MDM2蛋白过度表达致p53功能失活在原发性肝细胞癌发生中的作用

OBJECTIVE: This paper was to evaluate the role of p53 mutation, and p53 and MDM2 proteins expression in hepatocarcinogenesis. METHODS: Using streptavidin-peroxidase conjugation method (SP), the expression of p53 and MDM2 proteins was observed in 61 cases of primary hepatocarcinomas (HCC) and 59 cases of corresponding paracancerous tissue, among which p53 mutations in exons 5-8 were detected in 21 cases by polymerase chain reaction single-strand confirmation polymorphism analysis (PCR-SSCP). RESULTS: Positive nuclear p53 and MDM2 immunostainings were demonstrated in 57.38% (35/61) and 26.23% (16/61) of HCC, and 1.69% (1/59) and 3.39% (2/59) of corresponding paracancerous tissue, respectively. The expressions of p53 and MDM2 proteins in HCCs were significantly higher than those in paracancerous tissues (P < 0.01). The expressions of p53 and MDM2 were not significantly correlated (P > 0.05). There were 42.86% (9/21) mutations in exon 7 of p53 gene and no mutation was observed in exons 5, 6, 8 in HCCs and in paracancerous tissues. In cases of p53 mutations, there were 66.67% (6/9) of p53 overexpression and 11.11% (1/9) of overexpression of both p53 and MDM2. MDM2 overexpression also appeared in 25% (3/12) of cases without mutation. CONCLUSIONS: Mutation of p53 gene and functional inactivation of p53 resulting from MDM2 overexpression play an important role in carcinogenesis of HCC. It is possible that p53 mutations and MDM2 overexpression induced by other mechanisms are involved in carcinogenesis of HCC.     

MDM2蛋白过度表达致p53功能失活在原发性肝细胞癌发生中的作用

目的 :研究p5 3基因突变及p5 3,MDM2蛋白表达在原发性肝细胞癌 (HCC)发生中的作用。方法 :应用免疫组织化学SP法检测 6 1例原发性肝细胞癌及 5 9例相应癌旁肝组织中p5 3蛋白和MDM2蛋白的表达 ;用PCR -SSCP-银染技术对其中 2 1例HCC的p5 3基因第 5～ 8外显子的突变情况进行研究。结果 :p5 3和MDM2蛋白在HCC中的表达明显高于癌旁肝组织 (P <0 .0 1)。HCC中p5 3与MDM2蛋白表达无明显相关性 (P >0 .0 5 )。新鲜HCC组织中p5 3基因第 5～ 8外显子的突变率为 42 .86 % (9/ 2 1) ,且均位于第 7外显子 ,癌旁组织中未发现p5 3基因突变。突变病例中 6 6 .6 7% (6 / 9)有p5 3蛋白高表达 ,11.11% (1/ 9)有p5 3及MDM2蛋白的过度表达 ,无突变病例中MDM2过度表达率为 2 5 % (3/ 12 )。结论 :p5 3基因突变及由MDM2过度表达导致的p5 3功能失活在HCC发生中起重要作用。p5 3基因突变和其它机制引起的MDM2蛋白高表达可能在HCC中共同发挥致癌作用。     

肝肠钙黏连蛋白在肝癌中的表达及临床意义

目的 探讨肝细胞肝癌中肝肠钙黏连蛋白( LI-cadherin)的mRNA和蛋白表达水平及其临床意义。方法 应用逆转录-聚合酶链反应( RT-PCR)及免疫组织化学方法检测LI-cadherin的mRNA及蛋白在56例肝癌组织、44例癌旁肝组织和9例正常肝组织中的表达水平,并分析其与临床病理学特征之间的关系。结果 肝癌组织和癌旁肝组织中均有Ll-cadherin mRNA的表达,正常肝组织中均未枪测到LI-cadherin mRNA的表达。LI-cadherin mRNA在肝癌组织中的表达显著高于在癌旁肝组织中的表达(0.653±0.147 vs 0.534±0.138),且两者之间的差异有统计学意义(P＜0.01)。LI-cadherin蛋白在肝癌组织中其阳性表达率为64.29％( 36/56),在癌旁组织中其阳性表达率为22.73％(10/44),在正常肝组织中没有发现其表达。LI-cadherin蛋白的过表达与肝癌细胞的分化程度、淋巴结转移及门静脉癌栓的形成等临床病理因素有关(P＜0.05)。结论 LI-cadherin在肝癌细胞的发生、发展过程中发挥重要作用。LI-cadherin蛋白的过表达与肝癌细胞的淋巴结转移和门静脉癌栓有关,提示其在肝癌的侵袭和转移中发挥重要的作用。     

