干细胞因子的研究进展

干细胞因子(stem cell factor,SCF)是最近被查明的一种具有广泛生物活性的细胞因子。它是Sl基因编码的c—kit原癌基因的配体。无论小鼠、大鼠还是人类的SCF均对造血有明显的刺激作用,尤其对早期祖细胞的增殖作用显著。SCF的活体研究提示其在再障等骨髓功能抑制性疾病中有良好的应用前景。造血干细胞在其发育成熟的各阶段都表达SCF的受体,某些AML细胞亦可表达SCF受体,提示SCF在造血调节及白血病的发病中可能起着重要的作用。     

两步法体外定向诱导小鼠胚胎干细胞发育为CD+34/Sca-1+造血干细胞的研究

目的　建立一种体外诱导胚胎干细胞 (embryonicstemcell,ESC)定向发育为CD 3 4 /Sca 1 造血干细胞 (hematopoieticstemcell,HSC)的实验方法。方法　联合应用血管内皮生长因子(vascularendothelialcellgrowthfactor ,VEGF)、干细胞因子 (stemcellfactor ,SCF)、白细胞介素 3(interleukin 3,IL 3)、白细胞介素 6 (interleukin 6 ,IL 6 )和促红细胞生成素 (erythropoietin ,EPO)分阶段首先诱导ESC形成富含CD 3 4 /Sca 1 细胞的胚胎体 (embryoidbody ,EB) ,然后分别观察EB细胞在甲基纤维素半固体培养体系和骨髓基质细胞饲养层培养体系中进一步分化为HSC的情况。结果VEGF联合其他细胞因子能有效促进EB中HSC的形成 ,CD 3 4 /Sca 1 细胞数高达 (13 72± 1 92 ) %。收获此阶段的EB进一步诱导发现 ,甲基纤维素培养体系造血克隆形成率明显低于骨髓基质细胞培养体系 ,在甲基纤维素中CD 3 4 /Sca 1 细胞数最高只能达到 (2 0 5 2± 2 78) % ,而基质细胞中CD 3 4 /Sca 1 细胞数可达 (34 6 0± 3 71) % (t=5 2 6 ,P <0 0 0 1)以上 ,且来自骨髓基质细胞培养体系的造血分化细胞在造血集落培养时能形成类型和数量更多的造血克隆。结论　使用VEGF联合SCF、IL 3、IL 6、EPO分阶段诱导ESC形成富含CD 3 4 /Sca     

HCK基因在小鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化过程中的表达

目的 探讨HCK基因在小鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化过程中的表达及HCK基因在维持胚胎干细胞未分化状态中的意义.方法 培养小鼠胚胎干细胞,并诱导其向心肌细胞分化.抽提其胚胎干细胞未分化及分化第2、4、6、8天的总RNA,应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法对HCK基因mRNA的表达进行半定量分析;同时抽提胚胎干细胞未分化及分化第2、4、6、8天的总蛋白,应用Western-blot方法对HCK蛋白的表达进行半定量分析.采用SPSS 11.5软件进行统计学分析,P＜0.05为有统计学差异.结果 HCK基因mRNA在未分化的胚胎干细胞(D0)及分化的第2天(D2)均有表达,而在分化的第4天(D4)开始已不能检测到有表达,HCK基因mRNA的表达水平随小鼠胚胎干细胞的分化呈急剧下调趋势;HCK蛋白的表达与mRNA的表达相一致,在小鼠胚胎干细胞的分化进程中逐渐下调,至第4天已基本检测不出.结论 HCK基因随着小鼠胚胎干细胞向心肌分化,表达呈下调的趋势,HCK基因可能在维持胚胎干细胞未分化状态中起重要作用.     

小鼠胚胎干细胞定向诱导为胰岛样细胞过程中印记基因变化

目的：探讨体外诱导对小鼠胚胎干细胞株SF1-G印记基因Kcnq1、Cdkn1c的影响。方法：体外诱导小鼠胚胎干细胞SF1-G向胰岛样细胞分化,RT-PCR和细胞免疫荧光检测胰岛细胞标志基因表达;聚合酶链式反应-限制性内切酶片段长度多态性 (PCR-RFLP)检测印记基因Kcnq1、Cdkn1c在分化各阶段细胞中的亲本表达情况。结果：胰岛细胞标志性基因Insulin、Glucagon、Somatostatin、IAPP、Glut2在诱导分化后的细胞都有表达;分化终末细胞能表达胰岛细胞特异性蛋白胰岛素、C肽及Somastatin;PCR-RFLP检测分析显示,体外诱导分化后细胞的印记基因Kcnq1、Cdkn1c呈双等位基因表达。结论：胚胎干细胞经体外诱导培养可定向分化为胰岛样细胞;用此种分化方法可导致胚胎干细胞印记基因表达的改变,出现印记丢失。［中国当代儿科杂志,2010,12(12)：954-958］     

同源盒基因B簇在造血干/祖细胞增殖分化中的作用

同源盒(HOX)基因是造血干/祖细胞增殖分化的主控基因。HOX基因参与造血调控且与造血细胞发育有关,影响造血干细胞的数量和红系、粒系、巨核系及淋巴系增殖分化。本文综述HOX基因结构特征及HOX基因B簇中的HOXB2、HOXB3、HOXB4、HOXB6、HOXB8在造血干/祖细胞增殖分化中的作用。     

