红藤提取物联合5-氟尿嘧啶抑制肝癌细胞生长作用及机制研究

目的研究红藤提取物联合5-氟尿嘧啶对人肝癌HepG2细胞生长的抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法体外培养HepG2细胞,以不同质量浓度的红藤提取物作用于细胞,采用MTT法检测其对细胞生长的影响,选择后续实验浓度。将HepG2细胞分为对照组、红藤提取物(40 mg/L)组、5-氟尿嘧啶(10μmol/L)组及联合用药(红藤提取物40 mg/L+5-氟尿嘧啶10μmol/L)组,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞周期,Western blotting法检测细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)及细胞周期依赖性蛋白激酶4(CDK4)表达水平。结果 MTT检测结果显示,红藤提取物呈质量浓度依赖性地抑制HepG2细胞增殖,选择其质量浓度为40mg/L用于后续实验。与对照组比较,红藤提取物组和5-氟尿嘧啶组细胞增殖抑制率显著升高,G_0/G_1期细胞比例显著升高,S期和G2/M期细胞比例显著降低,细胞中PCNA、Cyclin D1、CDK4蛋白的表达显著降低(P0.05)。与5-氟尿嘧啶组比较,联合用药能显著抑制HepG2细胞增殖,阻滞细胞周期,抑制细胞中PCNA、Cyclin D1、CDK4蛋白表达(P0.05)。结论红藤提取物联合5-氟尿嘧啶能够增强对HepG2细胞生长的抑制作用,其作用机制可能与抑制细胞中PCNA、Cyclin D1、CDK4蛋白表达水平有关。     

桑根白皮素调控人结肠癌HCT116细胞周期阻滞及其抑制细胞增殖的体外研究

目的观察中药提取物桑根白皮素对结肠癌HCT116细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡的影响,探讨其相关机制。方法体外以不同浓度桑根白皮素作用于HCT116细胞72 h,CCK-8法检测细胞增殖,计算细胞生长抑制率和IC50,取25.4μmol/L和50.8μmol/L桑根白皮素作用于HCT116细胞24、48、72 h,CCK-8法检测细胞增殖,镜下观测细胞形态并摄图;25.4μmol/L桑根白皮素作用于细胞24 h后,流式细胞仪检测细胞周期分布,荧光显微镜下TUNEL法原位检测细胞凋亡;Western blot检测药物干预后β-catenin通路蛋白和细胞周期蛋白的表达变化。结果桑根白皮素对HCT116细胞增殖的抑制作用呈浓度/时间依赖性,72 h IC50为25.4μmol/L;桑根白皮素阻滞HCT116细胞周期于G0/G1期和G2/M期,对细胞凋亡无明显诱导作用;桑根白皮素显著降低β-catenin通路相关蛋白β-catenin、c-Myc及细胞周期调控蛋白cyclin D1、cyclin B1的表达。结论桑根白皮素可阻滞HCT116细胞周期,抑制细胞增殖,其机制可能是通过下调β-catenin通路活性,并抑制细胞周期蛋白cyclin D1、cyclin B1表达实现的。     

胡桃醌对卵巢癌SKOV3细胞周期影响

目的观察胡桃醌对人卵巢癌SKOV3细胞增殖及细胞周期的影响。方法采用MTT法检测胡桃醌对卵巢癌SKOV3细胞生长抑制作用;采用流式细胞仪检测胡桃醌对卵巢癌SKOV3细胞周期的影响;采用Western Blot检测卵巢癌SKOV3细胞Cyclin D1和Cyclin E的表达。结果与对照组比较,不同剂量胡桃醌对卵巢癌SKOV3细胞具有抑制作用且呈剂量依赖性,IC50为30.13μmol/L,将细胞周期阻滞在G0/G1期。与对照组比较,胡桃醌处理组细胞周期蛋白Cyclin D1表达降低(P0.05),而Cyclin E蛋白表达变化不显著。结论胡桃醌通过抑制Cyclin D1的表达抑制细胞周期G0/G1期阻滞,抑制细胞生长。     