肝细胞肝癌VEGF与p53的表达及其意义

目的研究血管内皮生长因子(VEGF)和p53蛋白表达与原发性肝细胞肝癌(HCC)的关系。方法用免疫组织化学SP法,检测49例HCC组织、21例癌旁组织、10例正常肝组织VEGF及p53蛋白的表达情况,并与临床病理指标比较分析。结果49例HCC中VEGF、p53蛋白阳性表达分别为63.2%和53.1%;VEGF和p53蛋白表达有相关性(P<0.05)。21例癌旁组织中VEGF和p53蛋白阳性表达分别为19.0%和9.5%。肝癌组织和癌旁组织VEGF和p53蛋白表达差异有显著性(P<0.01)。10例正常肝组织无VEGF和p53蛋白表达。HCC组织中VEGF、p53蛋白阳性表达与血管侵犯和转移倾向明显相关(P<0.05)。结论HCC组织中VEGF、p53蛋白过表达,通过促进HCC肿瘤血管的生成而促进HCC的生长和浸润转移,p53和VEGF可作为反应HCC生物学行为的重要指标。     

原发性肝细胞癌癌组织中p33ING1b与p53基因的表达

目的研究p33ING1b与p53蛋白在原发性肝细胞癌中表达的相关性及ING1b基因在原发性肝细胞癌中的突变率.方法应用免疫组织化学SP方法检测了57例原发性肝细胞癌癌组织、51例癌旁肝组织及12例正常肝组织中p33ING1b和p53蛋白的表达,并分析了原发性肝细胞癌癌组织中乙肝病毒(HBV)的感染率;应用聚合酶链式反应(PCR)联合单链构象多态性(SSCP)方法检测了28例配对癌及癌旁肝组织中ING1b基因两个外显子的突变情况,对有异常泳动条带的DNA片段分别克隆测序.结果在57例原发性肝细胞癌癌组织中,p33ING1b、p53蛋白的阳性率分别为42.1%和57.9%,p33ING1b、p53表达均呈阳性者有19例(33.3%),且两者在癌组织中阳性分布区域相同;p33ING1b蛋白表达与p53蛋白表达在癌组织中呈显著正相关(r=0.783, P<0.01);配对癌旁肝组织及正常肝组织中p53蛋白表达均为阴性,p33ING1b蛋白在13例癌旁肝组织及2例正常肝组织中呈弱阳性表达;在57例原发性肝癌组织中有35例(61.4%)HBV X蛋白呈阳性,其病理类型均为肝细胞肝癌,在51例癌旁肝组织中检出HBV X蛋白阳性者39例(76.47%),癌组织中HBV感染与p33ING1b、p53蛋白表达均有关(P<0.01);PCR-SSCP结果表明,ING1b基因在原发性肝细胞癌中突变率较低为7.1%(2/28).结论 p33ING1b、p53蛋白在原发性肝细胞癌中的表达呈显著正相关,p33ING1b的存在可能还有其他不依赖p53蛋白的途径;HBV感染与p33ING1b、p53蛋白表达均有关;基因突变不是p33ING1b丧失抑癌功能的主要因素.     

口腔舌鳞癌p53基因突变及其表达的相关性研究

目的：探讨口腔舌鳞癌中p53基因突变及其蛋白的表达两者相关性。方法：应用Western blot和聚合酶链反应-单链构象多态性方法检测38例口腔舌鳞癌、20例口腔癌前病变及10例正常口腔黏膜组织中p53蛋白表达及p53基因突变情况。结果：p53蛋白在口腔舌鳞癌、癌前病变和正常口腔黏膜组织的阳性表达率分别为42．1％（16／38）、10．0％（2／20）、0％（0／10）。39．5％（15／38）的口腔舌鳞癌存在p53基因第5、8外显子突变。在p53基因突变的病例中，p53蛋白表达与其基因突变密切相关。结论：p53基因突变及其蛋白过量表达与口腔舌鳞癌的发生、发展密切相关。     

