日本血吸虫外源性短肽干预小鼠巨噬细胞极化

日本血吸虫肝硬化与宿主巨噬细胞极化密切相关,本研究为验证多肽干预宿主巨噬细胞极化的分子机制,人工培养小鼠巨噬细胞,分别用单磷酸腺苷、日本血吸虫碱性磷酸酶、外源性短肽处理,ELISA检测各试剂最佳浓度;免疫印迹法检测短肽作用后细胞内一氧化氮合酶以及精氨酸酶1蛋白含量变化;酶联免疫吸附法检测细胞上清液中腺苷浓度的改变,对硝基苯磷酸二钠法检测日本碱性磷酸酶酶活,实时荧光定量PCR法检测细胞上清液中一氧化氮合酶、精氨酸酶1 mRNA的表达变化,硝酸还原酶法测定一氧化氮的浓度,免疫荧光技术鉴别M1和M2型巨噬细胞。结果显示,单磷酸腺苷、碱性磷酸酶及短肽最佳浓度分别为2. 5 mmol/L、1. 1 mmol/L及0. 6mmol/L;经多肽刺激小鼠巨噬细胞后分泌的一氧化氮合酶的蛋白及mRNA表达均上调,精氨酸酶1表达下调,碱性磷酸酶酶活降低(P<0. 01),腺苷受体激活率下降(P<0. 01),M1型巨噬细胞增多,M2型巨噬细胞减少。表明多肽通过降低碱性磷酸酶酶活,减少腺苷A合成,从而促进巨噬细胞经典途径激活极化,抑制巨噬细胞替代途径激活极化。     

日本血吸虫外源性短肽干预小鼠巨噬细胞极化

日本血吸虫肝硬化与宿主巨噬细胞极化密切相关,本研究为验证多肽干预宿主巨噬细胞极化的分子机制,人工培养小鼠巨噬细胞,分别用单磷酸腺苷、日本血吸虫碱性磷酸酶、外源性短肽处理,ELISA检测各试剂最佳浓度;免疫印迹法检测短肽作用后细胞内一氧化氮合酶以及精氨酸酶1蛋白含量变化;酶联免疫吸附法检测细胞上清液中腺苷浓度的改变,对硝基苯磷酸二钠法检测日本碱性磷酸酶酶活,实时荧光定量PCR法检测细胞上清液中一氧化氮合酶、精氨酸酶1 mRNA的表达变化,硝酸还原酶法测定一氧化氮的浓度,免疫荧光技术鉴别M1和M2型巨噬细胞。结果显示,单磷酸腺苷、碱性磷酸酶及短肽最佳浓度分别为2.5 mmol/L、1.1 mmol/L及0.6 mmol/L;经多肽刺激小鼠巨噬细胞后分泌的一氧化氮合酶的蛋白及mRNA表达均上调,精氨酸酶1表达下调,碱性磷酸酶酶活降低(P<0.01),腺苷受体激活率下降(P<0.01),M1型巨噬细胞增多,M2型巨噬细胞减少。表明多肽通过降低碱性磷酸酶酶活,减少腺苷A合成,从而促进巨噬细胞经典途径激活极化,抑制巨噬细胞替代途径激活极化。     

日本血吸虫感染致肝纤维化家兔肝脏微循环病变观察

目的 研究日本血吸虫感染致肝纤维化家兔的肝脏微循环病变。方法 对30只日本血吸虫感染致肝纤维化家兔和10只正常家兔取肝组织行光镜和电镜观察肝脏微循环病变。结果 HE染色示汇管区可见虫卵沉积，虫卵周围炎性细胞浸润。Mallory三色染色见肝内门静脉、肝动脉管壁纤维结缔组织增多，中膜平滑肌增殖肥大。透射电镜下见肝窦内皮受损严重，细胞大多崩解、破裂，窦内可见炎性细胞浸润，毛细胆管扩张，肝细胞肝窦面的微绒毛减少或断裂，肝窦呈毛细血管化。结论 肝脏微循环障碍是形成血吸虫肝纤维化门脉高压的发病基础之一。     

血吸虫感染肝脏纤维化进程中巨噬细胞型别的动态变化

目的 研究日本血吸虫感染诱发虫卵肉芽肿和肝纤维化进程中,巨噬细胞型别的动态变化及其功能特点。方法 通过腹部敷贴尾蚴法建立日本血吸虫感染小鼠模型,每只小鼠感染(17±2)条尾蚴;将15只小鼠随机分为第8、9、10周观察组小鼠,每组5只,于感染6周后给予吡喹酮(PZQ)连续灌胃治疗5 d,在去除肝损伤刺激因素后,于第8、9、10周处死小鼠,取材进行肝纤维化相关分析,观察肝脏纤维化的进程转归。采用Masson染色观察小鼠病理变化和肝纤维化程度,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)检测小鼠肝纤维化相关基因平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ),细胞外基质(ECM)降解相关基因基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP),肝内损伤因子相关基因如白细胞介素1(IL-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、转化生长因子-β(TGF-β)的表达,流式细胞术分析Ly6C^hi和Ly6C^lo2个肝内巨噬细胞亚群在肝内的表达。结果 尾蚴感染第8周后,小鼠肝脏出现明显的肝纤维化,说明...     

