抗EB病毒口服液对EB病毒抗原表达的抑制作用及其细胞毒作用

目的 观察抗EB(Epstein-Barr)病毒口服液对EB病毒抗原表达的影响及对鼻咽癌CNE2细胞的细胞毒作用。方法 用间接荧光法测定抗EB病毒口服液对Raji细胞早期抗原(early antigen，EA)表达及B95-8细胞病毒壳抗原(virus capsid antigen，VCA)表达的影响；用MTT法测定其对鼻咽癌CNE2细胞的细胞毒作用。结果 抗EB病毒口服液在无毒的浓度下，对Raji细胞EB病毒EA抗原表达有较强的抑制作用，其IC50值为0．667mg／mL：对B95-8细胞EB病毒VCA抗原表达有较强的抑制作用。其IC50值为0．89mg／mL；对正丁酸钠激发的B95-8细胞EB病毒VCA抗原表达亦有较强的抑制作用，其IC50为1．1mg/mL。抗EB病毒口服液对人鼻咽癌细胞CNE2的IC50为7．57mg／mL。结论 抗EB病毒口服液能抑制EB病毒抗原的表达,在较高的浓度下对鼻咽癌细胞CNE2具细胞毒作用。     

黄芪抑制EB病毒壳抗原在体外细胞中表达的作用

目的：探讨黄芪抑制EB病毒（EBV）壳抗原在体外细胞中表达的作用。方法：采用间接免疫酶法研究黄芪提取液对B95－8细胞壳抗原表达的抑制作用。结果：无毒性浓度的黄芪提取液对巴豆油。正丁酸联合激发的EB病毒壳抗原表达有明显抑制作用。抑制率随药物浓度增加而提高,结论：黄芪抑制EBV壳抗原表达效果好,有望在鼻咽癌预防方面起一定作用。     

EB病毒壳抗原抗体定性检测在鼻咽癌筛查中的作用

目的研究EB病毒壳抗原抗体定性检测在鼻咽癌筛查中的作用。方法选取我院2011年1月具有广州市户籍健康查体者血清2107份,采用酶联免疫法定性检测EB病毒壳抗原抗体表达,对于EB病毒壳抗原抗体阳性者行间接鼻咽镜检查,必要时行鼻内镜下鼻咽活检。结果 EB病毒壳抗原抗体阳性血清601份,阳性率为28.5%;其中男性388份,阳性率为30.3%;女性213份,阳性率为25.8%。189人完成间接鼻咽镜检查,2人经活检证实为鼻咽癌。结论定性检测EB病毒壳抗原抗体诊断价值有限,不适合用于鼻咽癌筛查。     

EB病毒壳抗原在大肠杆菌中的表达与应用

目的;获得足够的ＥＢ病毒壳抗原,建立ＥＬＩＳＡ方法用于鼻咽癌的诊断,方法：将ＢＡＬＦ４基因克隆进入载体ｐＵＲ２９１,在大肠杆菌中表达ＥＢ病毒壳抗原与β－半乳糖苷酶的融合蛋白,并通过ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ离子交换柱层析对融合蛋白进行纯化,将纯化的蛋白用于ＥＬＩＳＡ方法检测人血清中的ＩｇＧ／ＶＣＡ和ＩｇＡ／ＶＣＡ抗体,用带有ｐＵＲ２９１质粒的宿主菌裂解液吸收待血清中的抗β－半     

EB病毒壳抗原在大肠杆菌中的表达与应用

获得足够的ＥＢ病毒壳抗原,建立ＥＬＩＳＡ方法用于鼻咽癌的诊断。方法：将 ＢＡＬＦ４基因克隆进入 载体ｐＵＲ２９１,在大肠杆菌中表达ＥＢ病毒壳抗原与β－半乳糖苷酶的融合蛋白,并通过ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ　Ｆａｓｔ　Ｆｌｏｗ离子 交换柱层析对融合蛋白进行纯化,将纯化的蛋白用于 ＥＬＩＳＡ方法检测人血清中的ＩｇＧ／ＶＣＡ和 ＩｇＡ／ＶＣＡ抗体,用带 有ｐＵＲ２９１质粒的宿主菌裂解液吸收待检血清中的抗β－半乳糖苷酶抗体。结果：ＥＬＩＳＡ方法与免疫荧光方法检测的 结果呈正相关（ｒ＝０．６２３６,Ｐ＜０．００１;ｒ＝０．９２２５,Ｐ＜０．００１）。免疫荧光方法检测为阳性的血清,ＥＬＩＳＡ检测均为 阳性;ＩｇＧ／ＶＣＡ和ＩｇＡ／ＶＣＡ抗体的几何平均滴度（ＧＭＴ）分别是免疫荧光方法的１３倍和１５倍。在４０份免疫荧光检 测ＩｇＡ／ＶＣＡ阴性的血清中,ＥＬＩＳＡ检测有３例阳性,表明ＥＬＩＳＡ方法比免疫荧光方法更敏感。结论：在原核系统中 表达抗原,为ＥＬＩＳＡ方法在鼻咽癌的诊断和大规模血清学普查中的应用提供了一个有效手段。     

