大鼠局灶性脑缺血再灌注后P-erk表达及神经元凋亡的变化

目的 研究磷酸化细胞外信号调节激酶(phospho-excelluar signal-regulated kinase,P-erk)在局灶性脑缺血再灌注中的作用. 方法 建立局灶性脑缺血再灌注大鼠模型;HE染色观察脑组织形态病理学变化;免疫组化法检测大鼠脑缺血再灌注不同时间磷酸化ERK的表达;TUNEL染色检测神经元凋亡. 结果在脑缺血再灌注大鼠检测到磷酸化ERK在梗死中心灶和缺血半暗带都存在阳性表达,于再灌注6 h达到峰值,12 h后逐渐下降;而凋亡细胞于再灌注24 h开始有明显的阳性细胞增加,48 h细胞凋亡达到高峰(P<0.01). 结论 局灶性脑缺血再灌注后磷酸化ERK表达增加,提示缺血再灌注损伤可能导致ERK活性上调,参与缺血后神经细胞凋亡和非程序性死亡过程.     

环氧酶-2在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中的表达及意义

目的探讨局灶性脑缺血再灌注损伤过程中环氧酶(COX)-2基因的表达及其意义。方法采用栓线法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型。随机分为8组:假手术组,缺血2h组,缺血再灌注3、6、12、24、48和72h组,每组10只。评定神经功能损伤,HE染色观察脑组织形态学改变。Northern blot、Western blot和免疫组化染色方法检测脑组织的mRNA和蛋白产物表达。结果神经功能缺损表现随缺血再灌注时间的延长而逐渐加重。缺血2h组可见COX-2的mRNA和蛋白产物表达明显增加,再灌注后表达逐渐增强,再灌注12～24hCOX-2的mRNA和蛋白产物表达达到高峰。结论COX-2基因在局灶性脑缺血再灌注损伤中的表达呈动态变化过程,COX-2可能与缺血再灌注后迟发性神经细胞死亡有关。     

肾性高血压大鼠局灶性脑缺血再灌注后Survivin表达和细胞凋亡及意义

目的观察肾性高血压大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑组织Survivin表达和细胞凋亡,探讨其意义。方法体重290～310g肾性高血压Wistar大鼠50只随机分成2组：缺血再灌注组及假手术组。采用线栓法制作局灶性脑缺血再灌注模型,假手术组不造成缺血。用免疫组化法和TUNEL法分别观察再灌注6h、12h、24h、48h和72h脑组织Survivin表达和凋亡细胞。结果在缺血再灌注组中,再灌注6h时较多Survivin表达,到72h仍见强烈表达。再灌注6h后已出现较多凋亡细胞,在72h达高峰。假手术组及再灌注组的非缺血侧未见Survivin,但见0～2个凋亡细胞。结论局灶性脑缺血再灌注能促使Survivin表达,细胞凋亡参与了脑缺血再灌注过程。     

大鼠脑缺血再灌注损伤后死亡相关蛋白激酶的表达及意义

目的 探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤时死亡相关蛋白激酶(Death associated related protein kinase,DAPK)的表达变化及其与脑缺血再灌注损伤的关系。方法 线拴法建立局灶性脑缺血再灌注模型,SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组和缺血再灌注组,缺血组于栓塞3h后分别再灌注12h、24h、3d、7d。HE染色观察组织病理变化;免疫组化法检测DAPK的表达;原位杂交法检测DAPK mRNA的表达。结果 缺血组DAPK免疫阳性反应于再灌注后24h开始增强并于3d时达高峰,随后下降;DAPK mRNA的表达于再灌注3d时达高峰,随后下降。结论 脑缺血再灌注损伤诱导DAPK表达增强;DAPK在缺血性脑损伤中起重要作用。     

鼠脑缺血再灌注损伤后P-、L-选择素表达的研究

目的 研究P-、L-选择素在鼠局灶性脑缺血再灌注后的表达规律，探讨P-、L-选择素在脑缺血再灌注损伤中的作用。方法 72只雄性SD鼠随机分为假手术组和脑缺血2h再灌注2h、3h、4h、6h、12h、24h、48h组，采用尼龙线栓塞法建立鼠局灶性脑缺血再灌注模型，用免疫组化法检测脑组织缺血再灌注不同时间点P-、L-选择素的表达。结果 假手术组未见P-、L-选择素的表达。P-选择素在脑缺血再灌注后3h出现少量表达，12h达高峰，48h仍有表达；L-选择素在脑缺血再灌注后2h出现少量表达，6h达高峰，24h仍有表达。结论 鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中，P-、L-选择素表达明显上调，提示两者介导了白细胞、脑微血管内皮细胞的黏附，参与了脑缺血再灌注损伤的病理过程。     

