穿心莲内酯对人肺腺癌A549细胞NF-κB通路的调控作用

目的探讨穿心莲内酯对肿瘤细胞生长的作用及机制。方法人肺腺癌A549细胞分别与穿心莲内酯1.5～30μmol·L-1作用24h,以及穿心莲内酯30μmol·L-1作用4～24h。用MTT法检测A549细胞存活率;Western印迹法检测在肿瘤坏死因子α(TNF-α)10μg·L-1刺激下,穿心莲内酯30μmol·L-1对NF-κB信号通路中的相关蛋白NF-κB抑制因子α(IκBα)、磷酸化IκBα、IκB激酶β(IKKβ)和磷酸化IKKβ表达的影响;ELISA法检测穿心莲内酯对A549细胞核内NF-κBDNA结合活性的影响。结果穿心莲内酯的浓度和作用时间与A549细胞的存活率密切相关,穿心莲内酯30μmo·lL-1作用24h,A549细胞的存活率下降到(22.0±1.2)%,而穿心莲内酯1.5μmol·L-1作用24h或者穿心莲内酯30μmol·L-1作用4h对A549细胞的存活率几乎无影响。Western印迹法显示,穿心莲内酯能够抑制TNF-α诱导的NF-κB信号通路中IKKβ的磷酸化,抑制IκBα的磷酸化,推迟IκBα的降解,对IKKβ的表达无影响。穿心莲内酯还能够抑制TNF-α诱导的A549细胞核内NF-κBp65蛋白的DNA结合活性,抑制率达32%。结论穿心莲内酯通过影响NF-κB信号通路抑制A549细胞的生长。     

机械通气大鼠肺组织巨噬细胞炎症蛋白-1α及核因子-κB的表达

目的通过观察巨噬细胞炎症蛋白-1α(MIP-1α)和核因子-κB(NF-κB)在机械通气大鼠肺组织中的表达,探讨MIP-1α及NF-κB在呼吸机所致肺损伤(VILI)发生中的作用。方法 32只雄性健康Wistar大鼠随机分为对照组、小潮气量组、常规潮气量组和大潮气量组。分别采用原位分子杂交技术和免疫组织化学染色方法检测各组大鼠肺组织MIP-1α mRNA及NF-κB p65蛋白表达水平,测定其支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞及中性粒细胞计数。结果大潮气量组和常规潮气量组大鼠BALF中白细胞和中性粒细胞计数,以及细支气管上皮MIP-1α mRNA和NF-κB p65蛋白阳性表达细胞百分比均明显高于小潮气量组和对照组(P<0.01)。对照组与小潮气量组比较差异无统计学意义(P>0.05)。相关分析结果表明,各组大鼠细支气管上皮MIP-1α mRNA阳性表达细胞百分比与BALF中性粒细胞计数和NF-κB p65蛋白阳性表达细胞百分比之间均呈正相关(r=0.546,r=0.482,均P<0.05)。结论在VILI发生过程中,MIP-1α是导致中性粒细胞在肺内募集、活化的重要细胞因子;肺组织细胞表达MIP-1α在一定程度上可能受NF-κB的调控;机械刺激→NF-κB→MIP-1α信号通路可能是VILI发生过程中细胞内信号传导途径之一。     

同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞IκB和NF-κB表达的影响

目的:观察同型半胱氨酸(Hcy)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)核因子(NF)-κB的表达、激活的影响及其诱导动脉粥样硬化形成的分子机制。方法:将体外培养的HUVECs分为对照组、2.5(H1)、5(H2)、10(H3)及15mmol/L(H4)5组,培养24h。通过四甲基噻唑氮蓝(MTT)比色法测定细胞活力,采用RT-PCR法检测NF-κBp65mRNA的表达,Westernblot检测NF-κB抑制蛋白-α(IκB-α)的蛋白降解,免疫组化法检测NF-κB的核转移趋势。结果:H2、H3、H4组HUVECs细胞活力较对照组明显下降(P<0.01);Hcy可使NF-κBp65mRNA的表达明显增强(P<0.05或P<0.01);Hcy可促进IκB-α蛋白降解,且呈现明显的剂量依赖性;Hcy处理HUVECs后,大量的NF-κBp65从细胞质进入细胞核。结论:Hcy可通过增强NF-κBp65mRNA的表达,加速IκB-α蛋白的降解,促进NF-κBp65的释放、活化,从而转移进细胞核,调节其下游的趋化因子、细胞黏附分子的表达,促进动脉粥样硬化的形成和发展。     