原发性肝细胞癌中p16和cyclinD1蛋白表达及p16突变研究

目的：研究p16和cyclinD1蛋白表达及p16基因第2外显子突变与原发性肝细胞癌（HCC）发生的关系。方法：利用SP免疫组织化学方法与多聚酶链反应－单链构象多态性（PCR－SSCP）分析技术分别检测44例HCC及癌旁肝组织p16和cyclinD1蛋白表达和12例新鲜手术肝癌组织的p16基因突变。结果：HCC中p16蛋白阳性率和阳性信号强度明显低于癌旁肝组织（P＜0．01）,而cyclinD1蛋白阳性率和阳性信号强度明显高于癌旁肝组织,12例新鲜HCC标本中p16基因第2 子突变率为16．7％（2／12）,癌旁组织未发现p16基因第2外显子突变;有p16基因突变的HCCp16蛋白表达呈阴性。结论：P16蛋白失活或／和缺乏可能是肝细胞增殖失控的重要因素之一;HCC存在P16基因第2外显子突变,但不是频发事件;在HCC形成过程中,P16基因异常与cyclinD1过度表达可能存在协同作用。     

保罗样激酶1蛋白在肝细胞癌中的表达及临床意义

 目的 探讨肝细胞癌（HCC）组织及细胞系中保罗样激酶1（Plk1）蛋白的表达情况及其临床意义。方法 应用免疫组化SP法检测HCC组织67例、配对癌旁肝硬化组织27例及正常肝组织5例中Plk1蛋白的表达情况,并分析其与临床病理特征之间的关系。应用Western blot检测肝癌细胞系BCL-7402及HepG2细胞中Plk1蛋白的表达情况。结果 Plk1蛋白在HCC肝癌组织中的阳性表达率为76.1%(5167),其中强阳性44.8%(3067),在配对的癌旁肝硬化组织中均呈阳性表达,而5例正常肝组织中均无明显表达。高分化HCC肝癌中Plk1蛋白的表达明显高于中低分化HCC 肝癌(P0.01);无包膜侵犯的HCC肝癌组织中Plk1蛋白的表达高于有包膜侵犯的HCC肝癌组织(P0.05);Plk1的表达与患者年龄、肿瘤直径、肿瘤数目、淋巴结转移、肝外转移、及门静脉有无癌栓无关。肝癌细胞系BCL-7402及HepG2中均存在Plk1蛋白的过表达。结论 Plk1在HCC肝细胞癌中表达率较高,其阳性表达可能是HCC发生过程中一个关键的早期因素。     

人肝癌相关抗原SMP-30在肝癌中的表达及意义

目的：通过免疫组化方法检测人肝癌（HCC）中衰老标记蛋白-30（SMP-30）的表达,探讨其在HCC发生、发展中的作用及临床意义。方法：制备48例人HCC及相应的癌旁组织、6例正常人肝组织和1例正常人肾组织的石蜡切片。采用免疫组化SABC法,检测SMP-30在HCC和癌旁组织中的表达,结合临床资料进行统计分析。结果：初步发现HCC癌旁组织的SMP-30表达高于HCC组织（P〈0．05）。SMP30的表达与HCC患者性别、年龄、肿瘤大小、病理分级、肝硬化背景、HBsAg和AFP检测情况未见相关性（P〉0．05）。结论：SMP-30与HCC的发生、发展有关,其过度表达可能是HCC的早期性、保护性事件。     

