5-氮-2''-脱氧胞苷和曲古抑菌素A对子宫内膜腺癌细胞的抑制作用

目的:研究去甲基化制剂5-氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-CdR)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)在体内外对子宫内膜腺癌Ishikawa细胞的抑制作用.方法:以5-Aza-CdR和TSA单独或联合作用Ishikawa细胞,锥虫蓝拒染法观察药物对肿瘤细胞生长的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡和分析细胞周期,Western blotting检测肿瘤细胞凋亡信号通路中caspase- 8活化及多聚ADP核糖聚合酶(PARP)裂解情况.建立裸鼠Ishikawa细胞移植瘤模型,观察两抑制剂作用下的移植成瘤率、肿瘤的体积和重量.结果:5-Aza-CdR和 TSA对Ishikawa细胞增殖有明显的抑制作用,呈剂量、时间依赖性;两制剂联合作用时抑制作用更强(P<0.05).5-Aza-CdR或TSA均可诱导细胞凋亡,联合作用后细胞的凋亡率更高(P<0.05); 5-Aza-CdR和TSA联合应用使细胞发生明显的G1期阻滞;5-Aza-CdR和 TSA诱导了caspase-8活化及PARP裂解.荷瘤小鼠予5-Aza-CdR和 TSA治疗后移植瘤生长速度减慢,移植瘤体积和重量明显减少.结论:5-Aza-CdR与TSA能抑制Ishikawa肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡,两者联合作用时强度明显增加;其机制与两制剂诱导caspase-8活化及PARP裂解有关.     

5-氮杂-2-脱氧胞苷及曲古抑菌素A对人胃癌SGC-7901细胞生长及CHFR基因表达水平的影响

背景与目的:抑癌基因甲基化具有可逆性,相关药物可逆转甲基化使失活的基因重新表达。本研究观察去甲基化制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-dC)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对体外培养的人胃癌SGC-7901细胞活性及CHFR基因mRNA和蛋白表达水平的影响。方法:使用不同浓度的5-Aza-dC和(或)TSA处理SGC-7901细胞,分为对照组、TSA组(250 nmol/L)、5-Aza-dC组(5μmol/L)及TSA(250 nmol/L)联合5-Aza-dC(5μmol/L)组等4个组,采用台盼蓝染色法检测细胞活性,并利用RT-PCR及蛋白质印迹法(Westernblot)方法检测CHFR基因mRNA和蛋白表达的水平。结果:5-Aza-dC和TSA作用24、48、60和72 h后SGC-7901细胞活性均被抑制,且抑制率呈浓度和时间依赖性,两药联合作用更明显;SGC-7901细胞经5-Aza-dC单独或与TSA联合干预后,能提高CHFR基因mRNA和蛋白表达水平,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:5-Aza-dC和(或)TSA均能抑制细胞活性,提高CHFR基因mRNA和蛋白表达水平,两药联合的效果比单药明显增加,为临床胃癌患者的化疗方案提供了实验依据。     

曲古抑菌素A和紫杉醇对子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响

目的: 研究曲古抑菌素A（trichostatin A,TSA）和紫杉醇（paclitaxel, PTX）对人子宫内膜癌细胞株KLE增殖和凋亡的影响。方法：TSA和PTX、卡铂（carboplatin，Carbo） 、多柔比星（doxorubicin，Dox）单独或联合作用于KLE细胞，锥虫蓝法观察药物对肿瘤细胞生长的影响；Annexin V、Hoechst染色和线粒体膜电位检测细胞凋亡；Western blotting检测肿瘤细胞凋亡信号通路中多聚ADP核糖聚合酶（PARP）、半胱天冬氨酸蛋白酶9（caspase9）和乙酰化微管蛋白的表达。结果：PTX、Carbo、Dox和TSA对KLE细胞增殖均有抑制作用，TSA和PTX联用后抑制作用最强。Annexin V染色、Hoechst染色、线粒体膜电位法和PARP、Caspase9的检测显示，单用PTX或TSA均可诱导细胞凋亡, 联合应用产生最强的协同作用。Western blotting和免疫组化分析显示，PTX和TSA均可诱导微管蛋白乙酰化，联合用药后微管蛋白乙酰化明显增加。结论: TSA和PTX联合使用有明显的协同作用，能显著抑制子宫内膜癌KLE细胞生长和诱导细胞凋亡，其机制与激活线粒体凋亡信号通路和增强微管蛋白乙酰化有关。     

