维持人胚胎干细胞多能性顺式作用元件的筛选

目的 在人胚胎干细胞(hESCs)中建立一种可行的CRISPR文库筛选方法,筛选参与维持hESCs多能性的顺式作用元件.方法 将诱导型Cas9蛋白表达元件插入hESC基因组中,构建诱导型Cas9稳定表达株(iCas9-hESC).通过分析已发表的hESCs中的染色质互作信息,确定可能参与多能性基因调控的顺式作用元件,并...     

低氧对人胚胎干细胞多能性维持及印迹基因表达稳定性的影响

目的 研究低氧对人胚胎干细胞(hESC)生物学特性维持及印迹基因表达状态的影响.方法 在低氧(5％O2)条件下持续培养FY-hES-7细胞并采用细胞免疫荧光染色、RT-PCR等方法对其胚胎干细胞特性进行鉴定.运用全基因组基因表达谱芯片技术及实时荧光定量PCR方法检测FY-hES-7早期(第32代)和晚期(第52代)细胞的55个印迹基因表达状态.所有检测同时以常氧(21％ O2)培养作为对照.结果 低氧条件下长期培养的FY-hES-7细胞具有和常氧条件下培养相似的生物学特性,阳性表达干细胞表面标志SSEA-3、SSEA-4、TRA- 1-60、TRA-1-81及碱性磷酸酶(AKP),但细胞克隆形态较常氧培养下典型,且未分化状态保持时间较常氧条件下更长.低氧长期培养后FY-hES-7细胞的55个印迹基因中,有15个印迹基因(27.27％)表达发生了变化(上调8个,下调7个),而常氧培养后则有39个印迹基因表达水平有变化(70.91％)(上调21个,下调18个),氧浓度对印迹的影响差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 低氧更有利于hESC生物学特性的维持.长期培养能对hESC的印迹表达产生影响,但低氧培养条件下hESC的印迹稳定性要明显好于常氧培养.     

小鼠胚胎成纤维细胞重编程为多能干细胞

背景：目前胚胎干细胞研究面临伦理争议及来源困难等诸多问题,人们一直在寻找不需破坏胚胎或卵细胞的建立多潜能干细胞的方法。 目的：构建小鼠诱导性多潜能干细胞系并对其进行鉴定。 方法：利用反转录病毒将3个干细胞基因Oct4、Sox2、Klf4导入小鼠胚胎成纤维细胞中,将其诱导为多潜能干细胞。通过镜下观察、碱性磷酸酶染色、反转录PCR(RT-PCR)、免疫荧光实验及畸胎瘤形成实验等对诱导性多潜能干细胞形态、多能性基因表达情况、干细胞表面标记及全能性等进行鉴定分析。 结果与结论：从小鼠胚胎成纤维细胞诱导而来的诱导性多潜能干细胞镜下观察呈典型的克隆状生长,圆形或椭圆形,与饲细胞分界清楚;RT-PCR、碱性磷酸酶染色及免疫荧光检测诱导性多潜能干细胞高表达胚胎干细胞相关基因及蛋白;种植在免疫缺陷鼠体内能够形成向内中外3个胚层分化的畸胎瘤,表明诱导性多潜能干细胞具有多潜能性。通过转导3种重编程因子可以将小鼠成纤维细胞诱导为类似胚胎干细胞的多潜能干细胞。     

孤雌胚胎干细胞来源的诱导多能干细胞的建立及对印记基因表达的影响

目的 通过诱导多能干细胞（iPSCs）技术重编程孤雌胚胎干细胞,探讨iPSCs技术对孤雌胚胎干细胞的多能性及印记基因的影响。方法 从孤雌激活的囊胚中建立了孤雌胚胎干细胞;利用反转录病毒将多能性转录因子转入孤雌胚胎干细胞中,建立孤雌iPS细胞。 结果 建立的孤雌来源的iPS细胞体内外分化能力与孤雌胚胎干细胞的差别无显著性;Real-time PCR结果显示,孤雌iPS细胞母源印记基因的表达明显高于孤雌胚胎干细胞,父源印记基因表达下降,多能性基因表达升高。 结论 iPSCs技术能影响基因的表达,尤其是印记基因,印记使其更接近于正常受精来源的胚胎干细胞中印记基因水平。     

