重组单克隆抗体的纯化研究

<正>重组单克隆抗体是新一代生物工程技术产品,其通过特定的靶点发挥药效~([1])。随着大规模哺乳动物细胞培养技术的发展,工业化细胞培养液体积可达1万升以上,抗体表达量可达5 g/L以上,极大地加重了重组单抗下游纯化的压力~([2-3]),下游纯化成为限制重组单抗工业化扩大的主要因素~([4-6])。重组单抗杂质控制浓度指标见表1,这些指标必须通过离心、过滤和色谱层析纯化后控制在一定浓度以下~([7-10])。     

抗尿激酶单克隆抗体的研究——Ⅰ.分泌抗尿激酶单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

用市售的尿激酶(UK),免癌BALB/c小鼠。取脾细胞,与小鼠骨髓瘤细胞FO融合,获得六株分泌抗尿激酶单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为1UB_5、1UD_2、3UA_2、3UD_(12)、3UG_2、3UH_7。其中,1UB_5及1UD_2连续传代培养4个月以上,其培养液抗体的ELISA效价仍为10~(-2)～10~(-3)。两株细胞经扩大培养后,注入C_(57)×BALB/c杂交后的F_1代小鼠,诱生的腹水抗体效价为5×10~(-6)～10~(-7)1UB_5、1UD_2所分泌的抗体经ELISA鉴定,分属IgG_1和IgG2a。用高纯度的低分子量UK包被,ELISA检测后表明,两株细胞所分泌的为抗高分子量UK的McAb。 抗UK的McAb用于粗制品UK的纯化及监察某些肿瘤发生与发展的进一步工作正在进行之中。     

腹水型单克隆抗体纯化方法的研究

目的：比较不同纯化方法对腹水型抗体的纯化效果,探索出最适合实验室抗体生产的纯化方法。方法制备的 IgG1单克隆抗体腹水（4-D10）分别利用两步硫酸铵沉淀法（AS 法）、辛酸-硫酸铵沉淀法（CA-AS法）、辛酸-硫酸铵沉淀法联合 DEAE 阴离子交换层析法与辛酸-硫酸铵沉淀法联合蛋白 G 亲和层析法纯化处理后,经蛋白纯度、回收率、抗体免疫活性鉴定分析后,比较不同的纯化方法对腹水型抗体的纯化效果。结果① AS 法的蛋白纯度为25%,低于 CA-AS 法（44%）;AS 法回收率为63%,高于 CA-AS 法（41.8%）;比较抗体效价表明,AS 法（1.024×106）与 CA-AS 法（1.024×106）两者相当。②粗提后纯化效果表明,蛋白 G亲和层析法回收率明显降低,DEAE 纯品虽纯度略低,但回收率较高,且效价（5.12×105）高于蛋白 G 亲和层析法（1.28×105）。结论 CA-AS 联合 DEAE 离子交换法是适合实验室生产单抗的低成本、纯化效果和回收效果较佳的方法。     

羟基磷灰石纯化单克隆抗体

<正> 从小鼠诱生的单克隆抗体腹水除含特异性抗体外,还有小鼠的一些非抗体蛋白,常需要纯化后才能应用。单克隆抗体是免疫球蛋白,因而可用纯化血清中免疫球蛋白常用的方法如硫酸铵沉淀、离子交换层析、蛋白A琼脂糖珠柱层析等。但各种单克隆抗体的免疫球蛋白型不同,因而纯化时,除了根据实验需要,还需根据免疫球蛋白的种类选择适宜的方法。本文介绍一种适用于各型免疫球蛋白、简单易行的羟基磷灰石(hydr-oxylapatite)柱层析法,并就其优点与硫酸     

单克隆抗体纯化技术的探讨

自Kohler等建立杂交瘤技术以来,单克隆抗体(McAb)研究日益深入。含McAb的细胞培养上清、腹水及血清含中有大量杂蛋白和其它大分子物质,使McAb的实验研究和临床应用受到一定限制。近年来、McAb纯化的研究倍受重视,取得了进展。本文试以小鼠McAb的纯化为主,综述如下。     

抗尿激酶单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

抗尿激酶单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立秦玉倩吴悦周月梅（上海生物制品研究所免疫研究室，上海２０００５２）Ｖｅｔｅｒｌｅｉｎ等［１］报道用抗尿激酶（ＵＫ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）亲和层析柱，能从ＵＫ粗制品、甚至新鲜尿液中提取高纯度的ＵＫ，从而大大降低制备...     

