用单克隆抗体和基因扩增技术研究淋巴细胞白血病细胞起源

本研究采用系列单克隆抗体免疫酶方法(APAAP法)和体外基因扩增聚合酶链反应(PCR)技术,通过检测白血病细胞表面分化抗原及免疫球蛋白重链(IgH)和T细胞受体(TCR)γ、δ 基因重排,研究35例淋巴细胞白血病细胞起源。结果表明,20例表达B细胞表面标记,其中B-ALL15例,     

分化早期小儿急性白血病细胞免疫球蛋白和T细胞受体基因结构的变化

从29例免疫分型的小儿急性白血病中选出髓过氧化物酶染色阴性和不与细胞系相关或成熟细胞系相关的单克隆抗体反应的6例白血病细胞,进一步作免疫球蛋白(包括重链和κ轻链)和T细胞受体(包括δ、γ、β)基因结构的分析。所有6例均有IgH基因的重排,提示这些白血病细胞是β细胞来源。两例CD_(10)阴性和白病细胞.κ链基因没有重排,其中一例的TCRδ、γ、β基因也都处于胚系,另一例的TCRβ处于胚系。在CD_(10)阳性白血病细胞中,其中两例κ链基因丢失,TCR基因结构都有不同程度的变化(重排或丢失)。这些结果可能提示在CD_(10)阳性白血病细胞中能产生功能性IgH的重排,并可导致IgL和TCR基因结构的变化。     

小儿急性白血病的免疫球蛋白重链基因VDJ区重组及其部分序列分析

在Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹法分析的基础上用ＰＣＲ方法分析了２７例小儿急性白血病细胞的免疫球蛋白重链基因ＶＤＪ区的变化。６例未分化型白血病中５例有Ｖ＿Ｈ－Ｄ＿Ｈ－Ｊ＿Ｈ基因扩增带，提示已定向Ｂ系。１３例Ｂ系来源的白血病细胞中９例发生ＶＤＪ完全重排，４例Ｂ系来源和１例未分化型白血病ＰＣＲ无阳性扩增带而Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹法有重排带。１例普通型白血病ＰＣＲ有阳性扩增带而Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹法呈胚系。在１４例阳性病例中有１例出现二条扩增带呈双克隆性。１例Ｔ细胞性白血病和７例非淋系白血病均为阴性与ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹法结果一致，对２例未分化型，２例普遍型白血病进行顺序分析，发现它们的重排格局各不相同。     

淋巴细胞系和髓细胞系同时增殖的Ph~+急性混合白血病的bcr重排与c-abl基因表达

本文比较例有淋巴细胞系和髓细胞系幼稚细胞同时增殖的Ph~+急性混合白血病和一例CML混合急变的bcr重排和c-abl基因表达。两者都具有非T非B ALL免疫学表型,部分白血病细胞MPO(+),有Ig J_H基因重排。CML混合急     

T 细胞受体δ、γ基因在小儿急性白血病中的变化

本文在细胞形态,表面抗原分析的基础上,对20例小儿急性白血症细胞进行TCRδ和γ基因结构的分析。11例属分化早期的白血病中有9例发生TCRδ基因的重排和缺失,其中5例也有TCRγ基因的重排。在5例属非淋巴细胞系的白血病中有3例发生TCRδ基因的重排.3例粒细胞性白血病细胞的TCR基因(δ和γ)均为胚系。有一例细胞表型仅有CD_2表达的白血病细胞,其TCR 基因(δ和γ)也为胚系。结果还显示:TCRδ基因结构发生变化的白血病细胞均有CD_(10)抗原表达。研究提示:TCRδ基因的重排不显示严格的细胞特异性,但是TCR 基因的变化与淋巴细胞系白血病细胞某些表面抗原的表达存在某种联系。     

