丹酚酸A通过调节NF-κB/IκBα信号通路抑制肝纤维化

目的探索丹酚酸A抗四氯化碳(CCl_4)诱导的大鼠肝纤维化的防治及作用机制。方法将48只SD大鼠随机分为空白对照组、CCl_4模型组、丹酚酸A低剂量给药组和丹酚酸A高剂量给药组。除空白对照组外,其他3组每周2次给予50%CCl_4/花生油溶液(1 m L·kg-1)灌胃诱导建立肝纤维化模型,丹酚酸A低剂量和高剂量给药组大鼠同时每日1次给予腹腔注射丹酚酸A(分别为5 mg·kg-1与15 mg·kg-1)。6周后处死大鼠,HE和Masson染色法进行肝组织病理学观察;全自动生化分析仪检测血清肝功能指标(谷丙转氨酶及谷草转氨酶);放射免疫法测定血清肝纤维化指标(透明质酸、Ⅳ型胶原、层黏蛋白和Ⅲ型前胶原肽);Western blot检测肝脏组织中NF-κB和IκBα蛋白的表达;Q-PCR检测炎症因子以及肝星状细胞激活因子基因水平的表达。结果与CCl_4模型组相比,丹酚酸A给药组能够显著改善大鼠肝功能,降低大鼠肝纤维化程度(P<0.05)。与此同时,丹酚酸A给药组能够提高肝细胞浆中NF-κB、IκBα蛋白的表达,并降低细胞核NF-κB蛋白的表达,且能够抑制炎症因子与肝星状细胞激活因子基因水平的表达。结论丹酚酸A可通过调节NF-κB/IκBα信号通路发挥抗肝纤维化作用。     

淫羊藿次苷Ⅱ通过调节IKK/IκB/NF-κB信号通路抑制脂多糖诱导的星形胶质细胞炎症反应

目的研究ICSⅡ对脂多糖(LPS)诱导的星形胶质细胞炎症反应的作用。方法体外分离新生SD大鼠脑皮质组织提取原代星形胶质细胞并进行培养。将星形胶质细胞分为空白组、空白+ICSⅡ高浓度组、模型组、模型+ICSⅡ低浓度组、模型+ICSⅡ中浓度组、模型+ICSⅡ高浓度组、模型+地塞米松组。ICSⅡ(5,10,20μmol·L-1)或DSMX(1μmol·L-1)预处理星形胶质细胞1 h后,继续与LPS共同作用24 h。采用MTT法检测ICSⅡ作用于星形胶质细胞的安全浓度范围,确定安全浓度后再观察ICSⅡ对LPS诱导的星形胶质细胞炎症反应的影响;采用ELISA法检测星形胶质细胞中TNF-α,IL-1β,NO,Aβ1-40和Aβ1-42的水平;采用Western蛋白免疫印迹技术检测COX-2,i NOS,IκB-α,NF-κB(p65)(胞核),NF-κB(p65)(胞质)和BACE1的蛋白表达,以及NF-κB(p65)、IKK-α和IKK-β磷酸化水平;采用分子对接技术模拟ICSⅡ与BACE1蛋白的结合。结果 ICSⅡ(0～50μmol·L-1)对星形胶质细胞无毒性作用。模型组较空白组星形胶质细胞中TNF-α,IL-1β和NO水平均显著上升(P<0.05);细胞炎症通路蛋白COX-2,i NOS,NF-κB(p65)(胞核)及BACE1表达升高(P<0.05);IκB-α和NF-κB(p65)(胞质)表达显著降低(P<0.05);NF-κB(p65),IKK-α和IKK-β的磷酸化水平明显上升(P<0.05)。给予ICSⅡ能够明显降低TNF-α,IL-1β和NO水平(P<0.05)。此外,ICSⅡ显著下调炎症相关蛋白COX-2,i NOS,NF-κB(胞核)及BACE1的表达(P<0.05),明显上调NF-κB(胞质)和IκB-α蛋白表达(P<0.05)。同时,明显降低NF-κB(p65),IKK-α和IKK-β的磷酸化水平(P<0.05),对LPS诱导的IκB-α降解、NF-κB活化及细胞核易位均具有显著的抑制作用。结论本研究条件下,ICSⅡ通过调节IKK/IκB/NF-κB信号通路发挥其对LPS诱导的星形胶质细胞炎症损伤的保护作用。     