日本血吸虫感染对小鼠肝脏铁分布及铁蛋白表达的影响

目的 研究日本血吸虫感染对小鼠肝脏铁分布及铁蛋白表达的影响。方法 24只昆明小鼠随机分为对照组、感染6、8、10周组,每组6只。感染组经腹部皮肤接种尾蚴(20±2)只,待小鼠染虫6、8、10周时,处死小鼠留取肝脏,采用苏木精-伊红(HE)染色和马松(Masson)染色观察小鼠肝脏病理变化,采用二氨基联苯胺(DAB)增强的普鲁士蓝(Perl’s)铁染色观察肝组织铁分布,采用免疫组织化学染色检测肝脏铁蛋白的表达,采用逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测小鼠肝脏铁蛋白轻链和重链mRNA的表达。结果 与对照组小鼠比较,血吸虫感染6、8、10周组小鼠肝脏颜色逐渐变深,质地逐渐变硬。HE和Masson染色显示,感染组小鼠肝组织内有虫卵沉积,围绕虫卵形成肉芽肿及纤维化,而对照组未出现虫卵肉芽肿。DAB增强的Perl’s铁染色显示,与对照组比较,感染6、8、10周组肝细胞铁染色强度降低,差异均有统计学意义(t=5.94、7.72、9.67,P均<0.05),肝血窦内有铁色素沉积,且随感染时间延长逐渐增多(t=3.89、8.59、12.50,P均<0.05),虫卵壳铁染色较强。免疫组织化...     

日本血吸虫感染小鼠肝星状细胞差异表达microRNA的鉴定

目的 筛选并验证在感染日本血吸虫小鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)中差异表达的microRNA(miRNA)。方法 12只6周龄的BALB/c雄性小鼠随机分为正常对照组和感染日本血吸虫组,其中对照组3只,感染组9只。采用Ⅳ型胶原酶体外灌注、密度梯度离心和CD11b磁珠阴性分选相结合的方法,分离小鼠肝脏中的原代HSC。取正常小鼠和感染血吸虫后第42天、49天、56天小鼠的原代HSC样本进行miRNA高通量测序,筛选感染后差异表达的miRNA,并利用定量PCR（quantitative PCR, qPCR）技术验证测序结果。结果 通过miRNA测序,筛选出感染后HSC中差异表达的宿主miRNA共89条,其中75条表达上调,14条表达下调;qPCR验证部分表达改变miRNA的结果显示,miR-17-5p、miR-21a-5p、miR-25-3p、miR-100-5p、miR-122-5p的表达趋势与测序结果基本一致。结论 日本血吸虫感染导致宿主HSC部分miRNA表达谱发生了明显改变,这些差异表达的miRNA在血吸虫病肝纤维化进展中起着重要调控作用,其可能在肝纤维化发生发展过程中参与对某些信号通路的调控,确切机制需进一步深入研究。本研究结果为这些miRNA在血吸虫病肝纤维化中的功能及其机制研究提供重要基础。     

中药制剂对血吸虫性肝纤维化病理及超微结构的影响

目的：观察中药制剂对血吸虫肝纤维化病理及超微结构的影响。方法：应用鼠日本血吸虫病模型,第7周用吡喹酮杀虫后喂以中药制剂,分别于用药不同阶段对肝组织相应变化进行光镜、电镜观察。结果：感染血吸虫后,光镜下肝细胞变性坏死程度与胶原纤维分布明显。经中药制剂治疗后,肝组织病变明显减轻。电镜观察感染未治疗组贮脂细胞、枯否氏细胞增多,胶原纤维分布广泛。经中药制剂治疗组,上述细胞及胶原纤维相应减少。结论：中药制剂可以减轻病变程度,抑制肝纤维化的进展。     

小鼠日本血吸虫模型肝组织坏死形态学观察

建立小鼠日本血吸虫肝虫卵肉芽肿模型和自然感染模型，发现早期肝脏出现，片状或灶性凝固性坏死，后期发生纤维组织增生。提示肝组织凝固性坏死诱发肝纤维化，与虫卵肉芽肿引起的纤维化协同作用可能是血吸虫性肝硬化的又一发生机理。     

