同型半胱氨酸诱导ECV304细胞氧化损伤研究

探讨同型半胱氨酸 (Hcy)诱导人脐带静脉内皮细胞株———ECV30 4细胞氧化损伤的机制。用含不同剂量Hcy(0 0 5— 2 0 0mmol L)的培养基培养细胞 1 2小时以后 ,以分光光度比色法分别测定细胞内丙二醛含量和超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶活力的改变。以荧光显色法测定细胞内活性氧产生的改变。结果表明小剂量 (0 0 5～ 0 1 0mmol L)Hcy可明显的促进氧化损伤 ,促使细胞内MDA含量增加和细胞内活性氧的产生 ,并显著降低细胞内除过氧化氢酶以外的其它抗氧化酶 (超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶 )的活性。结论认为Hcy可能通过诱导细胞氧化损伤而损害血管内皮细胞     

同型半胱氨酸致细胞凋亡与畸胎发生的关系

为探讨胚胎细胞凋亡在同型半胱氨酸（ｈｏｍ ｏｃｙｓｔｅｉｎｅ, Ｈ Ｃ Ｙ）致胚胎神经管畸形和先天性心脏畸形中的作用,作者建立了２种鸡胚胎定位注射技术,观察 Ｈ Ｃ Ｙ 对６日龄胚胎的发育毒性。采用流式细胞仪、组织病理、透射电镜、原位末端标记、甲绿 派若宁双染 Ｄ Ｎ Ａ 和 Ｒ Ｎ Ａ 方法,探讨 Ｈ Ｃ Ｙ 激发细胞凋亡在畸胎发生中的作用。应用 Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ法检测胚胎血浆总 Ｈ Ｃ Ｙ 水平的变化。结果不同位点微注射 Ｈ Ｃ Ｙ（４～８μｍ ｏｌ／胚胎）后,均可造成胚胎中枢神经系统和心脏畸形,但其所致后果不同。畸形的主要表现是异位心、心包积液、心内膜垫缺损、脑膨出、脑裂和小头等,其它表现还有体位异常、发育迟缓和死亡。 Ｈ Ｃ Ｙ 能明显干扰胚胎细胞周期,抑制胚胎细胞 Ｄ Ｎ Ａ 和 Ｒ Ｎ Ａ 的合成。在胚胎脑和心脏区域,观察到凋亡的神经细胞、心肌细胞及血管内皮细胞等,均明显高于正常组。发现 Ｈ Ｃ Ｙ 所致细胞线粒体的变异（例如：线粒体肿胀、气球样变、嵴损伤及电子密度增高等）与胚胎细胞凋亡关系密切。胚外膜滴注 Ｈ Ｃ Ｙ 后,胚胎血浆 Ｈ Ｃ Ｙ 在１２０分钟时达高峰值（８０５８μｍ ｏｌ／ Ｌ）,显著高于正常对照组;同时滴注叶酸（５μｇ／胚胎）可明显?     

S-腺苷蛋氨酸和叶酸抑制同型半胱氨酸诱导的海马神经细胞凋亡

目的研究S-腺苷蛋氨酸和叶酸抑制同型半胱氨酸诱导的海马神经细胞凋亡作用及其相关机制。方法用同型半胱氨酸、S-腺苷蛋氨酸和叶酸处理体外培养的海马神经细胞,观察神经细胞的凋亡情况,以及凋亡相关蛋白的表达变化。结果用250μmol/L同型半胱氨酸作用4h可使神经细胞凋亡率显著升高,并呈时间依赖性。甲基供体S-腺苷蛋氨酸和叶酸可显著抑制同型半胱氨酸引起的神经细胞凋亡。同型半胱氨酸可显著促进凋亡相关蛋白P53、Bax的表达,抑制Bcl-2的表达。S-腺苷蛋氨酸和叶酸可抑制同型半胱氨酸引起的凋亡相关蛋白表达的改变。结论S-腺苷蛋氨酸和叶酸可显著抑制同型半胱氨酸引起的神经细胞凋亡,凋亡相关蛋白表达的变化可能是S-腺苷蛋氨酸和叶酸作用的分子机制之一。     