鼻咽癌血清中EB病毒核抗原-1和核抗原-2抗体的研究

用抗补体免疫荧光法检测鼻咽癌患者和对照人群中EB病毒核抗原-1(EBNA-1)和EB病毒核抗原-2(EBNA-2)抗体的水平。鼻咽癌组中两种抗体滴度都升高,以EBNA-1抗体上升明显;且EBNA-1抗体与总EBNA抗体水平的变化趋势相一致。鼻咽增生性病变组中EBNA-2抗体略占优势,该组中EBNA-2抗体水平升高可能与潜伏状态的EB病毒激活或再感染的早期阶段有关。     

EB病毒四项抗体联合EB病毒DNA检测在鼻咽癌早期诊断中的应用价值

目的 探究EB病毒（Epstein-Barr virus,EBV）四项抗体联合EBV-DNA检测在鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC）早期诊断中的临床应用价值。方法 选取2021年1—12月三峡大学第一临床医学院（宜昌市中心人民医院）耳鼻咽喉头颈外科收治的鼻咽肿物患者71例,其中经鼻咽活检确诊为NPC的53例患者设为NPC组,确诊为非NPC的18例患者设为非NPC组,另选择同期健康体检者50例设为对照组。各组均行EBV四项抗体及EBV-DNA检测,分析联合检测对NPC的早期诊断价值。结果 NPC组衣壳抗原（VCA）-IgM阳性率高于对照组（P<0.05）;NPC组VCA-IgG、早期抗原（EA）-IgG、核抗原（NA）-IgG、EBV-DNA阳性率高于非NPC组及对照组（P<0.05）。随着肿瘤分期增高,NPC患者的EA-IgG、NA-IgG、EBV-DNA阳性率明显升高（P<0.05）,Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期患者的EA-IgG、EBV-DNA阳性率明显高于Ⅰ期患者（P<0.05）。EBV四项抗体与DNA联合检测诊断NPC的敏感度（96....     

EB病毒核抗原1优势表位区段抗原的克隆表达及其在鼻咽癌诊断中的应用

目的制备高活性EB病毒核抗原1(Epstein-Barr virus nuclear antigen 1, EBNA1)的优势表位区段抗原,并初步评价该抗原在鼻咽癌诊断中的应用价值。方法利用生物学软件BIOSUN分析EBNA1抗原的B细胞表位分布,并从中选取含有优势表位的抗原区段。然后利用分子生物学技术构建含有优势表位区段序列的原核表达质粒并进行表达,获得纯化优势表位抗原,采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)初步评价优势表位区段抗原的检测性能。结果成功构建含有优势表位抗原区段序列的原核表达质粒,获得了可溶性表达的EBNA1优势表位区段抗原NA-2(401~641 aa)。通过间接ELISA法对小量样本进行验证,确定NA-2抗原针对EBNA1-IgA抗体具有较高的抗原活性和特异性,较EBNA1-IgG和EBNA1-IgM抗体而言,能够较好地区分鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma, NPC)和健康对照样本。放大样本量进行检测,基于NA-2抗原的EBNA1-IgA抗体间接ELISA方法检测灵敏度和特异性分别为90.38%和91.58%,EBNA1-IgA抗体检测的AUC值为0.942。结论获得EBNA1优势表位区段抗原NA-2,该抗原是优选的可以用于EBNA1-IgA检测的抗原,利用该抗原所建立的间接ELISA检测方法可以很好地区分鼻咽癌患者和健康对照。     

潮汕地区鼻咽癌患者的临床病理和EB病毒血压血清学分析

本文报道潮汕地区858例鼻咽癌患者的临床病理和EB病毒的血清学检测结果，显示：（1）男女比例为2．55：1。平均年龄为44．64岁，发病高峰女性在40－岁组，男性在50－岁组。（2）绝大部份病例都是低分化鳞癌，泡状核细胞癌仅占3％，高分化鳞癌仅有3例。癌组织中都有或多或少淋巴类细胞浸润，多数为中等量。（3）就诊病例绝大部分为Ⅲ期，Ⅰ，Ⅱ期少见（13．1％）。（4）87．8病例血清IgA/vcA阳性，GMT为1：30．3，且随病情进展滴度水平相应增高，IgA/VCA阳性患者中，IgA/EA阳性率为58．7％，GMT为1：16．3，也是随病情的发展，滴度水平逐渐升高。     