日本血吸虫多肽SJMHE1对关节炎小鼠的毒副反应检测

目的观察日本血吸虫多肽SJMHE1对关节炎小鼠的毒副反应。方法选择6～8周健康雄性DBA/1小鼠60只,依据随机数字法分为5组:正常对照(Naive)组、SJMHE1组、卵清蛋白323-339多肽(OVA323-339)组、磷酸盐缓冲液(PBS)组、胶原诱导的关节炎(CIA)组,每组12只。牛Ⅱ型胶原免疫构建胶原诱导的关节炎模型小鼠(CIA组),分别在牛Ⅱ型胶原免疫的第7天,SJMHE1组、OVA323-339组、PBS组乳化剂皮下免疫处理,每隔14天免疫一次,共注射3次;皮下免疫8周后,检测小鼠脚爪关节病理改变,检测其白细胞及血清中肝、肾功能酶学指标、苏木精-伊红染色观察小鼠肝脏、肾脏、肺脏、心脏病理形态学变化。结果关节炎小鼠脚爪病理出理大量炎性细胞的浸润及软骨破坏,但SJMHE1处理小鼠关节的炎症细胞浸润及软骨破坏最轻; OVA323-339组、PBS组、CIA组小鼠的白细胞计数显著高于Naive组[(4. 12±1. 13)×10~9/L、(3. 70±1. 11)×10~9/L、(5. 10±1. 27)×10~9/L比(1. 85±0. 07)×10~9/L](P <0. 01),但SJMHE1组小鼠的白细胞计数与Naive组比较差异无统计学意义(P> 0. 05);各组小鼠丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、尿素氮和尿肌酐比较差异无统计学意义(均P> 0. 05);SJMHE1处理小鼠8周后,小鼠肝脏、肾脏、肺脏、心脏均表现出正常的组织学形态。结论 SJMHE1可以抑制关节炎小鼠炎症,但不引起小鼠肝、肾功能损伤,不引起小鼠重要脏器的病理学改变,安全性较好。     

血吸虫性肝纤维化形成及其免疫调节的分子机制

血吸虫病是世界上危害最大的寄生虫病之一 ,它的主要病理变化是肝脏虫卵肉芽肿及其纤维化。在血吸虫病的各个阶段 ,肝脏和血清中的纤维化相关物质如透明质酸 (hyaluronicacid ,HA)、胶原蛋白等都有不同程度的改变 ,而在血吸虫病肝纤维化的形成和调节过程中细胞因子发挥着非常重要的作用 ,尤其是CD4+ 细胞分泌的细胞因子。CD4+ T细胞可分为Th1细胞和Th2细胞 ,Th1细胞产生的主要细胞因子有 :INF γ、IL 2、IL 1 2、TNF α、IL 1 8等。Th2细胞产生的主要细胞因子有 :IL 1 0、IL 1 3、IL 4、IL 5。这两类细胞因子对细胞外基质的沉…     

血吸虫病肝纤维化及其致病机制研究进展

血吸虫病是一种广泛流行于热带及亚热带地区可引起人畜共患的寄生虫病,其危害仅次于疟疾。中国是日本血吸虫病的主要流行国家之一。血吸虫病肝纤维化的病理基础是宿主对虫卵可溶性抗原（SEA）的持续刺激引起的免疫应答反应,导致以虫卵肉芽肿、组织损伤等为主要特征的慢性炎症发生,最终引起肝纤维化,严重可导致死亡。本文从细胞水平（Th2细胞、肝星状细胞、肝巨噬细胞、其他免疫细胞）、细胞因子及关键信号通路（IL-13/STAT6IL-13、TGF-β1/smads、IL-17、IFN-γ、其他通路）、microRNA的调控作用等方面对血吸虫病肝纤维化及其致病机制进行了综述。     

Endocannabinoids anandamide and its cannabinoid receptors in liver fibrosis after murine schistosomiasis