血浆同型半胱氨酸与急性脑梗死关系的临床研究

目的探讨血浆同型半胱氨酸（Hcy）与急性脑梗死的关系及其临床意义。方法86例急性脑梗死患者（急性脑梗死组）和同期66例体检正常的健康者（对照组）采用荧光偏振免疫分析法测定血浆Hcy，采用化学发光法测定叶酸和维生素B12，并将结果进行比较。结果急性脑梗死组血浆Hcy为（20．08±8．72）μmol／L，对照组为（12．50±2．20）μmol／L，两组比较差异有统计学意义（P〈0．01）；急性脑梗死组血浆叶酸为（4．98±5．01）μg／L，对照组为（7．68±2．02）μg／L，两组比较差异有统计学意义（P〈0．01）；急性脑梗死组血浆维生素B12为（227．39±127．89）pmol／L，对照组为（311．64±152．15）pmol／L，两组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论急性脑梗死患者血浆Hcy是升高的，而血浆叶酸和维生素B12呈下降趋势，Hcy是急性脑梗死的独立危险因素。     

同型半胱氨酸诱导内皮细胞凋亡及叶酸的拮抗机制———Caspase3及其抑制蛋白c-IAP1和c-IAP2的作用

目的　本研究探讨同型半胱氨酸 (Hcy)致内皮细胞凋亡的途径以及叶酸拮抗Hcy的机制。方法　Hcy、叶酸或二者联合处理人脐静脉内皮细胞 (HUVEC) 2 4小时后 ,用AnnxinV染色加流式细胞术及基因组DNA电泳检测DNAladder了解细胞凋亡状态 ;RT PCR和蛋白质印迹技术检测caspase3、c IAP1和c IAP2的mRNA和蛋白质水平。结果　 0 3mmol L和 3 0mmol L的Hcy均导致HUVEC凋亡 ,Hcy浓度高时凋亡细胞数较高 ,并伴有caspase3表达和活化增强 ,以及c IAP2的mRNA和蛋白质水平降低 ;叶酸可上调c IAP2的表达。结论　Hcy诱导HUVEC凋亡 ,此种作用可能涉及caspase3相关途径。叶酸可促进c IAP 2表达 ,从而部分拮抗Hcy的作用。     

诱导胃癌细胞凋亡中天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶的表达

目的　研究天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 (caspase 8)在维生素E琥珀酸酯 (VES)诱导胃癌细胞凋亡过程中的作用。方法　以人胃癌SGC 790 1细胞作为靶细胞 ,采用WesternBlot法、荧光分光光度法、DAPI染色法探讨caspase 8在VES诱导SGC 790 1细胞凋亡过程中的表达和活性。结果　经 5、10、2 0mg/LVES处理后 ,细胞中caspase 8蛋白表达增加 ,caspase 8活性分别为 ( 17 83±1 82 )U和 ( 33 74± 2 6 5 )U、( 5 2 34± 3 10 )U ,均呈剂量 效应关系 ;用caspase 8抑制剂z 异亮氨酸 谷氨酸 苏氨酸 天冬氨酸 (IETD fmk)处理SGC 790 1细胞后 ,降低了VES诱导的细胞凋亡率及caspase 8的活性。结论　caspase 8是VES诱导SGC 790 1细胞凋亡的重要参与者。     

同型半胱氨酸与脑梗死关系的实验研究

目的探讨血浆同型半胱氨酸和脑梗死之间的关系。方法测定120例脑梗死患者及41例健康对照者的血浆同型半胱氨酸、维生素B12和叶酸水平。结果脑梗死组的血浆同型半胱氨酸水平(17.15±4.63)μmol/L显著高于对照组(10.12±2.62)μmol/L,P<0.01;血浆同型半胱氨酸水平与叶酸和维生素B12均呈负相关;男女患者之间同型半胱氨酸的差异有显著性(P<0.01);高血压脑梗死患者的同型半胱氨酸水平高于单纯脑梗死患者(P<0.01)。结论同型半胱氨酸是脑梗死的一个重要发病因素,血浆同型光胱氨酸水平与叶酸和维生素B12均呈负相关,雌激素水平对血浆同型半胱氨酸也有影响,高同型半胱氨酸血症与高血压性脑梗死有关。     

血浆同型半胱氨酸与高血压病的关系探讨

目的探讨同型半胱氨酸、叶酸和维生素B12水平变化与高血压病的关系。方法用生物酶学法和平衡竞争放射免疫法检测80例高血压病患者血中同型半胱氨酸、叶酸、维生素B12水平,并与30例健康体检者进行对照。结果脑血管疾病患者血清中同型半胱氨酸含量明显高于健康对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）;叶酸和维生素B12水平明显低于健康对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论高同型半胱氨酸血症为高血压病发病的危险因素之一,并与叶酸和维生素B。2水平下降有关。     

