前房相关免疫偏离中调节性T细胞的变化

目的：探索前房相关免疫偏离（ACAID）机制中调节性T细胞的变化,为进一步研究其具体机制创造条件。方法：将C57BL／6小鼠分为ACAID实验组、阳性对照组和正常组。实验组将2μL卵白蛋白（OVA,50mg／mL）前房注射,阳性对照组和正常组以2μL PBS行前房注射,7d后实验组和阳性对照组足底皮下免疫OVA100μL（2．5mg／mLOVA与CFA等体积充分乳化）,正常对照组不予处理。14d后检测耳廓迟发型超敏反应（DTH）,流式分析脾细胞中CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋T细胞以及CD8^＋Foxp3CF细胞的数量和比例。结果：DTH结果显示,实验组的耳廓肿胀值较阳性对照组明显减小。CD4＋CD25＋Foxp3CF细胞和CD8^＋Foxp3q^＋细胞比例较阳性对照组和正常组均升高。结论：CD4^＋CD25＋Foxp3^＋T细胞和CD8^＋＋Foxp3^＋＋T细胞在ACAID机制中发挥重要作用。     

前房相关免疫偏离对内毒素诱发的大鼠眼葡萄膜炎的影响

目的　探讨前房相关免疫偏离 (ACAID)形成前后对内毒素诱发的葡萄膜炎 (EIU)的影响及机制。方法　将 5 μl光感受器间维生素A类结合蛋白 (IRBP) ( 10 μg/ μl)注射至SD大鼠前房诱导ACAID的动物模型 ,于前房注射IRBP后 3d( 3d组 ,n =18)、7d( 7d组 ,n =18)行足底注射 2 0 0 μg伤寒杆菌内毒素 (LPS)。同时进行迟发性超敏反应 (DTH)的检测以监测ACAID的形成。酶联免疫吸附分析 (ELISA)法检测血清白细胞介素 10 (IL 10 )水平 ,并取脾组织行逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)和Western免疫印迹 ,检测GATA 3基因及蛋白表达的变化 ,进行半定量分析。LPS注射后 2 4h观察EIU的临床表现 ,并摘取眼球行组织学检查。LPS单纯注射组作对照组 (n =2 4 )。结果对照组和 3d组DTH呈阳性反应 ,血清中未测出IL 10 ,GATA 3基因和蛋白表达无增加 ;7d组DTH呈阴性反应 ,血清中IL 10升高 ( 7 1pg/ml± 1 3pg/ml,P <0 0 1) ,GATA 3基因和蛋白表达升高。临床检查可发现 ,对照组和 3d组于LPS注射后 2 4h眼部炎症达高峰 ,瞳孔中央完全被纤维素样渗出膜遮盖 ,7d组大鼠眼部充血、渗出明显减轻 ;组织学检查发现 7d组较对照组和 3d组虹膜及睫状体基质内、前房、后房和玻璃体内细胞渗出明显减少。结论　前房注射抗原 7d后 ,GATA 3及IL 10的表     

角膜可溶性抗原诱导前房相关性免疫偏离的实验研究

①目的 建立兔前房相关性免疫偏离（ACAID）诱导模型。②方法 采用甘氨酸法制备可溶性角膜分类抗原,分组行兔前房注射诱导ACAID,并观察各组耳膨胀试验和脾脏病理学检查结果。③结果 角膜上皮、内皮、基质及全角膜可溶性抗原皆可诱导ACAID,诱导质量浓度为2.0g/L,成功率分别为90%,100%,80%和100%。④结论 角膜可溶性抗原可以诱导产生ACAID。     

GATA-3在哮喘大鼠肺组织中的表达及地塞米松对其表达的影响

目的探讨转录因子 GATA-3在哮喘大鼠模型肺组织中的表达及其气道炎症中的作用,并观察地塞米松对 GA-TA-3的表达及气道炎症的影响。方法 30只 Wista 大鼠随机分为3组(正常对照组,哮喘组,地塞米松治疗组),常规方法制作哮喘模型,并用地塞米松进行治疗,用免疫组化检测肺组织 GATA-3的表达,用 HE 染色的方法观察肺组织气道炎症的改变。结果与正常对照组比,哮喘组大鼠肺组织中 GATA-3的表达明显增加(P<0.05),同时气道粘膜和周围肺组织内可见明显的嗜酸粒细胞浸润。地塞米松能明显降低大鼠肺组织中 GATA-3的表达及气道炎症反应。结论转录因子 GATA-3在哮喘大鼠肺组织中的过度表达可能参与了哮喘气道炎症的发生及病理过程。     