Nanog稳定胚胎干细胞的多能性以及调节生殖细胞的形成

转录因子Nanog是在哺乳动物多潜能细胞和发育中的生殖细胞中发现的一种蛋白。Nanog的缺失引起早期胚胎的死亡。其组成型表达可以自动引起胚胎干细胞的自我更新。Nanog也因此被认为是多能性转录系统的核心元素，是干细胞增殖同时保持其分化潜能所必需的。但是，当前的实验表明在小鼠胚胎干细胞中Nanog的水平是上下波动的，并不是维持多能性所必需的。     

纤维母细胞生长因子依赖的鼠诱导性多潜能干细胞具有类胚胎干细胞多能性

近期研究表明干细胞在形态、分子以及功能上都存在两种明显特殊形式:以鼠源胚胎干细胞为代表的一类白血病抑制因子依赖性多能状态,以及鼠类外胚层干细胞为代表的纤维母细胞生长因子依赖性原始多能状态。在鼠源外胚层干细胞培养条件下诱导性多潜能干细胞的诱导取决于纤维母细胞生长因子,研究发现纤维母细胞生长因子诱导性多潜能干细胞意外地表现出类胚胎干细胞或内细胞群的性能。纤维母细胞生长因子诱导性多潜能干细胞有X染色体活性、多遗传性分化、畸胎瘤潜能以及在有机体内的嵌合能力。调查结果表明在129和B16鼠系中,无论出于何种生长因子环境下,诱导性多潜能干细胞都能保持原始多能状态。关键分子信号通路的描述说明纤维母细胞生长因子诱导性多潜能干细胞有赖于活化素和纤维母细     

成体干细胞诱导多能干细胞的研究进展

通过存在于卵母细胞中的一些未确定的因子,以成年细胞对动物进行克隆证实成年细胞能被重编程为胚胎干细胞(ESCs).近年来,某些转录因子被发现具有诱导体细胞且有多潜能性的特性,从而可以在不使用卵母细胞的情况下获得性能上与胚胎干细胞大体一致的诱导多能干细胞(iPS).iPS细胞为细胞多能性机制的研究、特定疾病模型的建立以及在...     

诱导多能干细胞的研究进展

人类组织工程的最终目的 是细胞在体外生长、分化为功能组织和器官以替代、修复、维持或者增强受损组织和器官功能.胚胎干细胞由于具有体外无限扩增的能力以及分化为机体各种类型细胞的潜能而成为组织工程中首选的细胞来源.主要就应用不同转录因子Oct3/4、Sox2、c-myc、Klf4、Nanog和LIN28经逆病毒导入未经遗传修改的成纤维细胞,从而使该类细胞去分化与重编程成具有分化为其它各种类型细胞的多能干细胞的研究进展作一综述.     

能帮助干细胞保持其多能性的蛋白质

据2011年3月30日Hao Wu(Nature,2011,[Epub ahead of print])报道,美国北卡罗来纳大学的研究组发现了一种新方法,蛋白质Tet1能帮助干细胞保持其多能性。在最新的两项研究中,该研究组宏观地观察到蛋白质在小鼠基因组中的位置,揭示了其令     

不同条件下培养小鼠胚胎干细胞

胚胎干细胞 (ｅｍｂｒｙｏｎｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌ,ＥＳ细胞 )是从早期胚胎中分离出来的全能细胞系[1,2 ] 。当将这种细胞注入受体胚胎时 ,能参加各种组织器官的发育 ,形成嵌合体而后杂交至纯合体。通过ＥＳ细胞进行基因打靶[3 ] ,将外源基因定点整合产生基因剔除或基因修复从而制备转基因动物模型 ,故ＥＳ细胞可以用于研究基因的结构、功能及调控、医学疾病模型建立以及生殖细胞基因治疗等研究。利用ＥＳ细胞可以研究哺乳动物的分化和发育等基本问题 ,还可以通过研究ＥＳ细胞在体外定向诱导为特殊组织类型细胞为将来临床提供器官组织的原材…     

