内源性内皮素转化酶在自体移植静脉术后的动态变化

目的:探讨ET-1及内源性ECE对自体静脉移植术后内膜增生的作用。方法:通过建立自体静脉移植模型，采用RT-PCR和免疫组织化学方法，从mRNA水平和蛋白质水平分析ECE和ET-1在移植静脉的表达及影响。结果:移植术后6 h，吻合口处中膜即出现PCNA阳性平滑肌细胞，并随着时间推移逐渐增高，在1~2周左右达到高峰。2周后，中膜PCNA阳性SMC开始逐渐减少，于术后8周趋于平稳。随着移植术后时间的推移，ET-1的表达与ECE的表达逐渐增高，手术后1~2周达到高峰，2周后表达逐渐下降，于8周左右趋于平衡，ET-1与ECE密切相关(r=0.975)。结论:静脉内膜增生病理过程的发生时间和变化规律与ET-1和ECE表达的动态变化过程吻合，提示ECE参与移植静脉内膜的增殖过程。     

大鼠自体静脉移植后内膜增生与细胞外基质堆积的研究

目的:研究静脉移植术后内膜增生(IH)中细胞基质(ECM)堆积的发生、发展及与平滑肌细胞(SMC)增殖的关系.方法:将大鼠一段颈外静脉桥接移植入颈总动脉,运用组织切片的特殊染色及免疫组化方法,观察术后1天至24周移植静脉的IH中,Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅱ型胶原(ColⅢ型)及SMC结蛋白(D_m)的变化.结果及结论:术后2周,IH中开始出现胶原的堆积,术后12周,IH中胶原含量达最大值并自此保持稳定不变,术后24周IH主要由细胞外基质组成;术后2周,IH中SMC的D_m开始表达,表明SMC的表型开始由收缩型向分泌型改变,术后6周,D_m达最大值,表明此时分泌型SMC最多,SMC可能是分泌细胞外基质的间质效应细胞.     

自体血管移植后内膜增生与内皮素-1 mRNA表达的关系

我们采用原位杂交方法探讨内皮素(ＥＴ) 1ｍＲＮＡ与自体血管移植后内膜增生的关系 ,现将结果报道如下。一、材料与方法1.动物分组及模型建立 :16 8只Ｗｉｓｔａｒ大鼠 (由哈尔滨医科大学提供 )随机分成 3组。Ｖ组 (静脉组 )采用质量分数为 1%戊巴比妥钠 30ｍｇ/ｋｇ体重腹腔注射麻醉。颈部旁正中切口 ,游离颈外静脉外侧分支长 1.0ｃｍ切断 ,放入肝素盐水弯盘中备用 (放置时间 15ｍｉｎ)。游离左颈总动脉长约 1.5ｃｍ ,两端分别放置动脉夹 ,切除颈总动脉约 1.0ｃｍ ,将切取的颈外静脉和颈总动脉断端行端端吻合 ,用 11 0无损伤线采用外翻结…     

大鼠自体静脉移植后内膜增生中Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA及其蛋白的早期表达

目的　探讨静脉移植后内膜增生早期的发生机制。　方法　采用免疫组织化学、核酸原位杂交等方法 ,对大鼠静脉移植后 7天、14天、2 8天和 42天内膜增生中的 型、 型 [α1( )、α1( ) ]前胶原 m RNA及 型、 型胶原蛋白的表达进行定位、半定量观察。　结果　与组织修复相关的胶原合成于术后 7天出现 ,术后 14天消失。术后 14天起 ,α1( )、α1( )前胶原 m RNA开始大量在增生内膜的平滑肌细胞中表达 ,并于术后 2 8天达高峰 (P<0 .0 5 ) ,与相应胶原的表达呈同步增长。　结论　静脉移植后 7天 型、 型胶原即开始在内膜增生中的平滑肌细胞内转录及合成 ,且与平滑肌细胞的增殖无关。提示防治静脉移植后内膜增生至少应从术后 14天开始 ,并应包括抑制细胞增殖及胶原合成两个方面。     