急性白血病非系限性分化抗原的动态研究

为探讨仅表达非系限性分化抗原的急性白血病的细胞起源，采用单克隆抗体免疫酶标和聚合酶链反应技术分析了１２例初诊时仅表达非系限性分化抗原的急性白血病化疗后免疫表型及免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）和Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）γ基因重排的变化。结果表明：初诊时仅表达ＣＤ３８抗原的５例急性白血病，化疗后３例出现Ｔ细胞相关抗原表达，并伴ＴＣＲγ基因重排；５例初诊时仅表达ＨＬＡ－ＤＲ或ＣＤ９的急性白血病，化疗后４例出现Ｂ细胞相关抗原表达，均伴有ＩｇＨ基因重排；２例无任何抗原表达者，化疗后１例表达Ｂ细胞相关抗原，另１例表达骨髓细胞相关抗原。提示免疫标志的动态研究，有助于初诊时免疫学无法分类急性白血病细胞起源的确定。     

用PCR分析30例急性淋巴细胞白血病的克隆演化

为了解急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）和Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）γ基因重排情况，应用ＰＣＲ技术对３０例急性淋巴细胞白血病初诊时及其中１０例复发后进行研究分析。结果表明：１５例Ｂ－ＡＬＬ中１３例具有ＩｇＨ基因重排，其中３例存在２条重排带，８例合并ＴＣＲγ基因重排；８例Ｔ－ＡＬＬ中６例具有ＴＣＲγ基因重排；３例Ｔ．Ｂ－ＡＬＬ具有ＩｇＨ和ＴＣＲγ基因双重排；４例Ｎｕｌ－ＡＬＬ中２例具有ＴＣＲγ基因重排。１０例复发后，７例具有相应的ＩｇＨ或ＴＣＲγ基因重排，２例丢失ＩｇＨ基因重排，１例获得ＴＣＲγ基因重排。以上事实表明在ＡＬＬ病程中存在白血病细胞克隆演化     

血液系统肿瘤患者外周血细胞IgH基因和TCRγ基因的检测及意义

检测各种血液系统肿瘤患者外周血细胞免疫球蛋白重链基因 (IgH )和T细胞受体γ基因 (TCRγ )克隆性重排并探讨其意义。通过多聚酶链式反应 (PCR )方法检测 32例非霍奇金淋巴瘤 (NHL )、 18例急性髓性白血病 (AML )、 2 4例多发性骨髓瘤 (MM )、 8例急性淋巴细胞白血病 (ALL )及 6例慢性淋巴细胞白血病 (CLL )患者外周血细胞IgH及TCRγ克隆性基因重排。结果表明 ,NHL、AML、MM、ALL及CLL患者中IgH克隆性重排率分别为 37 5 0 %、 2 2 2 2 %、 83 33%、 12 5 0 %和 16 6 7% ;TCRγ基因克隆性重排率分别为 6 2 5 0 %、 5 0 0 0 %、 5 4 17%、 5 0 0 0 %及 5 0 0 0 %。在B型、T型NHL中 ,IgH克隆性重排率分别为 31 5 8%及 6 6 6 7% ;TCRγ克隆性重排率分别为 47 37%及 6 6 6 7%。AML中IgH克隆性重排阳性者的初治完全缓解率(CR ) (5 0 0 0 % )与IgH重排阴性的初治CR率 (5 0 0 0 % )无显著差异 (P >0 0 5 )。TCRγ克隆性重排阳性者与阴性者的初治CR率 (均为 44 44 % )亦无显著差异 (P >0 0 5 )。IgH及TCRγ基因克隆性重排不具有细胞谱系的特异性 ,但通过检测外周血IgH、TCRγ克隆性基因重排对NHL有辅助诊断意义 ,并且可作为监测微小残留病壮 (MRD )的手段。     

用PCR检测难分类急性白血病基因重排

用ＰＣＲ检测难分类急性白血病基因重排王鲁群张明珙①宋素芹①马晓星迟翠芳（济南军区总医院，济南２５００３１）采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测１２例形态学和免疫学均难以分类急性白血病（ＵＡＬ）免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）和Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）γ基因重排，旨...     

