大鼠肺微血管内皮细胞分离培养方法的研究

目的探讨肺微血管内皮细胞(PMVECs)的分离培养方法。方法应用复合酶消化法获取Sprague Dawley大鼠的PMVECs,经传代培养纯化,并通过观察光镜下细胞的形态学特征、免疫细胞化学染色检测细胞内Ⅷ因子抗原的存在、透射电镜观察细胞超微结构等进行综合鉴定。结果体外培养的原代PMVECs在光镜下呈典型的铺路石样排列...     

免疫磁珠法分离培养小鼠原代骨骼肌微血管内皮细胞及鉴定

目的 旨在建立一种有效分离、培养、扩增小鼠原代骨骼肌微血管内皮细胞（MMECs）的方法。方法 采用胶原酶消化法、差速贴壁法以及免疫磁珠法分离纯化骨骼肌微血管内皮细胞,贴壁培养进行体外扩增。利用相差显微镜观察培养细胞的形态、MTT法测定细胞的生长情况、CD31免疫荧光染色对其表型进行鉴定、流式细胞术鉴定细胞纯度。结果 实验成功获取小鼠骨骼肌微血管内皮细胞,小鼠原代骨骼肌微血管内皮细胞在培养24 h后迅速贴壁,(3～6) d内迅速生长,呈梭形,单层排列,培养(6～8) d可长满培养皿底,呈铺路石样排布。MTT法测得培养第2代小鼠骨骼肌微血管内皮细胞的生长曲线呈倒“S”形。流式细胞术检测经差速贴壁联合磁珠纯化的CD31+的MMECs细胞可达97%以上。结论 成功建立了一种简单、高效的分离小鼠骨骼肌微血管内皮细胞的方法,为开展与骨骼肌微血管内皮细胞相关研究提供了良好的实验方法和技术手段。     

大鼠脑微血管内皮细胞的纯化培养与鉴定

目的探讨获取纯度较高的原代大鼠脑微血管内皮细胞（BMECs）的分离和培养方法。方法选取10只3周龄Wistar大鼠,取大脑,去除白质,剪碎成大约1mm^3大小,通过两次酶消化、20％BSA离心和33％连续密度Percoll梯度离心,获得纯度较高的大脑微血管片段,接种于涂布明胶的35himdish培养皿中,加入含4μg／ml嘌呤霉素的内皮细胞培养基,2d后更换新鲜培养基;采用倒置盟微镜观察内皮细胞生长状况及其形态;免疫组化法检测BMECs标志物Ⅷ因子相关抗原（vWF）的表达,以及神经胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）的表达情况。结果培养24h后可见内皮细胞从贴壁的脑微血管片段周围长出,细胞呈梭形;5～6d可形成融合;融合后的BMECs呈典型的“鹅卵石”样外观;免疫组化法检测显示BMECs的vWF表达阳性．GFAP表达阴性,内皮细胞纯度（vWF阳性细胞表达率）达96％以上。结论该方法能够成功获得纯度较高的原代大鼠BMECs。     

脂多糖致肺微血管内皮细胞单层通透性损伤的实验研究

近来有学者认为,多数急性肺损伤均由革兰阴性杆菌内毒素引起或与之有关。为探讨急性肺损伤时肺微血管内皮通透性增高的机制,我们主要观察脂多糖（ＬＰＳ）对大鼠肺微血管内皮细胞（ＲＰＭＶＥＣ）的单层通透性、Ｆ肌动蛋白分布及β受体（βＡＲ）的影响。材料和...     

