灵芝多糖分离鉴定及抗肿瘤活性的研究

目的探讨灵芝多糖的分离纯化、理化性质及初步抗肿瘤活性。方法采用热水提取 ,乙醇分级沉淀 ,DEAE 32离子交换柱色谱等方法从灵芝子实体中分离得到灵芝多糖。用SephadexG 10 0凝胶柱色谱法测定其纯度和平均分子量。用薄层色谱及气相色谱法测定其单糖组成。溴化四唑蓝法测定其初步体外抗肿瘤活性。结果从灵芝子实体中分离得到 4种均一多糖 (GLPL1 ～GLPL4 ) ,其中GLPL1 和GLPL3为主要成分 ,其分子量为 4 10 0和 5 70 0。GLPL1 由葡萄糖组成 ;GLPL3由葡萄糖和半乳糖组成。GLPL1 和GLPL3对人鼻咽癌细胞增殖有显著的抑制作用 ,GLPL3还对人胃癌细胞、人结肠癌细胞增殖有一定的抑制作用。结论灵芝多糖GLPL1 、GLPL3是很有潜力的抗肿瘤或辅助抗肿瘤药物     

灵芝多糖的提纯、组成及活性研究

目的探讨灵芝多糖的分离纯化、单糖组成以及抗肿瘤活性。方法采用热水提取,Sevag法去蛋白质,乙醇分级沉淀,DEAE-32离子交换色谱法从灵芝子实体粉中分离得到灵芝多糖。用SephadexG-100凝胶柱色谱法判断其纯度及相对分子质量,用薄层色谱法及气相色谱法鉴定其单糖组成,溴化四唑蓝法测定其体外抗肿瘤活性。结果从灵芝子实体粉中分离得到两种粗多糖GLPⅠ、GLPⅡ。GLPⅠ进一步分离得到两种均一多糖GLPH1、GLPH2。GLPH1糖苷键为β型,相对分子质量为45000。GLPH1由葡萄糖、半乳糖和痕量甘露糖、岩藻糖组成。GLPH1对KB细胞、BGC细胞、B16细胞的增殖具有一定的抑制作用。结论灵芝多糖GLPH1可望开发成抗肿瘤药或辅助抗肿瘤药。     

灵芝孢子多糖抗移植性肿瘤实验研究

目的 研究灵芝孢子多糖的抗癌作用。方法 采用小鼠抗移植性肿瘤实验方法。结果 灵芝孢子多糖分别以150 mg·kg^-1、300 mg·kg^-1和600 mg·kg^-1剂量连续12天灌胃给药,对小鼠移植性肝癌Heps的抑瘤率为53.77%～65.25%;连续8天灌胃给药,对小鼠移植性肉瘤S₁₈₀的抑瘤率为50.39%～55.04%,皆呈良好的抑瘤作用。灵芝孢子多糖可分别提高Heps和S₁₈₀荷瘤小鼠的脾指数和胸腺指数。结论 灵芝孢子多糖有良好的抑瘤作用,并可增强Heps和S₁₈₀荷瘤小鼠的非特异性免疫功能。     

不同提取方式对灵芝多糖含量及生物活性的影响研究

目的 对比不同提取方式下灵芝多糖提取率及其生物学活性,为灵芝的高效利用提供研究基础。方法 分别采用热水浸提法（HG）、超声破碎辅助法（UG）、超声辅助酶法（EG）及微波辅助法（MG）4种方法提取灵芝子实体中的多糖成分,比较不同提取方法所得灵芝多糖的含量、抗氧化活性及对高脂饮食小鼠糖脂代谢的影响。结果 MG法提取的灵芝多糖含量最高,为53.43%。MG法提取的灵芝多糖清除DPPH自由基能力最强,UG法提取灵芝多糖清除羟自由基能力最强。MG给药组小鼠空腹血糖、甘油三酯、胆固醇降幅最大,HG给药组调控血糖血脂能力最差。结论微波辅助法提取灵芝多糖具有较高的提取率,且所得灵芝多糖抗氧化活性,调控血糖血脂能力最佳。     

灵芝多糖的研究进展

灵芝多糖是灵芝的主要活性成分之一,具有抗肿瘤、抗氧化、抗衰老和降血糖等生物活性,对近年来研究灵芝多糖的超声法、微波法、复合酶法等提取方法和径向流色谱、柱色谱联用等分离纯化方法,含量测定及其在抗肿瘤和抗氧化等方面的药理活性进行综述,为灵芝多糖的进一步开发利用提供依据.     