This study examined endogenous carmabinoid （ECB）-anandamide （AEA） and its cannabinoid receptors （CBR） in mice liver with the development ofschistosomajaponicum. Mice were infected with schistosoma by means of pasting the cercaria onto their abdomens. Liver fibrosis was pathologically confirmed nine weeks after the infection. High performance liquid chromatography （HPLC） was employed to determine the concentration of AEA in the plasma of mice. Immunofluo-rescence was used to detect the expression of CBR1 and CBR2 in liver tissue. Morphological examination showed typical pathological changes, with worm tubercles of schistosoma deposited in the liver tissue, fibrosis around the worm tubercles and infiltration or soakage of inflammatory cells. Also, CBR1 and CBR2 were present in hepatocytes and hepatic sinusoids of the two groups, but they were obviously enhanced in the schistosoma-infected mice. However, the average optical density of CBR1 in the negative control and fibrosis group was 13.28±7.32 and 30.55±7.78, and CBR2 were 28.13±6.42 and 52.29±4.24 （P〈0.05）. The levels of AEA in the fibrosis group were significantly increased as compared with those of the control group. The concentrations of AEA were （0.37±0.07） and （5.67±1.34） ng/mL （P〈0.05）. It is concluded that the expression of endocannabinoids AEA and its cannabinoid receptor CBR were significantly increased in schistosoma-infected mice. Endogenous endocannabinoids may be involved in the development of schistosoma-induced liver fibrosis.     

血吸虫病虫卵肉芽肿与肝纤维化的动态观察

目的:从形态学和血清学角度探讨血吸虫病虫卵肉芽肿与肝纤维化之间的关系.方法:用血吸虫尾蚴感染新西兰家兔,建立血吸虫病动物模型.采用石蜡切片、HE染色动态观察日本血吸虫病急性期、慢性期、晚期肝脏虫卵肉芽肿大小,放射免疫检测仪测定不同时期的血清中透明质酸(hyaluronic acid,HA)含量的变化.结果:感染第6周家兔肝脏出现虫卵肉芽肿,第12周肉芽肿缩小,周围发现成纤维细胞,至第21周时虫卵肉芽肿明显缩小,肝脏纤维化程度增高,并有纤维组织增生.同时,血清HA含量检测显示随感染时间延长,体内HA水平逐渐升高.结论:血吸虫病是一个持续进展的过程,包含虫卵肉芽肿与肝脏纤维化两大病理变化,两者间发病机制不同,肝纤维化是虫卵肉芽肿的间接延伸.     

CD24 通过调节肝内Ly6Clo 巨噬细胞亚群中PDGF-B 的 分泌抑制肝纤维化进程

目的:探讨CD24 分子在胆总管结扎（BDL）诱导的小鼠胆汁淤积型肝纤维化中对肝内Ly6Clo巨噬细胞亚群的调节以及 分泌PDGF-B的影响。方法:建立小鼠胆总管结扎诱导的肝纤维化模型,将野生型（WT）与CD24 基因敲除（CD24-/-）雌性小鼠随 机分为造模组（BDL）与假手术组（Sham）,每组5只,造模组进行胆总管结扎,假手术组与造模组手术处理相同但不结扎胆总管。 术后7 d 应用HE 和天狼星红（Sirius Red）染色分析小鼠肝组织病理变化和肝纤维化程度,定量-PCR（Q-PCR）和Western 印迹 检测肝内α-SMA 等纤维化因子的表达,流式细胞术分析CD24 分子在肝内巨噬细胞亚群中的表达,共培养实验检测肝内星状 细胞中纤维化因子的变化。结果:两种基因背景小鼠的假手术组无病理表现,在造模组中,CD24-/-小鼠与WT 小鼠相比肝纤维化 明显加重,表现为肝汇管区炎性细胞浸润增多,α-SMA 等肝纤维化标志物的表达升高。流式分析结果显示,CD24 分子在肝内 Ly6Clo 巨噬细胞亚群上高表达,在造模组中,CD24-/-鼠造模后肝内Ly6Clo 巨噬细胞亚群比例[（65.05±0.250）%]高于WT 鼠 [（52.55±2.950）]%,差异有统计学意义（P<0.05）。进一步研究发现:PDGF-B 在肝内Ly6Clo巨噬细胞亚群高表达,并且在CD24-/- 小鼠中的表达明显高于WT小鼠,差异有统计学意义（P<0.000 1）。结论:CD24分子可通过调节肝内Ly6Clo巨噬细胞亚群中PDGFB 分泌减缓肝纤维化进程。     

小鼠日本血吸虫病肝纤维化肝脏CTGF的表达及意义

目的研究结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)在日本血吸虫病肝纤维化小鼠肝脏中的表达状况及意义。方法用昆明小鼠感染尾蚴复制小鼠日本血吸虫病肝纤维化模型;RT-PCR和免疫组化分别检测小鼠肝脏CTGFmRNA和蛋白的表达,免疫组化方法观察各阶段肝脏α-SMA阳性细胞的表达。结果模型组10周时形成典型的肝纤维化,此时模型组小鼠肝脏CTGFmRNA和蛋白表达、α-SMA 细胞数达高峰,10周、14周、18周时与治疗组相比均有明显的统计学差异(P均>0.05);CTGFmRNA和蛋白表达水平与α-SMA 细胞数均呈直线相关性。结论CTGF基因和蛋白表达增高与小鼠日本血吸虫病肝纤维化形成有密切关系;CTGF在小鼠日本血吸虫病肝纤维化形成过程中的作用可能主要通过作用于活化的肝星状细胞来实现的。     