NF-κB/IκB在二苯乙烯苷抑制过氧化氢诱导内皮细胞凋亡中的表达变化

目的探讨二苯乙烯苷(TSG)对过氧化氢(H2O2)诱导人脐静脉内皮细胞凋亡及对核因子κB(NF-κB)、NF-κB抑制因子(IκB)基因表达的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,实验分为对照组、H2O2组、TSG组,采用Ho-echst 33258染色观察细胞凋亡形态,MTT法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR检测NF-κB与IκB mR-NA表达,Western blot检测NF-κB p65、IκB蛋白表达。结果与对照组比较,H2O2组凋亡细胞数增多,细胞凋亡率增加,细胞增殖降低;NF-κB mRNA和蛋白表达增加,IκB mRNA和蛋白表达降低,差异均有显著性(P<0.01)。经TSG预处理后,细胞的增殖率较H2O2组增加,细胞凋亡率减少;NF-κBmRNA和蛋白表达减少,IκB mRNA和蛋白表达增加(P<0.01)。结论二苯乙烯苷能抑制H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡,其作用机制可能与调节NF-κB/IκB表达有关。     

紫草素通过调节NF-κB通路改善糖尿病心肌病的研究

目的 研究紫草素改善糖尿病心肌病的作用及其对炎症相关信号通路的影响。方法 构建糖尿病心肌病细胞模型,用不同浓度的紫草素处理细胞,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,qRT-PCR法检测炎症细胞因子的表达,western blotting检测蛋白表达水平。结果 体外高糖培养乳鼠心肌H9C2细胞后IL-1β、IL-6、TNF-α等炎症指标明显升高（P<0.01）,NF-κB信号通路被激活（P<0.01）,不同浓度紫草素处理高糖诱导的H9C2细胞,紫草素可呈时间和浓度依赖性改善糖尿病心肌病炎症,降低IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA及NF-κB p65表达水平。结论 紫草素可能通过调节NF-kB通路改善高糖诱导的H9C2心肌细胞炎症反应。     

柚皮素通过抑制NF-κB信号通路减轻哮喘大鼠气道炎症反应#br#

摘要：目的　探讨柚皮素对哮喘大鼠气道炎症反应的影响及其作用机制。方法　利用卵清蛋白（OVA）诱导建立哮喘大鼠模型,实验分为正常对照组、哮喘模型组、柚皮素100 mg/kg及柚皮素200 mg/kg组,实验结束后麻醉脱颈处死大鼠;Giemsa染色检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中炎性细胞的数量及分类;HE染色观察肺组织病理学变化;酶联免疫吸附测定试验（ELISA）检测血清中核因子κB（NF-κB）的含量和BALF中辅助性T2（Th2）细胞因子的含量;免疫组化和实时定量PCR（qPCR）检测哮喘大鼠肺部NF-κB蛋白及mRNA的表达水平。脂多糖（LPS）诱导建立A549炎症细胞模型,柚皮素处理细胞后免疫荧光和Western blot检测A549细胞中NF-κB蛋白的表达水平。结果　柚皮素100 mg/kg和柚皮素200 mg/kg组均可减少单核细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞对哮喘大鼠肺部和支气管的浸润,并可改善哮喘大鼠肺泡的生理结构,减少支气管黏膜上皮脱落,促进支气管假复层及纤毛结构修复。柚皮素可降低肺部NF-κB p65、NF-κB p50蛋白和mRNA的表达（P＜0.05）,降低血清中NF-κB p65、NF-κB p50和BALF中Th2细胞因子白细胞介素（IL）-4、IL-5、IL-13的含量（P＜0.05）。在体外LPS诱导的炎症A549细胞中,柚皮素可降低NF-κB p65、NF-κB p50蛋白的表达,上调IκBα的表达（P＜0.05）。结论　柚皮素可有效减轻哮喘大鼠肺部和支气管的炎症反应,其潜在的作用机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。     