BIOMED-2聚合酶链反应Ig基因重排对成熟非霍奇金B细胞淋巴瘤诊断的价值

目的 探讨BIOMED-2聚合酶链反应(PCR)在成熟非霍奇金B细胞淋巴瘤(B-NHL)诊断中的价值.方法 收集成熟B-NHL组织标本72例,其中弥漫性大B细胞淋巴瘤37例,黏膜相关淋巴组织结外边缘区淋巴瘤35例为研究对象,并以反应性增生病变25例作为对照.提取以上组织的DNA,并以PCR来检测其完整性和可扩增性,选取质量合格的DNA.85.6%(83/97)的样品DNA长度>300 bp,其中60例成熟B-NHL和23例反应性增生可用于BIOMED-2 PCR检测免疫球蛋白重链(IgH)和kappa轻链(IgK)基因重排的克隆性.结果 利用BIOMED-2 PCR检测的60例成熟B-NHL中,57例存在Ig基因的克隆性重排,其检测敏感性为95%,23例反应性增生病例中未出现Ig基因的克隆性重排,其检测特异性为100%.结论 BIOMED-2 PCR适用于石蜡包埋组织.该方法具有很高的敏感性和特异性,对成熟B-NHL诊断的辅助价值很高.     

用Southern印迹技术检测9种恶性淋巴瘤细胞系IgCλ基因的重排(英文)

成熟B细胞具有Ig重链和轻链的基因重排,而大多数非B细胞来源的造血细胞仍维持在胚系结构.这种Ig基因重排可作为一个敏感的特异指标,即使小于5%克隆性细胞群,也可证明其克隆性.淋巴瘤为恶性克隆起源的血液病,Ig基因的重排测定可以帮助其分型和预示早期复发.本文用Southern印迹技术分析人9 种恶性淋巴瘤细胞系,并于正常胚系DNA比较.这9种恶性淋巴瘤细胞系由美国国立癌症研究所提供,均为B细胞恶性淋巴瘤.实验结果表明,正常胚系DNA lgCλ基因表现为14Kb,8Kb,5Kb片断,SU-DHL-2细胞系表现为重排,比正常胚系细胞多出一个 4Kb片断,NU—DHL—1细胞系亦为重排,分别为13.5Kb,7Kb,4.9Kb和3Kb.Raji细胞系亦有3Kb重排,SB细胞系表现为13,5Kb,7Kb,4.7kb重排,Daudi细胞系亦是如此.8392细胞系缺失5Kb片断,仅SU-DHL-4,SU-DHL-5,PA-3细胞系维持胚系结构.每种细胞系个体的特异性重排是其恶性克隆起源的基因标志,这对于了解B淋巴细胞肿瘤生成,发展,演变的机制有重要意义.B 淋巴细胞起源的恶性肿瘤中,Cλ基因的重 排为20%～75%,而T淋巴细胞起源的恶性肿瘤中,Cλ基因的重排为0%.在髓系起源的细胞中亦无Cλ基因的重排,因此Cλ基因的重排可鉴别T,B细胞的起源和淋,粒细胞的起源.因为每种恶性克隆均有自己的Cλ基因的重排方式,这种个     

单纯表达CD38抗原难分类急性白血病细胞起源的研究

采用单克隆抗体免疫酶和聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，研究７例单纯表达ＣＤ３８抗原难分类急性白血病（ＵＡＬ）化疗前后免疫表型和免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）和Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）γ基因重排，结果表明：化疗前３例检测到ＴＣＲγ基因重排，化疗后４例表达Ｔ细胞分化抗原，并伴ＴＣＲγ基因重排；１例化疗后表达髓细胞抗原，无ＩｇＨ和ＴＣＲγ基因重排；２例化疗前后仅表达ＣＤ３８抗原，亦无ＩｇＨ和ＴＣＲγ基因重排。提示动态     

