胰腺细胞的再生方法及相关机制

人体的细胞和器官具有较强的再生能力,作为重要的消化器官和多种代谢性激素合成的核心器官,胰腺在出生后再生能力明显不足。轻度急性胰腺炎或部分胰腺切除的患者都可通过促进存活的胰腺外分泌腺泡细胞再生而完全康复。胰岛β细胞数量相对或绝对减少引起的糖尿病,可通过刺激β细胞再生进行治疗。这些方法主要包括促进β细胞自身增殖和α细胞、δ细胞、胰腺导管上皮细胞、腺泡细胞以及其他消化腺细胞等细胞的转分化。通过不同的生物因子相关信号通路来调节β细胞的再生,从而恢复胰岛细胞功能,逆转或者延缓糖尿病的发生、发展,可为糖尿病的治疗提供新思路。     

雌激素对老年雌鼠阴道NOS及雌激素受体的影响

目的 研究雌激素对老年雌性大鼠阴道组织一氧化氮合酶(NOS)活性及雌激素受体(ER)亚型的影响,探讨雌激素作用于女性性功能的可能机制.方法 SD雌性大鼠分三组:青年组(3月龄)、老年组(20月龄)、苯甲酸雌二醇治疗组,比色法检测阴道组织NOS的活性,免疫组化法检测ER α和β的表达.结果 老年大鼠阴道NOS活性下降,而阴道上皮细胞ERα、平滑肌细胞ERα和ERβ表达增加,雌激素治疗能逆转这些变化.大鼠血清雌二醇浓度与阴道组织NOS活性呈正相关,两者均与阴道上皮细胞ERα、平滑肌细胞ERα和ERβ呈负相关,而与大鼠阴道上皮细胞ERβ、基质纤维细胞ERα和ERβ无相关性.结论 雌激素可以通过调节阴道NOS维持女性性功能,这一过程与阴道上皮细胞ERα、平滑肌细胞ERα和ERβ密切相关.     

气道上皮损伤后支气管上皮-肌纤维母细胞转分化及转化生长因子β1的调节作用

目的 观察支气管上皮细胞损伤后,细胞表型、超微结构、内皮素1(endothelin-1,ET-1)、转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)表达的动态变化以及TGF-β1 对支气管上皮-肌纤维母细胞转分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的调节.方法 以多聚左旋精氨酸(PA)诱导支气管上皮16HBE-14o细胞损伤,观察损伤后细胞培养液ET-1、TOF-β1及乳酸脱氢酶(LDH)含量、细胞表型及超微结构的动态改变,ET-1对上皮细胞TGF-β1 分泌的调节以及TGF-β1 对EMT的促进作用.结果 PA造成16HBE-14o损伤,损伤后LDH、ET-1、TGF-β1 释放增多.上皮修复过程中,一过性出现少量肌动蛋白阳性的细长梭形细胞,胞浆内同时可见肌微丝及丰富的粗面内质网,梭形细胞周围可见新分泌的胶原纤维,发生EMT.50 μg/L TGF-β1 能促进损伤上皮细胞的EMT,TGF-β1中和抗体能完全阻断EMT.ET-1能刺激上皮细胞分泌TGF-β1,且为ET-1 A受体阻断剂-bq123完全阻断.结论 支气管上皮细胞损伤后ET-1、TGF-β1 表达上调,出现上皮-间充质转分化.TGF-β1 能通过自分泌、旁分泌作用促进EMT.ET-1可能通过上调上皮细胞TGF-β1 的表达参与EMT的调节.气道上皮损伤后上皮细胞的活化、EMT可能在支气管哮喘气道重塑中发挥重要作用.     