姜黄素下调NF-κB信号通路抑制化学缺氧诱导的U87细胞炎症反应

目的 研究姜黄素对化学缺氧所致人源性神经星形胶质瘤细胞系U87炎症反应的影响,并探讨相关分子机制。方法 100 μmol/L CoCl₂处理U87细胞不同时间（1、3、6、12、24 h）,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测炎症因子白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α） mRNA表达变化。100 μmol/L CoCl₂处理U87细胞12 h制备化学缺氧模型,同时给予1、5和10 μmol/L姜黄素处理,对照组（不添加CoCl₂）和模型组给予等体积DMSO;qRTPCR法检测IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA表达变化;Western Blotting法检测NF-κB/P65蛋白磷酸化水平及核转位。结果 CoCl₂上调U87细胞IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA水平并呈时间相关性,炎症反应在约12 h达到高峰。与模型组比较,姜黄素显著下调炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA水平,5和10 μmol/L浓度组差异显著（P<0.05）;显著下调p65的磷酸化水平（P<0.05）;导致细胞核内NF-κB/p65蛋白显著减少、细胞质中NF-κB/p65蛋白显著增加（P<0.05）。结论 姜黄素通过下调NF-κB信号通路抑制化学缺氧诱导的U87细胞炎症反应。     

红景天苷调控PI3K/Akt信号通路对LPS诱导的BV2小胶质细胞的抗炎作用

目的探讨红景天苷对脂多糖(LPS)诱导的BV2小胶质细胞的抗炎作用及其机制。方法建立LPS诱导BV2小胶质细胞损伤模型。经不同浓度的红景天苷作用后,q PCR法检测细胞因子IL-6、IL-1β、TNF-αmRNA的表达; Western blot法检测Akt、p-Akt、核蛋白NF-κB p50的蛋白表达。PI3K抑制剂LY294002作用30 min,再经红景天苷作用后,检测Akt、p-Akt、核蛋白NF-κB p50、IL-6、IL-1β、TNF-α等指标。结果与模型组比较,红景天苷能够抑制BV2小胶质细胞IL-6、IL-1β、TNF-αmRNA的表达,促进p-Akt蛋白表达,抑制核蛋白NF-κB p50;经LY294002作用后,红景天苷对pAkt、核蛋白NF-κB p50、IL-6、IL-1β等作用不明显。结论红景天苷能够抑制LPS诱导的BV2小胶质细胞炎症反应,主要是通过激活PI3K/Akt信号通路,促进Akt的磷酸化,抑制NF-κB p50核转录,进而抑制细胞因子。     

柚皮素通过抑制NF-κB信号通路减轻哮喘大鼠气道炎症反应#br#

摘要：目的　探讨柚皮素对哮喘大鼠气道炎症反应的影响及其作用机制。方法　利用卵清蛋白（OVA）诱导建立哮喘大鼠模型,实验分为正常对照组、哮喘模型组、柚皮素100 mg/kg及柚皮素200 mg/kg组,实验结束后麻醉脱颈处死大鼠;Giemsa染色检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中炎性细胞的数量及分类;HE染色观察肺组织病理学变化;酶联免疫吸附测定试验（ELISA）检测血清中核因子κB（NF-κB）的含量和BALF中辅助性T2（Th2）细胞因子的含量;免疫组化和实时定量PCR（qPCR）检测哮喘大鼠肺部NF-κB蛋白及mRNA的表达水平。脂多糖（LPS）诱导建立A549炎症细胞模型,柚皮素处理细胞后免疫荧光和Western blot检测A549细胞中NF-κB蛋白的表达水平。结果　柚皮素100 mg/kg和柚皮素200 mg/kg组均可减少单核细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞对哮喘大鼠肺部和支气管的浸润,并可改善哮喘大鼠肺泡的生理结构,减少支气管黏膜上皮脱落,促进支气管假复层及纤毛结构修复。柚皮素可降低肺部NF-κB p65、NF-κB p50蛋白和mRNA的表达（P＜0.05）,降低血清中NF-κB p65、NF-κB p50和BALF中Th2细胞因子白细胞介素（IL）-4、IL-5、IL-13的含量（P＜0.05）。在体外LPS诱导的炎症A549细胞中,柚皮素可降低NF-κB p65、NF-κB p50蛋白的表达,上调IκBα的表达（P＜0.05）。结论　柚皮素可有效减轻哮喘大鼠肺部和支气管的炎症反应,其潜在的作用机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。     

