抗个体型抗体对HBV感染的免疫调节作用——用抗个体型抗体诱生抗—HBs

Jerne~([1])指出,机体对抗原的免疫反应可以通过抗体的个体型(Id)和抗个体型抗体(抗-Id)的相互作用而得到调节。这一理论陆续被许多学者的研究结果所证实。     

工程化人源性抗-HBs Fab抗体的制备、纯化和鉴定

用获得的表达人源性抗 ＨＢｓＦａｂ片段的大肠杆菌,发酵表达该抗体的可溶Ｆａｂ片段。以羊抗人Ｆａｂ抗体偶联ＨｉＴｒａｐ柱,用Ａｃｔｉｓｅｐｅｌｕｔｉｏｎｍｅｄｉｕｍ作为洗脱液,在ＦＰＬＣ上纯化。用ＳＤＳ ＰＡＧＥ及蛋白印迹法分析、鉴定,用固相放兔法检测其活性单位。蛋白印迹及ＥＬＩＳＡ显示转化菌株有抗 ＨＢｓＦａｂ片段的表达。经ＦＰＬＣ纯化的抗体Ｆａｂ片段呈单一峰,与抗 ＨＢｓ阳性血清相似。纯化后的抗体Ｆａｂ片段达到电泳纯,具有较高的活性。     

抗GAM合成多肽抗体的制备和鉴定

根据ＧＡＭ ｃＤＮＡ所编码的氨基酸序列合成了ＧＡＭ分子羧基端２３个氨基酸的多肽，并利用ＧＭＢＳ双功能试剂将人工合成多肽成功地与ＯＶＡ进行了交联，免疫家兔制备了抗ＧＡＭ合成多肽的抗体，并经亲和层析进行了纯化。对此抗体进行鉴定的结果表明，抗ＧＡＭ合成多肽的抗体可与天然ＧＡＭ分子发生特异性反应，并可用于免疫沉淀和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ，为ＧＡＭ分子功能的研究提供了有力的工具。     

HBV 感染与抗平滑肌抗体相关性分析

目的：探讨HBV感染者病毒活动情况、疾病进程与血清抗平滑肌抗体（ASMA）产生的相关性。方法：回顾性分析我院2014年6月至2018年6月间慢性乙型病毒性肝炎（CHB）患者肝病自身抗体检测结果。筛选51例合并ASMA阳性患者的临床资料和实验室进行数据分析,以自身抗体检测阴性的50例CHB患者作为对照。分析两组的临床表现、肝功能、乙肝病毒活动情况和疾病进程的差异。结果：抗核抗体（ANA）、ASMA、抗线粒体抗体（AMA）和抗肝肾微粒体抗体（LKM-1）在CHB受检者中阳性率分别为13.46%、5.01%、0.60%和0.07%。ASMA阳性组和自身抗体阴性组患者的年龄、性别构成、HBsAg感染年限、HBsAg、HBeAg和HBV DNA对数值,以及CHB疾病进程等差异均无统计学意义（P>0.05）。ASMA阳性组首发症状多见黄疸,部分合并肝外自身免疫性疾病表现（P<0.05）。ASMA阳性组TBIL、ALP、TBA、PT高于自身抗体阴性组,ALB低于自身抗体阴性组,差异均有统计学意义（P<0.05）。ASMA阳性组中肝炎、肝硬化和肝癌患者的ASMA滴度差异无统计学意义（...     

全人单克隆抗核抗体的制备和鉴定

目的 本研究旨在从系统性红斑狼疮(systemmic lupus erythematosus,SLE)患者外周血淋巴细胞中获得自身抗体,并从中鉴定筛选出抗核抗体.方法 利用人B细胞杂交瘤技术制备SLE患者来源的全人单克隆自身抗体,采用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immuno sorbenk assay,ELISA)方法测定阳性杂交瘤细胞上清抗体浓度,并以HEp-2细胞为底物,采用间接免疫荧光法鉴定筛选出抗核抗体.结果 共获得48株稳定分泌IgG型全人单克隆自身抗体的杂交瘤细胞株,其中12种细胞上清抗体浓度大于1 500 ng/mL,占25％,通过免疫荧光鉴定从中筛选出3种抗核抗体,荧光核型分别为周边型、斑点型和核仁型.结论 全人单克隆自身抗体的制备及抗核抗体的筛选鉴定,为开发新型单克隆抗体药物以及研究SLE的致病机制奠定了良好的实验基础.     