GATA-3基因表达质粒的构建及在大鼠脑细胞中的表达

[目的]构建GATA-3基因正义、反义重组质粒,为进一步研究GATA-3在T细胞发育分化中的作用提供基础.[方法]采用PCR技术扩增GATA-3基因,通过酶切、连接、转化等分子生物学技术,将该全长基因亚克隆至表达载体pCDNA3,构建质粒后转染大肠杆菌,并在大肠杆菌中扩增.同时用脂质体法感染大鼠脑细胞.[结果]从大鼠脑细胞中成功地克隆出全长1335 bp的GATA-3基因,并经序列分析筛选证实GATA-3基因以正向、反向重组转染入载体,且在大肠杆菌中得到扩增,同时用RT-PCR方法检测到反义重组体对大鼠脑细胞表达该基因具有抑制作用.[结论]通过基因克隆方法成功构建了GATA-3基因正义、反义表达质粒,并初步证实反义GATA-3具有抑制细胞正常表达作用,为深入研究GATA-3对T细胞发育分化的影响奠定了基础.     

转录因子T-bet,GATA-3对食管癌患者免疫状态的影响

目的:研究食管癌患者转录因子T-bet,GATA-3的基因表达及其对患者免疫状态的影响。方法:根据其CT分期将40例食管癌患者分为两组:一组为第Ⅰ,Ⅱ期患者,另一组为第Ⅲ,Ⅳ期患者;荧光定量PCR技术检测40例食管癌患者及20例健康对照者外周血单核细胞T-bet,GATA-3 mRNA的表达水平;ELISA法检测血浆中辅助性T细胞1型(Th1)细胞因子IFN-γ及辅助性T细胞2型(Th2)细胞因子IL-4。结果:食管癌组较对照组T-bet mRNA表达明显降低,GATA-3 mRNA表达明显升高,IFN-γ表达明显降低,IL-4表达明显升高,不同期别食管癌组间差异不显著。T-bet,GATA-3分别与IFN-γ,IL-4呈正相关。结论:食管癌患者Th1型细胞因子表达降低,Th2型细胞因子表达升高,即Th1/Th2平衡被打破,发生了向Th2方向的漂移,免疫功能受损;这种改变受到转录因子T-bet,GATA-3的调控,T-bet表达的减少在这种调控中可能起着关键的作用。     

CpGODN对尘螨哮喘小鼠T-bet/GATA-3表达的影响

目的探讨CpG寡脱氧核苷酸(CpGODN)对尘螨哮喘小鼠Th1/Th2型细胞因子的影响及其机制。方法用雌性C57BL/6J小鼠建立尘螨哮喘小鼠模型,在抗原致敏阶段加入CpGODN进行干预,并设立GpCODN治疗对照组及布地奈德治疗对照组,观察支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞(EOS)数量的变化;用酶联免疫吸附(ELISA)法检测BALF中IL-4、IL-5、IFN-γ的含量变化;用免疫印迹(Western blotting)法检测肺组织T-bet和GATA-3蛋白的表达水平。结果与哮喘模型组及GpCODN治疗对照组比较,CpGODN治疗组的BALF中炎症细胞明显减少,IL-4、IL-5的浓度降低,IFN-γ浓度升高,肺组织中GATA-3蛋白表达降低,T-bet表达增高;与布地奈德治疗组比较,CpGODN治疗组的BALF中IFN-γ浓度升高。相关分析显示肺组织中T-bet/GATA-3比值与BALF中IFN-γ/IL-4比值呈正相关。结论 CpGODN可通过诱导T-bet表达、抑制GATA-3表达以恢复Th1/Th2平衡,从而减轻尘螨过敏性哮喘小鼠的气道炎症。     

GATA-3基因表达质粒的构建及在大鼠脑细胞中的表达

【目的】构建GATA-3基因正义、反义重组质粒，为进一步研究GATA-3在T细胞发育分化中的作用提供基础。【方法】采用PCR技术扩增GATA-3基因，通过酶切、连接、转化等分子生物学技术，将该全长基因亚克隆至表达载体pCDNA3，构建质粒后转染大肠杆菌，并在大肠杆菌中扩增。同时用脂质体法感染大鼠脑细胞。【结果】从大鼠脑细胞中成功地克隆出全长1335bp的GATA-3基因，并经序列分析筛选证实GATA-3基因以正向、反向重组转染入载体，且在大肠杆菌中得到扩增，同时用RT-PCR方法检测到反义重组体对大鼠脑细胞表达该基因具有抑制作用。【结论】通过基因克隆方法成功构建了GATA-3基因正义、反义表达质粒，并初步证实反义GATA-3具有抑制细胞正常表达作用，为深入研究GATA-3对T细胞发育分化的影响奠定了基础。     