内源性内皮素转化酶在白体移植静脉术后的动态变化

目的探讨ET-1及内源性ECE对自体静脉移植术后内膜增生的作用。方法通过建立自体静脉移植模型，采用RT—PCR和免疫组织化学方法，从mRNA水平和蛋白质水平分析ECE和ET-1在移植静脉的表达及影响。结果移植术后6h，吻合口处中膜即出现PCNA阳性平滑肌细胞，并随着时间推移逐渐增高，在1～2周左右达到高峰。2周后，中膜PCNA阳性SMC开始逐渐减少，于术后8周趋于平稳。随着移植术后时间的推移，ET-1的表达与ECE的表达逐渐增高，手术后1～2周达到高峰，2周后表达逐渐下降，于8周左右趋于平衡，ET-1与ECE密切相关（r=0．975）。结论静脉内膜增生病理过程的发生时间和变化规律与ET-1和ECE表达的动态变化过程吻合，提示ECE参与移植静脉内膜的增殖过程。     

大鼠自体静脉移植后增生内膜中α1（Ⅰ）和α1（Ⅲ）前胶原mRNA表在的定位研究

目的 明确静脉移植后内膜增生（IH）过程中分泌细胞外基质（ECM）的间质效应细胞。方法 建立静脉移植后内膜增生动物模型,采用Desmin免疫组织化学及特殊染色明确平滑肌细胞（SMC）的位置,用原位杂交检测细胞外基质的重要成分－Ⅰ、Ⅲ 型胶原α1（Ⅰ）、α1(Ⅲ)前胶原mRNA在静脉移植术后1、2、4、6、8周的定位表达。结果 术后早期,移植静脉增生内膜的SMC中有α1（Ⅰ）、α1(Ⅲ）前胶原mRNA的表达。术后远期α1（Ⅰ）、α1(Ⅲ前胶原mRNA也在增生内膜的SMC中表达。结论 移植静脉内膜增生中的胶原是由SMC合成及分泌的,SMC是ECM堆积的间质效应细胞。     

伊马替尼抑制大鼠静脉移植物内膜增生

目的 观察伊马替尼对自体移植静脉内膜增生的影响.方法 建立大鼠自体颈外静脉移植模型,实验分为4组:移植组、低剂量给药组、高剂量给药组及对照组.移植4周后取移植静脉,行病理学检查观察内膜增生情况,免疫组织化学及Western blot法检测PDGFRβ、ERK及P-PDGFRβ、P-ERK蛋白表达情况.结果与对照组比较,移植组和低剂量给药组内皮下平滑肌细胞大量增生,静脉内膜显著增厚,管腔明显狭窄,高剂量给药组内膜无明显增厚.Western blot结果显示,移植组血管P-PDGFRβ蛋白含量(P-PDGFRβ/GAPDH)较对照组明显增加(0.81±0.06比0.18±0.02,P<0.05),而高剂量给药组较移植组明显减少(0.32±0.03比0.81±0.06,P<0.05),低剂量给药组与移植组比较差异无统计学意义(P>0.05),P-ERK蛋白表达亦呈同样趋势变化.结论 高剂量伊马替尼能有效抑制自体移植静脉内膜增生,其机制可能与抑制PDGF信号通路蛋白磷酸化,从而抑制平滑肌细胞增殖有关.     

平滑肌细胞迁移在动静脉内瘘内膜增生中的作用机制研究

目的:探讨平滑肌细胞迁移在自体动静脉内瘘(arteriovenous fistula,AVF)内膜增生中的作用及可能的调控机制。方法:标本选自因AVF狭窄或闭塞不能维持正常血液透析治疗,需再次手术的尿毒症患者,通过对AVF失功的静脉侧标本的研究,伊红染色观察血管组织形态学变化,测量各组内膜、中膜厚度;免疫组化观察血管病变中碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)、胰岛素生长因子1(insulin-like growth factor,IGF-1)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达;Western blot检测金属基质蛋白酶2(matrix metallopro-teinase 2,MMP2)、金属基质蛋白酶9(matrix me-talloproteinase 9,MMP9)蛋白水平。结果:AVF流出道侧静脉内膜增生明显导致血管壁增厚,且内膜中可见大量平滑肌细胞及少量炎症细胞,静脉壁中bFGF、IGF-1表达水平明显升高,增生静脉的新生内膜层MMP2、MMP9表达增加,与对照组相比,失功的AVF标本MMP2表达水平显著增加,且差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:内膜增生是AVF失功的主要原因,平滑肌细胞可通过中膜向内膜迁移并上调bFGF、IGF-1、MMP2细胞因子的表达以维持内膜的持续增生。     

