生物素标记DNA探针快速诊断胎儿性别

本文用生物素代替同位素标记人Y染色体特异性DNA探针PY3.4和人男、女性均具有的ALu探针,进行正常人外周血和胎儿绒毛DNA样本的性别诊断,减少同位素特有的放射性损害和污染以及半衰期短等缺点,此种技术较常规的染色体核型分析周期短、特异性强,可用于性连锁遗传病的产前基因诊断。     

用生物素标记Y特异DNA探针对一例Y染色体结构异常患者的研究

用生物素标记Y特异3.4kbDNA为探针,应用染色体原位杂交技术对一例表型异常、常规染色体显带技术为小Y染色体的患者进行了研充:该患者不能与3.4kbDNA杂交,与~3H标记探针的染色体原位杂交结果一致。进一步以生物素标记此探针对患者的基因组DNA进行Southern印迹杂交分析,患者缺少一部分可检测的男性特异性片段,结合其临床特征,提示该患者为Yq的中间缺失。     

牙龈卟啉菌全染色体探针的制备

（1）目的 探讨利用化学发光地高辛标记法制备牙龈卟啉菌47A-1的全染色体探针的方法并测定标记效率。（2）方法 采用苯酚-氯仿-溴化十六烷基三甲胺（CTAB）法制备牙龈卟啉菌47A-1基因组DNA,随机引物地高辛标记法制备核酸探针。在尼龙膜上直接点样,化学发光法检测。（3）结果 CTAB法可获得高质量的牙龈卟啉菌47A-1染色体DNA,地高辛标记0.3μg的牙龈卟啉菌核酸可获得10ng探针DNA,化学发光法检测最低可测出0.002pg标记探针的存在。（4）结论 随机引物地高辛标记法是快速获得牙龈卟啉菌全染色体探针的有效途径。     

生物素标记DNA探针的研制(简报)

目前国内外应用核酸分子杂交技术检测外源基因以诊断病毒等微生物的感染,探测内源基因的多态性和缺陷以诊断遗传病和研究肿瘤。其中基因探针(即DNA探针)是关键,常用~32P放射性同位素标记DNA作探针。由于~32P脱氧核苷三磷酸半衰期短、价钱昂贵、主要依靠进口、以及保存和防护运输等原因,使基因诊断技术不能广泛应用。本文参考国外经验,用生物素标记的DNA作探针巳获得成功. 生物素标记的DNA是已知片断,例如作者用生物素标记HBV-DNA及Y染色体特异的DNA等.标记方法既采用传统的缺口平移法,以Bio-ll-duTP(BRL公司产品)为标记底物,标记双链DNA还     

同一细胞非放射性双原位杂交信号显示技术

目的：探讨同一细胞内双原位杂交信号的显示技术。方法：以地高辛标记的polβ探针加生物素标记的表皮生长因子受体(EGFR)探针或生物素标记的wtp53探针对人食管癌Eca-109细胞同时进行原位杂交后,以anti-Dig-AP孵育,以AP-Red为底物显色,杂交信号呈桔红色或桔黄色细颗粒。继之以SA-AP孵育后以NBT／BCIP底物显色,杂交信号呈蓝紫色颗粒。结果：在同一细胞内可见桔黄色和蓝紫色颗粒双杂交信号。结论：应用非放射性双杂交信号的原位杂交技术可观察单个细胞内2种基因共表达的情况。     

用生物素标记Y特异DNA探针进行产前性别诊断

作者以流产绒毛和外周血淋巴细胞DNA为材料,通过Southern印迹杂交和点杂交,考察了用生物素标记Y特异DNA探针PHY2.1和Cos84进行产前性别诊断的可行性。结果表明:PHY2.1可用于Sou-thern或点杂交,而Cos84只可用于Southern杂交进行产前性别诊断。     

地高辛配基标记DNA打点杂交和原位杂交检测钩端螺旋体

应用一种新的非放射标记物地高辛配基(DIG)制备黄疸出血群赖型017株钩端螺旋体DNA(017DNA)探针,与~(32)P和光敏生物素标记017DNA探针对照打点杂交检测钩端螺旋体DNA。结果,上述三种探针均能检测到不同群型的问号状钩体,DIG探针的敏感性为0.1pg,~(32)P和光敏生物素探针的敏感性分别为1 pg和10pg。以上探针均不能检测双曲钩体patoc型Patocl株、细螺旋体illini型3065株,与其它致病菌及人白细胞DNA也无明显杂交信号。DIG标记017DNA探针原位杂交检测感染017株钩体的豚鼠系列组织切片和血浆涂片,以对比度极大的着色反应,清晰地显示各组织和血浆中的钩体形态。细螺旋体illini型3055探针和HBV-DNA探针不能检测到上述标本中的钩体.     