CMIP与MDM2在肝细胞性肝癌中的表达及其临床意义

目的 观察c-maf诱导蛋白(CMIP)和小鼠双微体基因(MDM2)蛋白在肝细胞性肝癌(HCC)及癌旁组织中的表达,探讨其表达在HCC发生、发展过程中的作用及其临床病理意义.方法 采用免疫组化法检测CMIP、MDM2蛋白在 115例HCC及98例相应癌旁组织中的表达情况,并结合临床病理因素进行分析.结果 ①98例癌旁组织中CMIP蛋白全部阳性表达,HCC中CMIP蛋白阳性表达率为57. 39％(66/115);MDM2蛋白在HCC和癌旁组织中的阳性表达率分别为 57. 39％(66/115)和 12. 24％(12/98);两种蛋白在 HCC和癌旁组织中的表达差异均有统计学意义(P<0. 001).②CMIP蛋白在HCC组织中的表达与肿瘤大小密切相关(P<0.05),与性别、年龄、乙肝表面抗原(HBsAg)状况、有无脉管浸润、甲胎蛋白(AFP)水平、有无肝脏被膜侵犯、组织学分级、TNM分期均无关;MDM2蛋白在HCC组织中的表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小、HBsAg状况、有无脉管浸润、AFP水平、有无肝脏被膜侵犯、组织学分级、TNM分期均无关.③HCC中CMIP与MDM2蛋白阳性表达无明显相关.结论 HCC中存在较高比例的CMIP蛋白表达缺失和MDM2蛋白过表达,CMIP失活、下调与MDM2激活、上调参与HCC的发生发展过程.     

原发性肝细胞癌中p16和cyclin D1蛋白表达及p16突变研究

目的 :研究p1 6和cyclinD1蛋白表达及p1 6基因第 2外显子突变与原发性肝细胞癌 (HCC)发生的关系。方法 :利用SP免疫组织化学方法与多聚酶链反应———单链构象多态性 (PCR SSCP)分析技术分别检测 44例HCC及癌旁肝组织p1 6和cyclinD1蛋白表达和 1 2例新鲜手术肝癌组织的p1 6基因突变。结果 :HCC中p1 6蛋白阳性率和阳性信号强度明显低于癌旁肝组织 (P <0 .0 1 ) ,而cyclinD1蛋白阳性率和阳性信号强度明显高于癌旁肝组织。 1 2例新鲜HCC标本中p1 6基因第 2外显子突变率为 1 6 .7% (2 /1 2 ) ,癌旁组织未发现p1 6基因第 2外显子突变 ;有p1 6基因突变的HCCp1 6蛋白表达呈阴性。结论 :p1 6蛋白失活或 /和缺乏可能是肝细胞增殖失控的重要因素之一 ;HCC存在p1 6基因第 2外显子突变 ,但不是频发事件 ;在HCC形成过程中 ,p1 6基因异常与cyclinD1过度表达可能存在协同作用     

胃癌组织中p53基因突变和p53蛋白表达

目的比较胃癌和癌旁组织中p53基因突变及p53蛋白的表达与淋巴结转移和预后的关系。方法采用PCR．SSCP技术和免疫组织化学S-P法，对石蜡包埋组织进行p53基因外显子6．7和8，9以及p53蛋白的检测。结果（1）p53蛋白的阳性表达在癌组织和癌旁组织中分别为47．6％和38．1％；有淋巴结转移的病例p53蛋白表达52．8％。（2）癌组织中p53外显子7的突变率为23．9％；癌旁组织中突变率为19．0％。癌组织中p53外显子6的突变率为10．5％；癌旁组织为8．6％。癌组织中p53外显子8，9的突变率为1．9％；癌旁组织为1．0％。结论有淋巴结转移的病例中，筇3外显子的突变率和蛋白的表达率均明显增高，提示p53外显子的突变在胃癌的发生发展中是一个重要因素，并促进肿瘤的转移。p53基因突变与p53蛋白高表达在癌组织和癌旁组织中无显著差异。     

