mitoKATP和肌浆网钙ATP酶在预适应心肌保护中的相关性研究

目的探讨肌浆网钙ATP酶在心肌细胞缺血预适应及腺苷预适应中的作用以及其与mitoKATP开放的相关性。方法原代培养的新生SD大鼠心肌细胞,随机分为6组:正常培养组、缺氧/复氧损伤组、缺血预适应组、腺苷预适应组、5-HD(mitoKATP阻断剂)+缺血预适应组、5-HD(mitoKATP阻断剂)+腺苷预适应组。测定各组细胞上清中LDH的释放量,细胞存活指数及肌浆网钙ATP酶活性。结果缺血预适应组与缺氧复氧组比较,LDH的释放显著下降(P<0.01),存活指数明显上升(P<0.01),肌浆网钙ATP酶活性提高(P<0.01)。腺苷预适应组与缺氧复氧组比较,LDH的释放显著下降(P<0.01),存活指数显著上升(P<0.01),肌浆网钙ATP酶活性无明显提高(P>0.05)。5-HD+缺血预适应组较缺血预适应组LDH释放增多(P<0.05),细胞存活指数下降显著(P<0.01),肌浆网钙ATP酶活性下降(P<0.01)。而5-HD+腺苷预适应组较腺苷预适应组LDH释放无明显改变(P>0.05),细胞存活指数下降不显著(P>0.05),肌浆网钙ATP酶活性下降不明显(P>0.05)。结论肌浆网钙ATP酶与mitoKATP开放均参与了缺血预适应早期相的保护作用,且2者之间的作用具有相关性。但腺苷预适应的心肌保护作用与肌浆网钙ATP酶与mitoKATP开放无明显相关性。     

心肌缺血预适应延迟保护作用和诱导型一氧化氮合酶及蛋白激酶C的关系

缺血预适应（IPc）是体内普遍存在的一种强大的自身的保护机制。随着研究的不断深入，发现心肌缺血预适应存在具有更广泛临床意义的延迟保护作用，并且这种延迟保护作用与诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的活化及蛋白激酶C（PKC）通路有关。文章就心肌缺血预适应延迟保护作用机制与iNOS及PKC的关系研究进展作一综述。     

缺血预处理中ATP敏感性钾通道的作用

离体鼠心１８个，Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ－Ｎｅｌｌｙ离体心脏灌注模型，改良Ｋ－Ｈ液３７℃，１２ｋＰａ灌注，常温改良Ｔｈｏｍａｓ液诱导停搏４５分钟再灌注６０分钟。实验分二组，Ⅰ组ＡＴＰ敏感性钾通道开放剂缺血预适应组，Ⅱ组ＡＴＰ敏感性钾通道阻断剂缺血预适应组。结果显示：６０分钟再灌注后Ｉ组ＬＶＤＰ、ｄｐ＝ｄｔ，冠脉回流量均优于Ⅱ组，Ｐ〈０．０５，冠脉血管阻力低于Ⅱ组，Ｐ〈０．０５，心肌漏出酶低于Ⅱ组，Ｐ     

ATP敏感性钾通道在心血管疾病中的作用

1983年日本学者在豚鼠心室肌细胞上发现了一类非电压依赖、受细胞内三磷腺苷（ATP）和二磷腺苷（ADP）调节的选择性钾通道,命名为ATP敏感性钾通道（KATPchannel）。KATPchannel分为细胞膜、线粒体、核膜KATPchannel三类,在心血管疾病如急性心肌缺血、缺血预适应、心律失常、高血压等中发挥的作用十分广泛,但何种KATPchannel起关键作用还有一定争议,深入研究KATPchannel在心血管系统中的作用对于防治心血管疾病具有重要意义。     

优降糖对KATP通道介导缺血预适应心肌再灌注损伤的影响

目的 :探讨优降糖在完整大鼠心脏模型中 ,对 ATP敏感钾通道 (KATP)介导心肌缺血预适应作用的影响。方法 :将 4 4只大鼠随机分为 4组 :心肌缺血预适应组 (IPC组 )、优降糖组 (GL I组 )、优降糖 IPC组 (G P组 )和对照组 (C组 )。心肌缺血预适应由 3次 10分钟缺血和 10分钟再灌注组成。所有大鼠均接受 30分钟缺血和 6 0分钟再灌注。梗死范围由饱和曲利本蓝和红四氮唑蓝染色判定 ,并以坏死区占缺血区的百分比表示。 导联记录心脏室性心律失常。结果 :IPC能显著缩小缺血再灌注后的心肌梗死范围 ,且这种作用能被 KATP通道阻滞剂优降糖完全取消。 IPC可减少缺血再灌注所致的室性心律失常的发生 ,但这种保护作用不能被优降糖所阻断。结论 :优降糖对 KATP介导 IPC的心肌保护作用有影响。     

