用于HIV-1 DNA检测的滤纸片干血斑能力验证质控品的制备及应用

目的制备用于艾滋病病毒1型(HIV-1)DNA检测的干血斑能力验证质控品,并对其均一性和稳定性进行评估。方法培养仅含单拷贝的缺陷型HIV-1基因的8E5细胞,使用HIV-1阴性全血进行倍比稀释后,滴加到滤纸片上,制备成含有不同拷贝数8E5细胞的滤纸片干血斑。在不同温度条件下放置不同时间,然后使用雅培Real-time HIV-1定性检测试剂盒对其进行检测、整理并分析检测结果,评价滤纸片干血斑能力验证质控品的均一性和稳定性。结果滤纸片干血斑随机抽样平行检测结果完全一致;-20℃或4℃放置1年,室温放置3个月或在37℃放置4天,检测结果均一致。在应用性评价中,参加能力验证项目的15家实验室检测结果全部正确,制备的滤纸片干血斑作为质控品效果良好。结论使用8E5细胞制备的HIV-1DNA定性检测能力验证质控品的均一性、稳定性良好,是一种可用于目前中国HIV-1DNA定性检测能力验证质控品制备方法。     

滤纸血和血清快速ELISA检测囊虫病抗体的比较研究

本文使用滤纸血和血清同步进行快速ELISA试验检测囊虫病抗体的效果作了比较研究。滤纸血和血清的阳性检出率分别是78％、75％。滤纸血和血清的几何平均滴度分别是45和716。选择阳性的血清和滤纸血各5份,在不同时间内进行4次重复试验,血清的OD值变异系数为2～8％,滤纸血为4～12％。滤纸血于4℃冰箱内至少可保存4周,不影响阳性结果的判定。表明滤纸血快速ELISA是一种简便、快速的方法,在囊虫病血清流行病学调查中有其实用价值。     

滤纸片干血斑用于HIV-1 DNA检测的评价

目的 探索滤纸固定艾滋病病毒Ⅰ型核酸(HIV-1 DNA)的稳定性、均一性,评价滤纸片干血斑HIV-1 DNA检测方法的敏感性、特异性.方法 套式PCR扩增HIV-1的env、gag、pol三区.不同环境条件下保存的滤纸片干血斑,分别在不同的时间段检测;滤纸片干血斑的中心及圆斑的上下左右4个边缘,随机打取5个2.5mm圆片用于检测.采自新疆现场的94份阴性样本和90份阳性样本,分别制成滤纸片干血斑样本和全血样本,比较两者的HIV-1DNA检测结果.结果 滤纸片干血斑-20℃或4℃放置1年或室温放置3个月,或在37℃放置两天或冻融2次,实验的敏感性未见下降;37℃放置3天或冻融3次,已经有样本不能检出.滤纸干血斑不同位点随机打取圆片扩增,4个样本中,中点均阳性,但在上点、左点、右点分别出现一份阴性结果.滤纸干血斑法和全血法检测HIV-1前病毒DNA比较,敏感性是96.1%,特异性是98.9%.结论 滤纸干血斑在室温条件下运输是可行的,推荐尽量靠近滤纸干血斑的中间位点打取圆片扩增;该方法操作简便、经济、敏感、特异.     

对二甲氨基苯甲醛纸片法测定尿中异菸肼、对氨柳酸的初步报告

作者试用对二甲氨基苯甲醛(P-dimethylamineBenzylaldehyde,DAB)纸片法测定尿中的异菸肼、对氨柳酸,作为专业人员巡回抽查监督化疗之用。现将初步结果报告如下: 一、DAB纸片制作法 1.对二甲氨基苯甲醛2g加于10％草酸100cc内,徐徐搅拌使其溶解,必要时可稍加温。 2.把切好的4×4cm的滤纸片(杭州新华牌滤纸)浸泡在配好的DAB试剂内,半小时后取出,在     