玻璃体腔相关免疫偏离诱导对大鼠慢性青光眼模型影响的研究

目的:研究玻璃体腔注入热休克蛋白27(HSP27)对大鼠慢性青光眼模型血清中HSP27抗体浓度的影响.方法:51只Wistar大鼠随机分为高眼压组(15只),假手术对照组(15只),致敏组(9只),致敏对照组(9只),正常组(3只),右眼为实验眼,左眼为对照眼.术前、术后第3天、1周、2周、4周、6周、8周均检测大鼠双...     

GATA-3与Th1/Th2的分化

机体清除病原体需要辅助性T细胞的参与,根据其产生细胞因子的不同可将辅助性T细胞分为两类:Th1细胞和Th2细胞。GATA3在调节Th1和Th2细胞分化中起重要作用。转录因子GATA家族(GATA-3)不仅在转录水平上调节Th2类细胞因子的表达,而且在染色体结构的重组和IL-4位点的开放方面都起着重要的作用。作为一个重要的调控,GATA3通过两种方式使Th2细胞表型稳定,首先,GATA3通过抑制IL-12受体β2链的表达来限制Th1细胞的分化;其次,GATA3通过正反馈调节来加强自身的表达。     

SLE中GATA3和MBD2 对IL-4表达的影响

目的本文通过检测LE中MBD2、GATA3和IL-4表达的量化关系,探索LE中GATA3和MBD2表达水平对Th2异常分化的影响,旨在探讨基因表达调控异常对LE自身免疫异常的可能机制。方法获取12例系统性红斑狼疮患者和11例健康志愿者外周静脉血单核细胞,以RT-PCR半定量法检测GATA3、MBD2和IL-4的转录水平。采用两样本均数T检验比较分析SLE患者与正常人之间GATA3、MBD2和IL-4转录水平的差异。结果正常对照组PBMC中GATA3表达水平为(0.342±0.117),SLE患者组PBMC中GATA3表达水平为(0.552±0.234),SLE中GATA3表达水平显著高于正常对照(t=1.761,P=0.009);正常对照组MBD2表达水平为(0.587±0.193);SLE患者组MBD2表达水平为(0.760±0.203),SLE中MBD2表达水平显著高于正常对照(t=1.721,P=0.024);正常对照组IL-4表达水平为0.299±0.198;SLE患者组IL-4表达水平为(0.442±0.183),SLE中IL-4表达水平显著高于正常对照(t=1.725,P=0.042)。结论LE中与自身免疫反应有关的Th2细胞活化不仅受到低甲基化造成的IL-4表达增加的影响,而且受到低甲基化造成的沉默因子结合下降的影响,使GATA3失去了MBD2的竞争性抑制,更加有利于诱导IL-4表达,活化Th2,促进LE发病。     

氢饱和生理盐水对内毒素诱导的大鼠葡萄膜炎的影响

目的 探讨氢饱和生理盐水(hydrogen rich saline,HRS)对内毒素诱导的大鼠葡萄膜炎(endotoxin-induced uveitis,EIU)是否有减轻作用.方法 健康成年雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、氢饱和生理盐水(氢水)组和激素组,于后3组大鼠足垫部皮下注射0.125 mg/kg内毒素诱导葡萄膜炎.氢饱和生理盐水组大鼠于造模后0、0.5、1、2、6、8、12、24 h和3周内每天1次,腹腔注射氢饱和生理盐水20 mL/kg;激素组大鼠于造模后立即腹腔注射地塞米松磷酸钠注射液1 mg/kg.4组于造模后12、24、48、72、96 h在裂隙灯下观察葡萄膜炎表现,并进行量化评分;并于造模后1、4、7、10、14 d和21 d行视网膜电图检查、房水蛋白定量及病理组织学检查.结果 氢饱和生理盐水组葡萄膜炎程度与模型组相似,裂隙灯临床表现量化评分和炎症细胞计数差异均无统计学意义(P＞0.05);内毒素诱导的大鼠葡萄膜炎模型的视网膜功能有改变,暗适应3.0反应b潜伏期延长;与模型组相比,氢饱和生理盐水组b波潜伏期有缩短趋势,但差异无统计学意义(P＞0.05);氢饱和生理盐水组房水蛋白总量较模型组略低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 氢饱和生理盐水对内毒素诱导的大鼠葡萄膜炎无明显减轻作用.     