眼针对局灶性脑缺血再灌注大鼠VEGF/VEGFR系统表达的影响

目的   通过观察眼针对局灶性脑缺血再灌注大鼠血管内皮生长因子及其受体(VEGF/VEGFR)系统表达的影响,探讨眼针促进局灶性脑缺血再灌注大鼠微血管生成的作用机制。方法   采用改良线栓法制备局灶性脑缺血再灌注模型,采用眼针治疗。再灌注3、24、72h后,免疫组化法检测脑微血管密度及VEGF、VEGFR2表达;逆转录-聚合酶链反应法检测大鼠VEGF mRNA、VEGFR2 mRNA表达。结果   与模型组比较,眼针组缺血再灌注24、72h微血管密度明显增加,各时间点VEGF、VEGFR2表达明显增加,VEGF mRNA、VEGFR2 mRNA表达明显上调(P均＜0.05)。结论   眼针可以促进脑缺血再灌注大鼠微血管生成,其机制与上调VEGF/VEGFR表达有关。     

脑缺血再灌注后不同时间点病理变化与细胞凋亡的研究

目的探讨脑缺血再灌注后不同时间点病理变化与细胞凋亡的特点。方法采用线栓法制作大鼠大脑中动脉阻断(MCAO)局灶性脑缺血再灌注模型,光镜下观察病理变化,TUNEL法检测细胞凋亡。结果1脑缺血2h再灌注1~6h皮质缺血区病理变化不明显,24~48h病理变化明显;2脑缺血2h再灌注1h皮质缺血区可见凋亡细胞,24~48h达高峰,72h开始下降。结论脑缺血2h再灌注1~6h皮质缺血区脑细胞凋亡较轻,24~48h明显加重,且与病理变化相对应。宜尽早采取有效的干预措施抑制细胞凋亡,减轻脑组织病理损害。     

脑缺血再灌注后神经细胞bcl—2和p53mRNA的表达

目的：探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞bcl-2和p53mRNA表达的变化规律。方法：采用原位杂交技术分别观察血1.5h再灌注后2h,6h,12h,1d,2d,3d,7d和14d神经细胞bcl-2,p53mRNA的表达。结果：脑缺血再灌注2h在缺血周围区bcl-2mRNA开始表达，1d达高峰，之后逐渐减弱，14d达接近假手术组水平;p53mRNA于再灌注6h出现，1-2d达高峰，7d达假手术组水平。结论:大鼠局灶性脑缺血再灌注后bcl-2和p53mRNA的表达与缺血性损伤有一定关系，bcl-2和p53mRNA参与了神经细胞凋亡的调节。     

高压氧对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑神经细胞凋亡及bcl-2蛋白表达的影响

目的:探讨高压氧对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑神经细胞凋亡及bcl-2蛋白表达的影响.方法:选取健康雄性Wistar大鼠60只,随机分为假手术组(10只)、缺血对照组(25只)及缺血再灌注加高压氧治疗组(HBO组,25只).采用动脉线栓法制成大脑中动脉(MCA)局灶性脑缺血再灌注模型.用四氮唑染色观察局灶性脑缺血再灌注后120 h各组大鼠脑梗死灶的大小,应用TUNEL法及免疫组化方法检测缺血3 h再灌注6 h、24 h、48 h、72 h、120 h大鼠脑组织神经细胞凋亡及bcl-2蛋白的表达.结果:假手术组未发现脑梗死灶,凋亡细胞及bcl-2蛋白表达阴性.HBO组缺血再灌注后120 h大鼠梗死灶体积(15.9±4.2)明显小于缺血对照组(26.8±4.9)(P＜0.01);HBO组大鼠再灌注24 h,48 h,72 h各时点凋亡指数均低于缺血对照组,bcl-2蛋白表达均高于缺血对照组(P＜0.05).结论:脑缺血再灌注后凋亡细胞增多,bcl-2蛋白表达增强,高压氧治疗可以上调bcl-2蛋白的表达,抑制脑神经细胞凋亡,具有脑神经保护作用.     