半枝莲阻滞人结肠癌细胞周期的机制

目的研究半枝莲氯仿极性部位提取物(ECSB)阻滞人结肠癌细胞周期的机制。方法用ECSB干预结肠癌细胞株HCT-8、SW620,检测其细胞周期相关基因的表达。结果 ECSB干预SW620细胞后,其p16表达上升,PCNA表达下降;ECSB干预HCT-8细胞后,Cyclin D1、CDK2、CDK4表达下降。结论ECSB通过调控细胞周期相关基因的表达,抑制人结肠癌细胞的增殖。     

乳浆大戟提取物诱导HeLa细胞凋亡及其机制研究

目的研究乳浆大戟提取物诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用及其分子机制。方法采用MTT法和克隆形成实验检测乳浆大戟提取物对宫颈癌HeLa细胞的生长和增殖抑制作用;利用Annexin V-FITC/PI双染和DAPI细胞核染色法检测乳浆大戟提取物诱导细胞凋亡情况;线粒体膜电位检测凋亡细胞的线粒体膜电位变化情况;流式细胞仪和Westernblot法分别分析细胞周期及细胞周期蛋白变化情况。结果①乳浆大戟提取物以时间和剂量依赖的方式显著抑制宫颈癌HeLa细胞的生长和增殖;②乳浆大戟提取物能使宫颈癌HeLa细胞线粒体膜电位显著降低,诱导细胞发生凋亡性细胞死亡;③乳浆大戟提取物能够显著阻滞宫颈癌HeLa细胞在G0/G1期,降低Cyclin D1、Cyclin E和CDK4的表达水平,增加P21的表达水平。结论乳浆大戟提取物通过下调Cyclin D1、Cyclin E和CDK4的表达和上调P21的表达,使HeLa细胞阻滞在G0/G1期,进而显著抑制宫颈癌HeLa细胞生长和增殖,诱导细胞依赖线粒体通路的凋亡性死亡。     

淫羊藿苷对血管平滑肌细胞周期及周期相关蛋白表达的影响

目的 研究淫羊藿苷（icariin．ICA）对同型半胱氨酸（homocysteinemia,HCY）诱导增殖的血管平滑肌细胞（vascular smooth musckle cell．VSMC）细胞周期的影响及其机制。方法建立HCY诱导的兔VSMC增殖模型,与不同浓度的ICA共同培养48h后,用流式细胞仪检测VSMC细胞周期变化及细胞周期调控相关蛋白Cyclin D1和CDK4的表达。结果0．2mg／L、0．4mg／L ICA组G0／G1期细胞数明显增多,s期细胞数明显减少,与HCY组相比有统计学意义（P〈0．01）;CyclinDl和CDK4的表达量均随ICA剂量增加而减少。结论 ICA桔抗HCY诱导的兔VSMC增殖．其主要机制可能与Cyclin D1及CDK4的低表达所致的细胞周期抑制有关。     

雷公藤甲素诱导结肠癌细胞凋亡的分子机制研究

目的研究雷公藤甲素对人结肠癌HCT-116细胞周期和凋亡的影响及其分子机制。方法采用MTT法检测细胞的增殖;流式细胞仪分析细胞周期和细胞凋亡;Western blot检测细胞中相关蛋白的表达。结果雷公藤甲素可显著抑制HCT-116细胞的增殖活性;流式细胞仪和Western blot结果显示,雷公藤甲素作用HCT-116细胞后,G_0/G_1期细胞比例增多,随着雷公藤甲素浓度的增加,p21蛋白表达上调,周期蛋白Cyclin D1表达下调;并且,雷公藤甲素呈浓度依赖性诱导HCT-116细胞凋亡,凋亡抑制蛋白Bcl-2表达下调,促凋亡蛋白Bax表达上调。结论雷公藤甲素能抑制人结肠癌HCT-116细胞增殖,通过促进p21的表达,抑制Cyclin D1使细胞周期阻滞于G_0/G_1期,并可通过线粒体途径诱导HCT-116细胞凋亡。     