半巢式PCR联合Southern杂交检测白血病免疫球蛋白重链（IgH）基…

应用ＰＣＲ方法检测免疫球蛋白重链基因重排进行白血病微小残留病研究，应用半巢式ＰＣＲ法检测白血病患者ＩｇＨＣＤＲ－Ⅲ片段，７３．５％（２５／３４）急性淋巴细胞白血产现，７５％（３／４）慢性淋巴细胞白血病，１５．２％（５／３３）急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ，简称急非淋）和０％（０／１９）慢性粒细胞白血病（简称慢粒）丰Ｉdisplay status     

半巢式 PCR 联合 Southern 杂交检测白血病免疫球蛋白重链(IgH)基因重排

应用ＰＣＲ方法检测免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）基因重排可进行白血病微小残留病（ＭＲＤ）研究，应用半巢式ＰＣＲ法检测白血病患者ＩｇＨＣＤＲ－Ⅲ片段，７３．５％（２５／３４）急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ，简称急淋），７５％（３／４）慢性淋巴细胞白血病（ＣＬＬ，简称慢淋），１５．２％（５／３３）急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ，简称急非淋）和０％（０／１９）慢性粒细胞白血病（简称慢粒）存在ＩｇＨ基因重排，所有阳性病例都通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交加以证实，结果显示①半巢式ＰＣＲ较一次ＰＣＲ不仅灵敏度提高，而且在一定程度上能降低假阴性率。②ＩｇＨ重排并不只局限于Ｂ淋巴细胞白血病，还可出现于部分急非淋病例，其机理有待于进一步探讨。     

肺黏膜相关淋巴组织边缘区B细胞淋巴瘤及良性淋巴组织增生性疾病的临床病理分析

目的 研究肺原发性黏膜相关淋巴组织边缘区B细胞(MALT)淋巴瘤及良性淋巴组织增生性疾病的临床病理形态、免疫组织化学表型和B细胞重链基因重排,比较肺MALT淋巴瘤和良性淋巴组织增生性疾病的差异.方法 回顾性的分析原发性肺MALT淋巴瘤13例,7例肺良性淋巴组织增生性疾病资料.对标本行常规HE染色,EnVision免疫组织化学染色(抗体包括AE1/AE3、CD20、CD79α、CD3、CD5、CD10、CD21、bel-2、bcl-6、cyclinD-1)及免疫球蛋白重链IgH基因重排检测.结果 13例肺MALT淋巴瘤,细胞成分多样,分别由不同比例的小淋巴细胞样细胞、中心细胞样细胞、单核样B细胞组成,常伴有浆细胞分化.肿瘤细胞以弥漫性和滤泡边缘区排列为主,常见反应性淋巴滤泡和滤泡中心的植入.肿瘤细胞呈串珠状直接侵犯肺泡间隔和沿支气管血管束向周边及肺膜扩散.MALT淋巴瘤中,均未见坏死.9例可见肿瘤细胞侵犯血管壁,6例可见胸膜累及,2例肺门淋巴结侵犯.9例肺MALT淋巴瘤可见淋巴上皮样病变,免疫组织化学显示上皮细胞内的淋巴细胞CD20阳性,CD3阴性.7例肺良性淋巴组织增生性疾病,2例可见淋巴上皮样病变,免疫组织化学显示,其淋巴上皮样病变内的淋巴细胞,部分CD20阳性,部分CD3阳性.9例肺MALT淋巴瘤进行了免疫球蛋白重链IgH基因重排,8例阳性;7例良性淋巴组织增生性疾病均为阴性.结论 肺MALT淋巴瘤在细胞组成和排列上与其他部位结外MALT淋巴瘤相同,肿瘤细胞呈串珠状直接侵犯肺泡间隔和沿支气管血管束向周边及肺膜扩散.在肺内淋巴上皮样病变常见于MALT淋巴瘤,并有助于诊断,但并非其特异性病变,一些肺的反应性淋巴组织增生也可出现,用免疫组织化学有助于区别两种病变.免疫球蛋白重链IgH基因重排可以帮助鉴别肺MALT淋巴瘤和良性淋巴组织增生性疾病.     