叶酸抑制同型半胱氨酸诱导大鼠原代神经元凋亡的作用

目的 观察叶酸对同型半胱氨酸诱导的大鼠原代神经元凋亡的影响,并探讨其可能的机制。方法 分离24 h内新生Sprague-Dawley(SD)大鼠大脑海马组织,于37℃、5%CO2条件下进行原代神经元纯化培养。将培养4 d纯化后的原代神经元根据叶酸浓度以及是否添加100μmol/L同型半胱氨酸（Homocysteine, Hcy）分为8组：（1）叶酸缺乏组（0μmol/L）,(2)叶酸正常组（10μmol/L）,(3)叶酸低添加组（20μmol/L）,(4)叶酸高添加组（40μmol/L）,(5)叶酸缺乏+Hcy组,（6）叶酸正常+Hcy组,（7）叶酸低添加+Hcy组,（8）叶酸高添加+Hcy组,干预培养8 d后,检测各组原代神经元的活力、凋亡以及端粒损伤情况。每组设置3个复孔,至少进行3次独立重复实验。结果 在未添加Hcy的4组中,与叶酸缺乏组相比,叶酸正常组及两添加组细胞活力升高,凋亡率降低,端粒损伤水平降低（P<0.05）。与未添加Hcy的4组比较,添加Hcy的4组细胞活力降低,凋亡增加,端粒损伤水平显著升高（P<0.05）。与叶酸正常+Hcy组比较,叶酸缺乏+Hcy组...     

血浆同型半胱氨酸与急性脑梗死关系的临床研究

目的 探讨血浆同型半胱氨酸(Hcy)与急性脑梗死的关系及其临床意义.方法 86例急性脑梗死患者(急性脑梗死组)和同期66例体检正常的健康者(对照组)采用荧光偏振免疫分析法测定血浆Hcy,采用化学发光法测定叶酸和维生素B12,并将结果进行比较.结果 急性脑梗死组血浆Hcy为(20.08±8.72)μmol/L,对照组为(12.50±2.20)μmol/L,两组比较差异有统计学意义(P＜0.01);急性脑梗死组血浆叶酸为(4.98±5.01)μg/L,对照组为(7.68±2.02)μg/L,两组比较差异有统计学意义(P＜0.01);急性脑梗死组血浆维生素B12为(227.39±127.89)pmol/L,对照组为(311.64±152.15)pmol/L,两组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 急性脑梗死患者血浆Hcy是升高的,而血浆叶酸和维生素B12呈下降趋势,Hcy是急性脑梗死的独立危险因素.     

茶多酚影响同型半胱氨酸对内皮细胞的作用

目的:探讨茶多酚能否减弱同型半胱氨酸(HCY)对内皮细胞(EC)的损伤作用。方法:体外培养牛主动脉内皮细胞,随机分为5组,正常对照组,用含20%小牛血清DMEM培养液培养;0.25 mmol/L HCY组,培养液中加入HCY使其终浓度为0.25 mmol/L;1 mg/L茶多酚 +0.25 mmol/L HCY组;2 mg/L茶多酚 +0.25 mmol/L HCY组;4 mg/L茶多酚 +0.25 mmol/L HCY组。培养72h后,用流式细胞仪检测细胞周期,观察细胞生长情况,同时检测培养液中的一氧化氮(NO)、 一氧化氮合酶(NOS)、内皮素(ET)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)浓度或活性。结果:浓度为1、2、4、8 mg/L茶多酚组与HCY组相比,(1)细胞形态规则性增强,立体感增加,细胞内颗粒减少;(2)细胞周期检测提示茶多酚组细胞S期比例增多;(3)功能实验提示,茶多酚组EC释放的血管舒张因子NO浓度较HCY组高;而血管收缩因子ET低;(4)MDA含量和GS H-Px活性无明显改变。结论:茶多酚有抑制HCY对EC的损伤作用。     

叶酸配伍染料木黄酮对神经细胞早期凋亡的影响

目的:观察叶酸和染料木黄酮的单独及联合作用下对神经细胞早期凋亡的影响,并对其可能机制进行探讨。方法:在原代培养的神经细胞中加入环磷酰胺8μg/ml诱导其发生凋亡,在早期凋亡阶段以高、中、低三个浓度的叶酸和染料木黄酮进行单独及联合干预。用流式细胞仪和扫描电镜对凋亡的情况进行观察。结果:1.流式细胞仪检测结果提示:叶酸和染料木黄酮在一定浓度下均可对神经细胞的凋亡产生明显的抑制作用,且在一定的配伍下二者进行联合干预的效果要优于单独干预;2.由扫描电镜对神经细胞早期凋亡阶段所发生膜变化的观察也支持流式细胞仪检测的结果。结论:染料木黄酮可能通过增强叶酸对神经细胞早期凋亡的抑制作用而达到增强叶酸对神经管畸形的预防作用。     