健脾1号方对人结肠癌细胞作用及其机制研究

目的:探讨健脾1号方抑制人结肠癌细胞增殖和干细胞特性的作用机制。方法:以人结肠HCT116癌细胞株为模型,通过MTT实验检测不同浓度(0.4、2、10及50 mg/m L)健脾1号方对HCT116细胞的增殖抑制作用;以无血清悬浮培养实验检测健脾1号方对HCT116细胞干细胞特性的影响;通过Western-blot检测健脾1号方对HCT116细胞钙黏附蛋白E(E-cadherin)表达的影响。结果:健脾1号方对HCT116生长具有抑制作用,且导致细胞形态发生变化,干预24、48及72h后的IC50值分别为2.32、1.78、1.31 mg/m L;健脾1号方具有抑制HCT116细胞成球能力,上调E-cadherin蛋白表达。结论:健脾1号方对HCT116细胞生长和干细胞特性具有明显的抑制作用,其机制可能和调节细胞上皮间质转化(EMT)有关。     

白首乌苷B抗结肠癌作用的研究

目的:评价白首乌苷B(简称CGB)体内外抗结肠癌作用,并探讨其作用机制。方法:采用MTT法检测CT-26、HT-29、SW-620和HCT-116四种结肠癌细胞在CGB处理24、48、72 h后的细胞活性;采用流式细胞仪检测PI单染和Annexin V-FITC/PI双染后的细胞周期及细胞凋亡率;采用Western Blot方法测定细胞内周期蛋白的水平;采用CT-26小鼠和HT-29裸鼠移植性肿瘤模型,评价CGB的体内抗肿瘤作用。结果:CGB体外对四种结肠癌细胞有明显的增殖抑制作用,并呈剂量和时间依赖性;CGB能增加结肠癌细胞G0/G1期的比例,同时降低S期和G2/M期的比例,使细胞阻滞于G1期而无法进入S期;CGB能增加晚期凋亡细胞比例,但对早期凋亡和坏死细胞无明显影响;CGB能下调结肠癌细胞中周期蛋白CDK6、cyclin D1和CDK4的表达,且具有明显的量-效关系;CGB对移植性CT-26和HT-29肿瘤的生长具有明显的抑制作用。结论:CGB具有良好的抗结肠癌作用,其作用机制与诱导细胞凋亡、下调周期蛋白的表达、阻滞细胞周期、促使肿瘤组织坏死有关。     

肉豆蔻醚抑制结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用及机制研究＊

目的 探讨肉豆蔻醚（myristicin）对结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用及机制。方法 MTT法检测肉豆蔻醚在体外对结肠癌细胞HCT116和LOVO增殖的影响；Annexin V/PI双染法检测肉豆蔻醚对HCT116和LOVO细胞凋亡的影响；划痕试验和Transwell实验分别检测肉豆蔻醚对HCT116和LOVO细胞迁移和侵袭的影响；western blot实验检测肉豆蔻醚对p-MEK1/2、p-ERK1/2、CyclinD1、E-cadherin、MMP-2以及MMP-9表达的影响。结果 肉豆蔻醚作用后，HCT116和LOVO细胞增殖、迁移和侵袭受到显著抑制，细胞出现显著凋亡；肉豆蔻醚作用后，HCT116和LOVO细胞内MEK1/2、ERK1/2、CyclinD1、MMP-2以及MMP-9蛋白表达水平显著降低，而E-cadherin蛋白表达水平显著增高。结论 本研究发现肉豆蔻醚在体外具有抑制结肠癌细胞生长的作用，为临床用药提供一定的实验依据，为肿瘤治疗提供新的靶点和策略。     