简易指血电泳筛选异常血红蛋白

方法1:滴指血4滴于滤纸上4℃保存。标本采后1个月内电泳,血红蛋白(Hb)带都清晰。用淀粉胶电泳时,剪取血迹滤纸片约8×4毫米~2,置玻片上加蒸馏水3滴,约5分钟后红细胞溶解,以双层吸水纸吸去余液后移置淀粉胶板之标本裂隙内。电泳槽内装1:20 Tris-EDTA-硼酸盐缓冲液,以5层浸湿的吸水纸作盐桥,电泳3小时。当电流强度为2毫安/厘米宽,则HbA于3小时泳动3厘米,并使异常Hb获得充分分离。电泳完毕,挑去标本纸片,用细线割取胶板染色,先加邻联甲苯胺无水乙醇液2分钟,吸除多余染液,加20％过氧化氢,Hb及血浆蛋白带染成绿-蓝色,再加邻甲苯胺甲醇液复染3分钟,流水冲洗,Hb带呈现紫蓝色。如欲永久保存标本,可     

应用ELISA双抗体夹心法测滤纸片所含鼠疫FI抗原

应用以鼠疫 FIAg 制备单克隆抗体(McAb)建立的 ELITA 双抗体夹心法测滤纸片上沾取的 FIAg,通过对121份含 FIAg 样品的检测,基本上确定了完成此试验的剂量与条件,同时以单克隆抗体反向血凝法(McAb-RIHA)作为对照,证明该法对测滤纸片含 FIAg 灵敏度较McAb-RIHA 高1000倍,另对5份非含 FI 材料试验,结果均为阴性,证明该法有较好的特异性,同时滤纸片采血在保存与携带上也优于常规采血清,该法应用于鼠疫疫源地调查、人间疫情判定等方面将会带来较好的结果。     

曼氏血吸虫感染的酶联免疫吸附试验:滤纸干血滴的耐久性

本文采用酶联免疫吸附试验(ELISA)研究曼氏血吸虫病人干滴血滤纸的保存期限。血样取自一名低排卵量(590个/ml)的患者和一名高排卵量(1260个/ml)的患者(Bell法检出)。按Bruce-Chwatt等1973年的方法制备成干滴血滤纸,室温干燥过夜后用5种方法保存:(1)30℃室温,60～80%相对湿度(RH);(2)30℃矽胶干燥器;(3)22℃,60～85%RH;(4)4℃冰箱;(5)-20℃冰箱。血清反应于8周内,每周测定一次,然后于第16周再测定一次。以过氧化物酶标记的抗人IgG结合物和邻苯二胺底物进行ELISA试     

滤纸干血片法IFA、ELISA检测包虫病抗体的观察

目前,在包虫病流调中,常因流行区偏远不具备冷藏设备,为静脉采血带来了很多困难。为此,我们进行了用滤纸血片替代静脉采血的研究,结果如下。一、材料和方法(一)检测标本1.用新华滤纸(定性,型号102),取耳垂血2滴,自然干燥后,室温浸泡2h 或4℃浸泡过夜。洗涤剂:0.15M、pH7.4、0.5%Tween 的 PBS/T。2.每个测试对象采滤纸血片同时均采静脉     

纸片法血浆皮质醇的直接放免测定

纸片法血浆皮质醇的直接放免测定是一种新的微量简易的测定方法。血浆样品滴在滤纸上,经60℃加热洗脱15分钟后即可直接进行放免测定,不需要再进行CH_2Cl_2提取。样品取血量仅为5μl。标准曲线范围是0～1000pg,最小可测量为10pg。批内CV=5.8％;批间CV=10.8％。与CH_2Cl_2抽提方法相比,相关系数r=0.97,P<0.001,(n=39)。样品在三种不同牌号滤     