丽水地产灵芝子实体与灵芝孢子粉中灵芝烯酸D、多糖及重金属元素的测定

摘 要 目的： 丽水地产灵芝子实体和灵芝孢子粉中三萜类化合物、多糖及重金属元素的含量测定。方法: 采用HPLC法测定样品中灵芝烯酸D含量及分析其他三萜类化合物,用蒽铜 硫酸比色法测定多糖含量,用原子吸收分光光度法测定2种重金属含量。结果: 灵芝子实体与灵芝孢子粉中三萜类化合物的HPLC特征图谱差异明显;灵芝孢子粉中多糖含量高于子实体;灵芝菌柄重金属含量较菌盖高,菌盖与孢子粉中重金属含量无明显差异。结论:本试验可为评价丽水地产灵芝子实体的质量及比较灵芝子实体与灵芝孢子粉的药效提供理论依据。     

毛蚶多糖的分离纯化和免疫活性测定

目的从毛蚶体内分离纯化得到毛蚶多糖精品（polysaccharide from Arca subcrenata Lischke．简称ASLP），分析其纯度和单糖组成，同时考察免疫活性。方法经除蛋白、DEAE-52和Sephadex-GS0柱层析得多糖精品。糖醇乙酸酯法测定单糖组成。体外脾淋巴细胞增殖测定ASLP的免疫活性。结果从毛蚶体内提取到一种均一的多糖组分，其单糖组成只有葡萄糖，ASLP能够显著地促进脾淋巴细胞的增殖。结论从毛蚶中分离纯化得到一种均一的多糖组分，具有显著的体外免疫活性。     

灵芝孢子粉与子实体中三萜类化合物、多糖及重金属元素的含量比较

目的:比较灵芝孢子粉与子实体中三萜类化合物、多糖及重金属元素的含量差异。方法:采用高效液相色谱(HPLC)法分析灵芝孢子粉和子实体样品中的三萜类化合物,用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)技术对上述样品中5种重金属元素的含量进行测定,用蒽酮-硫酸法测定其中多糖的含量。结果:灵芝孢子粉和子实体中三萜类化合物的HPLC特征图谱差异明显;灵芝孢子粉中多糖的含量高于子实体中的含量;而重金属元素的含量二者没有显著差异。结论:本试验结果可为灵芝孢子粉与子实体药理作用的差异提供理论依据。     

缢蛏多糖的提取、分离和结构分析

目的从缢蛏中提取和分离纯化多糖,对其基本理化性质和结构组成进行分析。方法依次采用100℃热水提和碱提方法从缢蛏中提取粗多糖,采用Q Sepharose Fast Flow强阴离子交换柱层析和Sephacryl S-300凝胶柱层析对粗多糖进行分离纯化,并对其总糖、蛋白含量,相对分子质量和单糖组成进行分析。对多糖纯化组分采用甲基化、气质联用(GC-MS)、红外光谱(IR)和核磁共振波谱(NMR)进行化学结构解析。结果从缢蛏中经热水提粗多糖(YC-S)和碱提粗多糖(YC-J)均为葡聚糖,进一步分离纯化得到了4种水溶性多糖组分。对其中1种热水提多糖纯化组分YC-S2采用高效液相凝胶色谱法测得其相对分子质量为482kD,且色谱峰单一对称,表明其具有较高的纯度。结构分析表明,YC-S2是1种以α-(1→4)Glc为主链,含有少量的β-(1→3,4)和β-(1→4)分支的D-吡喃型葡聚糖。结论从缢蛏中提取分离得到了4种多糖组分,并初步确定了1种水溶性葡聚糖的结构,为缢蛏多糖结构和活性的深入研究提供了基础。     

杜氏藻中性多糖的提取分离及免疫活性初步研究

将提取所得杜氏藻的中性多糖（NPD）粗品经离子交换色谱和分子筛分离，得到提纯品，经柱前PMP（1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮）衍生化HPLC色谱、UV、IR分析，确定其组分为葡聚糖，HPLC测得纯度为98．77％。通过免疫活性研究试验显示该多糖可促进小鼠脾脏淋巴细胞增殖和小鼠白介素（IL-1）的分泌，有免疫增强活性。     