胃干细胞

干细胞研究于1999年度和2000年度连续两次被美国科学杂志评为世界十大科技成果之一,成为当今世界生命科学研究最前沿、最活跃的领域之一.由于(1)干细胞有自我更新和向多种细胞分化的能力,将为组织器官再生提供新的细胞来源途径;(2)目前研究认为,成年组织含有三个不同层次的细胞,即干细胞、祖细胞和成熟细胞,探讨疾病情况下干细胞、祖细胞的分化将很可能从细胞发育学的角度阐明一些疾病的发病机制;(3)研究如何促进干/祖细胞想所在组织的成熟细胞分化将可能成为疾病防治研究的新思路.因此,干/祖细胞研究具有重要的理论意义和潜在的临床应用价值.消化系统由多个器官组成,近年来国外对消化系统干/祖细胞的研究较多,为了了解国外消化系统干/祖细胞的研究状况、促进我国在该领域的研究,我们对消化系统主要器官胃、肠、肝脏及胰腺的干/祖细胞的研究文献进行了综述.     

机械损伤对人气道上皮细胞生长的影响

目的 通过机械划痕模拟机械损伤，探讨机械损伤对人气道上皮细胞生长及细胞因子分泌的影响。方法 通过机械划痕对气道上皮细胞进行损伤造模，将造模后细胞培养液加入正常培养液构建条件培养液；气道上皮细胞分两组，分别用正常细胞培养液及条件培养液进行孵育5天；CCK8法检测细胞增殖情况及活性；HE染色分析细胞形态；免疫细胞化学检测处理后气道上皮细胞中TGF-β、β-catenin、HIF-1表达水平。结果 利用损伤细胞培养液进行培养后，对比正常培养细胞，造模组气道上皮细胞数量降低，活性下降(P<0.05);HE染色显微镜下观察细胞变化情况，造模后细胞形态未变，胞核染色未变，胞质淡染；免疫细胞化学测定两组细胞因子表达水平，结果提示造模组TGF-β、β-catenin、HIF-1表达水平升高(P<0.05)。结论 机械损伤可抑制气道上皮细胞生长；缺氧及TGF-β、Wnt/β-catenin通路可能参与了气道机械损伤后的修复过程。     

胰腺的发育及其相关基因调控

胰腺由腺泡、导管和胰岛组成.外分泌腺泡是产生各种消化酶的部分.胰岛含α、β、δ和PP 4种内分泌细胞,分别产生胰高血糖素、胰岛素、生长抑素和胰多肽,是调节血糖的主要内分泌组织.导管上皮细胞除了分泌水和碳酸氢盐外,还是胰腺多能干细胞的储存部位.从导管上皮细胞分化来的内分泌前体细胞迁移至胰腺基质并最终分化为胰岛.胰腺的胚胎发生和胰岛的再生过程均受到多种基因和分子信号的调节,深入研究这些分子事件在胰腺发生、胰岛分化以及胰岛新生过程中的作用,对糖尿病、胰腺癌等疾病的治疗有重要意义.     

糖尿病大鼠胰腺Wnt／β-catenin信号通路的变化及其调节胰岛干细胞分化与增生的意义

目的研究胰岛β细胞损伤后胰岛再生过程中wnt／β-catenin信号通路的生物调控。方法STZ破坏新生大鼠胰岛β细胞,免疫组织化学观察1d、2d、3d中Wnt／w catenin通路β—catenin为核心的上、下游基因APC、c—Myc以及Nestin在胰岛再生过程中的表达。结果w catenin在残留的胰岛细胞中表达上调,并在胰腺间质中异常表达;APC表达于胰腺导管上皮及残留的胰岛细胞;c—Myc则主要表达于胰腺腺泡上皮及胰腺间质内;Nestin表达分布于残留的胰岛细胞和胰腺导管上皮。结论Wnt／β-catenin信号通路在胰岛再生中可能通过促进胰腺干细胞分化与增殖而调控。     

