同步化技术在白血病骨髓细胞染色体研究中的应用

采用改进同步化技术,即5-氟脱氧尿嘧啶核苷(Fdr)、尿嘧啶苷(Ur),加胸嘧啶核苷(Tdr)或5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu),对129例白血病和骨髓增生异常综合征(MDS)进行骨髓细胞同步化培养、染色体制备和显带,成功率达到95.4％,发现染色体畸变61例,包括78个异常克隆。本技术同一标本可用于G、R显带,与常规法比较,能产生更多有丝分裂细胞,染色体分散更好,显带较为细长清晰,且引起染色体损伤和丢失也更少。与其他同步化方法比较,免去洗涤细胞,更适合白血病的研究。     

人类高分辨G显带染色体技术及其初步应用(摘要)

人类高分辨染色体技术,由于可使处于有丝分裂的早期细胞染色体能显示出更多更细致的带纹,从而使人类细胞遗传学的研究日臻深入。参照Yunis和Dutrillaux等的方法,我们建立了两种使人体外-周血淋巴细胞同步化的方法,即氨甲喋呤同步化和过量的胸苷同步化法。然后经胰酶或胰酶-EDTA予处理,再以Giemsa染色。由此制得的标本中,处于分裂中期的细胞约占细胞总数的3～5％,其中大多数(占70％～80％)为处于分裂早期的细胞,它们的染色体较细长,分散良好,带纹数目多,适于作高分辨染色体分析。     

低氧对新生猪G1/S肾小管上皮细胞能量代谢影响的特点

目的探讨窒息早期所致低氧对围生期G1/S界面肾小管上皮细胞(RTEs)能量代谢的影响.方法应用二次过量胸苷同步化法获取G1/S界面细胞(应用流式细胞术进行鉴定).将RTEs分为三组采用氰化钠(NaCN)进行G1/S界面RTEs缺氧细胞模型(缺氧组),同时设立预防组(氰化钠+斑蟊素)和未处理对照组.反相高效液相检测缺氧前后及恢复60 min、120 min、180 min各组细胞内ATP含量的变化.结果二次胸苷同步化法可获取约(99.52±0.83)%的G1/S界面细胞;缺氧组在缺氧后0 min和恢复60 min及120 min时RTEs ATP含量均高于预防组和对照组(P<0.05),而在恢复180 min时细胞内ATP的含量均低于预防组和对照组(P<0.05). 结论体外化学缺氧对G1/S界面RTEs能量代谢的影响具有先上调后抑制的特点.     

低氧对新生猪G1/S肾小管上皮细胞能量代谢影响的特点

目的　探讨窒息早期所致低氧对围生期 G1 / S界面肾小管上皮细胞 (RTEs)能量代谢的影响。方法　应用二次过量胸苷同步化法获取 G1 / S界面细胞 (应用流式细胞术进行鉴定 )。将 RTEs分为三组 :采用氰化钠(Na CN)进行 G1 / S界面 RTEs缺氧细胞模型 (缺氧组 ) ,同时设立预防组 (氰化钠 斑蟊素 )和未处理对照组。反相高效液相检测缺氧前后及恢复 6 0 m in、12 0 min、180 min各组细胞内 ATP含量的变化。结果　二次胸苷同步化法可获取约 (99.5 2± 0 .83) %的 G1 / S界面细胞 ;缺氧组在缺氧后 0 m in和恢复 6 0 m in及 12 0 m in时 RTEs ATP含量均高于预防组和对照组 (P<0 .0 5 ) ,而在恢复 180 min时细胞内 ATP的含量均低于预防组和对照组 (P<0 .0 5 )。结论　体外化学缺氧对 G1 / S界面 RTEs能量代谢的影响具有先上调后抑制的特点     

