～20μg/ml Kou分别作用于经刀豆蛋白A或植物血凝素刺激的小鼠T淋巴细胞,四唑盐比色法检测细胞增殖情况,用酶联免疫法检测细胞上清中IL-2的含量.结果 经过流式细胞仪测定分离后的小鼠脾脏CD4⁺T细胞纯度达到90.%±5.8%:0.2%台盼兰染色细胞活力为94.9%±.6%;增殖试验表明分离后未加Kou的CD4⁺T细胞对刀豆蛋白A、植物血凝素的刺激保持了良好的增殖能力,当浓度范围为20～20μg/ml时,Kou均能抑制淋巴细胞的增殖(P<0.05),且表现出一定的剂量相关性;不同浓度的Kou(20、100、200μgm1)作用后,CD4⁺T细胞培养上清中的IL-2水平明显低于对照组(P<0.05).结论 免疫磁珠阴性分选法操作简单、快速,可获得较高纯化率、有活性的CD4⁺T细胞;Kou明显抑制小鼠CD4⁺T淋巴细胞增殖反应,此抑制作用可能与Kou抑制小鼠CD4⁺T细胞IL-2的分泌及免疫抑制作用相关.     

瞬时受体电位通道蛋白6(TRPC6)在SGC-7901细胞增殖中的作用

目的 探讨瞬时受体电位通道蛋白6(TRPC6)与SGC-7901细胞增殖的关系。方法 体外培养SGC-7901细胞,以是否加入TGF-β₁分为对照组和实验组。根据实验组是否加入SKF96365抑制剂分为TGF-β₁和TGF-β₁+SKF96365组。免疫荧光染色观察TRPC6在对照和TGF-β₁组的表达。Western blot方法检测TRPC6和增殖指标在对照组、TGF-β₁组和TGF-β₁+SKF96365组中的变化。结果 与对照组相比,TRPC6蛋白在TGF-β₁组中表达升高(P＜0.05)。抑制TRPC6蛋白表达,增殖指标在TGF-β₁+SKF96365组表达明显降低(P＜0.01)。结论 抑制TRPC6蛋白表达可降低SGC-7901细胞增殖能力。     

重组海葵溶细胞素及平颏海蛇磷脂酶A2对血管外膜成纤维细胞增殖的影响

OBJECTIVE: To observe the effects of recombinant Sagartia rosea cytolysin (rSrc) and Lapemis hardwickii phospholipase A2(rPLA2) on adventitial fibroblasts proliferation. METHODS: NIH-3T3 cells were cultured and treated with rSrc and rPLA2 at different concentrations for observation of cell proliferation using non-radioactive MTS/PES assay in comparison with the control group. RESULTS: The ratio of cell proliferation was 0.840+/-0.061 in the control group, and was 0.263+/-0.044, 0.418+/-0.054, 0.605+/-0.063, 0.772+/-0.054 and 0.906+/-0.072 in rSrc groups corresponding to rSrc concentrations of 100, 10, 1 microg/ml and 100, 10 ng/ml respectively. rSrc was found to significantly inhibit fibroblast proliferation in a dose-dependent manner when the concentration used was above 1 microg/ml (P<0.05), as compared with the control group (P<0.05). The ratio of cell proliferation was 0.498+/-0.076, 0.937+/-0.112 and 0.978+/-0.145 in rPLA2 groups corresponding to rPLA2 concentrations of 100, 10, 1 microg/ml respectively, indicating that rPLA2 also significantly inhibited fibroblast proliferation at the concentration of 100 microg/ml (P<0.05). CONCLUSION: rSrc and rPLA2 can both significantly inhibit adventitial fibroblast proliferation.     

rhIL-10对肿瘤坏死因子-α诱导的血管外膜成纤维细胞增殖的影响

目的 观察重组人白细胞介素-10(rhIL-10)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的成纤维细胞增殖的影响。方法 体外培养NIH/3T3细胞,应用rhIL-10与TNF-α共同作用并设立对照进行比较,采用MTS/PES法确定NIH/3T3细胞的增殖状态。应用流式细胞仪测定细胞周期。结果 TNF-α对NIH/3T3细胞增殖具有明显的刺激作用。rhIL-10单独应用对NIH/3T3细胞生长没有影响。在TNF-α刺激下,一定剂量的rhIL-10可抑制NIH/3T3细胞的增殖。rhIL-10可使TNF-α作用下的NIH/3T3细胞大部分处于G₀/G₁期。结论 rhIL-10能明显抑制由TNF-α刺激的成纤维细胞增殖。     