SPA单克隆抗体的制备与纯化

以SPA作基础免疫BALB/C小鼠后,融合前三天直接脾内免疫,取脾细胞与SP_2/O瘤细胞常规融合,融合率100％;以快速EIISA检测抗体,阳性率60％。5次有限稀释法克隆化后获得7株杂交瘤细胞,作中和抑制试验,证实为SPA特异性抗体。经鉴定属IgG2a及IgG2b亚类。电镜观察细胞融合,发现细胞内含逆转录病毒。经MAPS—100法纯化单抗腹水,获得了高纯度McAb。     

对单克隆抗体纯化的多方面探讨

单克隆抗体技术的发展为免疫学、生物化学、肿瘤生物学及科学和技术许多其它领域的进展提供了巨大的推动力。迄今,单克隆抗体的纯化还应用盐析、DEAE型软凝胶、分子大     

鼠IgM类单克隆抗体的纯化

本文介绍一种采用常规蛋白质分离提取技术,来纯化IgM类单克隆抗体的方法。将腹水经10000g离心5min,弃沉淀。用pH8.0、20mmol Tris溶液调蛋白浓度至10～12mg/ml。在4℃搅拌中加入45％饱和度硫酸铰,4℃放置1h,10000g离心15min,沉淀重悬于pH8.0 100mmol Tris-150mmolNaCl中,并对该溶液透析。将样品通过Ul-     

用结核菌单克隆抗体纯化PPD抗原的初步研究

本文用自备一株人型结核菌单克隆抗体(TB-15C_3)经亲和层析方法提纯人型结核菌H_(37)RvPPD。纯化抗原(定名C_3Ag)于SDS-PAGE电泳分析有二条带,分子量为66,000及56,000。Westen免疫印迹显示该二个位点的蛋白与TB-15C_3抗体反应。酶标TB-15C_3 ELISA检出C_3Ag的最小量10μgml。C_3Ag ELISA检测血清抗体最适浓度1～10μg/ml,C_3Ag的特异性是与     

抗重组人γ干扰素单克隆抗体的纯化研究

取本实验室制备的抗重组人γ干扰素单克隆抗体(rHu IFN-γ/McAb)A_3和B_3E_7粗制品(BALB/c小鼠腹腔分泌液),分别用饱和硫酸铵盐析法和葡萄球菌A蛋白(SPA)亲和层析法进行纯化。结果发现,虽两者都能部分纯化A_3和B_3E_7-McAb,但后者(SPA亲和层析法)的纯化效果比前者(硫酸铵盐析法)好。纯化后的产品经冷冻干燥后置低温贮存,其活性(抗体滴度)不受影响.     

抗人尿激酶单克隆抗体制备和鉴定

用人高分子量尿激酶(HMW-UK)为抗原,通过杂交瘤技术获得了两株阳性杂交瘤细胞(2B8、3A2)。采用葡萄球菌 A 蛋白(SPA)亲和层析或 Water's650快速蛋白分离系统纯化抗 UK 单克隆抗体(McAb).3A2McAb 为 IgG 1亚类,特异地识别 HMW-UK 和低分子量 LMW-UK,抑制 UK 活性,表明3A2McAb 所作用的位点为 UK 的 B 链,即活性中心。EIA 测定3A2McAb 与 UK 的亲和常数为8.43×10~8M~(-1)。2B_8McAb 亦为IgG_(?)亚类,特异地识别 HMW-UK 及其氨基端1～135氨基酸片段(ATF),不抑制活性,EIA 测定2B_8McAb 与UK 的亲和常数为2.8×10~9M~(-1)。2B_8McAb 可用于导向溶栓的研究以及 UK 与其受体间反应的研究。     