绿原酸抑制NF-κB/NLRP3炎性体通路减轻LPS诱导小胶质细胞神经炎症损伤研究

摘要：目的:探究绿原酸（CGA）对脂多糖（LPS）诱导的小胶质细胞神经炎症损伤及核因子κB（NF-κB）/Nod样受体家族含pyrin结构域蛋白3（NLRP3）炎性体通路的影响。方法:培养小胶质细胞BV2,3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）法检测不同浓度(0,1,2,4,8 mmol·L-1)CGA对BV2细胞活力的影响;再次培养BV2细胞,依次分为对照（Control）组、LPS组、脂多糖和药物溶剂对照[LPS+二甲亚砜（DMSO）]、脂多糖和阳性药物对照（LPS+Positive）组以及脂多糖和绿原酸处理（LPS+CGA）组。免疫荧光法检测肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素（IL）-1β表达情况;ELISA法检测TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、IL-12和诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）含量;免疫印迹分析NF-κB/NLRP3炎性体通路和凋亡相关蛋白水平;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:与CGA 0 mmol·L-1比较,CGA 1,2,4 mmol·L-1对BV2细胞增殖活力的影响无统计学意义（P>0.05）,CGA 8 mmol·L-1显著降低BV2细胞增殖活力（P<0.05）。LPS诱导后细胞凋亡率升高,细胞上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-12和iNOS分泌量增多,IL-10分泌量减少,细胞中NF-κB p65、磷酸化NF-κB抑制蛋白（p-IκBα）、NLRP3、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1（Caspase-1）和B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）蛋白水平上调,细胞中Bcl-2蛋白水平下调（P<0.05）。添加CGA可明显改善LPS对BV2细胞的影响（P<0.05）。结论:CGA通过抑制NF-κB/NLRP3炎性体通路减轻LPS诱导的BV2细胞神经炎症损伤。     

丹酚酸A诱导HepG2细胞凋亡及抑制c-Met表达

目的通过研究丹酚酸A（salvianol acid A,SalA）对肝癌HepG2细胞株c-Met蛋白表达的影响,探讨SalA抑制肝癌细胞增殖,诱导细胞凋亡的可能作用机制。方法以肝癌HepG2细胞株为研究对象,采用MTT法及流式细胞术检测SalA作用后细胞存活、增殖及凋亡情况;同时运用Westernblot法及PCR法检测HepG2细胞c-Met及其下游信号通路中关键蛋白和基因表达的改变。结果肝癌HepG2细胞经SalA处理后,其细胞增殖显著抑制,细胞凋亡比例亦升高,且呈浓度依赖性;同时HepG2细胞中c-Met及其下游信号分子AKT的磷酸化水平显著下调,凋亡相关蛋白Bax、caspase-3和caspase-9的表达亦明显上调。结论SalA能有效抑制肝癌HepG2细胞的增殖并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与其抑制HepG2细胞中c-Met蛋白及其下游信号通路中AKT蛋白的磷酸化水平有关。     