蓝萼乙素通过NF-κB信号通路调控舌鳞状细胞癌细胞的增殖与凋亡

摘要：目的:探讨蓝萼乙素调控舌鳞状细胞癌（TSCC）细胞增殖、凋亡的分子机制。方法:体外培养人TSCC细胞SCC15,使用不同浓度的(3,6,12μmol·L-1)蓝萼乙素处理24 h。甲基噻唑基四唑（MTT）检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测蓝萼乙素对核因子-κB（NF-κB）信号通路相关蛋白[磷酸化核因子κB抑制蛋白α（p-IκBα）、磷酸化p65（p-p65）、p65、核因子κB抑制蛋白α（IκBα）]表达的影响; NF-κB信号通路的激活剂脂多糖（LPS）预处理SCC15细胞后,MTT法与流式细胞术分别检测细胞增殖能力及细胞凋亡率; Western blot法检测细胞周期蛋白1（CyclinD1）、增殖细胞核抗原（PCNA）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白（Bax）、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved Caspase-3）、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶3总蛋白（T-caspase-3）的蛋白水平。结果:与空白组相比,蓝萼乙素不同浓度组细胞增殖率显著降低,CyclinD1、PCNA、Bcl-2、p-IκBα、p-p65蛋白水平显著降低,细胞凋亡率显著升高,Bax、Cleaved caspase-3蛋白水平显著升高（P<0.05）;与蓝萼乙素高浓度+PBS组相比,蓝萼乙素高浓度+LPS组细胞增殖率显著升高,CyclinD1、PCNA、Bcl-2蛋白水平显著升高,细胞凋亡率显著降低,Bax、Cleaved caspase-3蛋白水平显著降低（P<0.05）。结论:蓝萼乙素能够抑制TSCC细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能是通过抑制NF-κB信号通路的活化而发挥作用。     

淫羊藿次苷Ⅱ通过调节IKK/IκB/NF-κB信号通路抑制脂多糖诱导的星形胶质细胞炎症反应

目的研究ICSⅡ对脂多糖(LPS)诱导的星形胶质细胞炎症反应的作用。方法体外分离新生SD大鼠脑皮质组织提取原代星形胶质细胞并进行培养。将星形胶质细胞分为空白组、空白+ICSⅡ高浓度组、模型组、模型+ICSⅡ低浓度组、模型+ICSⅡ中浓度组、模型+ICSⅡ高浓度组、模型+地塞米松组。ICSⅡ(5,10,20μmol·L-1)或DSMX(1μmol·L-1)预处理星形胶质细胞1 h后,继续与LPS共同作用24 h。采用MTT法检测ICSⅡ作用于星形胶质细胞的安全浓度范围,确定安全浓度后再观察ICSⅡ对LPS诱导的星形胶质细胞炎症反应的影响;采用ELISA法检测星形胶质细胞中TNF-α,IL-1β,NO,Aβ1-40和Aβ1-42的水平;采用Western蛋白免疫印迹技术检测COX-2,i NOS,IκB-α,NF-κB(p65)(胞核),NF-κB(p65)(胞质)和BACE1的蛋白表达,以及NF-κB(p65)、IKK-α和IKK-β磷酸化水平;采用分子对接技术模拟ICSⅡ与BACE1蛋白的结合。结果 ICSⅡ(0～50μmol·L-1)对星形胶质细胞无毒性作用。模型组较空白组星形胶质细胞中TNF-α,IL-1β和NO水平均显著上升(P<0.05);细胞炎症通路蛋白COX-2,i NOS,NF-κB(p65)(胞核)及BACE1表达升高(P<0.05);IκB-α和NF-κB(p65)(胞质)表达显著降低(P<0.05);NF-κB(p65),IKK-α和IKK-β的磷酸化水平明显上升(P<0.05)。给予ICSⅡ能够明显降低TNF-α,IL-1β和NO水平(P<0.05)。此外,ICSⅡ显著下调炎症相关蛋白COX-2,i NOS,NF-κB(胞核)及BACE1的表达(P<0.05),明显上调NF-κB(胞质)和IκB-α蛋白表达(P<0.05)。同时,明显降低NF-κB(p65),IKK-α和IKK-β的磷酸化水平(P<0.05),对LPS诱导的IκB-α降解、NF-κB活化及细胞核易位均具有显著的抑制作用。结论本研究条件下,ICSⅡ通过调节IKK/IκB/NF-κB信号通路发挥其对LPS诱导的星形胶质细胞炎症损伤的保护作用。     