饲养层细胞体系及白血病抑制因子对维持小鼠胚胎干细胞未分化状态的作用

目的建立并筛选最适合的小鼠胚胎干(ES)细胞饲养层培养体系。方法建立7种经过不同处理的鼠胚成纤维细胞作为饲养层培养体系,分别进行小鼠胚胎干细胞的培养,观察7种饲养层培养体系对小鼠ES细胞增殖能力及未分化状态的维持情况。结果小鼠胚胎细胞在3代内均可用于ES细胞的培养。与其他各组比较,第3代培养鼠胚成纤维细胞经丝裂霉素C处理2h后加外源白血病抑制因子(IF,10μg/ml)用作饲养层的克隆形成率和碱性磷酸酶(AKP)染色阳性度最高。结论外源性白血病抑制因子是抑制小鼠ES细胞分化的主要因素。     

BFP Protein Expression in Transfected Embryonic Stem Cells

Cultured mouse embryonic stem cells can be transfected with a reporter gene encoding blue fluorescent protein BFP and regulated by drosophila heat shock protein 70 promoter. This gene is activated after heating and synthesizes matrix RNA. Blue protein is synthesized under these conditions. The system for transfection of stem cells allows us to activate automatically the corresponding transgenes.__________Translated from Kletochnye Tekhnologii v Biologii i Meditsine, No. 2, pp. 99–102, 2005     

胚胎干细胞研究进展

胚胎干细胞来源于着床前的囊胚内细胞团或早期胎儿的原始生殖细胞，具有全能分化和无限增殖的潜力。在适当条件下，胚胎干细胞可被诱导分化为各种细胞组织，这一特性使其在基础研究、移植治疗和基因治疗中具有诱人的应用前景。     

pCREB is Involved in Neural Induction of Mouse Embryonic Stem Cells by RA

Mouse embryonic stem (ES) cells can be induced by various chemicals to differentiate into a variety of cell types in vitro. In our study, retinoic acid (RA), one of the most important inducers, used at a concentration of 5 μM, was found to induce the differentiation of ES cells into neural progenitor cells (NPCs). During embryoid body (EB) differentiation, the level of active cyclic AMP response element‐binding protein (CREB) was relatively high when 5 μM RA treatment was performed. Inhibition of CREB activity committed EBs to becoming other germ layers, whereas increased expression of CREB enhanced NPC differentiation. Moreover, RA increased the expression of active CREB by enhancing the activity of JNK. Our research suggests that CREB plays a role in RA‐induced NPC differentiation by increasing the expression of active JNK. Anat Rec, 291:519–526, 2008. © 2008 Wiley‐Liss, Inc.     

Role of Gap Junctions in Embryonic and Somatic Stem Cells

Stem cells provide an invaluable tool to develop cell replacement therapies for a range of serious disorders caused by cell damage or degeneration. Much research in the field is focused on the identification of signals that either maintain stem cell pluripotency or direct their differentiation. Understanding how stem cells communicate within their microenvironment is essential to achieve their therapeutic potentials. Gap junctional intercellular communication (GJIC) has been described in embryonic stem cells (ES cells) and various somatic stem cells. GJIC has been implicated in regulating different biological events in many stem cells, including cell proliferation, differentiation and apoptosis. This review summarizes the current understanding of gap junctions in both embryonic and somatic stem cells, as well as their potential role in growth control and cellular differentiation.     

胚体培养对小鼠ES细胞定向神经分化的影响研究

为了研究胚胎干细胞（ES细胞）的定向诱导分化过程中胚体的形成对其后分化的影响，通过悬滴培养、悬浮培养及两者结合的方法得到2～4d的胚体（EBs），利用全反视黄酸（RA）对其处理4d后，进行免疫细胞化学和兴奋性功能的检测，观察比较了不同培养方式和不同培养时间下EBs分化出来的神经细胞所占的比例。结果表明，用单纯悬浮3d或悬滴3d转悬浮1d的培养方法得到的胚体其神经分化的比例较高，这对进一步阐明胚胎干细胞自身内部调控诱导分化的机制有一定的参考意义。     

诱导多潜能干细胞

通过病毒载体导入4个外源转录因子Oct4、Sox2、c-Myc、Klf或者Oct4、Sox2、Nanog、Lin28入体细胞,可以诱导产生具有胚胎干细胞特性相似的诱导多潜能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPS).iPS在疾病治疗和药物研究等领域具有非常重要的应用前景,但是目前存在诱导效率低以及致肿瘤性等缺点,采用改良方法诱导产生iPS是将来研究的重点.