柚皮苷通过P38 MAPK/NF-κB通路抑制脂多糖致HaCaT细胞炎症反应

目的 探讨柚皮苷通过P38 MAPK/NF-κB通路对脂多糖（LPS）致HaCaT细胞炎症损伤的抑制作用。方法 LPS（0、0.1、1.0、10.0、20.0 μg/mL）孵育24 h刺激人永生化角质细胞HaCaT,模拟银屑病模型,MTT法观察细胞存活率变化,Western bloting法检测白介素（IL）-6和NF-κB蛋白表达;MTT法观察柚皮苷（0、5、10、20、40、80、160、320μmol/L）作用24 h对HaCaT存活率的影响;选择LPS、柚皮苷最佳作用浓度。柚皮苷（20和40 μmol/L）作用银屑病模型HaCaT细胞24 h,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测IL-6、IL-1β、IL-17和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的mRNA表达水平变化;Western blotting法检测细胞核内转录因子NF-κB p65、P38 MAPK磷酸化蛋白水平以及炎症因子IL-6蛋白水平。结果 LPS增加HaCaT细胞存活率,并上调NF-κB p65和IL-6蛋白表达,呈剂量相关性,炎症反应在20 μg/mL达到高峰;5~160 μmol/L柚皮苷对HaCaT细胞无明显毒性作用。与模型组比较,柚皮苷能够显著抑制炎症因子IL-6、IL-1β、IL-17和TNF-α的转录水平（P<0.05）;同时能够显著抑制LPS诱导的NF-κB p65和P38 MAPK磷酸化蛋白水平、抑制IL-6蛋白的表达（P<0.05）。结论 柚皮苷抑制脂多糖致HaCaT细胞炎症反应,发挥改善银屑病的作用,机制可能与抑制P38 MAPK/NF-κB信号通路有关。     

银杏二萜内酯葡胺注射液通过调控炎症和凋亡信号通路减轻OGD/R诱导的细胞损伤（英文）

银杏二萜内酯葡胺注射液(DGMI)是一种银杏叶提取物注射液,目前用于缺血性中风恢复期的治疗。在本研究中,我们旨在证实DGMI是否可以抑制炎症反应和细胞凋亡,并探讨这些作用的潜在机制。将细胞暴露于氧-糖剥夺/复氧(OGD/R)后,通过MTS和LDH测定法测量细胞活力和乳酸脱氢酶(LDH)释放量。使用AnnexinV-FITC/PI双重染色分析试剂盒通过流式细胞仪检测了DGMI的抗凋亡作用。通过特定的Bio-PlexPro^TM剂盒对包括TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10在内的促炎性细胞因子进行定量检测。此外,分别通过蛋白质印迹分析和免疫荧光染色测定TLR2/4,NF-κBp65,MAPK通路激活和凋亡相关蛋白的活性以及NF-κBp65的细胞定位。结果显示,50μg/mL的DGMI在OGD/R诱导的BV2小胶质细胞中显著提高了细胞活力并降低了IL-1β,IL-6,IL-10和TNF-α的分泌。通过LDH测定和AnnexinV-FITC/PI染色也证实了这些作用。同时,DGMI不仅抑制TLR2,TLR4,MyD88,p-TAK1,p-Ik Bk,p-IKKK和B...     

基于NF-κB信号通路的高通量药物筛选细胞炎症模型的建立

目的 建立均相时间分辨荧光（homogeneous time-resolved fluorescence,HTRF）测定炎症细胞模型中NF-κB的方法,为高通量筛选呼吸道炎症药物提供实验依据。方法 采用HTRF检测细胞中Total-NF-κB及Phospho-NF-κB比率来确定NF-κB磷酸化程度。观察不同细胞密度（每孔5,25,50,100,150 k）、不同刺激因子（TNF-α、LPS）、不同作用时间（10,30,60 min）等条件对支气管平滑肌细胞（BSMC）、支气管上皮细胞（HBE）NF-κB磷酸化的影响,建立炎症细胞模型及HTRF测定NF-κB的方法。结果 采用HBE细胞,细胞密度为每孔10 k,刺激因子TNF-α（10 ng·mL^-1）刺激细胞,刺激10 min建立炎症细胞模型,可使细胞中NF-κB磷酸化水平达到52.6%,与正常对照组（14.2%）相比,有明显升高。结论 成功建立了快速、特异性高、操作简便的HTRF测定细胞炎症模型中NF-κB磷酸化程度的方法,为气道炎症药物筛选研究提供了依据。     