高水碘摄入对成人空腹血糖影响的探讨

Objective:To investigate the blood glucose level in different iodine status, then explore the impact of excess-iodine-intake on fasting blood-glucose. Methods:Adults were chosen from Haixing County in Cangzhou, Hebei. Llimosis morning-urinary and venous blood were collected to measure the levels of urinary iodine. Chemilu-minescent immunoassay was used to perform free triiodothyronine (FT₃), free thyroxine (FT₄), and sensitive thyroid-stimulating hormone (sTSH) in serum. Fasting blood-glucose was also measured by glucometer. Results:The median of water iodine in the excess-iodine-intake area (841.4 μg/L) was higher than that in the control area (12.79 μg/L, P<0.05). For adults’ urine iodine, the excess-iodine-intake area was higher(P<0.05), with the value of 1 137.3（646.8～1 450.8）μg/L vs 216.6（146.5～366.9）μg/L. The level of FT₃ in the excess-iodine-intake area was lower (P<0.05), with the value of （4.72±0.48） pmol/L vs （4.96±0.36）pmol/L. No significant difference was found in the FT₄ level in the areas. The median of sTSH in the excess-iodine-intake area was higher than that in the control area, with the value of（3.07±2.17）μIU/ mL vs （2.30±1.07） μIU/mL . And the prevalence of thyroid disease in the excess-iodine-intake area was higher, with 43(22.75%) vs 8(10.13%). No significant difference in the level of the fasting blood-glucose was found in the areas (P>0.05). Age and FT₄ were found positively correlated with fasting blood-glucose by correlation analysis（r=0.258,P<0.001; r=0.154,P=0.013）, while the others were not related. Conclusion:Difference in fasting blood-glucose in water-iodine-excess area and the control area does not exist. Yet further study should be taken in a larger population-based epidemiological investigation to confirm the effects of excess-iodine-intake on glucose.      

生长停滞特异性蛋白6在人牙周膜细胞迁移及成骨分化中的作用

探讨AXL受体酪氨酸激酶配体——生长停滞特异性蛋白6(growth arrest-specific protein 6,Gas6)在人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLCs)迁移及成骨诱导液培养下成骨分化中发挥的作用。方法: 在对hPDLCs进行体外培养的培养液中加入...     

冠心病患者血浆中新型气体信号分子硫化氢的变化

目的 探讨新型气体信号分子硫化氢(H₂S)在冠心病患者血浆中含量的差异及其病理生理意义。方法 采用硫敏感电极法测定40例冠心病患者及17例造影正常者血浆H₂S含量,并在冠心病患者分析不同临床亚型及不同冠脉病变类型血浆H₂S含量的差异、血浆H₂S含量与冠心病危险因素的关系。结果 (1)冠心病患者血浆H₂S含量[(26.10±14.27)μmol/L]远低于冠脉造影正常对照组[(51.74±11.94)μmol/L,P<0.01];(2)在冠心病患者中,不稳定型心绞痛患者血浆H₂S含量[(23.60±14.41)μmol/L]和急性心肌梗死患者血浆H₂S含量[(19.98±7.516)μmol/L],明显低于稳定型心绞痛患者[(38.41±14.53)μmol/L,P<0.05]。(3)冠脉双支和多支病变组血浆H₂S含量分别为(16.91±7.98)μmol/L、(18.39±7.78)μmol/L,两组间无明显差异(P>0.05),但均明显低于单支病变组(33.04±15.01)μmol/L(P<0.05和P<0.01)。冠脉血管有闭塞的其血浆H₂S含量明显低于单纯狭窄组[(19.04±9.55)μmol/Lvs(28.24±14.85)μmol/L,P<0.05]。(4)在冠心病患者中,吸烟者血浆H₂S含量明显低于不吸烟者[(27.54±10.37)μmol/Lvs(32.24±15.77)μmol/LP<0.05],高血压病者含量明显低于无高血压病者[(20.36±8.69)μmol/Lvs(33.77±15.86)μmol/L P<0.01];血浆H₂S水平与血糖水平呈强负相关(r=-0.4936 P=0.0016),与性别、年龄、胆固醇、甘油三酯、极低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、体质量指数等无明显相关性。结论 血浆中H₂S含量降低可能与冠心病临床病情严重性及冠脉血管病变程度相关;血浆H₂S含量的减少可能与冠心病危险因素吸烟、高血压、高血糖相关。     