灵芝孢子多糖LPS3对Lactacystin诱导PC12细胞损伤的影响

目的探讨灵芝孢子多糖LPS3对蛋白酶体抑制剂Lactacystin诱导PC12细胞损伤的影响。方法体外培养PC12细胞,建立Lactacystin诱导PC12细胞损伤的模型,用CCK-8法检测细胞活力,Annexin V-FITC/PI流式细胞法检测细胞调亡,免疫荧光法检测胞浆中α-synuclein聚集物的生成。结果模型组经20μmol·L-1Lactacystin处理24 h后,PC12细胞活力比空白对照组降低,仅为64.7%;经不同浓度的灵芝孢子多糖LPS3预处理后,细胞活性明显提高,且其细胞活性随多糖浓度升高而升高;Lactacystin可以诱导PC12细胞凋亡,处理24 h后细胞凋亡率为45.40%,经灵芝孢子多糖LPS3预处理后,细胞凋亡率明显降低;PC12细胞经Lactacystin处理后,胞浆内可见明显的颗粒状、小团块状α-synuclein聚集体的生成;而经灵芝孢子多糖LPS3预处理后,胞浆中α-synuclein的聚集体明显减少。结论灵芝孢子多糖LPS3对Lactacystin诱导的PC12细胞损伤有一定的保护作用,其作用机制可能与抑制α-synuclein聚集体的生成有关。     

蒽酮-硫酸法测定灵芝破壁孢子粉中多糖含量的研究

目的 建立灵芝破壁抱子粉中多糖含量的测定方法。方法 采用紫外分光光度法,检测波长为625nm,用葡萄糖为对照品,测定灵芝破壁抱子粉中多糖含量。结果 不同的提取方法对于多糖的提取率不同。最佳提取方法为沸水浴提取8h。结论 本法稳定可靠,简便快捷,适用于灵芝破壁抱子粉多糖含量测定。     

灵芝孢子胶囊的质量控制

目的:建立灵芝孢子胶囊质量控制方法。方法:采用显微镜鉴别破壁灵芝孢子。采用TLC法鉴别灵芝。利用硫酸-蒽酮显色,采用紫外分光光度法在波长625nm处测定制剂中多糖的含量。结果:显微镜下可明显观察到卵形孢子。TLC色谱可明显鉴别灵芝。灵芝多糖在5.25～31.50μg·ml^-1的浓度范围内线性关系良好,r=0.999 8（n=6）;平均回收率99.07%,RSD=1.08%。结论:定性、定量方法简单、快捷、可靠、准确,可作为该制剂的质量控制。     

基于CiteSpace的灵芝孢子粉研究知识图谱分析

目的 对灵芝孢子相关研究进行文献计量、可视化分析，探讨并综述其研究热点及发展趋势。方法 在中国知网、Pubmed和Web of Science数据库检索灵芝孢子粉相关的文献，并根据文献语言的不同分为中文与英文2个部分，应用CiteSpace对文献中的国家、机构、关键词和主题词、被引情况进行共现分析，绘制对应知识图谱、时间线视图，进而推断灵芝孢子粉的研究热点及趋势。对灵芝孢子主要研究热点、趋势、临床研究及物质基础等方面的研究进行总结。结果 共获得相关文献1 477篇，包括989篇中文文献、488篇英文文献，发文量均呈增涨趋势，且国家及机构共现分析表明发文的主要是中国与中国机构，研究热点领域为药理药效方面，主要以抗肿瘤、免疫调节、抗癫痫等药效研究为主。近5年新兴的灵芝孢子粉的研究集中在免疫检查点、肠道菌群等前沿领域。结论 灵芝孢子粉在抗肿瘤、免疫调节、抗癫痫等方面的药理作用研究广泛，具有良好的应用前景，但物质基础和质量控制研究较为薄弱，有待进一步深化。     