肌浆网钙转运ATP酶和受磷蛋白在大鼠心肌梗死后的表达变化

目的建立大鼠急性心肌梗死模型,观察心肌梗死后心室重塑过程中肌浆网钙转运ATP酶(Ca-2+ATPase,SERCA)和受磷蛋白(PLB)的表达变化。方法雄性SD大鼠,应用前降支动脉结扎法建立大鼠心肌梗死模型,术后4周观察血流动力学参数,SERCA mRNA和PLB mRNA的表达。结果大鼠心肌梗死后4周,心肌梗死组左心室舒张末压(LVEDP)显著大于假手术组,左心室内压最大上升和下降速率(±dp/dtmax)显著低于假手术组。心肌梗死组心肌组织中SERCA mRNA表达下调,PLB mRNA表达上调。结论大鼠心肌梗死4周后心室收缩和舒张功能已降低,进入了心力衰竭阶段,SERCA mRNA和PLB mRNA的表达变化与心力衰竭的发生发展相关,可能是心肌梗死后心肌收缩和舒张功能失调的重要机制。     

ATP敏感性钾通道开放剂对脑缺血/再灌注损伤的保护作用及信号转导机制研究

目的 观察ATP敏感性钾通道（KATP）开放剂对大鼠脑缺血／再灌注（I／R）损伤后神经元凋亡的保护作用及其信号转导机制。方法 将200只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组（A组）、缺血组（B组）、KATP开放剂治疗组（C组）及KATP开放剂和阻断剂联合治疗组（D组）。应用线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）模型，各组于缺血后2h进行再灌注。各组于再灌注6、12、24、48和72h分别取5只大鼠脑组织标本，用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）检测神经元凋亡，用免疫组化法检测天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）和caspase-9的蛋白表达；各组其余5只大鼠用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）观察caspase-3和caspase-9的mRNA表达。结果 B、C、D组再灌注后各时间点凋亡神经元数以及caspase-3、caspase-9的蛋白和mRNA表达均显著高于A组（P〈0．05或P〈0．01），C组各指标均显著低于B组和D组（P〈0．05或P〈0．01），而B组与D组各指标间比较差异均无显著性（P均〉0．05）。结论 KATP开放剂能显著减少脑I／R损伤后神经元凋亡以及caspase-3、caspase-9的mRNA和蛋白表达，提示KATP开放剂可能通过抑制线粒体通路减少脑I／R损伤后的神经元凋亡。     

心肌缺血预适应对急性心肌梗塞近期预后的作用

1986年Murry发现并提出心肌缺血预适应现象(ischemic conditioning)的新概念,是指一次或多次短时心肌缺血和再灌注可明显增强心肌对较长时间持续缺血和再灌注损伤的耐受能力。Orizi认为临床上心肌梗塞前多次发作不稳定心绞痛可使缺血心肌处于预适应状态。本文对100例急性下壁心肌梗塞或合并后壁、右室、前壁心肌梗塞患者,从临床上研究心肌梗塞前有无心肌缺血预适应现象对心肌梗塞的影响。 1 资料与方法 1993年1月～1997年5月收治的100例资料完整的急性下壁或合并后壁、右室和前壁心肌梗塞住院患者。其中男69例,女31例,平均年龄62岁。58例心肌梗塞前均有心绞痛发作史(A组),其心绞痛发作1天至10年不等,大多为2～4年。无心绞痛史者42例(B组)。     

牛磺酸对运动大鼠心肌线粒体ATP酶及钙、镁离子的影响

目的：探讨牛磺酸对运动大鼠心肌线粒体ATP酶及钙、镁离子的影响。方法：以力竭运动大鼠为模型，测定了心肌线粒体Ca^2 -ATP酶、Mg^2 -ATP酶的活性以及Ca^2 、Mg^2 含量。结果：大鼠力竭运动后，心肌线粒体Ca^2 -ATP酶和Mg^2 -ATP酶的活性显著下降，Ca^2 -含量显著增加，Mg^2 含量显著降低；而补充牛磺酸组大鼠力竭运动后未见心肌线粒体Ca^2 -ATP酶和Mg^2 -ATP酶的活性以及Ca^2 -、Mg^2 含量的显著变化。结论：牛磺酸能有效地拮抗力竭运动后大鼠心肌线粒体Ca^2 -ATP酶、Mg^2 -ATP酶活性的降低以及Ca^2 -、Mg^2 含量的显著变化，具有保护心肌线粒体的作用。     

