用PCR技术对人巨细胞病毒与膀胱癌关系的研究

采用一种新的定量PCR技术，对膀胱癌患者12人及正常对照5人的尿脱落细胞病理涂片标本进行人巨细胞病毒（HCMV）的定量检测，参照常规PCR，初步探讨了膀胱癌与HCMV感染的关系。结果表明，膀胱肿瘤细胞内存在HCMV基因的DNA。提示，HCMV的感染可能与膀胱癌的发生有一定的关系，也可成为判断膀胱癌患者预后的敏感指标。     

婴儿黄疸患儿尿中及母乳中人巨细胞病毒感染的研究

目的:了解婴儿黄疸患儿尿中人巨细胞病毒(HCMV)感染情况及HCMV通过母乳对婴儿的传播情况。方法:应用荧光定量PCR方法对858例患黄疸的婴儿尿及配对的316例母乳进行HCMV-DNA检测。结果:黄疸患儿尿中的HCMV-DNA阳性率为29.02%,母乳中的阳性率为59.18%;母乳HCMV-DNA阳性配对的患儿尿的HCMV-DNA阳性率为40.11%,母乳HCMV-DNA阴性配对患儿尿HCMV-DNA阳性率为18.60%,两组之间具有显著性差异(P<0.01)。结论:婴儿黄疸与HCMV感染有一定关系,HCMV感染母乳是婴儿获得性感染引起黄疸的主要途径之一。     

沈阳地区巨细胞病毒母婴传播的研究

目的:了解母婴之间巨细胞病毒的传播情况。方法:应用实时荧光定量PCR的技术对764名婴儿及其母亲进行巨细胞病毒DNA的检测。结果:母乳HCMV-DNA阳性,其配对的婴儿尿HCMV-DNA阳性率为31.67%;母乳HCMV-DNA阴性,其配对的婴儿尿HCMV-DNA阳性率为22.54%。两组间差异有统计学意义(P0.05)。结论:感染巨细胞病毒的母乳是婴儿获得性感染的主要途径之一。     

婴儿人巨细胞病毒感染中巨细胞病毒DNA的诊断应用

目的定量检测母乳及婴儿尿液、血液人巨细胞病毒(HCMV)DNA,探讨两种方式在诊断婴儿HCMV感染中临床效果以及母乳对婴儿HCMV感染的影响。方法选取96例婴儿均疑似感染HCMV,采集所有对应患儿母亲的乳汁及患儿的尿液、血液,定量检测HCMV的DNA水平,分离患儿血清酶联免疫法检测HCMV-IgM抗体。结果 96例疑似患儿的尿液荧光定量检测HCMV-DNA阳性60例,阳性率为62.50%,血液检测中HCMV-DNA阳性46例,阳性率为47.92%,均明显高于酶联免疫HCMV-IgM的阳性率(P<0.05);疑似患儿母乳HCMV-DNA检测中阴性37例,阳性59例,阳性率61.46%,阴、阳性结果比较差异有统计学意义(P<0.05);尿检中阴性36例,阳性60例,阳性率62.50%,阴、阳性结果比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论母乳感染HCMV是婴儿HCMV感染的重要途径,与传统免疫化学检测方法相比,检测婴儿血液中HCMV-DNA水平对于诊断婴儿HCMV感染具有重要意义,而检测婴儿尿液中HCMV的DNA水平确诊婴儿HCMV感染更加有效且敏感。     