带EB病毒膜抗原基因痘苗病毒的构建和表达

以痘苗病毒天坛株为载体,构建表达EB病毒膜抗原的重组痘苗病毒株。在重组病毒的感染细胞膜上表达病毒的膜抗原。该抗原免疫家兔能产生抗体。     

The Induction of Epstein-Barr Virus Early Antigen Expression in Raji Cells by GSM Mobile Phone Radiation

Mobile phones are widely used nowadays and there have been many reports suspecting mobile phone radiation‐induced cancer during the past few years[1‐5].But the results to date have given no consistent or convincing evidence of a causal relation between radiofrequency field exposure and cancer risks[6‐7].On May31,2011,International Agency for Research on Cancer(IARC),which is affiliated with World Health Organization(WHO),     

Epstein-Barr病毒DNA多聚酶基因扩增和表达载体构建

【目的】扩增Epstein Barr病毒 (EBV)DNA多聚酶基因 ,构建高效表达载体。【方法】根据EBV全基因序列 ,在EBVDNA多聚酶基因的 3′、5′端设计一对附加EcoRⅠ和HindⅢ酶切位点的特异性引物 ,以B95 8细胞DNA为模板 ,采用改良PCR方法扩增出EBVDNA多聚酶基因 (3 0 44bp)。用EcoRⅠ和HindⅢ酶切该基因片断并克隆至表达载体 pMAL p2 ,采用蓝白斑试验筛选阳性菌落。EcoRⅠ和HindⅢ酶切分析、鉴定重组体 pEBP。【结果】通过电泳鉴定 ,PCR产物为 3 0 44bp ,与EBVDNA多聚酶基因大小一致。经蓝白斑试验及限制性DNA内切酶分析 ,成功地筛选到EBVDNA多聚酶基因重组表达质粒 pEBP。【结论】本实验成功地扩增出完整EBVDNA多聚酶基因 ,并构建了高效表达重组体 ,为进一步在体外表达、制备EBVDNA多聚酶蛋白奠定了基础。     

宫颈鳞状上皮内瘤变中人乳头状瘤病毒L1壳蛋白和磷酸化组蛋白H3的表达及意义

目的 研究人乳头状瘤病毒L1(HPV-L1)壳蛋白及磷酸化组蛋白H3(PHH3)在宫颈鳞状上皮内瘤变中的表达及对宫颈病变转归的预测价值.方法 选择2013年1月至2014年7月在重庆市第五人民医院病理科诊断新柏氏液基细胞学(TCT)异常且高危人乳头状瘤病毒(HR-HPV)检测阳性的病例共234例,对入选患者进行宫颈活检,以病理组织学结果作为标准进行分组;同时,检测其HPV-L1壳蛋白、PHH3的表达情况,并进行相关性分析;对其中随访到的103例患者进行HR-HPV转阴分析. 结果 慢性炎症组和CINⅠ组的HPV-L1阳性率高于CINⅡ~Ⅲ组和SCC组(P<0.01);PHH3阳性率SCC组高于其他3组(P<0.05),CINⅡ~Ⅲ组高于慢性炎症组和CINⅠ组(P<0.01),CINⅠ组高于慢性炎症组(P<0.01);HPV-L1、PHH3表达呈负相关;随访病例CINⅠ和CIN≥Ⅱ患者中,HPV-L1(+)/PHH3(-)组的转阴率高于其他3组.结论 HPV-L1壳蛋白联合检测PHH3可作为诊断及预测宫颈鳞状上皮内瘤变的有效指标.     