肌浆网钙ATP酶过表达对心房颤动兔心房心电生理的影响

目的探讨肌浆网钙ATP酶2a(SERCA2a)过表达对急性心房颤动(AF)兔心房肌电重构及结构重构的影响。方法 36只成年新西兰大白兔,随机分为假手术组作为对照组(Control组,n=12)、腺病毒/绿色荧光蛋白+AF组(rAd/GFP+AF组,n=12)、腺病毒/SERCA2a+绿色荧光蛋白+AF组(rAd/SERCA2a/GFP+AF组,n=12)。采用快速心房起搏(频率600次/min)制作急性AF模型。观察各组起搏0、4、8、12、24 h心房有效不应期的变化;应用超声测量左右心房内径、左心室射血分数;荧光显微镜下观察心肌组织绿色荧光表达情况。结果 rAd/SERCA2a/GFP+AF组自起搏12 h后AERP较rAd/GFP+AF组延长(P<0.05)。rAd/SERCA2a/GFP+AF组与rAd/GFP+AF组相比较,兔左右心房直径增大,但增加不显著(P>0.05);EF值升高,两组有统计学差异(P<0.05)。rAd/SERCA2a/GFP+AF组兔心肌冰冻切片在荧光显微镜下可见弥漫绿色荧光。结论以rAd为载体介导SERCA2a基因转导在心房肌组织中过表达可以抗快速起搏引起的AERP缩短,可有效逆转快速心房起搏兔心房肌的电重构及结构重构,有望成为一种潜在的治疗AF的方法。     

针刺手厥阴心包经穴对缺血/再灌注大鼠心肌离子泵的影响

目的:观察针刺心包经穴对大鼠心肌缺血/再灌注损伤过程中心肌细胞Na -K -ATP酶和Ca2 -Mg2 -ATP酶活性的影响,探讨其心肌保护作用的机制.方法:50只大鼠随机分为5组.假手术组只穿线不结扎冠状动脉,其余各组制备缺血/再灌注动物模型,其中3个针刺穴位组分别于电针大鼠内关穴、郄门穴或支沟穴20 min后,结扎冠状动脉左前降支40 min,心电图监测,再电针相应穴位20 min,恢复灌流.假手术组于穿线后100 min、模型组和各针刺穴位组于再灌注60 min摘取心脏,取心室肌制备心肌细胞膜,定磷法观察Na -K -ATP酶和 Ca2 -Mg2 -ATP酶活性的变化.结果:针刺心包经穴(内关、郄门)组Na -K -ATP酶和 Ca2 -Mg2 -ATP酶活性均明显升高,与模型组比较差异均非常显著(P均<0.01).结论:针刺手厥阴心包经穴可提高Na -K -ATP酶和Ca2 -Mg2 -ATP酶活性,减轻心肌细胞钙超载程度,有效地保护心肌.     

外源性磷酸肌酸对游泳力竭小鼠大脑中谷氨酸和钙-ATP酶活力的影响

目的：研究外源性磷酸肌酸（PCr）对游泳力竭小鼠大脑中谷氨酸（Glu）和钙-ATP酶（Ca^2＋ATPase）活力的影响,以进一步揭示PCr的抗疲劳机制。方法：将44只6周龄小鼠分为力竭对照组12只（A组）、力竭给药组12只（B组）、游泳8min对照组10只（C组）、游泳8min给药组10只（D组）,采取小鼠负重游泳的力竭运动模型,每只小鼠负重量为自身体质量的6％。于游泳前30min,B、D组小鼠经腹腔注射磷酸肌酸钠溶液1000mg／kg;A、C组小鼠注射同等比例生理盐水作为安慰剂。记录力竭组小鼠的力竭游泳时间,采用化学比色法检测4组小鼠大脑中Glu含量和Ca^2＋ATPase的活性。结果：经检测,B组小鼠的力竭游泳时间明显长于A组（P〈0．05）。小鼠大脑Glu含量检测显示,B组明显低于A组,D组明显低于c组（P％0．05）;Ca^2＋ATPase活力检测显示,B组明显高于A组,D组明显高于C组（P〈0．05）。结论：外源性PCr的抗疲劳机制与增强Ca^2＋ATPase活性和间接降低大脑中的Glu含量有关。     