黄芪多糖通过TLR4/NF-κB信号通路抑制脂多糖诱导的大鼠心肌细胞肥大

目的旨在从TLR4-NF-κB信号转导通路角度探讨黄芪多糖(APS)对脂多糖(LPS)诱导新生大鼠心肌细胞肥大的作用机制。方法原代培养新生大鼠心肌细胞,以LPS 1mg.L-1诱导心肌细胞肥大,观察不同浓度APS及IκBα磷酸化抑制剂BAY11-7082对肥大心肌细胞的影响。以计算机图像分析系统检测细胞体积;考马斯亮蓝法测定细胞总蛋白含量;RT-PCR法检测TLR4 mRNA的表达;Western blot法检测心肌细胞IκBα的蛋白表达;ELISA法检测细胞外液TNF-α的含量。结果 APS及BAY11-7082均能有效抑制LPS诱导的心肌肥大,表现为蛋白含量降低,体积减小;并能有效减少炎症反应,表现为TLR4 mRNA表达降低,IκBα的蛋白含量升高,细胞外液中TNF-α明显减少,且APS的作用呈一定的剂量依赖性。结论黄芪多糖对LPS诱导的乳鼠心肌细胞有保护作用,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路有关。     

川芎嗪通过抑制NF-κB信号通路减轻膜性肾病大鼠的炎症反应和肾脏损伤

目的 探讨川芎嗪通过抑制NF-κB信号途径减轻膜性肾病大鼠的炎性反应和肾损伤的作用和机制。方法 Wistar大鼠分为对照组、模型组和川芎嗪低、高剂量（60、120 mg/kg）组,称量各组大鼠的体质量和肾脏质量,计算肾脏系数;双缩脲法测定各组大鼠24 h尿蛋白水平;全自动生化分析仪检测各组大鼠血清肌酐、尿素氮（BUN）、脂联素、总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）水平;HE染色观察各组大鼠肾组织病理变化;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测各组大鼠肾组织中肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-1β和巨噬细胞趋化蛋白-1（MCP-1）mRNA的表达;ELISA法检测各组大鼠血清中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）的表达;免疫组织化学法检测各组大鼠肾组织中p-NF-κB的表达;Western blotting检测各组大鼠肾组织中p-NF-κB蛋白的表达。结果 与模型组比较,川芎嗪低、高剂量组大鼠的肾质量及肾脏系数均显著降低（P<0.05、0.01）,尿蛋白和血清肌酐、BUN、脂联素、TC、TG水平显著下调（P<0.05、0.01）,肾组织病理损伤明显减轻,肾小球基底膜增厚和肾小球萎缩减轻,肾组织中TNF-α、IL-1β、MCP-1 mRNA的表达水平显著下降（P<0.05、0.01）,血清中MDA水平显著下调,SOD水平显著上调（P<0.05、0.01）,肾组织p-NF-κB的表达水平显著下调（P<0.05、0.01）。结论 川芎嗪对大鼠膜性肾病有较好的治疗效果,调节炎性因子的表达、改善肾脏组织形态,其机制与NF-κB通路有关。     

鹅去氧胆酸抗脂多糖诱导的BV2小胶质细胞炎症反应作用及机制

目的研究鹅去氧胆酸(CDCA)抗脂多糖(LPS)诱导的BV2小胶质细胞炎症反应的作用及其机制。方法 BV2细胞与CDCA 25～100μmol·L~(-1)预孵育2 h,加LPS 200 mg·L~(-1)继续培养22 h,采用Griess试剂法检测一氧化氮(NO)含量;Western印迹法检测细胞内环氧合酶2(COX-2)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达水平;RT-PCR法检测细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、IL~(-1)β和G蛋白偶联受体5(TGR5)mRNA表达水平。BV2细胞与CDCA 25～100μmol·L~(-1)预孵育2 h,加入LPS 200 mg·L~(-1)继续培养1 h,Western印迹法检测NF-κB、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)和丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)磷酸化水平;细胞免疫荧光法观察NF-κB入核情况。结果与正常对照组相比,模型组培养基中NO含量显著增加(P<0.01);COX-2和iNOS蛋白表达水平升高(P<0.05,P<0.01);TNF-α,IL-6和IL~(-1)βmRNA表达显著上调(P<0.01);TGR5 mRNA表达显著下调(P<0.01);并且NF-κB,IκBα和AKT磷酸化水平显著增加(P<0.05,P<0.01),NF-κB入核增多。与模型组相比,CDCA显著减少培养基中NO含量(P<0.01),降低COX-2和iNOS蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01);显著下调TNF-α,IL-6和IL~(-1)βmRNA表达(P<0.01);显著上调TGR5 mRNA表达(P<0.01)。与模型组相比,CDCA显著降低NF-κB,IκBα和AKT磷酸化水平(P<0.05,P<0.01),并观察到NF-κB核转位减少现象。结论 CDCA可显著抑制LPS诱导BV2细胞炎症反应,其作用机制可能与激活TGR5、抑制Akt/NF-κB信号通路相关。     