七叶皂苷钠对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤脑的保护作用

目的探讨七叶皂苷钠对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤脑的保护作用。方法198只健康雄性Wistar大鼠,用大脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血/再灌注大鼠模型,随机分为假手术组、缺血/再灌注组和缺血/冉灌注七叶皂苷钠治疗组,假手术组18只,后两组又分为缺血2 h后再灌注6、12、24、48和72h,共5个时间点,每时间点18只。进行各组神经功能缺损评分,测定梗死体积,观察病理形态学变化,并用SP法和图像分析测定其缺血区c-fos基因的表达变化。结果缺血/冉灌注组c-fos基因在神经元的表达于再灌注6h开始增加,24h达高峰,48h后降低,72h最低,缺血/再灌注七叶皂苷钠治疗组c-fos基因于再灌注同一时相显著减少。结论七叶皂苷钠能减轻大鼠脑组织的缺血/再灌注损伤,改善神经功能缺失,其作用机制可能与减少c-fos基因表达有关。     

CHANGES OF ENDOTHELIN-1 GENE EXPRESSION IN RAT BRAINS DURING ISCHEMIA AND ISCHEMIC REPERFUSION

ＣＨＡＮＧＥＳＯＦＥＮＤＯＴＨＥＬＩＮ－１ＧＥＮＥＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮＩＮＲＡＴＢＲＡＩＮＳＤＵＲＩＮＧＩＳＣＨＥＭＩＡＡＮＤＩＳＣＨＥＭＩＣＲＥＰＥＲＦＵＳＩＯＮＷｕＷｅｉｐｉｎｇ（吴卫平）；ＫｕａｎｇＰｅｉｇｅｎ（匡培根）ａｎｄＬｉＺｈｅｎｚｈｏ...     

棕榈油对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

目的研究棕榈油（palm oil,PO）对大鼠局灶性脑缺血再灌注后梗死体积及细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax蛋白表达的影响,探讨棕榈油的脑缺血保护作用及机制。方法用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型。将健康雄性SD大鼠随机分成4组：空白对照组、假手术组、缺血再灌注组（IR）、PO处理组。空白对照组与假手术组每组12只大鼠,缺血再灌注组与PO处理组再分为再灌注2 h、6 h、12 h、24 h、72 h、7 d等6个亚组,每亚组12只大鼠。TTC染色观察脑缺血再灌注损伤后的损伤体积;SDS聚丙烯酰胺凝胶转移电泳（westernblotting,WB）检测Bcl-2、Bax的表达水平并观察PO的保护作用。结果①TTC染色：空白对照组与假手术组未见缺血失染区域,缺血再灌注组与棕榈油处理组缺血再灌注后2h均未见明显的缺血失染区,在缺血再灌注6 h、12 h、24 h、72 h、7 d各时间点,PO处理组梗死质量百分比与对应的IR组数值比较均有统计学差异（P〈0.05）,PO处理组较缺血再灌注组缺血梗死脑区质量百分比减少;②WB：缺血再灌注组及棕榈油组从再灌注6 h开始Bcl-2、Bax在半暗带区表达增强,随缺血时间延长,表达呈先升高后降低,Bcl-2于缺血12 h达高峰,Bax于缺血24 h达高峰。各时间点PO处理组与相应缺血组相比,Bcl-2的表达量显著增加（P〈0.05）,Bax的表达量显著减少（P〈0.05）。结论①棕榈油可以减小大鼠局灶性脑缺血再灌注后的缺血受损范围;②棕榈油能够增加大鼠局灶性脑缺血再灌注后凋亡抑制基因Bcl-2表达作用,降低凋亡基因Bax表达作用,保护神经细胞。     