微血管内皮细胞功能改变与糖尿病微血管病变研究热点

糖尿病微血管病变是糖尿病多种并发症的病理基础,也是糖尿病预后的决定性因素,主要包括糖尿病视网膜病、糖尿病肾病、糖尿病神经病变及糖尿病心肌病变等。目前研究的热点主要涉及两方面,即糖基化终产物及其信号通路在糖尿病病变发生中的作用、微血管内皮细胞的功能改变与糖尿病血管病变的发生。本文就上述两方面的研究进展作一综述,并介绍本研究室的相关研究结果。     

采用组织块法培养心房颤动患者心房成纤维细胞

目的建立心房颤动(简称房颤)患者心房肌成纤维细胞培养模型。方法通过心脏外科手术获得房颤患者右心耳组织30 mg,对经典的大鼠组织块培养法作改进,采用组织块放入75%酒精中浸泡1 m in,培养基配方和植块方法改进,第二代传代时采用差速贴壁法除去内皮细胞,培养房颤患者心房肌成纤维细胞。结果形态学观察显示,心肌成纤维细胞生长较慢,3天左右开始从组织块边缘爬出,10天呈接合状态,细胞呈梭形,细胞排列较紧密,有的交叉重叠生长,胞核较大,呈椭圆形,通常含1~3个核,胞浆透明,胞体较大,无搏动;免疫细胞化学染色可见,心肌成纤维细胞波形蛋白呈强阳性反应,第八因子呈阴性反应;成功培养的心肌成纤维细胞纯度达95%以上。结论采用组织块法可成功培养人心房的心肌成纤维细胞,且简单、易行。     

酶消化组织块法培养人心房成纤维细胞

目的 建立人心房成纤维细胞体外培养的有效方法。方法 无菌条件下将人右心耳标本剪成1 mm3大小组织块,经 1.25 g/L胰蛋白酶预消化15 min后,用组织块贴壁法培养。通过倒置显微镜观察培养细胞生长及形态学特点,使用免疫荧光法进行细胞鉴定。结果 培养3~4 d后可见细胞自组织块爬出,7~9 d后细胞可传代,传代后的细胞呈长纺锤形或多边形。免疫荧光染色发现其抗波形蛋白（vimentin）及抗α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）染色阳性,抗血管性血友病因子（vWF）染色阴性,鉴定为肌成纤维细胞。结论 酶消化组织块法培养人心房成纤维细胞/肌成纤维细胞简便、高效,方法可行。     

成人冠状动脉内皮细胞体外培养方法的实验研究

血管内皮是人体最大的具有分泌功能的组织之一，能合成、分泌几十种生物活性物质，内皮功能障碍是多种疾病的发病基础。内皮细胞体外培养方法的建立是研究内皮细胞生物学功能及与多种疾病关系的基础。我们在国内首先建立了成人冠状动脉内皮细胞的体外培养方法，为研究冠状动脉粥样硬化的发病机制及防治方法提供更加可靠的试验材料。     

糖尿病微血管病变时内皮细胞的功能

在许多慢性病,明显的自体免疫病、动脉粥样化以及糖尿病时,血管内皮有特征性损害。本文目的在于阐述其病理生理的当代知识,着重讨论糖尿病微血管病变的发病学。     

内皮细胞衬里人工血管的实验研究

<正> 自Voorhees于1952年首次用人工血管在人体行血管移植获得成功以来,各种人工血管相继问世,并在大、中口径的动脉血管移植中取很显效。但小口径(直径≤5 mm)的人工血管通畅率仍很低,静脉代用品也未获成功。这显然与小管径动脉和代用静脉内血流量低,血流速度相对缓慢有关,与目前各种人工血管移植后,除在距吻合口等邻处可见内皮细胞爬行延伸外,大部分人工血管内不能产生内皮细胞层,而易引起血小板粘附、聚集、纤维素沉着、血栓形成和较后期吻合口内膜增生以及继发血栓形成也有很大关系。因而如能使人工血     