母亲巨细胞病毒DNA检测与新生儿感染的相关性研究

目的研究产妇人巨细胞病毒（HCMV）感染乳汁与血液中病毒载量相关性,探讨乳汁HCMV检测在HCMV感染中的临床应用价值。方法采用荧光定量PCR（FQ—PCR）检测疑似HCMV感染的502例产妇乳汁及血液HCMV．DNA,并对其新生儿血清及尿液HCMV—DNA进行检测,观察新生儿的感染情况。结果502例产妇乳汁阳性率12．15％,血液阳性率15．74％,两组阳性率差异无统计学意义（x2=2．396,P〉0．05）,而血液中平均拷贝对数值高于乳汁中,差异有统计学意义（t=7．706,P〈0．05）。且乳汁与血液HCMV—DNA拷贝数对呈显著正相关（r=0．698,P=0．000）。502例疑似HCMV感染产妇的新生儿血液、尿液HCMV—DNA检测共63例阳性,阳性率12．55％。母乳HCMV阳性组与母乳HCMV阴性组、母血HCMV阳性组和母血HCMV阴性组比较,新生儿血液、尿液HCMV—DNA阳性检测率均升高（x2值分别为438．69、63．71、407．48,均P〈0．05）。结论巨细胞病毒感染孕产妇血液与乳汁的病毒载量存在相关性,乳汁携带病毒为婴幼儿发生感染的重要原因。     

人巨细胞病毒感染跟踪调查研究

目的:探讨孕期HCMV活动性感染引起宫内传播及对胎、婴儿影响的相关因素。方法:ELISA法孕前筛查2602例育龄妇女HCMV-IgM、HCMV-IgG抗体,并根据抗体检测结果分为4组,应用ELISA和PCR两种技术,跟踪检测4组616例中444名孕妇早、中晚孕期外周血、羊水及新生儿脐带血感染情况,对新生儿行跟踪调查。对107例中发生在不同孕期的活动性感染的不良妊娠结局进行分析。结果:孕前育龄妇女活动性感染率为10.2％;4组孕期活动性感染率高达24.1％(107/444),以原发、复发组发生率最高(46.9％、41.7％)占孕期活动性感染的75％;孕期活动性感染自然流产率(17.8％)显著高于非活动性感染(10.4％);孕期活动性感染发生宫内感染的危险度为34.6％;孕期活动性感染新生儿先天性感染检出率为8.9％;发生在孕早期的活动性感染的不良妊娠结局最为严重。结论:孕前感染类型与孕后发生活动性感染危险度密切相关,且不同类型对妊娠结局影响不同;孕期活动性感染自然流产率高,能够引起宫内垂直传播;胎盘及母体的特异性IgG抗体对胎儿的保护作用不可忽视;重点预防早孕期HCMV感染。     

不同标本巨细胞病毒检测在诊断小儿人巨细胞病毒感染中的应用

目的探讨尿液、淋巴细胞和母乳的HCMV-DNA检测以及血清HCMV-IgM检测在小儿人巨细胞病毒(HCMV)感染诊断中的意义。方法用实时荧光定量PCR检测189例疑似HCMV感染患儿尿液、淋巴细胞和母乳的HCMV-DNA,用化学发光法检测其血清HCMV-IgM,并分年龄分性别对其阳性率进行分析比较。结果新生儿组母乳HCMV-DNA阳性检出率(60.3%)显著高于尿液(5.2%,P<0.001)和淋巴细胞(12.1%,P<0.001),也显著高于血清HCMV-IgM阳性率(3.4%,P<0.001);婴儿组母乳(48.1%)与尿液(55.0%)HCMV-DNA阳性率差异无统计学意义(P>0.05),但两者均显著高于淋巴细胞HCMV-DNA阳性率(22.1%,P<0.001)和血清HCMV-IgM阳性率(24.4%,P<0.001);婴儿组的尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM阳性率均显著高于新生儿组(P<0.01);两组各指标男女阳性率差异均无统计学意义(P>0.05);母乳HCMV-DNA阳性率与尿液、淋巴细胞HCMV-DNA阳性率及血清HCMV-IgM阳性率均呈显著正相关(r=0.630,P=0.000;r=0.413,P=0.000;r=0.341,P=0.000)。结论联合尿液、淋巴细胞HCMV-DNA和血清HCMV-IgM检测有助于患儿HCMV感染的辅助诊断;在无法联合检测的条件下,婴儿首选尿液HCMV-DNA检测可获得较高检出率;母乳HCMVDNA检测并正确喂养有助于预防HCMV感染。     