CPLX2在30例肝癌组织的表达及其对体外细胞增殖与侵袭的影响

目的 检测人复合素2(CPLX2)在肝癌组织中的表达,探讨其对肝癌细胞增殖与侵袭的影响。 方法 采用RT-qPCR和Western blotting方法检测30例配对肝癌组织和癌旁组织中CPLX2 mRNA和蛋白水平的表达。利用Lipofectamine 2000转染两条CPLX2小分子干扰RNA(siRNA)至肝癌Huh7细胞,RT-qPCR和Western blotting方法验证转染后的干扰效率。细胞实验分4组:空白组、对照siRNA组,CPLX2 siRNA1组和CPLX2 siRNA2组。噻唑蓝(MTT)法和Transwell实验检测细胞增殖和侵袭能力。采用成组t检验分析siRNA干扰效果和细胞侵袭能力的差异,双因素方差分析法两两多重比较各组细胞增殖能力的差异。 结果 CPLX2在肝癌组织(22.69±14.78)中的表达高于癌旁组织(4.03±2.65),差异有统计学意义(t=5.941, P<0.001)。CPLX2 mRNA在两siRNA干扰组的表达量分别为0.34±0.02和0.48±0.01,均低于对照siRNA组(0.88±0.02)和空白组(1.00±0.05),差异有统计学意义(P<0.001),mRNA和蛋白水平均显示siRNA干扰效果较好。MTT实验证实CPLX2两siRNA干扰组的细胞增殖能力低于对照siRNA组(P<0.001)和空白组(P<0.001)。Transwell migration实验显示每个检测视野CPLX2 siRNA1组细胞的穿膜细胞数(37.0±2.0)和CPLX2 siRNA2组细胞的穿膜细胞数(46.3±2.5)低于空白组(88.0±2.0)和对照siRNA组(77.0±4.4)。Transwell invasion实验结果显示,每个检测视野CPLX2 siRNA1组细胞的穿膜细胞数(29.7±2.5)和CPLX2 siRNA2组细胞的穿膜细胞数(41.0±2.6)低于与空白组(74.7±3.1)和对照siRNA组(68.7±1.5),差异有统计学意义(P<0.001)。 结论 CPLX2在肝癌组织中表达升高,下调其表达可抑制肝癌细胞Huh7的增殖和侵袭,CPLX2可能在促进肝癌的发生发展过程发挥重要作用。     

静脉盐负荷对高血压盐敏感者肾脏PGI2及TXA2的影响及盐敏感性高血压的胰岛素抵抗

目的 观察急性静脉盐水负荷对高血压盐敏感者肾脏PGI₂及TXA₂的影响及盐敏感性高血压的胰岛素抵抗情况。方法 测定53例已确定盐敏感性的高血压患者急性盐水负荷前后24h尿6-酮PGF₁α及TXB₂的排泄量,并在受试者中进行葡萄糖耐量及胰岛素释放试验。结果 静脉盐水负荷后,盐敏感者24h尿6-酮PGF₁α的排泄量明显较盐不敏感者为低[(316±57)vs(371±68)pg/min,P<0.01],负荷后的减少幅度前者明显高于后者[(197±99)vs(136±101)pg/min,P<0.01]。而盐负荷后盐敏感者尿TXB₂的排泄量及负荷后的增加幅度均明显较盐不敏感者为高[(394±32)vs(359±44)pg/min,P<0.01;(80±47)vs(47±45)pg/min,P<0.01]。盐敏感者空腹及糖负荷后各时点血糖、血胰岛素水平均显著高于盐不敏感者(P<0.05),而胰岛素敏感性指数则明显低于盐不敏感者(0.013±0.003vs0.018±0.004,P<0.01)。结论 急性静脉盐水负荷对高血压盐敏感及盐不敏感者肾脏PGI₂及TXA₂代谢的影响有明显差异,使高血压盐敏感者肾源性PGI₂减少而TXA₂增加,此异常可能与盐敏感性高血压的发病有关;盐敏感者胰岛素抗性较盐不敏感者高。     

重组牛碱性成纤维细胞生长因子辅助治疗凹陷性痤疮瘢痕的临床观察

目的 探讨重组牛碱性成纤维细胞生长因子辅助治疗对凹陷性痤疮瘢痕患者瘢痕改善情况及炎性因子的影响。方法 采用随机数字表法将120例凹陷性痤疮瘢痕患者分为试验组和对照组。两组患者均接受CO₂点阵激光治疗,术后对照组常规涂抹红霉素眼膏,试验组术后涂抹重组牛碱性成纤维细胞生长因子凝胶。分析随访治疗1个月后的临床疗效、临床相关指标、治疗前后瘢痕改善情况、炎性因子水平及不良反应情况。结果 治疗后试验组总有效率高于对照组(P=0.040),总不良反应发生率低于对照组(P=0.028)。与对照组比较,试验组患者红斑持续时间明显缩短(P=0.025),结痂时间(P=0.002)及水肿消退时间(P<0.001)均明显提前。与治疗前比较,治疗后试验组和对照组患者Goodman和Baron痤疮瘢痕分级1级比例明显升高(P=0.001,P=0.027),4级比例明显下降(P<0.001,P=0.034),且治疗后试验组1级比例高于对照组(P=0.031),4级比例低于对照组(P=0.031)。与治疗前比较,治疗后两组患者血清肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-1β水平均降低(P均<0.001),且试验组低于对照组(P均<0.001)。结论 在CO₂点阵激光治疗基础上辅以重组牛碱性成纤维细胞生长因子凝胶治疗,可更有效地改善凹陷性痤疮瘢痕患者面部瘢痕情况,缓解局部炎症反应,疗效好,不良反应少。