绞股蓝总皂甙减轻小鼠血吸虫性肝纤维化的实验观察

本实验采用绞股蓝总皂甙（ＧＰｓ）治疗小鼠血吸虫病，观察其对血吸虫性肝纤维化的影响。结果表明：ＧＰｓ治疗组肝虫卵肉芽肿反应增长比和肝纤维化程度均明显小于感染对照组（Ｐ＜０．０５）。提示ＧＰｓ具有减轻血吸虫性肝纤维化的作用。也提示自由基在血吸虫虫卵肉芽肿形成和发展中起了重要作用     

The pathogenesis of liver fibrosis in schistosomiasis japonica: Sequential qualitative and quantitative immunohistochemical study of extracellular components in schistosomal egg granulomas in murine Liver

Summary A combined morphological and qualitative and quantitative immunohistochemical study of fibronectin (FN) in schistosomal egg granulomas was carried out to investigate sequential behavior of FN and to define the sequence of events in hepatic fibrosis in schistosomiasis, as well as to verify the factors which initiate and promote the process. The results showed that FN could be demonstrated as early as 4 weeks after infection, reached the highest staining intensity at the 6th week, and decreased gradually as fibrosis progressed. In the early stage, FN might be produced by macrophages and sinusoidal cells, acting as a chemotactant for fibroblasts. In the later stages, FN might be derived primarily from fibroblasts and play an important role in guiding collagen deposition. It can be concluded that FN might be the initiating factor for the fibrogenesis and that the inflammatory infiltrate around granulomas is the origin of FN, which might be attributable to the continuous fibrosis of granulomas, and, finally, to the development of clay pipe-stem fibrosis.     

认识肝纤维化

了解肝纤维化的历史。从形态学、生化学、细胞学、免疫学和基因水平全面认识肝纤维化,并研究其重要性。     

B超与肝纤维化指标联合检测在血吸虫病肝纤维化诊断中的临床价值

目的：分析B超与肝纤维化指标联合监测对血吸虫病肝纤维化的诊断效果及其应用价值。方法对2007-2012年收治的615例血吸虫病患者进行诊断,将金标准病理诊断为肝纤维化的患者作为病例组,其余患者为对照组,分别对两组患者进行B超、肝纤维化四项指标的检测分析。结果肝纤维化Ⅱ、Ⅲ级患者的肝纤维化指标Ⅲ型前胶原（PC-Ⅲ）、Ⅳ型胶原（IV-C）、层粘连蛋白（LN）、透明质酸（HA）的值均高于对照组,差异有统计学意义;肝纤维化I级患者与对照组肝纤维化指标PC-Ⅲ、IV-C、LN、HA的值相比无统计学差异;肝纤维化指标和B超联合检查肝纤维化敏感度为98.53%、特异度为98.27%、符合率为98.69%。结论 B超与肝纤维化指标联合监测血吸虫病肝纤维化具有良好的诊断价值。     

肝炎后肝硬化代偿期不同证型肝纤维化指标的研究

目的观察肝炎后肝硬化代偿期中医辨证分型与血清肝纤维化指标的关系。方法选择经确诊的6种证型组的肝炎后肝硬化代偿期患者179例,检测血清肝纤维化指标,分析各种证型与肝纤维化指标的关系。结果各种证型肝纤维化指标均增高,与正常对照组比较差异有统计学意义,其中HA、LN及IV-C 3项指标均为肝气郁积型最低,肝纤维化4项指标均为血瘀型最高,指标增高在证型中颇有规律(肝气郁积型小于脾虚湿盛型小于湿热内蕴型小于肝肾阴虚型小于脾肾阳虚型小于血瘀型),且证型彼此间大多差异明显。结论肝炎后肝硬化代偿期各证型的肝纤维化指标随虚实转化而有规律变化;肝气郁积型可能是肝硬化处于最初始阶段的主要证型,疏肝解郁可能是防止慢性肝炎向肝硬化转变的重要治法;血瘀型可能是处在肝硬化代偿期与失代偿期过渡交界阶段的主要证型,活血化瘀可能是防止肝硬化代偿期向失代偿期转化的重要治法。