异丁酰紫草素通过PI3K/Akt/m-TOR通路靶向抑制结肠癌细胞增殖的研究

探讨异丁酰紫草素对结肠癌细胞体外生长抑制作用及其对PI3K/Akt/m-TOR通路的影响。MTT法检测不同浓度(0,6.25,12.5,25,50,100 mg·L~(-1))异丁酰紫草素处理人结肠癌HT29细胞24,48 h的增殖抑制率;CCK-8法检测异丁酰紫草素作用人结肠癌细胞HT29,HCT116,DLD-1,Caco-2 48 h的增殖抑制率;Annexin V/PI双标记流式细胞术检测24,48 h异丁酰紫草素对HT29细胞凋亡的影响;细胞周期检测试剂盒检测48 h异丁酰紫草素对HT29细胞周期变化的影响;Western blot及RT-PCR法检测异丁酰紫草素对HT29细胞PI3K,p-PI3K,Akt,pAkt,m-TOR蛋白水平和mRNA水平的变化。结果显示,异丁酰紫草素可抑制人结肠癌细胞生长、增殖,抑制率呈浓度依赖性;异丁酰紫草素促进细胞凋亡,且主要集中在早期凋亡,阻滞细胞于G0/G1期或G2/M期;异丁酰紫草素浓度依赖性下调HT29细胞PI3K,p-PI3K,Akt,p-Akt,m-TOR蛋白及PI3K,Akt,m-TOR mRNA水平。结果表明,异丁酰紫草素能显著抑制人结肠癌细胞增殖,诱导早期凋亡,改变细胞的周期分布,这种生物学效应可能与PI3K/Akt/m-TOR信号通路受到抑制有关。     

灵芝烯酸B诱导Oct4去SUMO化激活G0期胃癌侧群细胞

[目的]从蛋白质类泛素化修饰角度研究灵芝烯酸B(GAB)对静息期G0胃癌侧群细胞的活化作用,为胃癌侧群细胞靶向治疗提供新策略。[方法]流式细胞术分离CD133+的SGC-7901胃癌侧群细胞,培养细胞克隆球,给予GAB处理96 h,于不同时间点检测克隆球大小,绘制克隆球变化曲线;流式细胞术检测胃癌侧群细胞周期变化;蛋白免疫印迹(Western Blot)方法检测小泛素样修饰蛋白-1(SUMO-1)、八聚体结合转录因子4(Oct4)、细胞周期蛋白Cyclin D1、Cyclin E1、Cyclin A2和Cyclin B1的表达水平;四甲基噻唑蓝(MTT)法检测顺铂对CD133+胃癌侧群细胞的半数致死量(IC50)。[结果] GAB组胃癌侧群细胞克隆球生长速度明显低于对照组;对照组CD133+胃癌侧群细胞主要集中于G0/G1期,而GAB组CD133+则主要集中于G2/M期;与对照组比较,GAB组胃癌侧群细胞的SUMO-1、Oct4和Cyclin D1蛋白表达水平降低,而Cyclin E1、Cyclin A2和Cyclin B1蛋白表达水平升高(P0.05);GAB处理使顺铂对胃癌侧群细胞IC50从69.84μg/mL下降至35.67μg/mL。[结论] GAB能够通过诱导Oct4去SUMO化激活G0期胃癌侧群细胞,增加胃癌侧群细胞对顺铂的化疗敏感性。     

汉黄芩素对结肠癌LoVo细胞增殖、凋亡和周期及G_1/S关卡调控因子的影响

目的 探讨汉黄芩素对人结肠癌LoVo细胞体外增殖、凋亡和周期及G_1/S关卡调控因子的影响,为其临床应用提供理论依据。方法 汉黄芩素处理LoVo细胞后,采用CCK-8法检测细胞增殖情况,Graphpad计算IC50;FCM检测细胞周期和凋亡率;Western blot检测G_1/S关卡调控因子蛋白表达。结果 与对照组相比,汉黄芩素对LoVo细胞增殖抑制作用呈现时间和剂量依赖性(P0.05);24、48和72 h的IC_(50)分别是198.7、65.1和38.6μmol·L~(-1)。不同浓度汉黄芩素作用48 h后,汉黄芩素组LoVo细胞凋亡率均明显高于对照组,且呈现出剂量依赖性(P0.05);LoVo细胞G_0/G_1期比例增大(P0.05),S期比例减少(P0.05),G2/M期比例变化不明显(P0.05);随着汉黄芩素浓度增加,Cyclin D1、Cyclin E、CDK2和CDK4蛋白相对表达量均逐渐下调(P0.05),而p21和p27蛋白相对表达量则逐渐上调(P0.05)。Spearman相关分析显示,LoVo细胞G_0/G_1期比例与p21和p27蛋白表达呈正相关,而与Cyclin D1、Cyclin E、CDK2和CDK4蛋白表达呈负相关。结论 汉黄芩素通过G_1/S关卡调控因子蛋白表达来阻滞结肠癌LoVo细胞于G_0/G_1期,进而有效地抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡,提示汉黄芩素在结肠癌的辅助治疗中有一定的应用前景。     