硒、锌对梭曼诱导大鼠过氧化损伤的保护机制研究

目的 :　研究梭曼 (Soman)对大鼠急性中毒的自由基损伤作用及硒、锌的抗氧化保护作用。方法 :　雄性大鼠 40只 ,按体重随机分为阴性组 (正常对照组 )、阳性组 (损伤对照组 )、硒组 (加硒保护组 )及锌组 (加锌保护组 )。测定指标有血清、大脑、肝脏的维生素 E(VE)、总抗氧化能力 (T- AOC)及一氧化氮合成酶 (NOS)。结果 :　梭曼中毒后 ,T- AOC水平、VE含量明显下降 ,NOS活性显著提高 ;硒、锌组较阳性对照组损伤指标变化幅度较小。结果 :　梭曼中毒有明显的自由基损伤 ,硒、锌对梭曼中毒有显著的抗氧化作用。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对丙烯酰胺致小脑颗粒神经元氧化损伤的防护作用研究

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对丙烯酰胺(ACR)致小脑颗粒神经元(CGNs)损伤的保护作用。方法采用体外细胞培养的方法,建立ACR损伤CGNs的体外模型。经不同浓度EGCG(5、10、25、50、100 mol/L)预处理24h后,加入ACR(5 mmol/L)染毒,24 h后用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞存活率,倒置显微镜下观察细胞形态学变化,测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)的含量,Hochest 33342染色观察凋亡时细胞核形态的变化,末端脱氧核苷酸转移酶介导的原位缺口末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡指数。结果同ACR损伤组比较,终浓度为10、25、50 mol/L的EGCG能减轻ACR引起的CGNs损伤,可明显提高细胞的存活率(P<0.05),SOD活性增高,MDA含量降低(P<0.05),Hoechst33342染色和TUNEL荧光标记显示,细胞核固缩、致密浓染现象较ACR损伤模型组改善明显,凋亡指数下降(P<0.05),且呈现剂量依赖趋势,而终浓度为5、100 mol/L EGCG组较正常组无明显变化。结论 EGCG在一定剂量范围内对ACR氧化损伤的CGNs有防护作用。[营养学报,2012,34(4):362-367]     

维生素B_(12)影响同型半胱氨酸对大鼠认知能力的作用

目的:观察同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)对大鼠空间认知能力的影响及维生素B12(VB12)的干预作用。方法:大鼠随机分为对照组,实验组及VB12干预组。测定各组血浆Hcy,血清VB12水平和Y迷宫学习记忆情况,并对大鼠海马区进行乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)免疫组化分析。结果:实验组血浆Hcy水平比对照组升高,并出现空间认知障碍,且两组差异有显著性;实验组海马区AChE阳性纤维减少,呈弱阳性(+)。VB12干预组血浆Hcy水平与对照组比无明显变化,但VB12升高,无空间认知障碍发生;VB12干预组海马区有大量的AChE纤维,呈强阳性(+++)。结论:高同型半胱氨酸可引起大鼠空间认知障碍,而VB12可降低Hcy水平并干预空间认知障碍的发生。     

茶多酚对乙醇所致原代肝细胞损伤的保护作用研究

目的研究乙醇对原代肝细胞的氧化损伤作用,同时探讨茶多酚对乙醇所致的原代肝细胞损伤模型的保护作用。方法分离小鼠原代肝细胞,直接以不同浓度乙醇作用于肝细胞,或以茶多酚预处理后再用乙醇作用于肝细胞,测定各组细胞存活率、抗氧化酶及丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性的变化。结果随着乙醇浓度的增加,小鼠原代肝细胞存活率逐渐下降,抗氧化酶活性降低,转氨酶升高;而茶多酚的预处理对于乙醇所致的小鼠原代肝细胞损伤具有明显的保护作用,表现为相同乙醇浓度作用下,随茶多酚浓度的升高,细胞存活率逐渐升高,抗氧化酶活性增加,转氨酶下降,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论乙醇可以诱导小鼠原代肝细胞的氧化损伤,而茶多酚对其氧化损伤具有明显的保护作用。     