宁夏新生儿脐带血TSH检测结果分析

1999和2003年在宁夏开展了新生儿TSH水平检测,现将结果报告如下。1材料与方法1.1材料来源:样品来自银川、石嘴山、吴忠、中卫、固原5市部分医院或保健院。1.2采样方法:产妇正常分娩切断脐带时,将专业采血滤纸的中央部分轻轻接触断端出血表面,血液被自然吸入滤纸,使滤纸正面与背面血斑面积基本一样大,直径1.5cm。血样在室温条件下自然干燥后,密封于塑料袋中置于4℃存放。1.3测定方法:第一次样品采用免疫放射分析法,TSH试剂盒及滤纸由中国原子能研究院生产。第二次采用酶联免疫吸附测定法,试剂盒由芬兰Labsystem公司生产。2结果1999年5市共…     

四种方法检查肠道寄生原虫的比较

1989年我们在安国县舍二村对1986年检出人毛滴虫的13户家庭50人和该村幼儿园19名幼儿,共收集69份新鲜粪便,同时应用4种方法进行原虫检查,结果报告如下: 1 试管滤纸培养法 基本与全国寄生虫分布调查所用方法相同,不同点是试验所用物品均经高压灭菌。标本接种后置25—30℃培养3—4d,取出滤纸条,继续培养到第7d。滤纸条取出时不用温水浸洗纸条,避免混浊的培养液影响原虫滋养体检出。     

实验室传代繁殖的大劣按蚊曼谷株和巴拉巴按蚊玻璃市型的酯酶图式

本文选择实验室饲养的巴拉巴按蚊玻璃市型和大劣按蚊曼谷株为材料,用薄膜电泳法测定其酯酶图式,以了解能否用生物化学的指标对两种按蚊进行鉴别。测定方法,以琼脂0.75g和聚乙烯吡咯烷酮2g加于100ml磷酸钾缓冲液中(pH6.8)溶解为介质分离酯酶,用10ml琼脂凝胶溶液制成0.1cm厚的13×15cm~2薄板。用日龄5天未吸过血成蚊,取单体标本放在一滴去离子蒸馏水中磨碎,将此液吸入滤纸片(1×5mm~2)置琼脂板上30分钟。移去纸片,用滤纸搭桥使与电极槽内磷酸缓冲液连接,在5℃冰箱中电泳90分钟,维持电流在30mA与电压300V。电泳后,用1%α和β醋酸萘酯丙酮液喷涂琼脂板,于室温中温育30分     

滤纸上干燥血标本放射免疫测定T_4及TSH法普查新生儿甲低

先天性甲状腺功能低下的早期诊断很重要,可以避免引起新生儿的脑损害。但从临床角度进行诊断往往很困难,其表现常模棱两可。因为有些病例临床症状出现得晚,当一旦有症状时已造成严重的后果。作者介绍一种诊断新生儿甲状腺功能低下的普查法。用滤纸上干燥的血标本进行放射免疫测定法来测定新生儿的血甲状腺素(T_4)和促甲状腺激素(TSH)。此方法作为常规,各院把有血的滤纸邮寄到中心实验室,     

酶联免疫吸附试验、放射免疫测定和粪便检查诊断曼氏血吸虫感染的比较

在西印度群岛从未经治疗的516例曼氏血吸虫病患者,取血和粪便进行了4种诊断方法的效果比较。将血液在滤纸上,每人三份,室温下干燥后,放-20℃保存。放射免疫测定(RIA)和标记系按Pelley(1977)的方法稍加改良后进行。以高度纯化的抗原(主要的血清抗原MSA_2)用~(125)碘以标记,测定抗血吸虫的抗体。从滤纸上剪取直径8.0mm的血滴置于600μl的生理盐水中(4℃)浸出过夜(相当于30μl血清)。用移液器吸取100μl浸液(约5μl血清),加入400μl含10%正常免血清的pH7.0生理盐水,内含2,000～3,000cpm~(125)I标记的MSA,(1μg),每一血     