人巨细胞病毒疫苗研究进展

人巨细胞病毒(Human Cytomegalovirus，HCMV)亦称细胞包涵体病毒，因感染的细胞肿大，并具有巨大的核内包涵体而得名。HCMV在人群中感染非常广泛，美国中上阶层成人感染率为40％～60％，下层人群中达80％；发展中国家感染率更高，我国成人感染率为70％～90％以上。巨细胞病毒感染通常呈隐性感染，无临床症状；一旦感染，则会在人体内终生潜伏，在一定条件下可被激活，     

血液中人巨细胞病毒DNA的检出与分析

本文采用聚合酶链反应对临床不同人群血液标本中人巨细胞病毒ＤＮＡ进行检测并分析其检出意义。１２９份献血员血液标本ＣＭＶ－ＤＮＡ阳性率为７９．８％；７８份临床血沉标本ＣＭＶ－ＤＮＡ检出阳性率为８３．３％；１２例烧伤患者轻输血治疗后ＣＭＶ－ＤＮＡ阳性率达１００％。本文还同时对ＨＣＭＶ－ＩｇＧ与ＨＣＭＶ－ＤＮＡ存在的关系，血沉值与ＨＣＭＶ－ＤＮＡ检出的关系以及烧伤患者ＣＭＶ－ＤＮＡ携带状态作了一些有益的探     

应用荧光定量PCR技术检测小儿尿液中人巨细胞病毒

目的：探讨荧光定量聚合酶链式反应(FQ—PCR)方法检测尿液中人巨细胞病毒(HCMV)对儿童HCMV活动性感染的检测价值。方法：对收集的175份临床标本分别用FQ—PCR方法及低基质磷酸化蛋白(pp65)抗原血症检测方法进行平行检测比较。结果：71例临床患者尿液FQ—PCR检测阳性59例；血液pp65抗原检测阳性53例。尿液中HCMV DNA检测结果与HCMVpp65抗原血症的一致性为84．2％。结论：FQ—PCR检测敏感性要高于pp65抗原血症检测，可以有效提示体内病毒的活跃程度，具有良好的应用价值。     

应用原位免疫聚合酶链反应检测活性巨细胞病毒感染

目的 建立一种新的诊断活动性巨细胞病毒感染的方法。方法 应用原位免疫聚合酶链反应（PCR）技术检测早、中、晚期孕妇宫颈脱落细胞中巨细胞病毒抗原。结果 119例受检标本中16例出现人巨细胞病毒（HCMV）抗原阳性，孕早、中、晚期孕妇活动性HCMV感染率分别为：9．37％、11．90％、17．77％；检出的HCMV抗原阳性细胞数为2－38／5万宫颈脱落细胞，平均8．5／5万细胞。常规ABC法平行检测，原位免疫PCR法检测敏感性高于ABC法。结论 原位免疫PCR方法敏感性高、特异性强，可检出测量HCMV抗原，为临床诊断活动性HCMV感染提供一种新方法。     

Speciation of Arsenic in Exfoliated Urinary Bladder Epithelial Cells from Individuals Exposed to Arsenic in Drinking Water

Background

The concentration of arsenic in urine has been used as a marker of exposure to inorganic As (iAs). Relative proportions of urinary metabolites of iAs have been identified as potential biomarkers of susceptibility to iAs toxicity. However, the adverse effects of iAs exposure are ultimately determined by the concentrations of iAs metabolites in target tissues.

Objective

In this study we examined the feasibility of analyzing As species in cells that originate in the urinary bladder, a target organ for As-induced cancer in humans.

Methods

Exfoliated bladder epithelial cells (BECs) were collected from urine of 21 residents of Zimapan, Mexico, who were exposed to iAs in drinking water. We determined concentrations of iAs, methyl-As (MAs), and dimethyl-As (DMAs) in urine using conventional hydride generation-cryotrapping-atomic absorption spectrometry (HG-CT-AAS). We used an optimized HG-CT-AAS technique with detection limits of 12–17 pg As for analysis of As species in BECs.

