甘肃省合作牦牛多房棘球蚴自然感染的病理观察

本文报告甘肃合作牦牛自然感染多房棘球蚴，感染率１．６％，病理学观察：多房棘球蚴发育不良，无生发层与原头节存在，与人体多房棘球蚴病理观察相似。     

多房棘球绦虫葡萄糖转运蛋白1重组抗原肽构建及原核表达方法建立

目的 设计构建及表达纯化多房棘球绦虫葡萄糖转运蛋白1重组抗原肽(GLEP),为后续疫苗研究寻找有效工具.方法 用生物信息学软件预测EmGLUT1跨膜结构,将设计构建的表达载体pC zn1-GLEP转化入大肠杆菌真核表达系统,经IPTG诱导、Ni-NTA纯化获得目的 蛋白.结果 生物信息学软件分析结果表明EmGLUT1为...     

代谢综合征孕妇血清丙氨酸氨基肽酶、亮氨酸氨基肽酶表达和临床意义

目的：探讨代谢综合征孕妇血清丙氨酸氨基肽酶（AAP）、亮氨酸氨基肽酶（LAP）水平的表达,分析其临床意义。方法：选取我院2009年1月～2010年12月收治的42例代谢综合征孕妇作为研究组,入院后检测血清AAP、LAP的表达。另外选择同期我院的40例正常孕妇作为对照组,入院后检测血清AAP、LAP的表达。所有孕妇均为妊娠晚期。结果：研究组血清AAP[（64.21±9.46）U/L]、LAP[（53.53±7.67）U/L]均高于对照组血清AAP[（44.64±8.36）U/L]、LAP[（36.75±7.86）U/L],两组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：代谢综合征孕妇血清AAP、LAP明显增高,可能是机体对代谢综合征的一种保护措施。     

细粒棘球蚴95抗原基因的克隆及原核表达质粒的构建

目的：克隆细粒棘球蚴95（Eg95)抗原基因，构建携带目的基因的原核表达载体，为细粒棘球蚴抗原的免疫保护机制研究提供材料。方法：应用PCR方法从细粒棘球蚴cDNA文库中克隆获得Eg95抗原基因，将其克隆至pUCm-T载体，测序确定其正确性。利用定向克隆技术将Eg95抗原基因片段克隆至原核表达质粒pET28上，根据选择标记的卡那霉素抗性基因筛选到阳性克隆，通过酶切分析和PCR鉴定筛选出阳性克隆，测序确定序列。结果：测序表明所有pET28-Eg95阳性克隆均为正确连接95抗原基因的重组质粒。结论：pET28-Eg95可以进一步用于重组蛋白的表达及抗细粒棘球蚴感染的实验研究。     

灰仓鼠多房棘球蚴腹腔动物模型的建立

目的观察多房棘球蚴(Echinococcus muhilocularis E. m)在灰仓鼠腹腔内的生长发育规律,制作E. m灰仓鼠动物模型。方法2000个E. m原头节/只剂量腹腔接种灰仓鼠,接种后10、15、18、22、39、60、80和100 d,测量包囊重量和抗体,计算包囊重与灰仓鼠体重的包囊系数,观察多房棘球蚴在灰仓鼠体内的发育规律。分别按100个/只、500个/只和2000个/只剂量腹腔接种灰仓鼠各10只,100 d后剖检比较不同感染剂量的包囊发育情况和感染率。结果62只灰仓鼠中有59只感染了多房棘球蚴。18 d 可观察到成熟原头节,感染率达到100%,15 d出现抗体阳性,60 d时包囊系数达到15%以上;100、500和2000三种剂量的感染率100%;结论建立的灰仓鼠腹腔多房棘球蚴动物模型具有感染率高,感染周期短,包囊生长发育和抗体滴度变化易观察,感染60 d可作为E. m动物模型成模观察期。包囊系数,抗体滴度和包囊发育变化可作为造模的主要参考指标。雌性灰仓鼠造模优于雄性。     

多房棘球蚴影响PPARβ、γ表达并调控巨噬细胞极化

目的 本研究旨在探讨多房棘球蚴影响过氧化物酶体增殖激活受体β和γ(Peroxi-some proliferation-activated receptorsβ&γ;PPARβ,γ)表达并调控巨噬细胞极化的状态.方法 在体外将RAW264.7巨噬细胞与原头蚴共培养,用qRT-PCR和Western bolt法检测PPAR...     

Flt3的原核表达、纯化及多克隆抗体制备

Flt3(fms-like receptor tyrosine kinases)又称FLK-2(foetal liver kinase2)、STK-1(stem cell tyrosine kinase 1),为Ⅲ型受体酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinases,RTK)成员之一,在血细胞中表达仅限于造血干/祖细胞表面,与其配体在正常造血及免疫系统发育中起重要的调节作用.     