5-氮-2′-脱氧胞苷诱导膀胱癌EJ细胞凋亡研究

[目的]探讨5-氮-2′-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）诱导膀胱癌EJ细胞凋亡机制。[方法]以不同浓度的5-Aza-CdR作用于膀胱癌EJ细胞，以四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞的增殖程度，原位凋亡细胞检测技术（TUNEL）和流式细胞术（FCM）检测5-Aza-CdR对膀胱癌EJ细胞凋亡和细胞周期的影响。[结果]EJ细胞加入不同浓度的5-Aza-CdR（0.625，1.25，2.50，5.00mg/ml），与对照组相比各组EJ细胞增长速度减慢。与对照组相比，不同浓度的各组5-Aza-CdR（0.625，1.25，2.50，5.00mg/ml）可以显著降低EJ细胞的增殖比和增高EJ细胞的凋亡指数（P〈0.05），且与5-Aza-CdR呈浓度依赖关系（P〈0.05）；不同浓度的5-Aza-CdR作用EJ细胞后G0/G1期细胞明显增加（P〈0.05）。[结论]5-氮-2′-脱氧胞苷诱导膀胱癌EJ细胞凋亡并使EJ细胞阻滞于G0/G1期，从而抑制膀胱癌EJ细胞的增殖。     

5-氮杂-2'-脱氧胞苷和曲古抑菌素A对卵巢癌顺铂耐药细胞中hMLH1表达及DNA甲基化的影响

背景与目的:顺铂能造成细胞内DNA的损伤,而DNA错配修复蛋白能发现顺铂导致的DNA损伤,产生损伤信号,诱导细胞凋亡,从而摧毁肿瘤细胞.hMLH1是DNA错配修复系统的一个重要成员,其缺失能导致肿瘤对顺铂的耐受.本研究目的在于探讨卵巢癌顺铂耐药细胞中hMLH1表达及其基因启动子区DNA甲基化状态,同时探讨去甲基化制剂——5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-dC)和组蛋白脱乙酰化酶抑制剂——曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对hMLH1表达及DNA甲基化的逆转作用.方法:应用5-Aza-dC和TSA作用于卵巢癌细胞COC1与其顺铂耐药细胞COC1/DDP,应用甲基化特异性PCR、RT-PCR和Western blot检测上述两种细胞中hMLH1基因启动子区DNA甲基化、hMLH1 mRNA和hMLH1蛋白表达的变化.MTT法检测药物对细胞增殖的影响.结果:COC1细胞存在hMLH1 mRNA和蛋白的表达,其启动子区域表现为DNA非甲基化.单独应用5-Aza-dC、TSA及联合应用5-Aza-dC和TSA对COC1细胞中hMLH1 mRNA、hMLH1蛋白表达和DNA甲基化均没有影响(P>0.05),细胞形态变化不明显.COC1/DDP细胞中hMLH1 mRNA和蛋白表达缺失,启动子区域表现为DNA甲基化.5-Aza-dC不但能使COC1/DDP细胞中hMLH1基因发生DNA去甲基化,而且能使表达缺失的hMLH1 mRNA和hMLH1蛋白重新表达.TSA对COC1/DDP细胞中hMLH1 mRNA、hMLH1蛋白表达和DNA甲基化均没有影响(P>0.05).联合应用5-Aza-dC和TSA不但能使hMLH1基因发生DNA去甲基化,而且与单独应用5-Aza-dC相比较,对hMLH1 mRNA和hMLH1蛋白表达的影响更明显(P<0.05).5-Aza-dC单用及联合应用TSA对COC1/DDP细胞生长抑制率明显高于COC1组、阴性对照组(P<0.05).结论:COC1/DDP细胞对顺铂的耐药性与hMLH1mRNA和蛋白的表达缺失有关,而hMLH1基因和蛋白的表达缺失与其基因启动子区DNA甲基化相关,5-Aza-dC单用及联合TSA使hMLH1基因发生DNA去甲基化,促进hMLH1的表达,逆转COC1/DDP细胞对DDP的耐药性.     

5-氮杂-2′-脱氧胞苷对肝癌细胞HepG2凋亡及其PEG10基因表达的影响

目的探讨去甲基化药物5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对人肝癌细胞系HepG2凋亡及其PEG10基因表达调控的影响,进一步探讨肝癌的发病机制及5-Aza-CdR治疗肝癌的可行性。方法用浓度为50 μmol/L的5-Aza-CdR分别处理HepG2细胞24、48、72 h,hoechst 33342/PI 双染荧光显微镜检测HepG2细胞凋亡情况。RT-PCR、Western blot法分别检测PEG10 mRNA和蛋白表达水平的变化。结果与对照组相比,5-Aza-CdR作用24、48、72 h后,HepG2细胞的凋亡率明显升高,PEG10 mRNA 和蛋白表达水平显著下降,并呈现时间依赖性（P＜0.05）。结论5-Aza-CdR 可促进HepG2细胞凋亡并抑制PEG10基因的表达。     