葛根素对人小细胞肺癌H446细胞周期和相关周期蛋白表达的影响

目的观察葛根素诱导人小细胞肺癌H446细胞周期的阻滞作用,进一步探讨其作用机制。方法采用MTT法测定葛根素对H446细胞生长的影响;采用流式细胞术检测处理后H446细胞周期分布和周期蛋白cyclinD1、CDK4和P27表达水平。结果MTT法表明葛根素对H446细胞生长有较强的抑制作用;流式细胞仪检测结果发现细胞周期阻滞在G0/G1期,量效关系良好,并检测到细胞周期蛋白cyclin D1、CDK4表达减弱,P27表达增强。结论葛根素可通过诱导细胞周期阻滞而发挥体外抗肺癌作用,其机制可能涉及细胞周期相关蛋白cyclin D1、CDK4和P27表达的调控。     

维药肉豆蔻提取物对人结肠癌HCT-116细胞的抑制作用

目的探讨维吾尔药材肉豆蔻乙酸乙酯提取物对人结肠癌HCT-116细胞的生长及侵袭转移的影响。方法取对数生长期人结肠癌HCT-116细胞,实验分为6组,除对照组外,A、B、C、D、E组分别给予31.25,62.5,125,250,500 g/L肉豆蔻乙酸乙酯提取物干预。MTT法检测HCT-116细胞增殖情况,流式细胞仪分析HCT-116细胞凋亡情况和细胞周期变化,酶联免疫吸附法检测HCT-116细胞分泌上皮性钙黏附蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9情况。结果与对照组比较,肉豆蔻乙酸乙酯提取物对人结肠癌HCT116细胞的生长具有显著抑制作用,且随肉豆蔻乙酸乙酯提取物浓度的增加,细胞凋亡率逐渐升高;与对照组比较,肉豆蔻乙酸乙酯提取物各组G0/G1期的细胞比例明显增加,G2/M期的细胞比例明显减少,E-cadherin表达水平明显上调,MMP-2及MMP-2表达水平明显降低。结论肉豆蔻乙酸乙酯提取物能显著抑制人结肠癌HCT-116细胞的增殖,促进细胞凋亡,且呈剂量依赖性。该药通过上调E-cadherin、下调MMP-2及MMP-9的表达起到抗侵袭转移作用。     

藤黄醇提取物抑制人结肠癌细胞HCT116侵袭的分子机制研究

目的:探讨藤黄醇提取物对HCT116细胞侵袭的影响及其内在的分子作用机制。方法:采用Transwell侵袭实验观察藤黄醇提取物对HCT116细胞的侵袭能力影响,实时荧光定量PCR法检测MMP-7和Cyclin D1的mRNA表达水平,Western Blot法检测MMP-7和Cyclin D1的蛋白表达水平,免疫荧光观察β-catenin在细胞内的定位变化。结果:随着藤黄醇提取物剂量的增加,其抑制HCT116细胞的侵袭作用逐渐增强,β-catenin在细胞核内分布逐渐下降,MMP-7和Cyclin D1的mRNA和蛋白表达水平逐渐下降。结论:藤黄醇提取物可能通过抑制异常活化的Wnt经典信号通路来抑制HCT116细胞的侵袭。     