内皮素-1在良性前列腺增生组织中的定位表达及对平滑肌收缩作用的影响

良性前列腺增生(BPH)是老年男性常见疾病,其病理生理学基础尚未明了。内皮素1(ET1)是一种强烈的平滑肌收缩因子,在前列腺中有丰富的含量[1]。本实验旨在探讨ET1在BPH组织中的表达水平、定位及对前列腺平滑肌的收缩影响。一、材料和方法1.标本来源:正常前列腺标本14例,年龄22～40岁,取自意外死亡的尸体前列腺。标本取自武汉协和医院1990～2000年接受耻骨上经膀胱前列腺摘除术患者25例,年龄54～78岁,术后病理学证实为BPH。2.ET1含量测定:称取500mg前列腺组织,按W/V=1/5加入0.1mol醋酸,煮沸10min,匀浆,10000g离心20min,上清液置入-20℃…     

Effect of endothelin-converting enzyme inhibitors on big endothelin-1 induced contraction in isolated rat basilar artery

Summary.  Introduction: The aim of this study was to investigate whether blocking functional endothelin-converting enzyme (ECE) activity may offer a new approach to inhibit the development of cerebral vasopasm after subarachnoid hemorrhage (SAH) by preventing transformation of big Endothelin-1 (big ET-1) to vasoactive Endothelin-1 (ET-1).  Methods: In vitro, the effect of potential ECE inhibitors was determined by measurement of isometric contractions, induced by big ET-1, in isolated rat basilar arteries. Endothelium intact (E+) and de-endothelialized (E−) segments were examined after pre-incubated with the putative ECE inhibitors: Phosphoramidon (10⁻⁴ M), Captopril (10⁻³ M and 10⁻⁴ M) and [²²D-Val] big ET-1 (16–38) (10⁻⁵ M and 10⁻⁶ M).  Results: Application of 10⁻⁴ M Phosphoramidon resulted in a statistically significant decrease in big ET-1 induced contraction in endothelium intact (E+) and de-endothelialized (E−) segments; 10⁻³ M Captopril in E− segments caused a statistically significant inhibitory effect; 10⁻⁴ M and 10⁻³ M Captopril in E+ segments showed no statistically significant effect; 10⁻⁵ M and 10⁻⁶ M [²²D-Val] big ET-1 (16–38) in E− segments produced no statistically significant effect. The application of 10⁻⁶ M [²²D-Val] big ET-1 (16–38) in E+ segments caused increased contractions as shown by the shift to the left of the concentration-effect curve (CEC).  Conclusion: The present study indicates the existence of functional ECE activity in rat basilar artery, which is different in the endothelium and the smooth muscle layer. This ECE-activity could be inhibited by Captopril and Phosporamidon, suggesting a potency for prevention and therapy of cerebral vasospasm. However, the structural analogue of big ET-1, [²²D-Val] big ET-1 (16–38), was ineffective in reducing big ET-1 induced vasoconstriction and rather increased contraction in E+ vessels. Therefore further studies of the biochemical nature of the functional relevant cerebrovascular ECE activity are required for better understanding and development of other efficient ECE inhibitors. Published online October 31, 2002 Correspondence: Michael Zimmermann M.D., Ph.D., Department of Neurosurgery, University of Frankfurt/Main, Schleusenweg 2-16, 60528 Frankfurt, Germany.     