补骨脂宁通过激活Nrf2/HO-1并抑制NF-κB信号通路在过氧化氢诱导的HT22细胞和脂多糖诱导的BV2细胞上发挥抗氧化和抗神经炎症作用（英文）

氧化损伤和神经炎症与许多神经系统疾病相关。近年来,研究发现中药补骨脂能够改善中枢神经系统损伤。本研究旨在评价两个来自补骨脂的化合物:补骨脂宁和补骨脂定的神经保护作用,并揭示其作用机制。实验结果表明,补骨脂宁和补骨脂定能够抑制过氧化氢(H₂O₂)诱导的小鼠海马神经原代细胞(HT22)活性氧(ROS)的生成,抑制脂多糖(LPS)诱导的小鼠神经小胶质细胞(BV2)一氧化氮(NO)的生成。由于补骨脂宁在低剂量即表现出活性,且在高剂量时未表现出细胞毒,因此进一步研究其潜在的神经保护作用机制。在H₂O₂诱导的HT22细胞中,补骨脂宁显著增加过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性,促进谷胱甘肽(GSH)分泌,抑制线粒体膜电位(MMP)降低。同时上调Nrf2和HO-1蛋白在HT22细胞中的表达。在LPS诱导的BV2细胞中,补骨脂宁显著抑制炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌,并能够特异性抑制NF-κBp65转移入核。分子对接结果显示:补骨脂宁能够进入Keap1和NF-κB蛋白的疏水口袋,结合良...     

甲氨蝶呤对脂多糖诱导的大鼠脊髓神经胶质细胞pIκBα-NF-κBp65-炎性因子通路的影响

目的 观察甲氨蝶呤对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的大鼠脊髓神经胶质细胞pIκBα-NF-κBp65-炎性因子通路的影响。方法 脊髓组织块法培养神经胶质细胞。将分离的神经胶质细胞接种于多孔板培养48 h后,分为空白对照组、LPS组、LPS+pIκBα抑制剂组、LPS+甲氨喋呤组。随后应用免疫印迹法测定各组分的pIκBα与胞核及胞浆NF-κBp65水平变化,酶免疫法（ELISA）测定炎性因子TNF-α、IL^-1β、IL-6含量。结果 神经胶质细胞经LPS诱导后,pIκBα、胞核NF-κBp65和细胞上清液炎性因子TNF-α、IL^-1β、IL-6水平均显著增加（P<0.05或P<0.01）。甲氨喋呤可明显抑制经LPS诱导的神经胶质细胞pIκBα水平,显著降低胞核NF-κBp65水平和细胞上清液炎性因子TNF-α、IL^-1β、IL-6的含量（P<0.05）。结论 甲氨喋呤对LPS诱导的脊髓神经胶质细胞pIκBα-NF-κBp65-炎性因子通路有显著的抑制作用。     