腺苷对心房肌细胞钾钙通道的影响及受体机制

运用膜片钳全细胞记录方式，研究腺着（Ado）及选择性腺着A;受体阻滞剂8-环戊基-1，3-二丙基黄嘌呤（DPCPX）对豚鼠心房肌细胞延迟整流性怀通道电流（IK）和L-型钙通道电流（L－ICA）的影响及受体机制。结果表明：3μmol／LAdo可加强IK，其峰值电流增大（P＜0.01），LK尾电流Ik．tail亦增大，Ik.tail的快、慢失活时间常数均减少。同时Ado可抑制L－ICa，峰值电流减少36.9％．其激活和失活时间常数均增大。Ado对两者的峰值电压、激活电位、反转电位及时间和电压依赖性均无影响。DPCPX可基本消除Ado对IK、L-ICa的作用，表明Ado对心房肌细胞钾、钙通道的影响由A1受体介导实现的。     

甲状腺激素T3对心肌细胞钠钾泵及钙泵功能的影响

目的观察甲状腺激素T3(三碘甲腺原氨酸)对鼠缺血再灌注(I/R)心肌细胞钠钾泵及钙泵功能的影响,探讨T3在心肌保护中的作用.方法将实验大鼠分为甲状腺功能正常(A组)和甲状腺功能减退(甲减,B组)两组,每组又分别随机分成对照组、缺血组、单纯灌注液组、T3灌注液组;测定左室心肌与体重的比值;测定各组心肌细胞Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase活性.结果甲减状态大鼠心肌细胞Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase活性分别下降10.8%、43.2%(P＜0.01).缺血30min,A、B两组的Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase活性均明显降低,并随着复灌进一步下降.然而,在复灌20min时,T3灌注液组的酶活性较单纯灌注液组显著提高,A组Na+-K+-ATPase活性(14.93±0.87)μmol/(mg*h)比较(12.17±0.91)μmol/(mg*h),P＜0.05,Ca2+-ATPase活性(11.20±1.07)μmol/(mg*h)比较(7.33±0.56)μmol/(mg*h),P＜0.01;B组Na+-K+-ATPase(14.10±0.51)μmol/(mg*h)比较(10.89±0.76)μmol/(mg*h),P＜0.01,Ca2+-ATPase活性(6.89±0.52)μmol/(mg*h)比较(5.23±0.71)μmol/(mg*h),P＜0.05.结论甲减状态及I/R过程心肌细胞钠钾泵及钙泵功能受到严重损害,T3可显著提高钠钾泵及钙泵功能,可部分逆转I/R过程中泵功能的损害,降低胞浆中Ca2+浓度,减轻心肌细胞的损伤,对心肌保护有益.     

康莱特对HepG2细胞凋亡及其Caspase-3和Survivin表达影响

目的观察康莱特注射液对HepG2肝癌细胞凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）和存活素（Survivin）表达的影响,并初步探讨其作用机制。方法分别采用体积分数0.005、0.010、0.015、0.020的康莱特体外培养HepG2细胞。采用MTT法检测HepG2细胞抑制率,流式细胞仪检测HepG2凋亡情况以及Caspase-3和Survivin表达的变化。结果康莱特能明显抑制HepG2肝癌细胞生长,且呈时间和浓度依赖性。康莱特组中Caspase-3、Survivin蛋白的表达与对照组比较,差异有显著性（P〈0.01）。结论康莱特可抑制HepG2肝癌细胞增殖,并可通过提高Caspase-3蛋白表达和降低Survivin蛋白表达诱导HepG2肝癌细胞凋亡。     

低分子肝素对COPD模型大鼠肺组织HIF-1α、HO-1及VEGF表达的影响

目的研究低分子肝素（LMWH）对慢性阻塞性肺疾病（COPD）模型大鼠肺组织中低氧诱导因子-1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）、血红素加氧酶-1（HO-1）表达的影响。方法将60只SPF级Wistar大鼠随机分为正常对照组、COPD模型组及LMWH干预组。采用烟熏联合气管内注入脂多糖的方法建立COPD动物模型;LMWH组在建立COPD模型同时皮下注射低分子肝素干预。观察3组大鼠肺组织病理变化,并应用免疫组化的方法检测LMWH干预前后肺组织中HIF-1α、VEGF、HO-1的表达情况。结果 COPD组及LMWH组大鼠肺组织中HIF-1α、VEGF及HO-1的表达均较正常对照组明显升高,差异有显著性（F=58.97～88.12,q=6.70～18.65,P〈0.01）;与COPD模型组相比,LMWH干预组大鼠肺组织的病理改变较轻,HIF-1α、VEGF及HO-1表达下降,差异有显著性（q=8.64～11.19,P〈0.01）。结论 HIF-1α、VEGF和HO-1可能均参与COPD发生发展,参与气道炎症及气道重塑;LMWH可以减轻气道炎症及气道重塑。     