槐定碱抑制内毒素血症小鼠肾组织NF-κB通路活化的研究

为研究槐定碱干预对内毒素血症小鼠肾组织NF-κB通路的影响,以细菌脂多糖(LPS)引起的内毒素血症肾损伤小鼠为实验对象,槐定碱(12、6及3 mg·kg-1,ip)干预,RT-PCR检测肾组织IKKβ与TNF-α的mRNA表达,免疫组化检测磷酸化IKKβ蛋白(pIKKβ)表达,Western blotting与免疫荧光激光共聚焦显微镜观察肾组织NF-κB的表达与分布,放射免疫法检测血清中TNF-α的水平。结果显示,槐定碱(12、6及3 mg·kg-1)干预降低了内毒素血症小鼠肾组织IKKβmRNA及pIKKβ表达,抑制NF-κB P65蛋白表达并减少NF-κB P65蛋白入核率,从而使肾组织TNF-αmRNA表达及血清TNF-α含量减少。结果提示,槐定碱可抑制LPS引起的炎症反应,其机制可能与抑制NF-κB通路活化有关。     

异甘草酸镁对成纤维细胞NF-κB信号通路活性的影响

目的:研究异甘草酸镁(magnesium isoglycyrrhizinate,MgIG)对成纤维细胞核因子-kappa B(nuclear factor kappa B,NF-κB)信号通路活性的影响。方法:实验分6组,为空白对照组、TNF-α模型组、地塞米松(dexamethasone,DEX)阳性对照组和0.1、1、10mg/ml的MgIG组。DEX组和MgIG组分别给予DEX(1μg/ml)和MgIG(0.1、1、10mg/ml)预处理4h后,除对照组外,其余5组加入TNF-α(20ng/ml)作用1.5h。提取细胞核蛋白,以免疫印迹法检测NF-κB p65蛋白质表达。提取总RNA,用实时PCR技术检测细胞内IκBαmRNA表达。成纤维细胞经DEX和MgIG预处理4h后加入TNF-α作用24h(浓度同上),用报告基因技术检测NF-κB基因表达。结果:成纤维细胞经TNF-α作用1.5h后,细胞核内NF-κB p65蛋白质表达量明显增加,IκBαmRNA表达上调;TNF-α作用24h后,NF-κB基因上调。DEX预处理4h,可以明显减少TNF-α引起的核内NF-κB p65蛋白质表达和细胞内IκBαmRNA表达,明显降低与TNF-α共作用24h后NF-κB基因表达。MgIG处理成纤维细胞4h后,能够明显降低TNF-α作用1.5h后核内NF-κB p65蛋白质表达量,但对IκBαmRNA表达水平无明显影响。1、10mg/ml的MgIG能够明显降低与TNF-α共作用24h后NF-κB基因表达水平。结论:MgIG的抗炎作用与抑制NF-κB p65转位入核和NF-κB基因表达,从而抑制NF-κB信号通路活性相关,但与DEX不同的是MgIG不能改变IκBαmRNA表达水平。     