莪术醇对结肠癌细胞HCT116的影响及作用机制研究

目的:探讨莪术醇对结肠癌细胞HTC116抑制、凋亡的影响及其可能的作用机制。方法:设置100、50、25μg/mL莪术醇为高、中、低剂量组,不加药为空白对照组,顺铂5μmol/L为阳性药物组,药物干预24h,采用CCK8法检测不同浓度的莪术醇对结肠癌细胞HTC116的抑制作用,采用FDA染色实验观察结肠癌细胞各组生长状态,Western Blot(免疫印迹)实验检测凋亡蛋白BCL-2、BAX、Caspase9的表达变化。结果:莪术醇能有效抑制结肠癌细胞HCT116增殖。形态学上,空白组生长密集,阳性药物组细胞稀疏,高、中、低莪术醇组分别呈密集到稀疏趋势。在凋亡方面,莪术醇能上调凋亡蛋白BAX、Caspase9的表达,降低抗凋亡蛋白BCL-2的表达。结论:莪术醇能明显抑制HCT116细胞的分化增殖,其机制可能与上调凋亡蛋白BAX、Caspase9的表达,降低抗凋亡BCL-2的表达有关。     

中华芦荟多糖对辐射后非瘤细胞周期改变及周期相关蛋白表达的影响

目的:研究中华芦荟多糖(AP)对X射线照射后人非瘤细胞株C.Liver和293细胞周期进程及细胞周期相关蛋白表达的影响.方法:流式细胞仪检测细胞周期,Western blot检测细胞周期相关蛋白的表达.结果:辐射后293和C.Liver细胞均出现明显的G2/M期阻滞,G0/G1期细胞比例显著下降,50μg/mlAP能显著改变上述趋势.AP预处理能显著下调辐射所致C.Liver细胞P53蛋白水平,显著升高P21、Cyclin B1、pRb蛋白的表达,对P27、CDK4和Cyclin D1蛋白表达水平无显著影响.结论:AP对X射线辐射后非瘤细胞周期紊乱的改善作用与对周期相关蛋白表达的调节有关.     

溪黄草下调miR-1290表达抑制结肠癌细胞恶性行为的研究

目的研究中药溪黄草对结肠癌细胞中miR-1290表达、以及结肠癌细胞恶性行为的影响。方法制备溪黄草乙醇提取物,以不同浓度(20～80μg/mL)作用于体外培养的人结肠癌细胞HCT116,采用实时荧光定量PCR法检测细胞内和细胞培养液中miR-1290的表达水平,采用CCK-8法检测细胞增殖能力,采用划痕法检测细胞迁移能力,采用Matrigel穿膜法检测细胞侵袭能力。结果溪黄草乙醇提取物显著下调了HCT116细胞内和细胞培养液中miR-1290的表达水平,有力抑制了HCT116细胞的增殖能力、迁移能力和侵袭能力。结论中药溪黄草能够下调结肠癌细胞对促癌性小RNA miR-1290的表达和分泌,抑制结肠癌细胞的恶性行为,在结肠癌的治疗上具有良好的应用价值。     

肠胃清药物血清协同奥沙利铂对人结肠癌耐药细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨肠胃清药物血清协同奥沙利铂(L-OHP)对HCT116/L-OHP细胞增殖及凋亡的影响.方法:采用MTT法检测L-OHP联合肠胃清药物血清对HCT116/L-OHP细胞的生长抑制情况,流式细胞仪碘化丙啶(PI)染色分析细胞周期分布及Annexin V-FITC试剂盒监测对HCT116/L-OHP凋亡的影响.结果:HCT116/L-OHP细胞对L-OHP的耐药指数为9.17倍,48 h L-OHP作用于HCT116和HCT116/L-OHP的IC50分别为(9.88 ±0.42),(85.81 ±2.76) mg·L-1,联用肠胃清药物血清后HCT116/L-OHP的IC50降至(35.2±2.8) mg·L-1,逆转指数为2.44倍(P＜0.05).联用前后细胞周期分别停滞在G1,G2期及G1期,其中G1,G2期各组间两两比较P＜0.001,S期组间除奥沙利铂组与奥沙利铂联用肠胃清组比较P＜0.05外,余P＜0.001.联用前后细胞凋亡率分别为(8.6±0.31)％,(23.73±2.36)％,各组间除空白组与奥沙利铂组比较P＜0.05外,余P ＜0.001.结论:肠胃清药物血清能有效地逆转人结肠癌耐奥沙利铂细胞株HCT116/L-OHP对奥沙利铂的耐药,诱导HCT116/L-OHP凋亡,改变细胞周期分布.