丹参酮II-A通过调控TLR4/IκBα/NFκB信号通路抑制LPS诱导的细胞炎症

目的建立脂多糖(LPS)诱导的小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)炎症模型,探究丹参酮II-A(Tan IIA)的抗炎活性及其机制。方法CCK-8法测定Tan IIA对细胞活力的影响;迁移小室测定Tan IIA对LPS诱导细胞迁移能力作用;ELISA法测定细胞上清液中小鼠肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factoralpha,TNF-α)、白介素6(interleukin 6,IL-6)、IL^-1β、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein,MCP-1)的含量;Western blot法检测基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinases,MMP-2)、MMP-9、Toll样受体-4(TLR4)、IκB-α、p-IκB-α、NFκB和p-NFκB蛋白的表达。结果Tan IIA对LPS诱导的RAW264.7细胞培养液中炎症因子TNF-α、IL-6、IL^-1β和MCP-1的分泌有明显的抑制作用;明显下调MMP-2、MMP-9、TLR4、p-IκB-α和p-NFκB的蛋白的表达,抑制IκB-α磷酸化和NFκB的入核和活化。结论Tan IIA可通过抑制MMP-2和MMP-9的表达以及TLR4/κB-α/NF-κB信号通路,调控TNF-α、IL-6、IL^-1β等炎症因子的释放而发挥抗炎活性。     

丹皮酚通过抑制NF-κB信号通路诱导Tca8113细胞凋亡

目的 研究丹皮酚对核因子κB（NF-κB）信号通路的影响,探讨其诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制。方法 将丹皮酚以不同浓度及不同时间作用于人舌鳞癌Tca8113细胞,应用MTT法观察不同浓度丹皮酚在不同作用时间下对Tca8113细胞增殖的抑制作用,Hoechst 33342荧光染色及流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2,以及NF-κB信号通路组分中IκBα和p-IκBα的表达情况,并采用凝胶电泳迁移率检测（EMSA）对NF-κB活性进行测定。结果 经丹皮酚作用后,Tca8113细胞生长受到明显抑制,并呈明显的时间、剂量依赖效应关系。丹皮酚有明显诱导Tca8113细胞凋亡的作用,Western Blot 以及EMSA检测结果显示,丹皮酚上调Tca8113细胞中Bax与IκBα的表达,下调Bcl-2的表达,并能下调IκBα磷酸化及NF κB活性。结论 丹皮酚能够抑制NF-κB信号转导通路,进而抑制Tca8113细胞的增殖并诱导其凋亡。     

姜黄素通过增强自噬抑制Aβ_(1-42)诱导的BV2小胶质细胞和原代小胶质细胞炎症反应

目的研究姜黄素对淀粉样β蛋白片段1-42(Aβ_(1-42))刺激所致小鼠小胶质细胞BV2细胞和原代小胶质细胞炎症的作用及机制。方法姜黄素0.1,1,5,10,15,25和40μmol·L~(-1)与BV2细胞培养24 h,MTT法和ATP法检测细胞存活。姜黄素5和10μmol·L~(-1)预处理BV2细胞和原代小胶质细胞2 h后,加入Aβ_(1-42)1 mg·L~(-1)共同作用24 h,使用实时荧光定量PCR法检测BV2细胞白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达水平,同时检测原代小胶质细胞TNF-α和iNOS mRNA表达水平;BV2细胞加姜黄素5和10μmol·L~(-1)培养2 h后,加Aβ_(1-42)1 mg·L~(-1)培养24 h,Western印迹法检测BV2细胞中iNOS、自噬相关蛋白5(Atg-5)和P62蛋白表达水平及微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)与LC3-Ⅰ的比值;姜黄素5和10μmol·L~(-1)预处理BV2细胞和原代小胶质细胞24 h后,加入Aβ_(1-42)1 mg·L~(-1)共同作用4 h,Western印迹法检测BV2和原代小胶质细胞对Aβ_(1-42)的吞噬;原代小胶质细胞加入姜黄素5和10μmol·L~(-1),24 h后加Aβ_(1-42)1 mg·L~(-1)培养4 h,细胞免疫荧光染色法检测原代小胶质细胞对Aβ_(1-42)的吞噬和离子钙接头蛋白分子1(Iba1)蛋白表达水平。稳定敲降Atg-5的BV2细胞加姜黄素5和10μmol·L~(-1)培养2 h后,加Aβ_(1-42)1 mg·L~(-1)培养24 h,Western印迹法检测稳定敲降Atg-5的BV2细胞中LC3-Ⅱ与LC3-Ⅰ蛋白比值及iNOS,Atg-5和P62蛋白水平。结果 MTT和ATP结果显示,姜黄素≤25μmol·L~(-1)时对BV2细胞无明显细胞毒性。实时荧光定量PCR结果显示,与Aβ_(1-42)相比,姜黄素5和10μmol·L~(-1)组细胞内iNOS,IL-6和TNF-αmRNA水平明显降低(P<0.01),原代小胶质细胞内iNOS和TNF-αmRNA水平明显降低(P<0.01);Western印迹结果显示,与Aβ_(1-42)组相比,姜黄素10μmol·L~(-1)组细胞内iNOS和P62蛋白表达显著减少(P<0.01),LC3-Ⅱ与LC3-Ⅰ蛋白比值和Atg-5蛋白表达增加(P<0.01);与Aβ_(1-42)组相比,姜黄素10μmol·L~(-1)组BV2细胞和原代小胶质细胞对Aβ_(1-42)蛋白的吞噬明显增加(P<0.01);细胞免疫荧光结果显示,与Aβ_(1-42)组相比,姜黄素5和10μmol·L~(-1)组平均每个细胞内Aβ_(1-42)荧光强度明显增加(P<0.01),Iba1的荧光强度降低(P<0.01);与Aβ_(1-42)相比,姜黄素10μmol·L~(-1)不影响稳定敲降Atg-5的BV2细胞中LC3-Ⅱ与LC3-Ⅰ比值及iNOS,Atg-5和P62蛋白水平。结论姜黄素通过增强Atg-5表达,促进小胶质细胞对Aβ_(1-42)蛋白的吞噬,抑制Aβ_(1-42)诱导的小胶质细胞炎症反应。     