胰腺纤维化与TGF-β1/Smad信号转导机制的研究进展

流行病学资料表明,慢性胰腺炎(CP)的发病率呈逐年升高趋势,而胰腺纤维化是CP的重要病理特征之一。近年来的研究发现,胰腺星状细胞(PSC)可能是导致胰腺纤维化的主要始动细胞和效应细胞,其静止型可在转化生长因子-β1(TGF-β1)的作用下转变为活化型,导致细胞外基质(ECM)大量生成并最终进展为纤维化。TGF-β1主要将刺激信号经由细胞质中的Smad蛋白来调节PSC的表达,TGF-β1/Smad信号通路在胰腺纤维化过程中可能起着重要作用。此文主要就PSC及信号通路与胰腺纤维化的发生、发展的研究进展作一综述。     

TGF-β1诱导的肺泡上皮细胞间质转化及其机制探讨

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的肺泡上皮细胞-间质细胞转化(EMT)过程及信号传导通路。方法体外培养肺腺癌细胞系A549细胞,以TGF-β1进行干预;采用Western blot免疫印迹法检测干预前后细胞标志物蛋白及信号传导蛋白P-Smad2/3、Snail1、Snail2的表达;采用RT-PCR检测干预前后细胞标志物mRNA表达;采用倒置相差显微镜观察细胞形态学变化。结果 TGF-β1干预后,随着时间的延长,A549细胞上皮细胞标志物E-cad和CK19蛋白及mRNA表达下调(P0.05);间质细胞标志物α-SMA、Vimentin蛋白及mRNA表达上调(P0.05);信号传导蛋白P-Smad2/3、Snail1表达上调(P0.05);倒置相差显微镜观察TGF-β1干预后A549细胞由干预前的鹅卵石状变为梭形,如同肌纤维母细胞。结论 TGF-β1可诱导肺泡上皮细胞向间质细胞转化,其机制可能与P-Smad2/3、Snail1信号传导通路有关;TGF-β1可能是通过诱导肺泡上皮细胞间质转化的细胞效应,最终导致肺泡上皮细胞凋亡和纤维组织形成。     

成熟的肝脏干细胞体外转分化为产生胰腺内分泌激素的细胞

在胚胎发生过程中,肝脏和腹侧胰腺来源于胚胎内胚层的同一细胞群,可以假定胰腺和肝脏内的上皮细胞群可能来源于共同的干细胞群,已有证据表明胰腺干细胞拥有分化成肝细胞的能力,然而,肝脏干细胞分化成胰腺细胞(特别是内分泌胰腺细胞)的能力还不为人所知。 材料和方法:按Petersen等所描述的步骤用2-乙酰胺基笏/肝损伤模型在体内激活肝卵圆细胞,然后用Seglen的二步胶原酶灌注法分离,再通过细胞分类纯化获得Thyl.1-阳性细胞群,纯化的Thyl.1-阳性细胞培养在改进的DMEM     

他汀类药物与内皮祖细胞

内皮祖细胞是来源于骨髓可分化为内皮细胞的一群细胞,在组织缺血及血管损伤时动员入血,参与微血管的生成及血管内皮的修复。有研究表明循环内皮祖细胞的数量和功能与冠心病危险因子呈负相关,提示循环内皮祖细胞有作为心血管疾病预后评估工具的应用前景。他汀类药物除了调节血脂的作用外,在血脂正常的动物模型中也发现能增加内皮祖细胞数量及增强内皮祖细胞功能,他汀类药物的这种作用可能是其临床上治疗冠心病获益的机制之一。     

肝卵圆细胞分化调控机制的研究进展

卵圆细胞是肝脏的干细胞，具备多向分化潜能，体内外实验证实其可以分化为肝细胞、胆管细胞、胰腺及肠型上皮细胞。在胚胎发育过程中，肝脏干细胞以肝细胞的形式存在，而在成年哺乳动物的肝组织中则以卵圆细胞的形式存在。对卵圆细胞分化调控机制的研究在基础理论和临床应用等方面均有重要意义，一方面，卯圆细胞可能参与肝脏损伤的修复与重建，研究其分化机制有助于阐明肝脏的发育机制；另一方面，卵圆细胞可分化为具有功能的成熟肝细胞，将为肝细胞移植和生物型人工肝提供重要的细胞来源，可能缓解供体肝脏严重缺乏的矛盾。但卵圆细胞的分化过程和机制非常复杂，分化异常可能导致肝细胞癌的发生。     