雷公藤红素升高ROS和抑制NF-κB通路抑制肺癌H460细胞生长

摘要：目的:探究雷公藤红素对人肺癌H460细胞的体外抑制作用。方法:使用MTT法检测雷公藤红素对H460细胞生长的影响;使用细胞集落实验检测雷公藤红素对H460细胞集落形成的影响;采用细胞流式仪检测雷公藤红素及雷公藤红素联用N-乙酰半胱氨酸（NAC）对活性氧（ROS）水平的影响;采用MTT法检测雷公藤红素联用NAC对H460细胞生长的影响;蛋白质印迹法检测雷公藤红素及联用NAC后对凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达水平影响。同时,进一步使用蛋白质印迹法检测雷公藤红素对核因子κB（NF-κB）通路中IκBα表达水平的影响。结果:雷公藤红素浓度依赖性的抑制H460细胞的生长和集落形成（P<0.05或P<0.01）,浓度依赖性的促进细胞内ROS水平（P<0.01）,同时能够通过升高ROS水平诱导H460细胞死亡（P<0.01）,升高Bax蛋白及抑制Bcl-2蛋白的表达（P<0.05或P<0.01或P<0.001）,促进IκBα的表达（P<0.05或P<0.01）。结论:雷公藤红素表现出高效抗肺癌作用,能升高ROS水平介导凋亡相关蛋白的表达以及抑制NF-κB通路来抑制人肺癌H460细胞的生长。     

核因子-κB p65与心肌素在子宫肌瘤中的表达及作用机制

目的探讨核因子(NF)-κB p65亚型和心肌素在子宫肌瘤发生中的作用机制。方法蛋白印迹法检测29例子宫肌瘤和相应肌层组织以及15例原代子宫肌瘤细胞和相应肌层细胞中NF-κB p65、心肌素的表达;RNA干扰技术抑制子宫肌瘤细胞中NF-κB p65基因表达,光镜观察细胞生长状况,蛋白印迹法检测干扰后子宫肌瘤细胞中NF-κB p65和心肌素的表达。结果与正常肌层相比,子宫肌瘤组织和细胞中的NF-κB p65相对表达量增高(P<0.05),而心肌素的相对表达量降低(P<0.05)。RNA干扰后,与未转染的子宫肌瘤细胞相比,NF-κB p65的相对表达量降低(P<0.05),而心肌素的表达量相对增高(P<0.05)。结论 NF-κB p65与心肌素可能相互作用共同参与了子宫肌瘤的形成。     

宝华玉兰种子提取物对NF-κB及IκBα表达的抑制作用

目的探讨宝华玉兰种子提取物对核转录因子-κB(NF-κB)、核转录因子-κB抑制蛋白α(IκBα)表达的抑制作用机制。方法使用宝华玉兰种子提取物处理人肝癌细胞HepG2后,用Western blotting法检测NF-κB及IκBα蛋白的表达变化情况。结果宝华玉兰种子提取物对IκBα的磷酸化及降解有抑制作用。宝华玉兰种子提取物可有效抑制NF-κB介导的基因转录。结论宝华玉兰种子提取物可能通过抑制IκBα磷酸化及降解,阻断NF-κB活性,进而抑制COX-2而发挥其抗炎和抗肿瘤作用。     

苹果寡糖下调脂多糖刺激引起的TLR-4/NF-κB通路活性升高

目的探讨苹果寡糖(AOG)对细菌脂多糖(LPS)活化人结肠癌细胞HT-29的TLR-4/NF-κB通路的影响及相关机制。方法将HT-29细胞分为对照组、LPS处理组(1μg·mL~(-1),30 min、1 h)、AOG(0.5 mg·mL~(-1))+LPS(1μg·mL~(-1))处理组(30 min、1 h),采用免疫荧光法观察NF-κB在细胞质、细胞核内的分布情况;免疫印迹法检测细胞中IκB-α、磷酸化IκB-α、细胞核中NF-κB以及细胞膜上TLR-4的蛋白变化。结果 AOG可抑制LPS刺激引起的HT-29细胞的NF-κB核转位;可有效抑制IκB-α降解及IκB-α的磷酸化;可降低细胞膜上TLR-4的表达。结论 AOG可能通过抑制LPS刺激引起的TLR-4表达升高,发挥抑制NF-κB信号通路活化的作用。     