生物素标记探针检测外周血白细胞端粒长度的应用研究

目的建立生物素标记测定端粒DNA长度的方法,探讨其法医学应用价值．方法基因组DNA经RsaⅠ和HinfⅠ限制性内切酶消化,0.8％琼脂糖凝胶电泳,Southern印迹转移,以5′末端生物素标记寡核苷酸（TFAGGG）3为探针进行杂交,化学发光检测DNA谱带,与DNA标准分子量比较计算端粒长度．结果通过严格控制印迹转移条件、探针的工作浓度、杂交温度等主要影响因素,获得了比较好的杂交条带．结论生物素标记探针检测端粒DNA长度方法稳定、可靠,无放射污染,杂交信号明显．     

地高辛标记的DNA探针检测核酸疫苗中宿主菌基因组DNA的含量

将合成的引物与宿主菌的染色体模板DNA进行PCR扩增的核糖体DNA片段,以地高辛进行标记,与待测DNA样品进行点杂交,确定制备的乙肝DNA疫苗中其宿主菌基因组含量<15 ng/μg质粒DNA.这提示地高辛标记的探针用于检测基因组DNA的方法灵敏、可靠.     

FISH技术检测β—珠蛋白基因在小鼠MEL细胞染色体上的整合

目的：观察外源基因是否稳定地整合到小鼠ＭＥＬ细胞染色体上。方法：用生物素标记已知的目的片段作为探针,与待检测染色体杂交,观察是否有阳性信号。结果：观察２１０个中期染色体分裂相,其中有阳性荧光杂交信号的７３个。结论：染色体荧光原位杂交技术可有效地用于检测外源基因在染色体上的整合及状态。     

男性胃癌病人Y染色体缺失的原位杂交检测及其意义

建立了用染色体特异的探针检测细胞染色体畸变的原位杂交法。用生物素标记的ＰＹ３．４探针对１２例男性胃癌标本进行原位杂交，检测Ｙ染色体的丢失，我们发现：胃癌组织细胞的Ｙ染色体丢失率很高，Ｙ染色体丢失很可能是胃癌细胞的一个染色体标志，胃癌组织细胞的Ｙ染色体丢失与肿瘤的分化程度和肿瘤的转移有一定关系，这对胃癌的诊断和估计预后有一定帮助。     

用生物素标记Y特异DNA探针进行产前性别诊断

Using biotinylated human Y-specific DNA probe PHY2.1 and Cos 84, we carried out Southern and dot hybridization with human DNA from artificially aborted chorionic villi, and with DNA of peripheral lymphocytes from normal male and female. The results show that PHY2.1 may be applied in prenatal sex identification both by Southern and by dot hybridization but with Cos 84, only Southern hybridization could be used.     

人类的起源与迁移--来自Y染色体与线粒体的线索

Y染色体为性染色体，呈全男性遗传。线粒体DNA为母系遗传，Y染色体与线粒体的DNA多态性可作为可靠的遗传标记，为人类的起源与迁移提供证据。     

ZFY基因与性征异常疾病相关性研究

一组性征异常病人DNA经Eec RI酶切后,用~(32)P标记的ZFY探针进行Southern印迹杂交。结果发现:3例47,XXY Klinefelter综合症及1例45,XO Turner’s综合症有杂交信号,并首次发现了1例46,XX真两性畸形病人存在着Y特异性的DNA序列ZFY。提示,ZFY基因在性别决定过程中可能起某些作用或可能与性征发育异常有一定相关性。     

利用PCR，FISH对异常核型中额外染色体的证实

目的：检测在常规G显带下，45，X［115］/46，X+mar［45］/46，XY［29］异常核型中额外小染色体的来源。方法：利用PCR对SRY基因进行检测；对人的Y染色体进行标记，利用荧光原位杂交技术，在荧光显微镜下观察。结果：用Y染色体杂交，发现在额外小染色体上有荧光信号。结论：额外小染色体来源于Y染色体。     

小鼠性决定基因SRY探针的制备

目的 研究制备地高辛标记的小鼠性决定基因SRY探针,用于检测小鼠体内SRY基因表达的研究。方法 按已知的雄性小鼠Y染色体上性决定蛋白基因(SRY)的序列,请上海博亚公司合成四条oligoDNA,采用PCR技术连接并扩增,地高辛标记的方法制备基因探针。结果 用细胞原位杂交方法证实这种探针具有较高的敏感性和特异性。结论 小鼠性决定基因SRY探针的制备成功为进一步研究异体雄性小鼠骨髓移植到雌性小鼠体内后的分布和表达提供了实验基础。     

应用直接酪胺信号放大方法显示Y染色体荧光原位杂交信号

目的用直接酪胺信号放大(tyramine signal amplification,TSA)方法显示Y染色体荧光原位杂交信号,以提高检测脑组织切片Y染色体荧光原位杂交信号的灵敏度。方法以小鼠Y染色体重复序列pY353/B cDNA为模板标记RNA探针,以雌性小鼠为对照,用原位杂交方法杂交Y染色体特异性基因区域,分别用直接TSA方法和"三步抗体法"显示荧光原位杂交信号。通过计数Y染色体阳性细胞核占所有细胞核的百分率来计算TSA法和"三步抗体法"检测脑组织切片Y染色体荧光原位杂交信号的灵敏度,比较分析两种方法灵敏度的差异。结果"三步抗体法"在脑切片检测Y染色体阳性信号的灵敏度和特异度分别为85.67%和100%;直接TSA法在脑切片检测Y染色体阳性信号的灵敏度和特异度分别为92.82%和100%。结论TSA方法检测脑组织切片Y染色体荧光原位杂交信号的灵敏度比"三步抗体"法有显著的提高,可以用于脑内追踪和分析骨髓干细胞的迁移规律。