CpG ODN对哮喘小鼠气道炎症及GATA-3的影响

目的观察CpGODN对支气管哮喘小鼠气道炎症及肺组织GATA-3mRNA表达的影响。方法将40只雌性BALB/C小鼠随机分为4组(每组10只):生理盐水对照组(A组);哮喘组(B组);CpGODN干预组(C组);GpCODN对照组(D组)。以鸡卵白蛋白(OVA)致敏小鼠建立哮喘模型,C组和D组在OVA激发前分别予CpGODN及对照GpCODN腹腔注射。在末次激发后24h收集各组小鼠的支气管肺泡灌洗液行白细胞计数及EOS分类计数,ELISA法检测各组小鼠BALF中IL-4、IL-5及IFN-γ水平,肺组织HE染色观察其病理变化以及用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肺组织中GATA-3mRNA的表达。结果各组BALF中白细胞总数、嗜酸性粒细胞百分比、IL-4、IL-5和IFN-γ浓度分别为:A组为(7.46±1.77)×105个/mL、(0.75±0.48)%、(26.9±4.6)pg/mL、(41.7±5.1)pg/mL和(110.4±12.1)pg/mL,B组为(21.68±4.40)×105个/mL、(9.50±1.13)%、(267.6±24.5)pg/mL、(218.2±15.2)pg/mL和...     

GATA3与乳腺癌发生发展关系的研究进展

GATA3转录因子在正常乳腺的生长分化中起重要作用,与乳腺癌的发生发展也密切相关,GATA3在不同乳腺癌亚型发生中的作用有所不同。本文综述了GATA3与正常乳腺及乳腺癌发生发展关系的研究现状,为今后研究GATA3在乳腺癌中的临床应用提供理论依据。     

地塞米松对哮喘大鼠转录因子GATA-3表达的影响

目的：观察地塞米松对哮喘大鼠转录因子GATA-3表达的影响。方法：36只SPF级SD大鼠随机分为正常对照组（A组）、哮喘模型组（B组）和地塞米松组（C组），每组12只。以卵蛋白腹腔注射并雾化吸人制备大鼠哮喘模型，以动物呼吸机测定气道反应性评价造模效果。采用免疫组化半定量法测定肺组织GATA-3含量。结果：予乙酰胆碱（Ach）激发后，比较各组大鼠呼气相气道阻力（Re），显示造模成功；B组、C组的GATA-3表达量显著高于A组（P〈0．01）；C组GATA-3表达量和B组比较．差异有显著性（P〈0．01）。结论：支气管哮喘大鼠存在GATA-3高表达。地塞米松减低气道高反应性，抑制GATA-3的表达．纠正Th1/Th2失衡，从而对支气管哮喘有疗效。     

转录因子T-bet/GATA-3在支气管哮喘小鼠中的表达及地塞米松的干预作用

目的:探讨核因子T-bet/GATA-3在支气管哮喘小鼠发病机制中的作用,观察地塞米松干预后T-bet、GATA-3 mRNA的变化.方法:建立卵清蛋白(OVA)诱导的哮喘小鼠模型;24只BALB/c小鼠随机分为正常组、哮喘组及地塞米松治疗组.地塞米松腹腔注射(2 mg/kg)给药.HE染色观察气道炎症变化;采用RT-PCR方法检测T-bet、GATA-3 mRNA的表达:流式细胞技术检测小鼠脾脏CD4T细胞IFN-γ、IL4水平.结果:与正常组相比,哮喘组小鼠GATA-3 mRNA表达显著增Dn(P<0.05).T-bet mRNA水平明显降低(P<0.05),IFN-γ水平明显降低(P<0.01),IL-4水平明显升高(P<0.05);经地塞米松干预后,肺组织GATA-3、T-bet mRNA均有所降低,以GATA-3 mRNA降低更为明显,IL-4表达明显降低(P<0.05),而IFN-γ水平有减少倾向.结论:支气管哮喘小鼠T-bet/GATA-3表达失衡与气道炎症密切相关,地塞米松通过抑制GATA-3和T-bet的表达,调节IL-4/IFN-γ比率并纠正Th1/Th2平衡失调,可能是其治疗哮喘的机制之一.