直接免疫荧光抗体试验鉴定蚊胃血血源的研究

近年来,国内学者在改进蚊胃血血源鉴定方法方面进行了不少的研究。为探讨直接免疫荧光抗体试验(下称直接法)鉴定蚊胃血血源的效果,而进行此项研究,同时以胃血环状沉淀试验(下称沉淀法)对照比较,研究结果如下。材科与方法一、材料 1.蚊胃血标本:实验室饲养羽化4～6d饥饿24h大劣按蚊叮刺志愿者前臂吸饱血,然后在不同时间制备胃血滤纸标本;于海口市郊人、牛房采集吸饱血的三带喙库蚊制胃血滤纸标本。装入塑料袋,4℃密封保存。     

获得性金属β内酰胺酶表型检测法的研究

目的 探讨适用于临床微生物实验室常规初筛获得性金属β内酰胺酶(MBLs)的实验方法,为指导临床合理选择抗生素提供依据.方法 以EDTA为MBLs的抑制剂,以亚胺培南IMP和头孢他啶CAZ为MBLs的底物,采用双纸片增效法作MBLs初筛试验,将两种初筛试验的结果与聚合酶链反应PCR的结果进行比较分析.结果 应用PCR法,在70株耐IMP和或CAZ的鲍曼不动杆菌中检出VIM型MBLs阳性株4株,IMP型MBLs阳性株6株.IMP-EDTA纸片法的敏感性50%,特异性28.6%;CAZ-EDTA纸片的敏感性85.8%.特异性13.3%.结论 IPM-EDTA纸片法方法简便、结果可靠,可作为获得性MBL的初筛方法在临床微生物室日常工作中开展.     

纸片血清标本检测乙型肝炎病毒标志物及丙型肝炎抗体的应用

应用纸片血清标本浸泡提取法检测乙型肝炎病毒标志物(HBV-M)及丙型肝炎抗体(抗-HCV)进行了研究.386例纸片血清标本与新鲜血清标本对照结果完全相同.纸片血清标本经置32℃下20天和实地邮寄试验结果不受影响.对早期诊断和预防乙型肝炎及丙型肝炎具有重要意义.     

脑膜炎球菌抗原在A群脑膜炎球菌感染的诊断和治疗上的应用

在尼日利亚的200名A群脑膜炎球菌性脑膜炎患者中,用对流免疫电泳测定其血清和脑脊液中的脑膜炎球菌抗原。所用的抗血清能检出A群多糖体抗原的墁低极限为0.07微克/毫升。脑脊液标本收集于滤纸上干燥7～10天后用极小量蒸馏水洗脱,再进行对流电泳。A群脑膜炎球菌多糖体抗原在脑脊液和滤纸中,39℃可保存2周,但45℃时,1周后滴度即下     

用滤纸血片放射免疫分析(RIA)筛查农村新生儿甲状腺功能低下症初报

用滤纸血片 RIA 筛查了先天性甲功低下症,采集血片11819人,合格血片11092人,采血率占全年出生总数的50%,采血合格率为93.65%。11092人中有10人经两次纸片采血 T_4值均低于正常,又经血清 T4、TSH 检测,加上临床和 X 光检查,确定为先天性甲功低下两例,患病率为1/5500。这说明我市以普及碘盐为主的对碘缺乏症的综合防治措施是十分有效的。本文对9336例统计表明:出生后头半个月 T_4值除第三天偏低外基本平稳,以后随着日龄的增加呈阶梯形上升,并有显著差异。本文对采血、T_4值判定、假阳性、暂时性高 T_4血症,筛查方法与程序进行了讨论。     

纸片血清标本检测乙型肝炎病毒标志物及丙型肝炎抗炎的应用

应用纸片血清标本浸泡提取法检测乙型肝炎病毒标志物（ＨＢＶ－Ｍ）及丙型肝炎抗体（抗－ＨＣＶ）进行了研究。３８６例纸片血清标本与新鲜血新标本对照结果完全相同。纸片血清标本经置３２℃下２０天和实地邮寄试验结果不受影响。对早期诊断和预防乙型肝炎及丙型肝炎具有重要意义。