TIM-3 在慢性HBV 感染中的免疫调节作用

<正>慢性乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染是世界范围内最常见的慢性病毒性感染,全球约有20亿人口有血清学证据证实现症或既往感染HBV,其中约3.5亿人口罹患慢性HBV感染[1,2];慢性HBV感染可致慢性肝病,与肝硬化、肝癌的发生密切相关,在2010年全球疾病负担研究中,HBV感染位居首位,在导致死亡的病因中位列第10(78.6万/年)[3],基于这些数据,WHO将病毒性肝     

抗独特型抗体的制备与鉴定

内影像抗独特型抗体可模拟外部抗原，刺激机体的免疫反应。其制备的关键步骤包括动物的选择，免疫原的制备、免疫的剂量及方法以及独特型抗体的鉴定。     

抗独特型抗体的制备与鉴定

内影像抗独特型抗体可模拟外部抗原，刺激机体的免疫反应，其制备的关键步骤包括动物的选择，免疫原的制备，免疫的剂量及方法以及独特型抗体的鉴定。     

抗体结构、个体型和抗体多变性的产生

抗体有两种功能:一是识别非己细胞和大分子(抗原),二是清除这些物质。由于抗原为数甚多,必然需要各种各样的抗体。有人推测成年人的免疫系统至少可以产生10~6的抗体分子。机体如何产生和保持大量的抗体分子,是当今免疫学研究的中心课题。所有抗体或免疫球蛋白的基本结构都是由4条多肽链组成(见图),两两相同:两条由约215个氨基酸组成的轻链(L),两条比轻链约长一倍的重链(H)。各链之间通过二硫键和共价键连接。各个肽链内部另有一些由二硫键隔成的功能区,这样的区轻链有2个、重链有辱个。各区功能不同。负     

抗Wistar大鼠抗二硝基苯抗体的独特型抗体的研究——Ⅰ.抗独特型抗血清的制备和鉴定

以DNP-F_γG免疫的Wistar大鼠的脾细胞继承传递给照射过的同系大鼠,得到较多量的个体源性的抗血清。以亲和层折,从中分离得到单相的抗DNP抗体(R A DNP Ab)。用这种抗体免疫豚鼠得到抗血清(GP A Id S),经正常Wistar大鼠的免疫球蛋白(R Ig)吸收后,用ELISA测定其对R A DNP Ab和R Ig的效价,前者明显高于后者,证明了其中含有抗R A DNP Ab独特型的抗体。同时从个体间的交叉反应表明来源于不同免疫次数的个体间的R A DNP Ab具有交叉反应的独特型决定簇。     

小鼠抗人BART多克隆抗体的制备和鉴定

目的制备小鼠抗人源性BART的抗体。方法采用原核系统表达人全长BART,经纯化后免疫小鼠制备抗BART的抗体,以Western blot、免疫组化染色法检测抗体的效价和特异性。结果获得高效价的小鼠抗BART的抗体,该抗体能够识别大鼠脊髓组织中的BART分子。海马神经元和星形胶质细胞的免疫组化染色结果显示,BART分子在海马神经元、星形胶质细胞中广泛表达;在海马神经元中,BART与钙离子通道存在共定位现象。结论制备出能特异性识别天然BART分子的抗体,为检测BART分子并进一步研究其功能奠定了基础。     

人源抗NH-LBP Fab抗体的制备和初步鉴定

目的：构建人源抗脂多糖结合蛋白氨基端片段（NH-LBP）Fab抗体的原核表达载体, 并制备高稳定性Fab抗体.方法：用PCR方法, 从可溶性表达抗NH-LBP抗体的重组质粒pComb3H-Fab中扩增出VH链和VL链基因序列, 分别构建表达质粒pET-28a（＋）-VH和pET-28a（＋）-VL, 并于工程菌BL21（DE3）star中分别表达及TALON柱芯亲和纯化, 将抗体片段VH和VL共同复性, 通过二硫键形成Fab抗体, 再采用ELISA法初步鉴定其与NH-LBP的结合力.结果：扩增出VL链和VH基因片段长约为650 bp和700 bp, 经BL21star表达出相对分子质量（Mr）约为28　000和30　000的目的蛋白, 共同折叠后所获得Fab抗体与NH-LBP具有较高的结合力.结论：成功地制备抗NH-LBP Fab抗体, 为临床抗炎研究提供了条件.     