高甲硫氨酸饮食对动脉损伤的实验研究

目的　观察甲硫氨酸诱发高同型半胱氨酸血症对动脉的损伤作用。方法　新西兰白兔 1 8只 ,随机分为甲硫氨酸组 (M组 )和对照组 (C组 )各 9只。 M组每日先喂含 3%甲硫氨酸饲料 2 0 g后 ,再喂予与 C组相同的饲料 ,不限量。1 6wk末处死留血测甲硫氨酸、同型半胱氨酸和其他生化指标 ,同时留主动脉进行病理学检查。结果　两组血浆蛋白、血糖和血脂无显著性差异 (P>0 .0 5)、M组甲硫氨酸和同型半胱氨酸分别为 2 9.97± 5.34μ mol/L和 1 3.30± 2 .1 9μ mol/L,显著高于 C组的 1 9.78± 1 .97μmol/L和 5.36± 1 .1 9μ mol/L(P<0 .0 1 )。光镜检查显示 M组主动脉内膜剥脱、内弹力膜断裂、内膜下胶原纤维增生且暴露、中膜弹力纤维断裂。结论　甲硫氨酸诱发的同型半胱氨酸血症对动脉具有显著的损伤作用     

莲房原花青素对乙醇诱导肝细胞损伤的拮抗作用

目的:研究莲房原花青素(LSPC)对乙醇诱导的人胚肝细胞株L-02损伤的拮抗作用。方法:观察5、10、25mg/L的LSPC与200mmol/L乙醇共同作用于肝细胞L-0224h后,对细胞的生存率,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)含量、凋亡率以及DNA损伤等指标的影响。结果:与乙醇组相比,5mg/L和10mg/LLSPC使细胞的生存率由73.14%上升到84.79%和90.52%,提高了细胞SOD、CAT、GSH的含量(P<0.01),降低MDA的生成;有效降低细胞的凋亡率,降低细胞p53和生长抑制DNA损伤基因(GADD)34、45β、153的表达,但高剂量组(25mg/L)对乙醇的拮抗作用不明显。结论:适量浓度的莲房原花青素对乙醇诱导的肝细胞L-02的损伤有拮抗作用。     

茶多酚对D-半乳糖诱导致大鼠肾脏损害的保护作用及其机制

目的探讨茶多酚(teapolyphenols,TP)对D-半乳糖诱导致大鼠肾脏损害的保护作用及其作用机制。方法D-半乳糖(150mg/kgbw)连续腹腔注射(ip)8w,诱导大鼠糖基化肾脏损伤,并于第3w开始灌胃给予茶多酚高、中、低(150,75,37.5mg/kgbw)剂量处理6w,阳性对照药物给与维生素E(250mg/kgbw)和氨基胍(150mg/kgbw)。测定大鼠血糖,糖化血红蛋白,血清果糖胺;测定血红细胞醛糖还原酶活性和晚期糖基化终末产物(AGEs)含量;测定肾脏组织中AGEs、MDA含量,SOD和GSH-Px活性;测定尿蛋白含量,血尿素氮和血肌酐含量;流式细胞仪检测肾脏细胞凋亡情况。结果D-半乳糖处理8w后,模型大鼠2h血糖和血红细胞醛糖还原酶活性明显升高,糖化产物形成增多;肾组织中AGEs和MDA含量明显升高,SOD及GSH-Px活性下降,尿蛋白、血尿素氮和血肌酐量明显增加,肾细胞凋亡率明显增加。茶多酚处理6w后,高、中剂量可以明显抑制D-半乳糖引起的全身和肾脏糖基化反应,降低肾组织中AGEs和MDA含量,并提高肾脏组织抗氧化能力,降低尿蛋白、血尿素氮和血肌酐含量及肾细胞的凋亡率。结论茶多酚通过抑制糖基化反应和提高肾脏组织抗氧化能力,对D-半乳糖诱导的肾脏损伤具有保护作用。     

硬质干酪对维甲酸诱导大鼠骨质疏松防护效果的研究

目的观察硬质干酪对大鼠骨质疏松的防护作用。方法 SD大鼠48只,随机分为正常对照组、模型组、干酪高、中、低剂量组和葡萄糖酸钙对照组,每组各8只。除正常组外,其余各组用维甲酸按80mg/(kg.d)连续灌胃建立骨质疏松模型,并灌服相应的受试物和药物,正常组和模型组灌胃给予同等体积蒸馏水。实验结束后处死大鼠,观察骨密度、血清生化、骨矿含量和骨形态计量学的变化。结果模型组左侧股骨骨密度、骨矿含量、骨小梁面积百分比和平均骨小梁宽度均明显减少。血清钙、磷、碱性磷酸酶活性、抗酒石酸酸性磷酸酶含量和破骨细胞均明显升高,提示骨质疏松模型复制成功。干酪高剂量组左侧股骨密度、骨矿含量、抗酒石酸酸性磷酸酶含量与正常对照组、葡萄糖酸钙组比较无明显差异。结论通过补充硬质干酪增加钙的摄入,可提高大鼠的骨密度、骨钙、磷含量,对骨质疏松有一定的预防保护作用。