组织块贴壁法培养SD大鼠腹主动脉平滑肌细胞及鉴定

目的培养、鉴定SD大鼠腹主动脉平滑肌细胞。方法采用组织块贴壁法分离培养SD大鼠腹主动脉平滑肌细胞,胰蛋白酶消化传代,并应用相差显微镜和平滑肌肌动蛋白对细胞进行形态学和免疫组化鉴定。结果培养出的平滑肌细胞呈长梭形生长,镜下可见培养细胞呈典型的"峰-谷"状生长,高倍镜下可见胞质内大量棕色、与细胞长轴平行的纤维细丝,免疫组化染色显示胞浆内平滑肌肌动蛋白阳性表达。结论组织块贴壁法体外培养SD大鼠腹主动脉平滑肌细胞操作简单、纯度较高、可行性高。     

应用改良的组织块酶消化法体外培养人大肠癌原代细胞

目的探讨应用改良的组织块酶消化法体外培养人大肠癌原代细胞的方法.方法应用结合组织块法和Ⅳ胶原酶消化法的改良的组织块酶消化法体外原代培养人大肠癌细胞,通过对培养条件、促进贴壁、控制污染、细胞纯化等方面的探索得到了大肠癌细胞,并最终用形态学方法(瑞姬氏染色)、和免疫学方法(免疫细胞化学)鉴定所得细胞.结果经改良的组织块酶消化法体外培养的人大肠癌原代细胞,瑞姬氏染色进行细胞形态学鉴定,结果显示胞核呈紫红色,核质比明显增大,符合肿瘤细胞特征;细胞胃肠癌相关糖链抗原19-9(carbohydrate antigen 19-9,C A19-9)进行细胞免疫学鉴定,结果显示胞浆呈棕色,细胞CA19-9阳性.结论改良的组织块酶消化法在培养方法改良、促进贴壁、控制污染和去除杂细胞四方面进行了改进,既可快速获得游离细胞,又充分利用了未彻底消化的组织块.采用该改良的组织块酶消化法原代培养细胞成功率高,所培养的细胞进行初步鉴定证明为大肠癌细胞.     

体外循环后微血管通透性实验研究

据推测体外循环后微血管通透性增加,但迄今尚无直接证据。作者以犬小肠微血管床为实验模型,分别测定肠段中淋巴液及血浆中各种蛋白成份并求出通透比率,以比较体外循环组和开胸插管后不行体外循环组动物术后微血管通透性变化。方法:14条杂种犬随机分为体外循环(n=7)和对照(n=7)两组,术前24小时禁食但予饮水。吸入麻醉下,经正中切口进腹后,选取30cm终段小肠段以热盐水垫保护并维持37℃。分离该肠段肠系膜静脉并于此静脉中央围一塑料套圈,外箍螺丝钳以备     

脑微血管内皮细胞在阿尔茨海默病中的作用

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是一种以记忆力下降和认知功能障碍为主要临床表现的神经退行性疾病,其发病率高,根据2018年研究统计,全球超过5000万痴呆患者,平均每3s增加1例,至2050年将达1.52亿[1].AD中血脑屏障可以通过多种方式影响认知功能,动物模型显示,中性粒细胞的中枢神经...     

血管内皮细胞生长因子与糖尿病微血管并发症

随着人们对糖尿病诊断和治疗水平的提高 ,各种糖尿病慢性并发症已成为糖尿病患者致死与致残的主要原因。如何防治与减少糖尿病慢性并发症的发生已成为治疗糖尿病的关键环节。近年来 ,人们对糖尿病慢性并发症的发病机制有了进一步的认识 ,尤其是阐明了促血管形成因子在糖尿病微血管并发症发病中的作用。在糖尿病状态下 ,许多组织因高糖和缺氧等因素使一些具有促血管生成能力的细胞因子的表达增加 ,这些因子在增加血管通透性 ,细胞外基质生成的同时 ,促发血管生成 (ａｎｇｉｏｇｅｎｅ ｓｉｓ)的过程 ,从而导致组织损伤和糖尿病微血管病变的形…     

凝血酶致脑微血管内皮细胞凋亡作用

脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cell,BMVEC)在脑疾病发生、发展中占重要地位[1].近年来,BMVEC的体外培养方法已获成功[2].凝血酶是一种血清丝氨酸蛋白酶,除参与凝血外,它还促进BMVEC收缩并增加其通透性[3],并与肺动脉内皮细胞及神经元凋亡相关[4～6].本实验用体外原代培养的大鼠BMVEC研究凝血酶的作用,并用其受体拮抗剂水蛭素探讨致病机制.     