鼠双微粒体-2基因和突变型p53基因表达与肝癌细胞增殖和凋亡关系的研究

目的　探讨鼠双微粒体 2 (murine double minute 2, MDM2) 基因和突变型 p53 基因表达及其与肝癌细胞增殖和凋亡的相关关系。方法　应用免疫组织化学、原位分子杂交和 TUNEL 方法检测原发性肝细胞癌组织中MDM2基因和突变型 p53基因表达与肝细胞癌组织中癌细胞增殖和凋亡情况, 并分析 MDM2 基因和 p53 基因表达与肝细胞癌组织学分级、类型、增殖和凋亡的相关关系。结果　①MDM2蛋白和mRNA 、p53蛋白和mRNA 在肝细胞癌组织中阳性表达率明显高于癌旁肝组织和正常肝组织 (均P<0 .05); MDM2 mRNA阳性表达与肝细胞癌组织学分级和类型无相关关系 (均P>0 05); p53 mRNA阳性表达与肝细胞癌组织学分级具有相关关系 (P<0 .05)。②肝细胞癌组织中癌细胞增殖和凋亡的阳性率分别为 100%和 50%, 两者相比差异有极显著性意义 (P< 0 .01); MDM2mRNA 和 p53 mRNA阳性表达与肝癌细胞增殖均具有相关关系 (均P<0. 05), 但与肝癌细胞凋亡均无相关关系 (均P>0. 05)。结论　MDM2 和 p53的蛋白和mRNA在肝细胞癌组织中呈过表达状态, MDM2 基因和 p53基因过表达在肝细胞癌发生、增殖和分化中起重要作用。     

原发性肝细胞癌中p53、p16和p21WAF1蛋白表达及临床意义

目的:研究p5 3、p16和p2 1WAF 1蛋白在原发性肝细胞癌中的表达及临床意义。方法:应用免疫组织化学S- P法检测原发性肝细胞癌4 1例,癌旁组织30例中p5 3、p16和p2 1WAF1 蛋白的表达。结果:p5 3蛋白的表达在PHC中显著高于癌旁(P<0 .0 1) ,其表达与病理学分级、有无肝内或门静脉转移有显著相关性(P<0 .0 5 )。p16蛋白的表达在PHC中显著低于癌旁(P<0 .0 1) ,其表达与病理学分级显著相关(P<0 .0 5 )。p2 1WAF 1 蛋白的表达在PHC中显著高于癌旁(P<0 .0 1) ,而在不同临床病理特征间差异无显著性。结论:p5 3、p16和p2 1WAF 1蛋白的表达情况与原发性肝细胞癌的发生、发展及恶性程度有关。     

原发性肝癌中肝肠钙粘连蛋白的表达及意义

目的探讨肝肠钙粘连蛋白(LI-cadherin)在肝细胞肝癌中的表达水平及其临床意义。方法应用免疫组织化学链霉素亲生物素-过氧化酶标记法(S-P)检测LI-cadherin蛋白在62例肝癌组织、30例癌旁肝组织中的表达水平,并分析其与临床病理学特征之间的关系。结果肝癌组织中LI-cadherin蛋白阳性表达率为64.5%(40/62),在癌旁组织中其阳性表达率为26.7%(8/30),LI-cadherin蛋白的过表达与肝癌细胞的分化程度、癌栓的形成及淋巴结转移等临床病理因素有关(P<0.05)。结论 LI-cadherin在肝癌细胞的发生、发展过程中起重要作用。LI-cadherin蛋白的过表达与肝癌细胞的门静脉癌栓、淋巴结转移有关,提示其在肝癌的增殖、侵袭和迁移中发挥重要的作用。     

Immunohistochemical study of p53 protein expression in human hepatocellular carcinoma

Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｓｔｕｄｙｏｆｐ５３ｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｈｕｍａｎｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ（王东）；ＳｈｉＪｉｎｇｑｕａｎ（史景泉）；ＬｉｕＦｅｎｇｘｕａｎ（柳凤轩）（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎ...     

乙型肝炎病毒X蛋白、雄激素受体及p53蛋白在肝细胞癌中的表达及意义

目的探讨乙型肝炎病毒X蛋白（HBx）、雄激素受体（androgen receptor,AR）及p53在肝细胞癌（HCC）中的表达及意义。方法采用生物素标记的第二抗体与链霉菌抗生物素蛋白连接的碱性磷酸酶及底物色素混合液（SP）免疫组化方法检测58例患者乙型肝炎病毒相关原发肝细胞癌组织（HCC）及相应癌旁组织中HBx、AR及p53的表达,并分析其与临床病理特征的关系。结果 HCC和癌旁组织中HBx、AR及p53的表达率分别为63.8%（37/58）、58.6%（34/58）及62.0%（36/58）和20.9%（12/58）、27.6%（16/58）及8.6%（5/58）;差别有统计学意义（P〈0.05）。HBx阳性和HBx阴性的HCC组织中AR及p53的表达率分别为72.3%（27/37）、83.8（31/37）和33.3%（7/21）、23.8%（5/21）,在HCC组织中HBx表达与AR及p53表达正相关（r=0.4532及r=0.4754,P〈0.05）。HBx染色的阳性率与AFP水平和分化程度相关;AR染色的阳性率与性别及肿瘤直径相关;p53染色的阳性率与TNM分期相关。结论在HCC组织中HBx蛋白可上调AR及p53的表达,HBx-AR信号传导途径及p53基因突变可能促进HBV相关肝细胞癌的发生发展。     