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子对HBV宫内感染婴儿的免疫调节作用

目的 观察粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)对HBV宫内感染免疫失败婴儿的免疫调节作用.方法 宫内感染婴儿分为治疗组和对照组(均为20例),都给予乙肝疫苗10μg免疫用量,同一部位三角肌注射(疫苗注射时间按0、1、6方案),乙肝免疫球蛋白200IU臀部肌肉注射,20天1次,共3次.治疗组注射乙肝疫苗3天后,同一部位皮内注射GM-CSF 10μg/Kg.1岁时抽外周静脉血检测T淋巴细胞亚群的水平、血清干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)的水平.结果 (1)治疗组CD4+T细胞百分数及CD4 +/CD8+比值高于对照组(t=11.67,P＜0.05;t=13.06,P＜0.05),CD8+百分数低于对照组(t=6.25,P＜0.05),两组比较差异均有显著意义.(2)患者外周血IFN-γ水平治疗组高于对照组(t=13.92,P＜0.05);IL-4水平与对照组相比,差异无统计学意义(t=1.30,P＞0.05).结论 GM-CSF可提高HBV宫内HBV感染免疫失败婴儿CD4 +/CD8+比值,并且调节Th1/Th2细胞因子比例平衡.     

乙型肝炎病毒e抗体在HBV感染中的作用

长期以来,病毒载量和谷丙转氨酶水平是判断抗-HBe阳性慢性乙型肝炎是否需要治疗的关键指标,而忽略了抗-HBe本身在疾病进展中的作用.目前,随着对抗-HBe研究的不断增多,逐渐对抗-HBe在HBV感染中的作用产生了新的认识,本文对发生血清学转换后HBV-DNA病毒载量的变化、抗-HBe与肝组织病变的关系等方面进行综述.     

CpG基序对HBV DNA疫苗诱导小鼠产生抗-HBs的影响

为研究CpG基序克隆入质粒载体后对乙型肝炎病毒 (HBV)DNA疫苗诱导小鼠产生抗 HBs的影响。构建编码乙肝表面抗原中蛋白的卡那霉素抗性真核表达质粒pVAX CpGS2 S ,其中通过PCR克隆了若干个CpG基序到质粒载体中 ,按不同剂量一次性肌内注射免疫小鼠 ,ELISA法检测小鼠血清抗 HBs。结果发现与不含CpG基序的对照组相比较 ,克隆了CpG基序的实验组一次性免疫BALB/c小鼠后诱导产生的抗体效价比对照组免疫效果好 ,但两者差异不显著     

抗吗啡疫苗抗体的制备及其特性鉴定

目的制备高效价的抗吗啡疫苗的抗体,并对其特性进行鉴定。方法将人工合成的6-琥珀酰吗啡(M-6-S)与BSA在pH9.0碳酸盐缓冲液中交联成M-6-S-BSA。经凝胶柱过滤和硫酸铵法纯化后,用两种不同方案免疫BALB/c小鼠和SD大鼠,用ELISA法和中和抑制试验分别测定抗体的滴度和进行特异性鉴定;用辐射热甩尾(TF)反射试验检测M-6-S-BSA疫苗的免疫效果。结果用合成的M-6-S-BSA疫苗连续免疫小鼠8次,所获抗血清的效价可达1∶200000,大鼠免疫4次后抗血清的效价超过1∶20000。中和抑制试验表明,抗M-6-S抗体对吗啡和与吗啡有共同母环结构的6-单乙酰吗啡、海洛因及可待因具有较高的特异性。免疫大鼠腹腔注射2mg/kg的吗啡后,其甩尾(TF)反射受到明显抑制,最大效应百分率(%MPE)减少了74.7%,TF潜伏期回到基线水平的时间明显快于对照组。结论成功地制备M-6-S-BSA疫苗,用其免疫小鼠和大鼠均可产生高滴度和特异性抗吗啡抗体。该抗体可明显减低大鼠对吗啡的抗伤害感受,为进一步研究吗啡疫苗抗体对抗吗啡的成瘾作用奠定了基础。     