小鼠前列腺干细胞抗原的原核表达、纯化及抗原活性检测

目的 RT-PCR扩增小鼠前列腺干细胞抗原(mPSCA)基因,构建原核表达质粒pET-42a-mPSCA,诱导mPSCA蛋白表达并纯化,并检测mPSCA蛋白的抗原活性。方法利用RT-PCR的方法从小鼠前列腺癌细胞系RM-1细胞中扩增mPSCA基因,测序正确后PCR的方法去掉mPSCA的信号肽序列将其克隆至原核表达载体pET-42a中构建重组载体pET-42a-mPSCA。将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,随后将表达的融合蛋白进行纯化。经SDS-PAGE分析后,Western blot检测纯化的蛋白,将纯化蛋白进一步包板后用ELISA法对其抗原活性进行评价。结果测序结果证实成功扩增出全长mPSCA基因;酶切和测序结果证实pET-42a-mPSCA原核表达载体构建成功;转化后可以成功诱导并纯化出大小与预期一致的蛋白;Western blot检测证实纯化的蛋白能与特异性的抗体发生反应;ELISA检测显示纯化后的mPSCA抗原具有免疫原性。结论成功扩增出小鼠全长PSCA基因,成功构建了mPSCA基因的原核表达载体,获得了纯化的mPSCA蛋白,该蛋白具有良好的抗原活性,为进一步研究以PSCA为靶点的前列腺癌的免疫治疗奠定了基础。     

小鼠前列腺干细胞抗原的原核表达、纯化及抗原活性检测

摘要：目的RT-PCR扩增小鼠前列腺干细胞抗原（mPSCA）基因,构建原核表达质粒pET-42a-mPSCA,诱导mPSCA蛋白表达并
纯化,并检测mPSCA蛋白的抗原活性。方法利用RT-PCR的方法从小鼠前列腺癌细胞系RM-1细胞中扩增mPSCA基因,测序
正确后PCR的方法去掉mPSCA的信号肽序列将其克隆至原核表达载体pET-42a中构建重组载体pET-42a-mPSCA。将其转化
至大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达,随后将表达的融合蛋白进行纯化。经SDS-PAGE分析后,Western blot检测纯化的蛋白,
将纯化蛋白进一步包板后用ELISA法对其抗原活性进行评价。结果测序结果证实成功扩增出全长mPSCA基因;酶切和测序
结果证实pET-42a-mPSCA原核表达载体构建成功;转化后可以成功诱导并纯化出大小与预期一致的蛋白;Western blot检测证
实纯化的蛋白能与特异性的抗体发生反应;ELISA 检测显示纯化后的mPSCA抗原具有免疫原性。结论成功扩增出小鼠全长
PSCA基因,成功构建了mPSCA基因的原核表达载体,获得了纯化的mPSCA蛋白,该蛋白具有良好的抗原活性,为进一步研究
以PSCA为靶点的前列腺癌的免疫治疗奠定了基础。
     

大鼠ANT1蛋白的原核表达纯化及多克隆抗体的制备

目的：表达和纯化大鼠腺苷酸转运体（ANT1）蛋白并制备其多克隆抗体.方法：通过PCR扩增大鼠脑组织中ANT1的编码区序列,构建ANT基因重组载pET28a-ANT1,转化至E. coli BL21（DE3）,IPTG诱导表达,Ni2＋-NTA离子交换树脂层析纯化;纯化的ANT1蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体并亲和纯化,并通过Western Blot法鉴定其特异性.结果：成功构建重组质粒pET28a-ANT1,经IPTG诱导在大肠杆菌中表达了Mr约为32×10^3的目的蛋白;亲和层析纯化后免疫的新西兰大白兔获得其多克隆抗体;曝光后胶片上均可见Mr32×10^3的阳性条带,与纯化的大鼠ANT1重组蛋白处于同一水平,表明纯化的抗ANT多克隆抗体具有高度的特异性.结论：利用基因重组技术,在大肠杆菌中成功表达了大鼠ANT1融合蛋白并制备了其多克隆抗体,为研究腺苷酸转运体蛋白在癫痫发病过程中的作用机制奠定了基础.     

不同剂型的砂生槐总生物碱对多房棘球蚴小鼠的药效学作用

目的 探讨不同剂型的砂生槐总生物碱对多房棘球蚴小鼠的药效学作用.方法 通过腹腔注射多房棘球蚴原头节完成小鼠造模4个月后,将经多普勒超声检测造模成功的小鼠随机分为片剂组、水剂组,于给药15、30、60天时,计算囊重指数、脾脏指数;采用流式细胞技术检测脾脏组织中的CD4+、CD8+、T、B细胞相对含量;采用实时荧光定量PC...     