CEA单链抗体表达质粒构建及产物纯化

目的单链抗体基因的构建并在大肠杆菌中进行表达以及表达产物的纯化研究。　方法采用重组PCR技术将已获得的抗癌胚抗原 (CEA)鼠源单克隆抗体E7B10 重、轻链可变区基因 (VH、Vk)经 (Gly4 Ser) 3 编码的寡核苷酸拼接成单链抗体基因 ,并在大肠杆菌中表达了单链抗体C端融合 6×His蛋白 ,表达产物经Ni2 -IDASepharose 6B亲和柱纯化。　 结果表达的融合蛋白在胞内主要以可溶性存在 ,其表达量达到菌体总蛋白的 10 % ,SDS -PAGE和Western印迹图谱显示表达产物分子量为 2 7kd ,与其基因编码蛋白的理论推算值相符。表达产物经Ni2 -IDASepharose 6B亲和柱纯化 ,纯度可达 90 %以上 ,得率为 0 .8mg/ 10 0ml。　 结论纯化后的融合蛋白具有CEA结合活力 ,其亲和常数为 5 .4× 10 7/M(抗体结合浓度 ) ,略低于其亲本单抗E7B10 2 .7× 10 9/M。     

Expression and Purification of Recombinant Hepatitis Delta Virus (HDV) Antigen for Use in a Diagnostic ELISA for HDV Infection Using the High-Density Fermentation Strategy in Escherichia coli

Objective Hepatitis Delt a Virus (HDV) antigen is widely used as a capture antigen in ELISAs for the identification of HDV infection;large amounts of recombinant HDV antigen with active antigenicity are required for this purpose.
Methods Reconstruct the gene of HDV antigen based on the bias code of Escherichia coli, the recombinant protein expresses by high-density fermentation with fed-batch feeding strategy, and purify by immobilized metal chromatography. The sensitivity and specificity of this antigen detect by ELISA method.
Results The expression of HDV antigen can reach 20%of the total cell mass in the soluble form. The recombinant HDV antigen can be conveniently purified (98%) by immobilized metal ion affinity chromatography (IMAC) using the interaction between a His-tag and nickel ions. Production of recombinant HDV antigen can reach 0.5 g/L under conditions of high-density cell fermentation. Applied to the diagnostic ELISA method, the recombinant HDV antigen shows excellent sensitivity (97%for IgM and 100%for IgG) and specificity (100%for IgG and IgM) for the detection of anti-HDV antibodies.
Conclusion Expression and purification the recombinant HDV antigen as a candidate protein for application in a diagnostic ELISA for HDV infection. Large-scale production of the protein can be achieved using the high-density fermentation strategy.     

鼻咽癌患者血清中抗Epstein-Barr病毒特异性DNA酶抗体检测方法的探讨

本文报道了鼻咽癌患者血清中抗Epstein-Barr病毒特异性DNA酶(EBV-DNase)抗体的检测方法,并对影响检测结果的几种因素进行了探讨。用抗酶率来表示抗体滴度可在0.08～0.20UEBV-DNase范围内进行检测,使实验条件容易控制。 作者对149例鼻咽癌患者和70例健康人血清标本的抗酶率进行了测定。结果表明抗EBV-DNase抗体与EA-IgA有显著的相关性。抗酶率与EA-IgA和VCA-IgA滴度的相关系数分别为0.78和0.66。     

结核分支杆菌Ag85B基因在大肠杆菌中的高效表达

目的 通过结核分支杆菌Ag85B蛋白编码基因在大肠杆菌中稳定表达，以获得大量纯化的Ag85B蛋白。方法 采用DNA重组技术构建结核分支杆菌Ag85B基因的表达载体，双酶切和聚合酶链反应(PCR)鉴定重组子，阳性重组子转化大肠杆菌，并诱导表达外源蛋白。十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)鉴定Ag85B蛋白抗原在大肠杆菌中的表达，对染色的凝胶扫描，以测定目的蛋白表达水平。结果 菌体蛋白经SDSPAGE，含阳性重组质粒的菌体蛋白中出现一条新蛋白带，表达量占菌体总蛋白的33％～38％。Ag85B蛋白抗原在大肠杆菌中表达方式主要是包涵体形式。结论 构建的大肠杆菌重组体能高效表达结核分支杆菌Ag85B蛋白抗原。     

In Vitro Expression of Hepatitis C Virus Non-structure 5 Antigen in the HepG2 Cell Line

ItisofgreatsignificancetoestablishasensitivepropagationsystemofHCVinvitroforstudyingthefeaturesofHCV,pathogenesisofHepatitisC,thetreatmentofanti--virusandstudyofvaccine.Wede-tectedthepositiveandnegativelineofHCVinTlymphcellsofhumaninndroinpreviousstudyLI],andpresentedinthispaPeristhefurtherstudyoninvljroexpressionofHCV.lMATERMisANDMETHODS1'1PositiveInocuIumsofHCVRNATheserumofHCVRNAwith1evelof2X10'copy/mlwasselected,anddefinedbyfluorescentquantificationmethed(Thereagentkitwa…