Results

All urine samples and 20 of 21 BEC samples contained detectable concentrations of iAs, MAs, and DMAs. Sums of concentrations of these As species in BECs ranged from 0.18 to 11.4 ng As/mg protein and in urine from 4.8 to 1,947 ng As/mL. We found no correlations between the concentrations or ratios of As species in BECs and in urine.

Conclusion

These results suggest that urinary levels of iAs metabolites do not necessarily reflect levels of these metabolites in the bladder epithelium. Thus, analysis of As species in BECs may provide a more effective tool for risk assessment of bladder cancer and other urothelial diseases associated with exposures to iAs.     

黄疸婴儿人类巨细胞病毒感染的荧光定量PCR检测

目的:调查黄疸婴儿人类巨细胞病毒感染的情况。方法:采用荧光定量PCR方法对203例黄疸婴儿尿液标本进行HCMV-DNA定量检测。结果:在所检测的203例婴儿中,HCMV-DNA阳性的有52例,感染率为25.62%。HCMV-DNA拷贝数与黄疸持续时间无相关性。结论:HCMV是引起婴儿黄疸的主要原因之一,荧光定量PCR检测婴儿尿液中的HCMV-DNA快速、方便,检出率高,可及时诊断出巨细胞病毒的感染,以便及时治疗,降低畸形儿发生率。     

人巨细胞病毒对母婴的影响

为探讨人巨细胞病毒感染对母儿的影响,采用ＥＬＩＳＡ法对１８１８例早、中、晚孕期孕妇进行ＨＣＭＶ病原体血清学监测,并对部分感染者的羊水、胎盘组织、脐血等采用ＰＣＲ方法监测ＨＣＭＶ－ＤＮＡ,同时采用Ｂ超监测胎儿的生长发育及新生儿结局。结果发现早、中晚期孕妇中有７８例为活动性感染（４．３％）,并发胎膜早破和早产１７例。新生儿先天感染２２例（２８．２１％）,２例 流产、４例畸形、１３例头颅Ｂ超异常,９只耳     

PCR技术检测尿中人巨细胞病毒的方法学研究

应用ＨＣＭＶ早、晚期两对ＤＮＡ引物，建立了聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测尿中人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）的方法。肾移植术后ＨＣＭＶ感染的临床尿样检测结果表明，该方法具有快速、特异性强、灵敏度高等优点，与血清ＨＣＭＶ－ＩｇＭ检测结果符合率为８３．３％。使用早、晚期基因组的双引物分别对临床尿样进行ＰＣＲ扩增，减少了由于自然点突变所致的假阴性，且引物与ＨＣＭＶ同属其它病毒及组织ＤＮＡ间无交叉反应；以ＨＣＭＶ组织培养液作模板，灵敏度可达６２５ｆｇ。本方法为诊断肾移植受者ＨＣＭＶ感染提供了新的手段，适于临床推广。     

吖啶橙染色法在膀胱癌无创诊断中的应用

[目的]运用吖啶橙染色荧光显微镜(acridineorenge,AO-F)检查法进行膀胱癌无创性诊断。[方法]采用AO-F检查法及巴氏染色分级(papanicolaousstaingradingsmethod,PG)检查法检测79例膀胱癌患者及80例非肿瘤患者的尿脱落细胞。[结果]两种染色法对诊断膀胱癌均有统计学意义,分层卡方检验,χMH2=173.461,P=0.000。巴氏染色法与吖啶橙荧光染色法比较,后者膀胱癌的检出率优于前者,χ2=19.606,P=0.000。巴氏染色法检出膀胱癌的敏感度为56.6%,特异度为100%。吖啶橙荧光染色法检出膀胱癌的敏感度为85.5%,特异度为100%。80例非膀胱癌患者两种尿脱落细胞检查的阳性检出率为0%。[结论]吖啶橙染色法比单从细胞形态上检测肿瘤细胞更具有重要的临床价值,可作为膀胱癌的辅助诊断方法。     