骨髓增生异常综合征造血前体细胞对白细胞介素15反应的研究

目的　探讨儿童骨髓增生异常综合征 (MDS)造血前体细胞对白细胞介素 15 (IL 15 )的反应 ,为临床应用提供理论依据。方法　采用吸附单克隆抗体的免疫磁珠分离系统分离纯化 18例MDS患儿骨髓CD3 4 细胞 ,采用碘化丙锭染色、流式细胞仪分析和细胞核形态检测两种方法同时检测体外培养MDS造血前体细胞增殖、分化过程中的凋亡状况 ;观察IL 15对其影响 ,并进行定量分析。结果　在培养d8,IL 15浓度在 0～ 10 0ng/ml可呈剂量依赖性地抑制体外培养MDS骨髓造血前体细胞的凋亡。结论　IL 15可部分抑制体外培养的MDS造血前体细胞凋亡     

多氯联苯对P19细胞向心肌分化进程的影响

目的 探讨多氯联苯对P19细胞向心肌分化进程的影响.方法 在P19细胞向心肌细胞分化的培养液中加入多氯联苯(Aroclor 1254)2.5 μmol/L,同时设立阴性对照组.显微镜下连续观察P19细胞形态的变化,并采用实时荧光定量RT-PCR技术对分化过程的第0、4、10天中GATA4及Nkx2.5基因mRNA的表达水平进行检测.结果 在分化全程(0 ～ 10天),实验组与对照组无细胞形态上的差别;而GATA4、Nkx2.5基因的表达量除在分化开始前(第0天)差异无统计学意义外,在分化中期(第4天)及末期(第10天),实验组中GATA4、Nkx2.5基因的相对表达量均显著低于对照组.结论 多氯联苯可通过对早期心脏发育相关重要基因的表达影响心肌分化进程.     

胚胎干细胞诱导分化为造血干细胞重建造血功能的作用

目的探讨胚胎干细胞（ESC）定向分化来源的造血干细胞（HSC）体内重建造血功能的作用。方法将小鼠E14.1胚胎干细胞采用三步诱导法在体外分化发育为HSC,流式细胞仪检测HSC表面标志性抗原CD34^＋/Sca-1^＋的表达,体内畸胎瘤形成实验检测其致瘤性,造血克隆形成（CFU）实验观察其体外造血集落形成情况,免疫磁珠分选纯化HSC移植给经亚致死剂量γ射线照射的雌性小鼠观察其体内重建造血的功能。结果多种造血刺激因子联合应用能有效促进ESC发育为含丰富造血前体细胞的胚胎体（EB）,诱导14 d后,EB中CD34^＋/Sca-1^＋细胞数达峰值,为（13.72&#177;2.07）%。收获此阶段的EB行第二步诱导分化16 d后,CD34^＋/Sca-1^＋细胞数可增至（24.62&#177;2.50）%,CFU培养出现红系和粒系造血克隆;在骨髓基质细胞加胎肝基质细胞上清液培养体系中进行第三步诱导分化15 d后,CD34^＋/Sca-1^＋细胞达峰值,为（58.64&#177;4.20）%,CFU培养能形成较多的红系、粒系/巨噬细胞系及混合细胞集落,W right-G iemsa染色显示为原始的造血细胞。此阶段的HSC经分选纯化后移植给经γ射线照射后的小鼠,移植组小鼠＋10 d造血功能开始恢复,观察40 d后除血小板恢复较慢外,白细胞、红细胞、血红蛋白等指标已接近正常,植入率为71.4%,存活率为43.0%,染色体检测证实已由受体鼠的XX转为供体鼠的XY。结论采用分阶段诱导的方法,可在体外定向诱导小鼠ESC分化发育为HSC,此来源的HSC较安全,无致瘤性,并具备体内重建造血功能的能力。     

造血干细胞向淋巴系祖细胞增殖分化过程中HOXC6基因表达的研究

目的探讨人脐血造血干细胞(HSC)向淋巴系祖细胞增殖分化过程中HOXC6基因表达的情况及全反式维甲酸(ATRA)对HOXC6基因表达的影响。方法采用造血干/祖细胞体外培养技术,以ATRA持续诱导人脐血造血干细胞,观察人脐血HSC经植物血凝素(PHA-M)诱导后,在培养过程第3、7和12天的淋巴系祖细胞集落生成情况;采用实时荧光定量PCR技术检测人脐血造血干细胞向淋巴系祖细胞增殖分化过程中HOXC6基因的表达水平。结果人脐血造血干细胞向淋巴系祖细胞增殖分化过程中,HOXC6基因表达呈现时间规律性。结论HOXC6基因在增殖分化的第7天表达最强烈,第12天表达明显降低,提示HOXC6基因与人脐血造血干细胞向淋巴系祖细胞增殖分化过程密切相关,可能是其调控基因之一。ATRA能显著上调HOXC6基因的表达。     

异基因造血干细胞移植并发植入综合征四例

随着造血干细胞移植的增加 ,一组在移植后早期中性粒细胞恢复的过程中 ,以发热、皮疹及非心源性肺水肿为主要特征的临床症候群亦被认识 ,现被称为植入综合征(ｅｎｇｒａｆｔｍｅｎｔｓｙｎｄｒｏｍｅ ,ＥＳ)。它主要发生在自体造血干细胞移植中。现就我单位近 2年移植过程中出现的 4例植入综合征报告如下。患儿资料4例患儿均患重型 β 地中海贫血 ,年龄为 3 5～ 10 0岁 ,行全相合同胞异基因造血干细胞移植。预处理方案为 :白消安 16～ 2 0ｍｇ/ｋｇ、环磷酰胺 160～ 2 0 0ｍｇ/ｋｇ、抗胸腺免疫球蛋白 90ｍｇ/ｋｇ。例 1和例 2供者在 - 3…