过量胸苷对细胞周期素表达的影响

目的 :探讨过量胸苷干扰细胞周期素细胞周期时相表达的特点 ,为进一步研究细胞周期转化以及细胞周期素与DNA合成的关系奠定基础 .方法 :应用二次过量胸苷阻断法进行新生猪肾小管上皮细胞体外同步化培养 ,采用流式细胞术进行鉴定 ;然后分别进行G1/S,S及G2 期细胞CyclinA ,B ,D1mAb免疫细胞化学染色并进行图像分析 .结果 :二次过量胸苷阻断法可获取G1/S界面细胞为 (99 5± 0 8) % ,S期细胞为(90 5± 0 7) % ,G2 期细胞为 (93 5± 2 2 ) % ,G2 /G1=2 2 0 .G1/S ,S,G2 细胞CyclinA表达特点为G2 期大于G1/S和S期 (目标灰度值 :13 6 3± 2 7,14 5 0± 1 4 ,14 7 5± 1 8,P <0 0 1) ,CyclinB表达特点为G1/S期小于S和G2 期 (目标灰度值 :15 5 6± 1 6,14 8 8± 2 2 ,13 6 6± 2 6,P <0 0 1) ,CyclinD1的表达特点为G2期大于G1/S期 (目标灰度值 :13 2 .6± 1.9,14 6.7± 1.3 ,P <0 .0 1) ,S期小于G1/S期 (目标灰度值 :15 8 8± 1 1,14 6 7± 1 3 ,P<0 0 5 ) .结论 :二次过量胸苷阻断细胞DNA合成可能与细胞周期素表达的改变相关     

溴化乙锭及放线菌素D对高分辨染色体的作用

应用胸苷同步化方法,对比分析了染色体凝缩抑制剂溴化乙锭及放线菌素D对高分辨染色体的影响。结果表明,溴化乙锭组高分辨分裂细胞比例高,染色体带纹稳定,染色体断裂率低。放线菌素D组染色体带纹出现不均匀凝缩现象,染色体断裂率增高。提示溴化乙锭是一种稳定的染色体凝缩抑制剂,优于放线菌素D。     

高分辨染色体G显带制备技术的改良方法

目的探讨一种简便、能提高分裂相数目的高分辨G显带染色体标本制备改良方法。方法应用低浓度秋水仙胺长时间处理制备高分辨染色体G显带标本与常规方法进行比较。结果实验组获取的细胞分裂相数目比例明显多于对照组(P<0.01)。结论改良后的高分辨染色体G显带制备方法简便、效果突出,具有一定的实际应用与推广价值。     

FdU同步化外周血淋巴细胞后,用BrdU/Hoechst 33258掺入诱导产生高分辨R带

自从Yunis首先创建人类高分辨染色体制备方法以来,又产生了许多方法和改良方法。目前,国内的细胞遗传学实验室多采用高分辨G带,而采用R带标本分析染色体,有助于染色体末端异常的检出。1984年Ronne报道,外周血淋巴细胞在FU(氟尿嘧啶)同步化基础上,用BrdU和Hoechst 33258同时掺入,可诱导产生分辨R带。我们参照Ronne法,用     

人类高分辨染色体制备方法的研究

本文分别对纺锤体抑制法、阴止凝缩法，同步拦截法三种方法，用于高分辨染色体的制备进行了探索，结果：选择第三种方法，即过量胸苷同步结合放线菌素D掺入法制备高分辨染色体，进行改进，获得比较理想的人类高分辨染色体，经临床应用77例，成功率为83.12%，分裂指数为4.68%。高分辨染色体占54.00%。     

放线菌素D诱导羊水细胞染色体高分辨G显带

近代染色体技术的进展,为增加带的分辨力和显带分析的精确性提供了有效的工具。我们在血、羊水细胞染色体G显带和外周血染色体高分辨显带的基础上,于1983年7月在没有见到国内外羊水高分辨染色体制作的情况下,仿效Yu等(1981)放线菌素D诱导人类成纤维细胞染色体高分辨显带的方     

改良高分辨G显带技术在复杂染色体重排携带者中的应用

目的应用染色体改良高分辨G显带技术,对四例复杂染色体重排(CCRs)携带者进行细胞遗传学分析,探讨该技术对CCRs的临床应用价值。方法选取因复发性流产或不孕不育就诊于广东省妇幼保健院医学遗传中心的4对夫妇,经改良高分辨G显带技术制备外周血染色体,核型分析并与常规方法进行比较。结果改良高分辨G显带染色体分辨率达到550条以上核型占比50%以上;核型分析提示4对夫妇中各有一方是CCRs携带者,涉及3～4条染色体易位;易位染色体涉及3号和12号染色体最多。结论改良高分辨G显带技术能更好的发现CCRs携带者的多个染色体易位,避免漏诊。该技术成本较低、操作简单,适合在基层单位推广。     

外周血同时制备高分辨染色体G、R显带的简易快速同步法的探讨

染色体高分辨G、R显带的技术在细胞遗传学的研究中十分重要。作者参照国内外一些学者的方法在Shah的基础上加以改进,所用方法不仅简便,而且可以同时制备高分辨染色体的G、R显带。     