NP9蛋白的原核表达及纯化

目的构建表达人NP9融合蛋白的重组体并进行融合蛋白的原核表达及NP9蛋白的分离和纯化。方法通过聚合酶链反应（PCR）得到NP9基因的编码区序列，克隆到原核表达载体pGEX-6P-3上构建重组NP9原核表达质粒。转化大肠杆菌后通过SDS-PAGE电泳和Western blotting鉴定融合蛋白表达。使用GSTFF层析柱分离纯化NP9蛋白。结果得到序列正确的NP9基因及重组原核表达质粒pGEX-6P-3-Np9，SDS-PAGE电泳和Western blotting证实重组质粒能够在大肠杆菌内受IPTG诱导表达，层析分离得到分子量为大约14kDa单一的NP9蛋白。结论成功构建了表达NP9融合蛋白的原核表达载体，该栽体能在细菌内表达出GST—NP9融合蛋白．有效分离得到NP9蛋白．     

甘肃省合作牦牛多房棘球坳自然感染的病理观察

本文报告甘肃合作牦牛自然感染多房棘球蚴,感染率1.6％。病理学观察:多房棘球蚴发育不良无生发层与原头节存在,与人体多房棘球蚴病理观察相似。     

HBV 靶向核糖核酸酶基因的原核表达和纯化及多克隆抗体的制备

目的旨在获得HBV靶向核糖核酸酶,并制备其兔的多克隆抗体. 方法 将构建好的HBV靶向核糖核酸酶基因克隆入原核表达载体pET32a(+),转化入大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG诱导6×His融合蛋白的表达并经Ni2+亲和层析纯化.通过SDS-PAGE 和 Western blot鉴定后,用纯化的蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体,并以复性的蛋白作为抗原,用ELISA测定抗体的效价. 结果 成功地纯化和复性了HBV靶向核糖核酸酶,获得了较高效价的抗血清. 结论 获得纯化并复性的HBV靶向核糖核酸酶和多克隆抗体,为进一步研究奠定了基础.     

大鼠神经球蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

目的 克隆Wistar大鼠神经球蛋白(NGB)基因,通过原核表达制备其多克隆抗体,为进一步研究其功能奠定基础.方法 从雄性Wistar大鼠脑组织中提取总RNA,经逆转录PCR得到cDNA,测序证明该基因序列正确后,亚克隆人pET-28a( )载体中,通过双酶切和测序确定序列和阅读框正确.转化大肠杆菌BL21菌株,获得可溶性表达产物,经鉴定、纯化后免疫新西兰兔,分离血清,ELISA法测定抗体效价.结果 神经球蛋白多克隆抗体效价达1:100 000,此多抗可以与293细胞内表达的重组蛋白发生很好的抗原抗体反应.结论 成功制备了兔抗NGB的多抗,为后续研究提供了重要的实验材料.     

PD-L1胞外域密码子优化及原核表达纯化

目的 获取活性的PD-L1胞外域蛋白。方法 本研究基于大肠杆菌的原核表达系统,通过稀有密码子优化,将PD-L1胞外域优化后的基因序列转入pET-28a(+)载体中,诱导其以可溶性状态在细菌上清裂解液中表达,再通过SDS-PAGE考马斯亮蓝染色对所得蛋白进行检测分析。结果 在密码子优化前,改变温度或者IPTG浓度等诱导条件,目的蛋白始终在包涵体中表达,无法得到保持生物活性、可溶性的PD-L1胞外域蛋白;密码子优化后,通过摸索诱导条件,发现在16℃,0.1mmol/L IPTG的诱导条件下,诱导12h,成功在细菌上清裂解液中得到可溶性的PD-L1胞外域目的蛋白,经镍离子螯合纯化树脂纯化后,获得了保持生物活性及结构的PD-L1胞外域目的蛋白。结论 成功获取活性的PD-L1胞外域蛋白为SELEX筛选识别PD-L1胞外域特异性DNA/RNA 适体提供实验基础,为通过DNA/RNA 适体与PD-L1结合从而阻断PD-1/PD-L1信号通路导致的肿瘤的免疫逃逸提供了新的临床思路。     

小鼠周脂素基因的原核表达及纯化

目的构建小鼠周脂素（prilipin,Plin）原核表达载体,表达周脂素蛋白并进行初步纯化,为研究周脂素的功能奠定基础。方法通过酶切从pMD18-Plin重组载体上酶切下周脂素目的基因,定向插入原核表达载体pET-32a（＋）中,转化大肠杆菌BL21（DE3）,IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE及Western blot鉴定后,进行纯化。结果构建的pET-32a-Plin载体能够表达周脂素重组蛋白,表达量约占菌体总蛋白的50%,经初步纯化后,纯度达95%以上。结论成功构建了周脂素原核表达载体,并在原核系统中表达了重组蛋白,纯化的蛋白纯度较高,可用于后续试验。     

血管生成抑素的原核表达及纯化

目的：构建血管生成抑素（angiostatin)的原核表达载体。并转入大肠杆菌BL21中诱导表达并纯化。方法：设计引物扩增angiostatin的cDNA,然后亚克隆入原核表达载体pET32a,并转化入大肠杆菌BL21中诱导表达。结果：通过重组质粒酶切和测序分析等方法,筛选出重组阳性克隆,转化入大肠杆菌BL21中诱导表达,并纯化成功。结论：通过构建的原核表达。获得了纯化的angiostatin蛋白。