胰腺肾素-血管紧张素系统对胰岛β细胞功能的影响

近年研究显示胰腺局部组织存在肾素-血管紧张素系统,对胰岛β细胞功能有着直接或间接的影向,其主要活性成分为血管紧张素Ⅱ.后者在胰腺局部表达并活化,与其受体结合发挥生物学作用.可以改变胰腺局部血流动力学,增强胰腺局部氧化应激及炎性反应,从而通过活性氧簇和炎性反应因子对胰岛β细胞造成损伤,同时可抑制胰岛素的生物合成和分泌,诱导胰岛β细胞凋亡并抑制其增殖,使其数量减少,并影响β细胞的形态与结构、增强纤维化程度,从而促进糖尿病的发生、发展.     

Vimentin在胰腺癌细胞中的表达及临床意义

目的:研究vimentin在胰腺癌细胞中的表达及意义.方法:采用免疫组织化学的方法检测99例胰腺癌组织中vimentin的表达,并分析其与临床病理资料的关系.免疫荧光、Westem blot分析不同胰腺癌细胞中vimentin的表达,Transwell侵袭小室法检测细胞的运动能力.结果:在99例胰腺癌组织中vimentin阳性16例(16%),vimentin的阳性表达和淋巴结转移(P= 0.02)、远处转移(P<0.001)、肿瘤细胞的分化程度(P=0.002)存在明显的相关性.Vimentin在低分化的胰腺癌细胞Panc-1中呈高表达,而在中分化和高分化的胰腺癌细胞AsPC-1和BxPc-3中表达较低.vimentin的表达和细胞体外运动能力相关.结论:胰腺祖细胞标记物vimentin在胰腺癌细胞中存在表达,胰腺癌的发生和干细胞可能存在一定的联系,并可能预测胰腺癌的恶性程度.     

转化生长因子-β1对人近端肾小管上皮细胞结缔组织生长因子表达的影响

目的:探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)对人肾小管上皮细胞结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响,同时观察TGF-β1对肾小管上皮细胞合成细胞外基质(ECM)、组织金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的影响.方法:应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,观察TGF-β1诱导人近端肾小管上皮细胞系(HK-2)合成CTGF、ECM、TIMP-1及α-SMA的情况.结果:在无TGF-β1刺激的情况下,HK-2细胞中有基础量的CTGF mRNA表达,TGF-β1以剂量和时间依赖的方式诱导HK-2细胞合成CTGF mRNA,其表达在24h时达高峰,同时TGF-β1可使HK-2细胞合成ECM、α-SMA增多,但在时相上均晚于CTGF.随着TGF-β1浓度的增加,HK-2细胞合成TIMP-1也随之增加,但较大剂量的TGF-β1(15ng/ml)方可使TIMP-1 mRNA的表达明显增加(P＜0.05).结论:TGF-β1可直接诱导体外培养的人近端肾小管上皮细胞表达CTGF,其表达转录水平要早于ECM、α-SMA的表达,提示CTGF可能介导了TGF-β1的促肾小管上皮细胞ECM合成和转分化的作用.     