In vivo effects of high phenylalanine blood levels on Na+,K+-ATPase,Mg2+-ATPase activities and biogenic amine concentrations in phenylketonuria

OBJECTIVE: To evaluate the activities of Na+,K+-ATPase and Mg2+-ATPase in erythrocyte membranes from phenylketonuric (PKU) patients and to correlate the enzyme activities with their blood phenylalanine (Phe) levels, biogenic amines as well as with their precursors tyrosine (Tyr) and tryptophan (Try). DESIGN AND METHODS: Twenty three PKU patients were divided into group A (n = 12) on a restricted diet (Phe 1.57 +/- 0.52 mg/dL or 0.10 +/- 0.03 mM) and group B (n = 11) on a "loose" diet (Phe 24.45 +/- 1.50 mg/dL or 1.72 +/- 0.09 mM). The enzyme activities were measured spectrophotometrically, the amino acids with an automatic amino analyser and the biogenic amines with HPLC methods. RESULTS: In group B, plasma amino acids (Tyr, Try), their biogenic amines [adrenaline (A), noradrenaline (NA), dopamine (DA) and serotonin (5HT)], (Na+,K+)-ATPase and Mg2+-ATPase activities were found remarkably decreased (p < 0.001). CONCLUSIONS: High Phe and/or low NA, DA, 5HT plasma levels may indirectly inhibit the erythrocyte membrane Na+,K+-ATPase and Mg2+-ATPase in PKU patients. The observed enzyme inhibitions could be a very informative peripheral marker as regards the neurotoxic Phe brain effects.     

基底膜蛋白多糖对成骨细胞增殖及BMP-2分泌影响

目的研究基底膜蛋白多糖对成骨细胞增殖及其分泌骨形态发生蛋白2（BMP-2）的影响。方法体外培养大鼠成骨细胞,随机分为基底膜蛋白多糖抑制剂组（A组）、空白对照组（B组）、低氧状态下基底膜蛋白多糖抑制剂组（C组）、低氧状态下对照组（D组）。各组分别进行相应处理,培养24、48、72、96h。采用细胞增殖检测方法（CCK-8法）和ELISA法,检测并比较各组成骨细胞增殖和分泌BMP-2的变化。结果培养24、48h,A组与B组比较、C组与D组比较成骨细胞增殖活性均降低,差异有显著性（t=4.51~18.04,P〈0.05）;培养72h,各组差异无显著性（P〉0.05）。培养96h内,A组与B组比较、C组与D组比较成骨细胞分泌BMP-2降低,差异有显著性（t=6.61~30.50,P〈0.05）。结论在成骨细胞增殖早期基底膜蛋白多糖对成骨细胞增殖活性有显著影响,并对成骨细胞分泌BMP-2有促进作用。     

肺癌A549细胞P物质和NK-1表达及SR140333对其影响

目的探讨P物质及其受体神经激肽1（NK-1）在体外培养的肺癌细胞系A549中的表达及免疫细胞化学定位,并进一步研究NK-1受体拮抗剂SR140333对A549细胞的影响。方法用放入盖玻片的6孔板进行A549肺癌细胞系的培养,第3天将盖玻片取出进行免疫细胞化学染色;另取培养3 d后的细胞加入SR140333,48 h后应用免疫细胞化学染色方法检测P物质和NK-1的表达。结果 A549细胞系中P物质和NK-1呈阳性表达,P物质阳性表达主要位于胞浆,而NK-1阳性表达主要位于胞膜和胞浆。加入SR140333的A549细胞P物质和NK-1阳性表达明显低于仅加入培养液的细胞,差异有显著性（t=11.54、14.58,P〈0.05）。结论 P物质和NK-1可能通过神经内分泌机制参与肺癌的发病过程,SR140333可抑制A549细胞P物质及NK-1的阳性表达。