曲古抑菌素对肿瘤坏死因子α诱导U937细胞IκB-α蛋白降解的影响

目的:探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素(trichostatin A,TSA)与肿瘤坏死因子α(TNF-α)分别或联合作用于人类单核细胞白血病细胞株U937细胞前后,IκB-α蛋白的表达变化及其在NF-κB激活过程中的作用。方法:分别将TSA、TNF-α单独或联合作用于U937细胞,用免疫印迹法及荧光显微镜检测NF-κB/P65蛋白在该细胞中的表达及定位的变化;流式细胞术和免疫印迹法分析IκB-α蛋白表达的变化。结果:①荧光显微镜观察:分别作用45min后,NF-κB/P65蛋白分布于对照组及TSA处理组的细胞浆;而TNF-α处理组胞浆、胞核中均可见P65蛋白分布;TSA TNF-α联合处理组仅胞浆表达P65蛋白。免疫印迹结果同样证实,作用相同时间后,TNF-α处理组细胞核表达P65蛋白,TSA TNF-α联合处理组细胞核内P65蛋白表达较前者明显减少;②流式细胞术结果表明,经相同时间处理后,TSA TNF-α联合处理组的IκB-α蛋白平均荧光强度较TNF-α处理组明显增高(P<0.05);免疫印迹结果也显示,作用45min后,TNF-α处理组细胞IκB-α蛋白表达较对照组明显降低,TSA TNF-α联合处理组细胞IκB-α的表达较前者明显增高,但在作用2h后二者IκB-α蛋白表达差异无显著性。结论:TSA能部分抑制TNF-α诱导的U937细胞IκB-α的降解,从而抑制NF-κB的激活。TSA有可能通过影响NF-κB信号途径发挥抗肿瘤作用。     

三七总皂苷调节iNOS-NO-NF-κB信号通路抑制LPS诱导的RAW246.7细胞炎症研究

目的 探讨三七总皂苷（PNS）对脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7细胞iNOS-NO-NF-κB信号通路相关分子表达及活性的影响。方法 MTT比色法检测PNS对RAW264.7细胞增殖的抑制作用;不同浓度PNS（25、50、100 μg/mL）干预体外培养LPS诱导的RAW264.7细胞24、48 h后,Griess法检测NO变化;PNS干预24 h后,Western blotting检测iNOS、NF-κB、p-NF-κB、IKKα、p-IKKα、p-ΙκΒα蛋白表达量的变化;PNS干预4 h后,激光共聚焦显微镜检测NF-κB转位入核情况。结果 PNS浓度大于150 μg/mL时,才表现出显著抑制细胞增殖的作用。25、50、100 μg/mL PNS作用于RAW264.7细胞24和48 h后,与模型组比较,NO生成量均显著降低（P<0.001）。50、100 μg/mL PNS作用于RAW264.7 24 h后,iNOS、NF-κB蛋白表达量显著降低,磷酸化蛋白p-NF-κB、p-IKKα、p-ΙκΒα表达水平也显著降低（P<0.01、0.001）。与模型组比较,PNS 25、50、100 μg/mL组核因子p65入核荧光强度显著降低（P<0.01、0.001）。结论 PNS能够显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞iNOS-NO-NF-κB信号通路的活性,降低细胞炎症反应。     

丹皮酚通过抑制NF-κB信号通路诱导Tca8113细胞凋亡

目的 研究丹皮酚对核因子κB（NF-κB）信号通路的影响,探讨其诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制。方法 将丹皮酚以不同浓度及不同时间作用于人舌鳞癌Tca8113细胞,应用MTT法观察不同浓度丹皮酚在不同作用时间下对Tca8113细胞增殖的抑制作用,Hoechst 33342荧光染色及流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2,以及NF-κB信号通路组分中IκBα和p-IκBα的表达情况,并采用凝胶电泳迁移率检测（EMSA）对NF-κB活性进行测定。结果 经丹皮酚作用后,Tca8113细胞生长受到明显抑制,并呈明显的时间、剂量依赖效应关系。丹皮酚有明显诱导Tca8113细胞凋亡的作用,Western Blot 以及EMSA检测结果显示,丹皮酚上调Tca8113细胞中Bax与IκBα的表达,下调Bcl-2的表达,并能下调IκBα磷酸化及NF κB活性。结论 丹皮酚能够抑制NF-κB信号转导通路,进而抑制Tca8113细胞的增殖并诱导其凋亡。     