Ghrelin对大鼠心肌微血管内皮细胞的作用

目的:探讨ghrelin对大鼠心肌微血管内皮细胞(cardiac microvascular endothelial cells,CMECs)增殖、迁移能力和分泌NO的影响。方法:以酶消化法获得SD大鼠的CMECs,采用Dil-ac-LDL吞噬试验鉴定CMECs。将新一代CMECs分5组分别干预24 h:即(A)空白对照组、(B)1×10-9mol/L ghrelin组、(C)1×10-8mol/L ghrelin组、(D)1×10-7mol/L ghrelin组和(E)ghrelin+拮抗剂LY294002组(1×10-7mol/L ghrelin和20μmol/L LY294002)。用MTT比色法检测ghrelin对CMECs增殖的影响;以transwell法检测ghrelin对CMECs迁移的影响。用硝酸还原法检测CMECs分泌NO的量。结果:Dil-ac-LDL吞噬试验表明,90%以上的CMECs表达Dil-ac-LDL。与对照组相比,10-8~10-7mol/L的ghrelin可明显促进CMECs增殖和迁移,以及NO分泌(P0.05);LY294002则能够明显抑制ghrelin对CMECs的促增殖和迁移作用,以及抑制ghrelin刺激CMECs分泌NO的作用(P0.05)。结论:一定浓度条件下,ghrelin能够促进心肌微血管内皮细胞(CMEC)的增殖、迁移和NO分泌,这可能与激活AKT/PI3K信号转导通路有关。     

肝癌化疗栓塞术后残癌组织微血管密度及血管内皮细胞生长因子表达的研究

目的 研究肝癌经导管动脉内化疗栓塞(transcatheter arterial chemoembolization,TACE)术后残癌组织微血管密度(microvessel density,MVD)、血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,BFGF)的表达变化。方法 对40例原发性肝癌患者的手术切除标本作免疫组织化学染色,检测肿瘤组织的MVD和肿瘤细胞VEGF、BFGF的表达。40例患者中20例术前接受l~7次不等的TACE治疗(TACE组),另20例为直接手术患者,术前未进行任何其它治疗(直接手术组)。结果TACE组平均MVD为130.51±75.5,直接手术组为152.35±58.80,两组差异无显著性(t=－1.021．P=0.341)。VEGF平均染色强度TACE组为645.60±543.27,直接手术组为158.28±188.48,前者强于后者(t=281,P＜0.001)。BFGF阳性率TACE组和直接手术组分别为35%和40%,差别无显著性(x~2=0.107,P=0.744)。结论TACE术后残癌组织只有丰富的肿瘤血供,残存肿瘤细胞VEGF表达增强,可能在TACE术后肿瘤血供的重建中起重要作用。     

冠状动脉微血管内皮细胞功能紊乱机制的研究进展

冠状动脉微血管疾病是诸多心血管事件的高风险因素,然因其隐蔽性高、病因复杂,目前对其的病理生理机制认识十分有限,极大地限制了其的临床诊疗。在冠状动脉微血管疾病发生发展的过程中,冠状动脉微血管内皮细胞(CMEC)的损伤是核心环节,CMEC的应激、代谢、炎症等功能紊乱与冠状动脉微血管疾病具有因果关系,亦是冠状动脉微血管疾病早期的主要特征。目前,有关CMEC功能损伤的机制尚未完全阐明,该文主要综述了CMEC功能紊乱机制研究的进展,以期加深临床医师对这一复杂的病理生理过程的理解以及为后续研究提供一些参考。