肝细胞肝癌组织中p34cdc2表达的临床意义

目的:探讨p34cdc2激酶在肝细胞肝癌(HCC)发生发展中的作用及与临床病理特征的关系. 方法:收集肝细胞肝癌(含癌旁组织)标本43例,正常肝组织10例,采用免疫组织化学SP法显示p34cdc2激酶的表达并结合肝癌的临床病理特征进行分析. 结果:在肝癌组织、癌旁肝组织及正常肝组织细胞中p34cdc2表达定位于胞质和胞核中,在癌组织中过表达,差异有统计学意义(P<0.01). 临床分期I II期组p34cdc2 阳性表达率高于III IV期组(P=0.026);Child-Pugh分级A B级组p34cdc2阳性表达率高于C级组( P=0.004). 而不同病理分级,肿瘤大小,有无淋巴结转移与p34cdc2阳性表达率均无统计学意义(P>0.05). 结论:p34cdc2激酶的高表达与HCC的发生发展密切相关,高表达p34cdc2激酶可作为反映肝癌临床分期及Child-Pugh分级的指标.     

乙型肝炎病毒开放编码区T53C、G912A突变的临床意义

目的 探讨HBV DNA开放编码区T53C、G912A突变的临床意义.方法 2004-2006年留存血清标本的慢性HBV感染患者112例,其中慢性乙型肝炎(CHB)69例(61.6％),乙肝肝硬化(LC)37例(33.0％),乙肝相关肝癌(HCC)6例(5.4％).所有血清标本均进行HBV DNA全基因组测序.随访5～7年,将发生LC、HCC、反复肝功能异常或死亡事件定义为疾病进展,探讨乙肝病毒开放编码区突变与疾病进展的关系.结果 S区T53C突变在CHB、LC、HCC组的发生率分别为9.7％、18.8％、25.0％,差异无统计学意义(P=0.269),P区G912A突变在3组的发生率分别为14.3％、28.6％、66.7％,差异有统计学意义(P=0.039).随访5～7年,T53C在疾病未进展组、进展组的突变发生率分别为7.6％、24.1％,G912A在疾病未进展组、进展组的突变发生率分别为14.6％、36.4％,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 S区T53C、P区G912A可能与乙肝相关肝病的进展有一定相关性.     

肝细胞癌组织中Skp2的表达及与p27kip1、PCNA蛋白表达的关系

目的:探讨Skp2的表达在肝细胞癌(HCC)发生发展中的作用,及其与p27kip1(p27)和PCNA的关系。方法:收集76例HCC及癌旁组织,l0例肝血管瘤旁肝组织的临床病理档案资料,l0例HCC及癌旁肝新鲜组织,采用免疫组织化学方法及免疫印迹技术检测Skp2、p27及PCNA蛋白在这些组织中的表达。结果:免疫印迹结果显示:Skp2在HCC组织中的表达明显高于对应的癌旁肝组织。免疫组织化学结果显示HCC中Skp2的阳性率(24.08%)显著高于癌旁组织和正常肝组织(P<0.001)。Skp2的表达与肝癌组织分化程度,血清AFP值及转移有关(P<0.05)。p27在正常肝组织和癌旁组织中的表达明显高于HCC组织(P<0.001)。HCC组织中PCNA蛋白的表达明显高于癌旁和正常组织(P<0.01)。HCC组织中Skp2的表达与p27呈负相关(P<0.001);与PCNA呈正相关(P<0.01)。结论:Skp2在HCC组织中表达是上调的,可能是通过作用于细胞周期调控蛋白p27,加速了对p27泛素化依赖的蛋白降解,使其表达及代谢发生异常。导致细胞周期失控并促进细胞异常增殖,从而参与了HCC的发生和发展。