宫颈淋巴瘤样病变与宫颈淋巴瘤的鉴别

目的探讨宫颈淋巴瘤样病变和宫颈淋巴瘤的临床病理特点及免疫球蛋白重链（IgH）基因重排在两者鉴别诊断上的价值。方法对10例宫颈淋巴瘤样病变和16例宫颈淋巴瘤进行临床资料分析和组织病理学观察,以免疫组织化学（EnVision法）检测B、T淋巴细胞标记物和免疫球蛋白轻链（κ,λ）的表达,并应用半套式聚合酶链反应方法检测了4例淋巴瘤样病变和4例淋巴瘤中IgH基因重排的情况。结果宫颈淋巴瘤样病变患者年龄24—54岁（中位年龄43岁）,临床多表现为宫颈糜烂或息肉,镜下观察可见表浅分布的、局灶或弥漫性免疫母细胞样大细胞浸润,伴淋巴细胞转化成熟现象和多型性炎性细胞浸润（多量成熟浆细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞）。宫颈淋巴瘤患者年龄28—78岁（中位年龄58岁）,临床表现为宫颈肿块或弥漫性宫颈肥大,镜下观察示12例弥漫性大B细胞淋巴瘤和4例滤泡性淋巴瘤,二者组织学形态分别以弥漫分布、形态单一的肿瘤性大淋巴细胞浸润和肿瘤性滤泡形成为特点,病灶中少有多型性炎性细胞浸润,也不出现淋巴细胞转化成熟现象。宫颈淋巴瘤样病变中,免疫母细胞样大细胞κ和λ染色结果欠满意。4例宫颈淋巴瘤病例和2例宫颈淋巴瘤样病变中检出单克隆性IgH基因重排。结论宫颈淋巴瘤样病变和淋巴瘤主要依据不同的临床和病理形态特点相互区分。IgH基因重排检测对于二者鉴别有帮助,但需注意部分良性病变也有单克隆性淋巴细胞增生。     

非霍奇金淋巴瘤的IgH和TCRδ基因重排

目的：探讨非霍奇金淋巴瘤（NHL）免疫球蛋白重链（IgH）和T细胞受体δ链（TCRδ）基因重排情况。方法：用半重叠式聚合酶链反应（PCR）方法检测IgH及TCRδ基因重排。结果：57例NHL中41例（72％）发生IgH基因重排，30例（53％）出现TCRδ基因重排。结论：检测克隆性基因重排可以作为诊断NHL有效基因标志，NHL中存在系列不忠实现象。     