狐臭柴茎挥发油体外抗炎活性及基于NF-κB和MAPKs信号通路作用机制的研究

目的:探究狐臭柴茎挥发油的体外抗炎活性及其作用机制。方法:通过水蒸气蒸馏法制备狐臭柴茎挥发油,采用GC-MS对其化学成分进行分析。通过Griess法和ELISA法测定挥发油对LPS诱导RAW264.7细胞上清液中一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平的影响;qRT-PCR检测iNOS、COX-2、TNF-α、IL-6、IL-1β mRNA的表达;Western blot测定挥发油对iNOS、COX-2、NF-κB和MAPKs信号通路蛋白的影响。结果:从挥发油中共鉴定出74种化学成分,其中主要的化学成分是茅术醇(13.50%)。挥发油显著抑制NO、TNF-α和IL-6的分泌(P＜0.01),同时降低了促炎因子(TNF-α、IL-6和IL-1β)和促炎酶(iNOS和COX-2)的mRNA表达水平(P＜0.01)。Western blot研究表明挥发油能下调NF-κB信号通路细胞核p65蛋白表达、p65和IκBα磷酸化(P＜0.05或P＜0.01)。此外,还降低了MAPKs信号通路p38、JNK和ERK蛋白的磷酸化(P＜0.01)。结论:狐臭柴茎挥发油对LPS诱导RAW264.7细胞炎症模型具有较好的抗炎效果,其内在的分子机制与下调NF-κB和MAPKs信号通路有关。     

Toll样受体4/NF-κB信号通路参与黄芪多糖对肿瘤坏死因子α诱导的乳大鼠心肌细胞肥大的抑制作用

目的探讨黄芪多糖(APS)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的乳大鼠心肌细胞肥大的保护作用及机制。方法 原代培养乳大鼠心肌细胞分别加入APS 25,50和100 mg.L-1作用30 min后再加入TNF-α50μg.L-1作用48 h。考马斯亮蓝法测定心肌细胞蛋白含量;消化分离法及计算机图像分析系统检测细胞体积;RT-PCR检测心肌心钠素(ANP)和Toll样受体4(TLR4)的mRNA表达;Western印迹法检测心肌细胞p65和IκBα的蛋白表达;ELISA法检测细胞外液白细胞介素1β(IL-1β)的含量。结果 与正常对照组相比,TNF-α组心肌细胞蛋白含量增加了52.8%,细胞体积增大了66.7%,ANP和TLR4 mRNA分别增加了60.3%和68.7%,p65蛋白表达增加了50.5%,IκBα蛋白表达减少了43.1%,IL-1β表达增加了59.0%,差异均有统计学意义(P<0.01)。与TNF-α模型组相比,APS 50,100 mg.L-1和IκBα阻断BAY11-7082 5μmo.l L-1组蛋白含量、细胞体积、ANP mRNA、TLR4 mRNA、IL-1β和p65蛋白表达显著降低(P<0.05),IκBα蛋白表达明显增高(P<0.05);APS 25 mg.L-1组蛋白含量、细胞体积和ANP mRNA表达显著性降低(P<0.05)。结论 APS对TNF-α诱导的乳大鼠心肌细胞肥大有保护作用,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路有关。     

NF-κB、P53蛋白在子宫内膜癌中的表达及意义

目的探讨核因子κB(Nuclear factor-κB,NF-κB)、P53蛋白在子宫内膜癌中的表达及临床病理学意义。方法采用免疫组化PV-6000-G两步法对31例子宫内膜癌组织和15例正常子宫内膜组织中的NF-κB p65、P53蛋白进行检测。结果 NF-κB p65、P53蛋白在子宫内膜癌组织中的阳性表达率均明显高于正常子宫内膜(P<0.01),P53蛋白的过表达与临床分期有关(P<0.05),与组织学分级无关(P>0.05);NF-κB p65的阳性表达与子宫内膜癌的组织学分级、临床分期无关(P>0.05);NF-κB p65与P53蛋白在子宫内膜癌中的表达呈正相关(r=0.626,P=0.000)。结论 NF-κBp65、P53蛋白的表达在子宫内膜癌的发生发展中起重要作用,NF-κB可能参与P53蛋白的调控。