羊水细胞染色体高分辨G显带的初步研究

本文记述了使用改变的Shah方法,对人类羊水细胞染色体高分辨G显带获得成功。本技术对产前诊断,具有应用和临床意义。在国内我们的实验室领先掌握了羊水细胞染色体高分辨G显带技术。     

染色体G显带两种处理方法效果的比较

①目的 探讨快速稳定显示G显带的方法。②方法 采用染色体制备技术，分别用胰蛋白酶磷酸(PBS)NN乙二胺四乙酸胰蛋白酶(EDTA)法显示G显带。③结果 PBS法与EDTA法显示带纹同样清晰。④结论 PBS法比EDTA法配制试剂简单、预处理条件稳定、结果显示快，是一种较好的方法。     

人类体细胞染色体的异态性研究Ⅰ.1qh~

本文运用数种显带(G、C显带和高分辨显带)技术对具有1qh~ 的4个家系作了研究。结果表明,1qh~ (1区2带)的大小约为16p的1.3～1.5倍;通过对例1家系的追溯,提示1qh~ 染色体按孟德尔显性定律传递。至于1qh~ 与临床表现(如两眼距宽、颈蹼等)之间的关系尚待进一步研究。     

Let-7a在人宫颈癌HeLa细胞不同周期时相的表达

目的 探讨微小RNA let-7a在HeLa细胞不同周期时相的差异表达.方法 应用经典的双胸苷阻断法将HeLa细胞同步化于不同的周期时相,应用流式细胞术检测同步化的效率.应用实时荧光定量RT-PCR方法 检测不同周期时相的HeLa细胞中let-7a的表达水平.结果 HeLa细胞G1、S和G2/M期细胞同步化效率分别约为84.81%、83.65%和77.69%;let-7a在不同周期时相均有表达且存在差异,G1和S期表达水平较低,G2/M期表达水平较高.结论 细胞周期对let-7a的表达有较大的影响,这为理解细胞周期调控的具体机制提供了新的线索.     

同步化技术在白血病骨髓染色体研究中的应用

采用同步化处理技术进行白血病骨髓染色体研究,结果染色体较长,显带清晰。在41例急性非淋巴细胞白血病中显带成功率92.7％。本技术同一份标本可用于显示G带、荧光R带和Giemsa R带,易于检出更多的异常和确定精细的断裂点。     

高分辨染色体制备及显带方法的改良效果分析

目的寻找简单实用的高分辨染色体制备及显带方法。方法比较常规制片和秋水仙素与低渗同时处理的方法对提高染色体高分辨的作用,以及常规显带与改良胰蛋白酶磷酸（PBS）显带方法对染色体核型分析结果的影响。结果采用秋水仙素与低渗同时处理进行常规染色体制备,结果显示在5000个分裂相中对照组大于400条带的为482个,占9.64%,实验组为1655个,占33.1%,明显高于对照组（P〈0.01）;用PBS法进行染色体显带,各条带之间能明显区分,便于染色体核型分析。结论秋水仙素与低渗同时处理可使染色体加长,高分辨染色体出现率明显增高,用PBS法进行染色体显带,操作简单,可明显缩短显带时间。     

热蒸汽—双氧水法制备人类G显带染色体的研究

目的探索一种能改善染色体分裂相分散程度、缩短G显带染色体标本制备时间的方法。方法将外周血样本进行常规细胞培养后,采用热蒸汽—双氧水法制备G显带染色体标本,与常规G显带染色体标本制备法作比较。结果实验组获取的细胞分裂相分散优良比例明显多于对照组(P<0.01),制备时间短于常规法。结论改良后的人类染色体G显带制备方法简便、效果突出,具有一定的实际应用与推广价值。     

1168例遗传咨询门诊病人的染色体分析

我室从1973年4月25日至1982年5月27日在遗传咨询病人中选择1200人作了染色体检查,有1168人获得了成功,占受检病人的97.3%。所用的标本有外周血、胎儿羊水、皮肤、条索状性腺、睾丸、精索等活检组织块。按我室常规进行细胞培养及 G 显带处理,必要时采用 C 带、Q 带、N 带、姊妹染色单体互换(SCE)技术、X 染色体迟复制(Lx)技术、G_(11)技术、高分辨 G 显带染色体技术以及 X、Y 小体检查技术等。