A novel mouse model of autologous venous graft intimal hyperplasia

BACKGROUND: To investigate the molecular mechanism of autologous venous graft intimal hyperplasia, a mouse model is needed. Currently only vein to carotid artery mouse models are available and are hampered by a high thrombosis rate. We hypothesized that operating on the aorta would lead to intimal hyperplasia with decreased risk of thrombosis. MATERIALS AND METHODS: In C57BL/6J mice, the left external jugular vein was grafted into the infrarenal abdominal aorta by end-to-end anastomosis with 11-0 Ethilon. Grafts harvested at 1, 2, 4, 8, and 16 weeks postoperatively were subjected to histological and immunohistochemical analysis. RESULTS: Thirty-one of 35 mice survived; 2 mice were sacrificed secondary to thrombosis. The percentage lumen narrowing (+/-SE) was 7.8 +/- 0.3, 16.4 +/- 0.9, 19.2 +/- 0.9, 22.3 +/- 0.8, and 23.9 +/- 1.6% at 1, 2, 4, 8 and 16 weeks, respectively. Nuclear density decreased with each successive time point. The percentage of alpha-smooth-muscle actin-positive cells within the neointima peaked at 16 weeks (53%), and the percentage of cells positive for proliferating cell nuclear antigen peaked at 2 weeks (39%). CONCLUSIONS: We thus report on a novel mouse model of intimal hyperplasia in autologous venous grafts with a low thrombosis rate. Further studies using this model, coupled with genetic and bone marrow transplantation mouse models, should lead to significant enhancement in understanding of the mechanism of intimal hyperplasia.     

缺氧诱导因子-1α与同源盒基因共转染在移植静脉重塑态的表达

目的 探讨缺氧诱导因子(HIF-1α)和同源盒基因(gax)共转染在移植静脉组织中的表达状态.方法 Wistar大鼠16只随机分为实验组和对照组,每组8只,均行自体静脉移植术,实验组移植静脉行缺氧诱导因子(HIF-1α)和同源盒基因(gax)共转染,对照组则未行基因转染,于术后14 d取出移植的静脉,分别采用逆转录-聚...     

移植血管平滑肌细胞PCNA表达及药物影响的研究

目的　探讨 Ｂａｔｒｏｘｏｂｉｎ 等药物对兔静脉移植模型早期增殖细胞核抗原（ Ｐ Ｃ Ｎ Ａ） 表达的影响。　方法　兔颈静脉移植于颈动脉后应用 Ｂａｔｒｏｘｏｂｉｎ 、 Ｌ Ｍ Ｗ Ｈ 、 Ｕｒｏｋｉｎａｓｅ 和 Ｖｅｒａｐａ ｍｉｌ 治疗, 并于不同时间采用免疫组化方法观察血管平滑肌 Ｐ Ｃ Ｎ Ａ 表达的变化。　结果　术后３ 、７ 、１４ 天均有 Ｐ Ｃ Ｎ Ａ 的表达;３ 天时 Ｕｒｏｋｉｎａｓｅ 、 Ｌ Ｍ Ｗ Ｈ 两组 Ｐ Ｃ Ｎ Ａ 的表达与对照组差异不显著;相反 Ｖｅｒａｐａ ｍｉｌ 及 Ｂａｔｒｏｘｏｂｉｎ两组的 Ｐ Ｃ Ｎ Ａ 指数均低于对照及其他两组;术后７ 、１４ 天动、静脉 Ｖ Ｓ Ｍ Ｃ 中的 Ｐ Ｃ Ｎ Ａ 各组的表达均与术后３ 天相同只是强度略有下降;移植静脉 Ｐ Ｃ Ｎ Ａ 指数均略低于相应动脉。　结论　 Ｕｒｏｋｉｎａｓｅ 、 Ｌ Ｍ Ｗ Ｈ对血管移植后动、静脉 Ｖ Ｓ Ｍ Ｃ 内的 Ｐ Ｃ Ｎ Ａ 表达无影响, Ｖｅｒａｐａ ｍｉｌ 及 Ｂａｔｒｏｘｏｂｉｎ 对移植静脉及相应动脉平滑肌细胞的 Ｐ Ｃ Ｎ Ａ 表达有抑制作用     