抗人端粒酶蛋白亚基单域抗体制备和鉴定

目的　研制抗人端粒酶逆转录酶 (hTERT)蛋白亚基单域重组抗体。方法　以重组His taghTERT融合蛋白为抗原免疫小鼠 ,以逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)扩增小鼠脾细胞重链可变区 ;经克隆噬菌粒载体pCANTAB 5E及转染大肠杆菌建立噬菌体抗体展示文库 ,经过亲和性富集选择阳性克隆 ,并于大肠杆菌 (E .coli.HB2 15 1)中表达为可溶性单域抗体 ;Westernblot确定单域抗体结合特性。结果　以RT PCR扩增His taghTERT免疫小鼠脾细胞RNA ,得到 35 0bp小鼠重链可变区DNA片段 ;通过克隆及转染制备出噬菌体展示抗体文库 ,文库大小是 8× 10 4 ;经过抗原 抗体亲和性筛选 ,得到 4个克隆 ,并表达为可溶性单域抗体 (相对分子质量 16 0 0 0 ) ;WesternBlot分析显示 :其中 2个克隆的可溶性单域抗体可特异性结合His taghTERT融合蛋白 (相对分子质量 16 70 0 ) ,与His tag无关 ;与人癌细胞表达的天然hTERT蛋白 (相对分子质量 12 70 0 0 )分析亦显示其特异性结合能力。DNA序列分析证实可溶性单域抗体为小鼠抗体重链可变区VH基因编码。结论　利用噬菌体展示技术已初步制备出小鼠重链可变区编码的抗hTERT蛋白的特异单域抗体 ,为进一步探索其抑制端粒酶活性及抗肿瘤作用奠定了基础。     

生长抑素抗独特型卵黄抗体的制备与鉴定

目的在成功制备中和性生长抑素(SS)单克隆抗体的基础上,制备了SS抗独特型卵黄抗体Ab2,鉴定其生物学特性,探讨其在促进动物生长方面的应用。方法用对SS具有免疫中和性的单克隆抗体2E7免疫产蛋鸡,筛选并收集有高效价抗独特型卵黄抗体的鸡蛋,分离蛋黄,破碎蛋黄组织,用稀释和酸化沉淀法除脂蛋白,用冷酒精沉淀法纯化抗独特型卵黄抗体Ab2。用间接ELISA检测卵黄Ab2的特异性、效价和浓度,用竞争抑制和动物免疫检测卵黄Ab2β,用动物实验检测卵黄Ab2β促进鸡生长的效力。结果该SS抗独特型卵黄抗体Ab2效价为10~(-5),含量为8 mg/mL。且与兔抗SS抗体发生免疫反应,不与兔抗生长激素抗体、兔抗胰岛素抗体、兔抗胃泌素抗体发生免疫反应。该SS卵黄Ab2能和异种动物兔产生的SS抗体发生免疫反应,该免疫反应能被SS竞争抑制,该SS卵黄Ab2能诱导小鼠产生SS Ab3,该SS Ab3能和SS发生免疫反应,说明它是SS卵黄Ab2β。用其作疫苗,以0.8μg/只和3.2μg/只分别皮下注射免疫小鼠,以0.8μg/羽和3.2μg/羽分别肌肉注射免疫鸡,以3.2μg/尾浸泡免疫多宝鱼。一个月后,实验小鼠平均体质量比对照组分别增加33.5%和37.9%,实验鸡平均体质量比对照组分别增加25.6%和34.1%,实验鱼平均体质量比对照组增加24.8%。结论成功制备了特异性强、效价高的SS卵黄抗体Ab2β,以其作疫苗免疫动物,以较小剂量一次性免疫即可产生显著的促鸡和多宝鱼生长效果。     

抗-HBs阳性HBV感染者随访5年前后生化和超声观察

目的观察抗-HBs阳性HBV感染者五年前后生化、超声影像变化。方法57例抗-HBs阳性HBV感染者根据HBV DNA定量，乙肝病毒血清标志物检测前瞻性随访五年生化，超声影像变化。结果抗-HBs低水平组五年后超声积分增加，门静脉内径增宽，平均流速增加，有统计学差异（P〈0．01，P〈0．01，P〈0．05）；HBV DNA高、低载量组五年后超声积分均增高（P〈0．01，P〈0．05），HBV DNA高载量组五年后球蛋白水平明显增高（P〈0．01），门静脉平均流速增加（P〈0．05）。结论抗HBs阳性的HBV感染者抗-HBs水平和HBV DNA载量是预后预测指标，抗-HBs愈低，HBV DNA载量愈高，预后愈差。     

兔抗单克隆个体基因型抗体的制备鉴定

利用具有抑制恶性疟原虫生长能力的94D_1株单克隆抗体(McAb)免疫家兔。得到抗血清后,经Seharose 4 B—正常BALB/c小鼠IgG固相反复吸附3次以上,以除去其抗同种型和同种异型抗体,然后再经Sepharose4 B—9~4D_1株McAb亲和层析柱提纯,得到抗9_4D_1个体基因型抗体。这种抗体经免疫双扩散、IFA封闭试验、SPRIA等方法鉴定,证明具有较高的特异性。在双扩散中,仅与9_4D_1株McAb产生沉淀线;在IFA封闭试验中,能抑制