丹红注射液及其活性组分对脂多糖诱导的小胶质细胞NO分泌的抑制作用

目的 研究丹红注射液及其单体成分对小鼠小胶质细胞株(BV-2细胞)的影响及其作用机制.方法 实验分为对照组、脂多糖(LPS)刺激组、加药组,检测不同稀释倍数的丹红注射液、水和醋酸乙酯萃取物及其单体成分对小胶质细胞活力及LPS诱导小胶质细胞一氧化氮(NO)产生的影响.结果 丹红注射液及醋酸乙酯萃取物对LPS诱导的小胶质细胞NO的产生没有抑制作用,但是丹红注射液水萃取物以及丹酚酸A可以在不影响细胞活力的情况下抑制NO产生.结论 丹红注射液水萃取物中的某些成分以及丹酚酸A抑制激活小胶质细胞NO的产生可能是丹红注射液神经保护作用的机制之一.     

秦皮素抑制NF-κB/COX-2信号通路改善PC12细胞损伤

目的研究秦皮素(fraxetin)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)致大鼠嗜铬细胞瘤细胞株(PC12细胞)损伤的作用并考察炎症反应中相关蛋白的变化。方法采用MTT法研究秦皮素对PC12细胞活力的作用,筛选合适给药浓度。试验共分为3组即对照组(Control组)、LPS模型组和秦皮素保护组(fraxetin+LPS组)。采用四甲基偶氮唑盐比色法(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测细胞活性变化;采用倒置显微镜和4′,6-diamidino-2-phenylindole dihydrochloride(DAPI)荧光核染色法观察细胞形态学变化;采用real-time PCR法检测细胞因子IL-1、IL-6、TNF-α及环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)mRNA水平;采用western blot法检测COX-2和NF-κB-p65蛋白表达水平。结果与模型组比较秦皮素保护组细胞存活率显著升高(P<0.01)。LPS模型组炎症因子IL-1、IL-6和TNF-αmRNA水平,NF-κB-p65和COX-2蛋白表达水平相对于对照组均明显升高(P<0.01)。与此同时秦皮素治疗组其炎症细胞因子mRNA水平,NF-κB和COX-2蛋白的表达水平均显著下调。结论秦皮素对LPS所致PC12细胞损伤有保护作用,其效应可能与抑制NF-κB/COX-2信号通路,降低炎症反应有关。