亲和层析法纯化大鼠单克隆抗体

本文着重介绍Lou大鼠杂交瘤系统免疫亲和层析纯化法。该法简便易行,快速特异,能较好地解决宿主免疫球蛋白(Ig)污染问题,有推广价值。其原理是95％大鼠Ig轻链为k型,其k轻链恒定区有二个不同个体基因(1a、1b),定位稳定,利用小鼠抗大鼠k-1a型轻链     

液相色谱法分离纯化单克隆抗体的进展

本文介绍了近年来国内外液相色谱法(包括常压液相色谱法和高效液相色谱法)在单克隆抗体分离纯化中的应用。由于单克隆抗体分子的特殊性,其分离纯化的方法也多种多样,各种不同分离原理的液相色谱法:离子交换色谱,凝胶过滤色谱,疏水性相互作用色谱,亲和色谱,羟基磷灰石吸附色谱,以及新近发明的亲硫吸附色谱和混合态色谱都在单克隆抗体分离纯化中有着程度不同的应用。这些液相色谱方法可适用于分离纯化腹水或杂交瘤细胞培养上清液中的小鼠、大鼠和人源的不同类型及亚类的单克隆抗体。本文还就各种不同方法的应用范围,及纯化结果的纯度、活性回收率、纯化周期、每批可纯化样品量、纯化成本等方面作了比较和讨论。     

一种简易的纯化单克隆抗体方法

<正> 从小鼠腹水中纯化抗体常是单克隆抗体特征鉴定,生产应用中的一个重要步骤。目前最常用的方法为离子交换层析法,但该法既不适于多种细胞及腹水同时纯化鉴定,也不适于大规模生产,且洗脱液中抗体含量较低,常需浓缩后才能使用。近来,Reik M(1987)等报导了正辛酸纯化法。本实验室在从腹水纯化抗HCG单克隆抗体中,用正辛酸法与DEAE柱层析进行对照、分析,结果     

单克隆抗体亲和层析纯化绿脓杆菌外毒素A

本文用间接ELISA法测定了本室研制的4株绿脓杆菌外毒素A单克隆抗体的相对亲和力。结果表明,它们的相对亲和力可排列为23B9>14F10>24B5>23C12。选用23B9制备免疫吸附柱,用于亲和层析纯化绿脓杆菌外毒素A。洗脱液用pH11.5,0.05 mol的二乙胺溶液,回收率为上柱样品的72.4％。所获纯化毒素对BALB/c小鼠的LD50为137ng,在SDS聚丙烯酰胺凝胶电冰中为一条带,保持有良好的毒性及免疫学活性。     

单克隆抗体亲和层析纯化绿脓杆菌外毒素A

本文采用ELISA法测定了本室研制的4株单抗的相对亲和力。当包被抗原浓度选定为5μg/ml后,饱和50％这一抗原浓度所需的抗体蛋白质量是:14F10为0.015μg/ml,23B9为0.010μg/ml,24B5为0.4μg/ml,23C12为2.5μg/ml。故它们的相对亲和力是:23B9>14F10>24B5>23C12。 选用23B9与CNBr一活化的Sepharose4B按说明书条件进行偶联,制备免疫吸附柱。将预处理的DE-52离子交换纤维素投入绿脓杆菌标准产毒株PA-103株培养物上     

中压液相层析快速纯化单克隆抗体

中压液相层析快速纯化单克隆抗体中国医学科学院肿瘤研究所免疫室北京１０００２１张叔人，马文波，常立水，张友会ＡｃｃｅｌｌＱＭＡ是Ｗａｔｅｒ′ｓ公司推出的较为经济的耐压型强阴离子交换剂，配合该公司Ｗ６５０中压液相层析系统用于单克隆抗体的纯化。将含有ＩｇＧ...