孕妇巨细胞病毒激活感染及对胎儿影响研究

目的 探讨孕妇巨细胞病毒激活感染的危险因素及对胎儿的影响.方法 收集孕妇血清标本351份,母婴血清标本245对,检测HCMV-IgM抗体.并对孕妇的年龄、孕次、产次及病理性流产史等因素进行调查,观察对婴儿的影响.结果 上述因素对HCMV激活感染有一定作用,其中孕次是激活感染的危险因素.孕妇激活感染可影响胎儿发育,引起胎儿生长发育迟缓,新生儿呈低体重,多种脏器均有HCMV包涵体及病毒颗粒.在孕早期能使胎儿发育受阻而产生难免流产.结论 减少怀孕次数有利于优生优育,避免早期的HCMV激活感染,可减少流产及畸形儿出生.     

人巨细胞病毒感染与自然流产关系的研究

目的 探讨人巨细胞病毒(HCMV)感染与自然流产之间的关系。方法 应用酶联免疫吸附试验(ELISA)及聚合酶链试验(PCR)检测39例自然流产患者(流产组)血清中HCMV-IgM及外周血、胎儿组织中HCMV-DNA,并选择23例人工流产孕妇做对照组。结果 流产组患者血清中HCMV-IgM、外周血、胎儿组织HCMV-DNA阳性率分别为38.46%、43.58%、33.33%.对照组分别是8.69%、8.69%、4.31%.两者比较差别有显着性意义(P<0.05).结论 HCMV感染是引起自然流产的重要原因之一。     

实时荧光定量PCR检测膀胱癌TWIST1基因启动子的甲基化状态

目的建立针对TWIST1基因启动子甲基化状态的荧光定量检测方法,进而评估其在膀胱癌临床研究的应用前景。方法应用实时荧光定量PCR方法检测南通地区50例确诊膀胱癌患者和25例非膀胱癌的健康对照者的尿液标本中TWIST1基因启动子的甲基化和非甲基化含量,对其甲基化率进行对比。结果正常人的TWIST1启动子的甲基化率为8.1%～17.3%,平均值为12.3%,膀胱癌患者的甲基化率为25.2%～48.3%,平均值为38.2%,膀胱癌患者的TWIST1基因启动子甲基化率有明显的增高(P<0.05)。结论 TWIST1基因启动子区在膀胱癌中异常甲基化,能够作为有效检测膀胱癌的基因。     

婴幼儿人巨细胞病毒基因分子信标杂交荧光检测的研究

目的选择人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）基因序列设计分子信标,建立扩增体系及分子信标（moIecular beacon）芯片检测方法。方法选取2008年6月1日至2008年7月30日,人巨细胞病毒呈阳性的临床血标本来源于重庆市四所医院（重庆市儿童医院为9例、重庆市计生医院为8例、第三军医大学西南医院为7例、第三军医大学新桥医院为5例）,共计29例纳入感染组。选取同期来源于上述四所医院（第三军医大学西南医院为5例、重庆市计生医院为4例、第三军医大学新桥医院为4例、重庆市儿童医院为3例）的人巨细胞病毒呈阴性临床标本,共计16例纳入对照组。无探针包被位点（n=10）纳入空白对照组（本研究遵循的程序符合第三军医大学西南医院人体试验委员会所制定的伦理学标准,得到该委员会批准,取得受试对象的知情同意,并与试验患儿监护人签署临床研究知情同意书）。运用Beacon designer软件设计人巨细胞病毒分子信标及其单侧延长臂分子信标,建立扩增体系及分子信标芯片人巨细胞病毒检测方法,应用荧光显微镜观测荧光信号强度。结果荧光显微镜观测人巨细胞病毒感染组与对照组PCR产物与分子信标杂交后荧光信号强度区别明显;29例人巨细胞病毒婴幼儿感染（感染组）与16例无人巨细胞病毒感染（对照组）的荧光信号强度比较,差异有显著意义（P〈0．05）。结论分子信标芯片技术检测婴幼儿人巨细胞病毒基因具有灵敏、快速、可批量处理等优特点。采用荧光显微镜观测荧光杂交信号具有更强的荧光信号识别、放大功能及结果判断更准确等优点。