参芎注射液对大鼠脑缺血再灌注后内质网应激相关分子C／EBP同源蛋白表达的影响

【摘要】目的检测内质网相关分子C／EBP同源蛋白（C／EBPhomologyprotein,CHOP）在缺血再灌注大鼠脑内的表达变化及参芎注射液对CHOP的影响,以期为参芎注射液的脑保护作用提供理论依据。方法144只雄性SD大鼠按随机数字表法分为三组：假手术组、手术组、参芎组。采用线栓法制作大脑中动脉缺血再灌注模型,分别于再灌注后6、12、24、72h时相点处死动物,用免疫组化学及逆转录聚合酶链反应法分别检测脑缺血区CHOP蛋白水平及mRNA水平;末端标记法原位检测神经细胞凋亡。结果CHOPmRNA及蛋白水平在再灌注后均有升高,分别在再灌注后12、24h时相点达到高峰;在缺血再灌注模型中,神经细胞凋亡的数量随再灌注时间延长而增加,24h时相点到达高峰;在再灌注后各个时间点参芎干预组凋亡细胞数均低于手术组（P〈0．01）;再灌注后6、12、24、72h参芎干预组CHOPmRNA及蛋白水平明显低于相应时间点的手术组大鼠（P〈0．01）。结论参芎注射液可能通过抑制脑缺血再灌注后内质网应激诱导的CHOP的表达进而减少神经细胞凋亡,发挥神经保护作用。     

脑缺血大鼠HGF及VEGF的表达及其相关性

目的研究脑缺血大鼠肝细胞生长因子（HGF）及血管内皮细胞生长因子（VEGF）的表达情况及其相关性。方法48只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组及大脑中动脉线栓法制作局灶性脑缺血大鼠模型组,分别于2h、6h、12h、24h、3d、7d、14d处死动物,采用免疫组织化学法观察各组脑组织HGF和VEGF的表达。结果HGF在假手术组几乎无表达,缺血2hHGF表达增加,并随时间延长表达逐渐上升,缺血组与对照组比较均有统计学差异（P〈0．01）。VEGF假手术组即有表达,缺血6h表达明显增加,在3-14d时表达增高达高峰,缺血组与对照组比较均有统计学差异（P〈0．01）。结论脑缺血后HGF及VEGF表达增高,两者可能起相互协同促进作用,共同参与缺血灶周围血管新生及脑保护作用。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注脑内p47phox表达变化的研究

目的通过观察大鼠局灶性脑缺血再灌注后p47phox基因在脑内表达动态变化,探讨p47phox在局灶性脑缺血再灌注后对脑缺血损害的作用及机制,可能为p47phox基因作为脑卒中的候选基因提供理论依据。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑缺血再灌注组和假手术组再灌后第1、3、6、12和24h和正常对照组p47phox基因在脑内的表达。结果正常对照组和假手术组大鼠脑皮质内有少量p47phox mRNA表达,组内各时间点比较无统计学意义(P>0.05);脑缺血再灌注组,缺血再灌注1h后p47phox mRNA表达增加,至3h达高峰(与假手术组和正常对照组相比差异显著,P<0.01)。结论p47phox可能参与了脑缺血再灌注后损伤,并在其中发挥了重要作用。     

外周静脉给予PACAP38对脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨通过外周静脉途径给予垂体腺苷酸环化酶激活肽38（PACAP38）对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法线栓法制作大鼠大脑中动脉梗阻模型,脑缺血2h再灌注后6h、12h、24h、48h、72h时分别外周静脉途径给予PACAP38,维持48h后取出脑组织,测定脑梗死体积、超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）和一氧化氮（NO）含量,并设立对照组,对照组静脉输入生理盐水。结果PACAP38能显著减轻脑梗死体积,增加SOD活性,降低MDA和NO含量,再灌注后6h时给予PACAP38上述改变最为明显。结论PACAP38能有效经外周静脉途径通过血脑屏障,发挥减轻局灶性脑缺血再灌注损伤的作用,其机制与减少自由基生成有关。     

肌苷对大鼠脑缺血再灌注后VEGF表达的影响

①目的　研究肌苷对大鼠脑缺血再灌注后血管内皮生长因子 (VEGF)表达的影响 ,探讨其神经保护作用机制。②方法　成年健康雌性SD大鼠 6 8只 ,应用线栓法建立大鼠脑缺血再灌注动物模型 ,随机分为假手术组 4只 ,肌苷组 32只 ,对照组 32只。肌苷组腹腔注射肌苷 (10 0mg/kg) ,对照组同步注射等量的生理盐水。采用免疫组织化学法检测肌苷对大鼠脑缺血再灌注不同时间内VEGF蛋白表达的影响。③结果　对照组在皮质区和纹状体区于脑缺血再灌注 2hVEGF开始表达 ,12h达高峰 ,持续 2 4h ,随即迅速降低。肌苷治疗组VEGF表达于缺血再灌注 2h～ 2d较对照组显著增高 (t=12 .4 5～ 2 7.78,P <0 .0 1)。④结论　肌苷对脑缺血再灌注后的保护作用可能通过上调脑组织VEGF的表达而实现的。