用Southern印迹技术检测9种恶性淋巴瘤P细胞系lgCλ基因的重排

成熟B细胞具有Ig重链和轻链的基因重排，而大多数非B细胞来源的造血细胞仍维持在胚系结构．这种Ig基因重排可作为一个敏感的特异指标，即使小于5％克隆性细胞群，也可证明其克隆性．淋巴瘤为恶性克隆起源的血液病，Ig基因的重排测定可以帮助其分型和预示早期复发．本文用Southern印迹技术分析人9种恶性淋巴瘤细胞系，并于正常胚系DNA比较．这9种恶性淋巴瘤细胞系由美国国立癌症研究所提供．均为B细胞恶性淋巴瘤．实验结果表明，正常胚系DNA lgCλ基因表现为14Kb，8Kb，5Kb片断．SU—DHL-2细胞系表现为重排，比正常胚系细胞多出一个4Kb片断．NU—DHL—1细胞系亦为重排，分别为13．5Kb，7Kb，4．9Kb和3Kb．Raji细胞系亦有3Kb重排．SB细胞系表现为13．5Kb，7Kb，4．7kb重排。Daudi细胞系亦是如此．8392细胞系缺失5Kb片断．仅SU—DHL-4，SU—DHL-5．PA-3细胞系维持胚系结构．每种细胞系个体的特异性重排是其恶性克隆起源的基因标志．这对于了解B淋巴细胞肿瘤生成，发展．演变的机制有重要意义．B淋巴细胞起源的恶性肿瘤中。Cλ基因的重排为20％～75％，而T淋巴细胞起源的恶性肿瘤中，C2基因的重排为0％．在髓系起源的细胞中亦无Cλ基因的重排，因此Cλ基因的重排可鉴别T，B细胞的起源和淋，粒细胞的起源．因为每种恶性克隆均有自己的Cλ基因的重排方式．这种个体的特异性对于其本身和子细胞均是一种基因标志，利用它可以研究基因分型，克隆演化．判断治疗效果，监视复发与检测小残留疾病．尤其在这些细胞克隆缺乏明确的表型抗原时．与原代细胞比较，细胞系稳定性好，重复性高，可靠性强，尤其在发病机理，药物敏感性，耐药机理的研究中显示越来越重要的作用．     

B淋巴细胞增生性疑难病例中IgH基因克隆性重排的分析

目的 探讨IgH基因克隆性重排对B淋巴细胞增生性疑难病变的辅助诊断价值.方法 检测77例B淋巴细胞增生性疑难病例中IgH基因的克隆性重排情况,均采用BIOMED-2系统IgH克隆性试剂盒中FR1、FR2、FR3三组家族引物进行PCR及聚丙烯酰胺凝胶电泳,硝酸银染色后观察,并对照最终病理诊断进行分析.结果 77例病变的最终病理诊断:B淋巴细胞反应性增生12例,不能排除B淋巴细胞不典型增生或淋巴瘤20例,B细胞性淋巴瘤45例.三组中FR1、FR2和FR3至少有一个为阳性的比值分别为2/12、11/20(55%)和36/45(80%).B细胞性淋巴瘤中,FR1、FR2和FR3的阳性率分别为60%(27/45)、60%(27/45)、56%(25/45),其类型有边缘区B细胞性淋巴瘤20例(其中黏膜相关淋巴组织型结外边缘区淋巴瘤18例,结内边缘区淋巴瘤2例),弥漫性大B细胞淋巴瘤7例,滤泡性淋巴瘤7例,套细胞性淋巴瘤1例,Burkitt淋巴瘤1例,浆细胞瘤4例,不能分型5例.FR1、FR2和FR3三者检测均为阴性但仍诊断为淋巴瘤9例(20%),其中1例后来出现肝脏B细胞淋巴瘤.对IgH基因重排阳性的B淋巴细胞反应性增生和不典型增生14例的随访结果,4例重新取活检后诊断为B细胞性淋巴瘤,其中3例IgH基因重排检测为阳性.结论 联合检测IgH基因FR1、FR2和FR3克隆性重排对B淋巴细胞增生性疑难病变诊断有重要的辅助价值;对形态改变和免疫表型诊断淋巴瘤依据不足而基因重排阳性者,重取活检或随访有一定价值;对阴性病例有必要补充IgH基因重排及IgK和IgL基因重排的检测以提高检测敏感性.     

T细胞受体与白血病

<正> T、B淋巴细胞是人体特异性免疫反应中,两类主要的效应细胞,B细胞通过其表面的免疫球蛋白(Ig)对抗原的识别,发挥体液免疫作用,而T细胞则通过T细胞受体(TCR)对呈现在细胞表面的外来抗原进行识别,介导细胞免疫反应。本文着重介绍和分析白血病细胞中TCR基因的重排与表达的情况。