段木灵芝与代料灵芝的化学成分的研究Ⅱ.主要营养成分、孢子、多肽、油脂成分

目的研究段木灵芝多肽、孢子破壁前后油脂与多糖变化。结果一般化学成分分析中代料灵芝的蛋白质含量14．34％,是段木灵芝的1.6倍,代料灵芝多糖含量高于段木灵芝1～2.6倍。灵芝破壁孢子油脂释放能力是未破壁孢子的5．2倍;破壁孢子的活性成分多糖肽是未破壁孢子多糖肽含量1.69倍。灵芝多糖肽由16种氨基酸组成。从脂肪分析结果来看,灵芝孢子油的饱和脂肪酸含量为23．70％,不饱和脂肪酸为76.20％,对于孢子油是否有应用价值,值得进一步研究。     

黑灵芝多糖对体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响

目的研究黑灵芝多糖对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响。方法用不同浓度的黑灵芝多糖作用于正常的和LPS活化的腹腔巨噬细胞;测定巨噬细胞代谢MTT活力;Griess法测定NO的产生;ELISA法检测巨噬细胞培养上清中TNF-α、IL-1β的分泌水平。结果黑灵芝多糖对细胞代谢MTT活力有增强作用;在20～160mg·L-1范围内,多糖呈剂量依赖性地促进正常的巨噬细胞分泌NO、TNF-α、IL-1β,增强免疫;而巨噬细胞经LPS激活后,与LPS组比较,多糖不同程度地抑制NO、TNF-α、IL-1β的过量分泌。结论黑灵芝多糖能有效地增强小鼠腹腔巨噬细胞的免疫,可改善LPS对小鼠腹腔巨噬细胞的诱导作用。     

Characterization and immunostimulatory activity of a polysaccharide from the spores of Ganoderma lucidum

Spores of Ganoderma lucidum contain a large amount of bioactive substances and have a higher bioactivity than the fruit bodies of G. lucidum. However, ingredients from spores are less studied due to the difficulties in collecting the spores and breaking the rigid shell. In this study, a water-soluble polysaccharide named GSG was extracted from the spores of G. lucidum. GSG is characterized to be a branched glucan that contains several different kinds of linkages. It was an effective inducer of MAPKs- and Syk-dependent TNF-α and IL-6 secretion in murine resident peritoneal macrophages. Dectin-1 could recognize GSG and partially mediate its biological activities. Additionally, in vivo administration of GSG potentiated the Con A-induced proliferative response of splenocytes and induced anti-tumor activity against Lewis lung cancer in mice. Therefore, these results suggest that GSG is an effective immunomodulator and may be a promising adjuvant remedy for anti-tumor therapies.     

灵芝(孢子粉)生药质量检测

目的 通过显微形态、化学成分的检测分析,探讨灵芝孢子粉生药质量检测方法。方法 一般化学成分按常规方法进行,锌、锰等微重元素分析采用原子吸收分光度法(AAS),多酶含量的检测采用苯酚-硫酸比色法,牛磺酸分析采用氨基酸自动分析仪;破壁形态观察和破壁率的检测采用数字显微镜、扫描电镜进行。结果 破壁前后孢子的粗蛋白、总酷、微量元素、牛磺酸等含量均变化不大,而粗脂肪(索氏提取)及多糖(热水提取)含量明显增加。在扫描电镜和光学显微镜下,未破壁孢子粉的显微形态完整,而破壁孢子粉样品中观察不到完整的孢子,其孢壁蛄构基本解体,孢内物质是易释出。结论 (1)水溶性多糖(Polysaccharides)、灵芝酸(Triterpenoid acids)及牛磺酸(Taurine)等含量可以作为灵芝孢子粉生药质量控制的重要指标;(2)对破壁孢子粉的检测可以数字显微镜或扫描电镜观察其破壁形态及破壁率高低。     

BBD设计-效应面法优选灵芝多糖提取工艺

目的:优选灵芝多糖的提取工艺。方法:采用单因素试验考察料液比、浸提温度、浸提时间对灵芝多糖抗氧化活性的影响。以液料比、浸提温度、浸提时间为自变量,以灵芝多糖对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基的半数清除率的倒数(1/EC50)为因变量,通过对自变量各水平进行多元线性回归及二项式拟合,采用BBD设计-效应面法优选灵芝多糖提取工艺。结果:优选提取工艺为浸提温度63℃、浸提时间2 h、料液比1∶33(g/ml),在此条件下,灵芝多糖的1/EC50为0.732 2 ml/mg,与响应面拟合方程的预测值0.733 7ml/mg相当。结论:优选的提取工艺合理、可行,可用于灵芝多糖的提取。