正常大鼠胰腺上皮细胞来源类胰岛样细胞簇的实验研究

目的 观察大鼠胰腺上皮细胞来源类胰岛样细胞簇的胰岛素分泌功能及移植至糖尿病模型大鼠的效果.方法 将传代培养6个月以上的大鼠胰腺上皮细胞经高糖、10 mmol/L尼克酰胺、10 μg/L肝细胞生长因子和10 μg/L成纤维细胞生长因子分化诱导后,分化成类胰岛样细胞簇,应用双硫腙染色法进行鉴定;应用放射免疫法检测培养液中胰岛素和C肽分泌水平;收集成熟的类胰岛样细胞簇,移植到糖尿病鼠的肾被膜下,检测糖尿病鼠血糖水平.结果 诱导后1周,自单层的扁平上皮细胞以出芽的方式生长出三维的类胰岛样细胞簇,双硫腙染色后呈桔红色.随着类胰岛样细胞簇的成熟和数量的增加,培养液中的胰岛素水平逐渐升高,并对高糖刺激有反应性.移植实验表明大鼠胰腺上皮细胞来源的类胰岛样细胞簇移植可以将糖尿病鼠的血糖从(22.43±0.23)mmol/L～(28.96±1.52)mmol/L逆转至(9.60±0.34)mmol/L～(11.80±0.98)mmol/L之间.结论 大鼠胰腺上皮细胞来源的类胰岛样细胞簇具有胰岛素分泌功能,移植后可以逆转糖尿病大鼠的高血糖状态.     

上皮间质转化与肝纤维化的研究进展

上皮间质转化是一个复杂的病理生理过程,目前认为他在肝纤维化过程中起着重要的作用.现有研究表明肝上皮细胞(肝细胞、胆管上皮细胞、肝祖细胞)可以通过上皮间质转化而促进肝纤维化.该过程主要通过转化生长因子-β1信号通路调节,并涉及多种细胞因子的参与.本文就上皮间质转化与肝纤维化的关系作一综述.     

通过启动内源性β细胞再生治疗糖尿病

胰岛移植是一种治疗糖尿病的有效方法,却因供体来源缺乏和免疫排斥等问题难以广泛应用.在正常机体中,胰岛β细胞的再生与凋亡处于动态平衡中.胰腺损伤等条件能刺激内源性B细胞再生以满足机体对胰岛素的需求.成体中内源性β细胞再生的来源主要包括胰腺干/祖细胞分化、β细胞自身分裂增殖和其他类型细胞转分化3种途径.一些小分子药物及非β细胞的移植能够有效刺激内源性β细胞的再生,有望成为治疗糖尿病的新方法.     

胰岛β细胞去分化、再分化与转分化的调控与功能

胰岛β细胞功能衰竭是2型糖尿病(T2DM)发生及进展的中心环节,β细胞去分化可能是导致β细胞数量下降及功能障碍的核心机制。预防β细胞去分化和(或)促进去分化细胞再分化为β细胞是T2DM治疗的关键策略。通过诱导胚胎干细胞或多潜能干细胞分化或β细胞增殖、再分化及转分化可促进β细胞数量或体积的增加。深入理解β细胞去分化、再分...     

抗凋亡因子生存素在急性出血坏死性胰腺炎及合并肺损伤组织中的表达

目的 探讨急性出血坏死性胰腺炎(ANP)合并肺损伤时大鼠胰腺和肺脏组织抗凋亡因子生存素(survivin)的表达及变化情况.方法 采用胆胰管逆行注射4.5%牛磺胆酸钠的方法制作大鼠ANP合并肺损伤模型.将50只Wistar大鼠随机分为对照组、造模后24 h、48 h、72 h、96 h共5组,每组10只,采用免疫组化和Western blot法检测胰腺和肺脏中survivin的表达及变化情况.结果 survivin在对照组肺组织表达呈阴性,在实验组肺泡上皮细胞、支气管上皮细胞及血管内皮细胞中表达呈阳性;在对照组胰腺组织表达呈阴性,在实验组主要表达于胰腺导管细胞的胞核和胞质,腺泡细胞胞核中有散在表达,胞质中未见表达.Western blot结果显示,对照组肺和胰腺组织无survivin蛋白带,实验组肺脏和胰腺组织中表达逐渐增强,48 h达高峰,96 h下降明显.结论 survivin在ANP组织中及合并肺损伤的肺组织中异常高表达,可能起到减轻肺损伤、促进修复的作用.