大鼠肾上腺髓质增生的生物酶消融治疗

目的探讨生物酶消融利血平诱导的大鼠肾上腺髓质增生的治疗效果。方法雄性Wistar大鼠47只，皮下注射利血平建立大鼠肾上腺髓质增生模型。6周后随机取2只大鼠肾上腺行体外生物酶消融实验，其余45只大鼠随机分为A、B、C3组，每组15只。A组为生物酶消融组，将生物酶注入肾上腺；B组为D-Hanks液对照组；C组为正常对照组，不作任何处理。1个月后处死全部大鼠，观察治疗效果。结果在体外实验中，4h后生物酶可将肾上腺消融塌陷，髓质呈现空洞状，与对侧对比有显著变化。A组大鼠治疗后，肝肾功能无明显改变，肾上腺素、去甲肾上腺素及3-甲基4-羟基苦杏仁酸均有下降，治疗前分别为（2．36±0．48）nmol／L、（4．80±0．52）nmol／L、（8．43±1．03）mg／24h，治疗后分别为（1．10±0．12）nmol／L、（1．59±0．23）nmol／L、（2．67±0．38）mg／24h；肾上腺区塌陷，无明显粘连；肾上腺体积变小，失去正常的三角形或半月形；22侧肾上腺仅剩皮质，无明显髓质组织；8侧肾上腺髓质仅剩少许。B、C组鼠肾上腺仍维持增生状态。结论生物酶消融对于利血平诱导的大鼠肾上腺髓质增生有一定治疗作用，为临床上治疗肾上腺髓质增生提供了一种新的微创方法。     

ET 1，cmy c在自体静脉移植血管内膜增殖表达意义

为观察内皮素、cmy c在自体移植静脉术后内膜增生中的相互作用，探讨移植静脉术后再狭窄的机制。笔者应用免疫组化技术观察内皮素、cmy c在自体移植静脉术后内膜增生中的表达。结果表明移植静脉术后早期，内皮素1（ET 1）在平滑肌细胞出现阳性表达，术后1周开始增多，到术后2周达高峰，4周开始减少，而cmy c亦在同时期表达，1周后逐渐呈高表达，在移植静脉术后2周后表达逐渐减少，二者与增殖细胞核抗原（PCNA）表达呈一致性改变。ET 1，cmy c术后1~2周表达与早期表达有显著差异（P<0.05 ),ET 1与cmy c呈正相关（r=0.36）。提示在血管移植术后ET 1与cmy c之间存在调控作用，即ET 1可以激活cmy c,使静止期SMC进入增殖期,产生血管平滑肌细胞（SMC）过度增殖,同时表明ET 1可能是cmy c等早期应答基因持续增殖一个重要原因，这也为今后应用ET 1抑制剂加反义cmy c抑制内膜增殖提供了一定的理论依据。     

内皮素－1对大鼠黄体细胞孕酮生成的影响

我们采用黄体细胞孵育的方法，观察了内皮素－１对离体黄体细胞孕酮生成的影响。发现内皮素－１能抑制黄体细胞孕酮的基础分泌及人绒毛膜促性腺激素（ＨＣＧ）刺激下的孕酮分泌。内皮素－１加入孵育的黄体细胞悬液１５分钟后，即发生明显地抑制孕酮分泌作用（Ｐ＜０．０１）。人内皮素－１的抗血清能反转内皮素－１的上述作用。实验结果提示，内皮素－１可能为一种卵巢内调节肽，它通过抑制黄体细胞的孕酮生成，参与黄体退化过程的调节     

内皮素－1对大鼠黄体细胞孕酮生成的影响

我们采用黄体细胞孵育的方法，观察了内皮素－１对离体黄体细胞孕酮生成的影响。发现内皮素－１能抑制黄体细胞孕酮的基础分泌及人绒毛膜促性腺激素（ＨＣＧ）刺激下的孕酮分泌。内皮素－１加入孵育的黄体细胞悬液１５分钟后，即发生明显地抑制孕酮分泌作用（Ｐ＜０．０１）。人内皮素－１的抗血清能反转内皮素－１的上述作用。实验结果提示，内皮素－１可能为一种卵巢内调节肽，它通过抑制黄体细胞的孕酮生成，参与黄体退化过程的调节