曲古抑菌素A和紫杉醇对子宫内膜癌Ark2细胞凋亡和线粒体膜电位的影响

背景与目的:晚期子宫内膜癌患者应用现有的抗癌药物治疗预后较差,5年生存率仅为25%,为降低这类患者死亡率,需研发新的抗癌药物。组蛋白去乙酰基酶抑制剂曲古抑菌素A(Trichostatin,TSA)有望应用于临床各种恶性肿瘤的治疗,与传统的抗肿瘤药物联用可以提高肿瘤患者的生存率。本实验探讨TSA和紫杉醇(paclitaxel,PTX)对人子宫内膜癌Ark2细胞凋亡的影响及其机制。方法:Ark2细胞培养于RPMI-1640培养液中,应用TSA、PTX单独或者联合干预,Annexin V法结合Hoechst33258染色法检测Ark2细胞凋亡;Western blot检测其凋亡信号通路中Caspase-9活化及多聚ADP核糖聚合酶(Poly ADP-ribose polymerase,PARP)裂解情况,以及微管乙酰化的表达及微管稳定性。MitoTracker red法检测其线粒体膜电位。结果:流式细胞仪检测显示,1.5nmol/L PTX联合25nmol/L TSA处理Ark2细胞3d后,可见45.2%的细胞凋亡,明显高于单用1.5nmol/L PTX或25nmol/L TSA组的细胞凋亡率(分别为14.1%、11.2%)。Hoechst33258染色法检测结果与流式细胞仪检测结果一致。TSA和PTX联用组PARP、Caspase-9裂解较单用PTX或TSA明显增加(P<0.05)。Western blot和免疫荧光分析证明PTX和TSA可诱导微管蛋白乙酰化,联合用药后微管蛋白乙酰化明显增加,微管稳定性增强。PTX和TXA联合组细胞线粒体膜电消失较单独用药组明显,两药合用具有协同作用(q=2.54)。结论:TSA和PTX有促进Ark2细胞凋亡的作用,去乙酰化酶抑制剂导致的非组蛋白乙酰化和线粒体膜电位的消失是其可能的抗肿瘤机制。     

5-氮-2′-脱氧胞苷对人卵巢癌细胞凋亡及DNA错配修复基因表达的影响

目的:观察5-氮-2′-脱氧胞苷(5-aza-2′-deoxycytidine,又称5-aza-CdR)对卵巢癌细胞SKOV3和3AO增殖凋亡及DNA错配基因hMLH1和hMLH2表达的影响。方法:以特异性甲基转移酶抑制剂5-aza-CdR0.5、5、50μmol/L处理人卵巢癌细胞SKOV3和3AO3d,继续常规培养7d后,采用MTT比色法观察细胞经药物处理前后的增殖活性,用流式细胞术分析5-aza-CdR对细胞凋亡影响,以半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞经5-aza-CdR处理前后DNA错配修复基因hMLH1和hMSH2mRNA表达水平的改变。结果:人卵巢癌细胞SKOV3和3AO经5-aza-CdR处理后,与对照组比较,0.5、5、50μmol/L均能明显抑制肿瘤细胞生长,随着5-aza-CdR浓度增加,细胞增殖速度下降。SKOV3经5-aza-CdR0.5、5、50μmol/L处理后细胞的凋亡率分别为(10.59±1.57)%、(17.52±1.72)%、(34.10±1.45)%,3A0经0.5、5、50μmol/L5-aza-CdR处理后细胞的凋亡率分别为(11.11±2.21)%、(17.24±1.11)%、(26.53±2.00)%,与对照组相比均有统计学意义(P<0.01);且凋亡率与剂量成正相关(FSKOV3=227.6,PSKOV3<0.01;F3AO=108.4,P3AO<0.01)。经5-aza-CdR处理后的两株卵巢癌细胞中hMLH1和hMLH2的mRNA表达量有不同程度的增加(P<0.01),且与药物存在剂量依赖性。结论:在人卵巢癌细胞株SKOV3和3AO中,5-aza-CdR可部分逆转hMLH1和hMLH2的失活,恢复其生长调控功能,抑制肿瘤细胞生长,并诱导细胞凋亡。     

曲古抑菌素A增加人肝癌Bel7402细胞对TRAIL敏感度的实验

目的 探讨曲古抑菌素A(Trichostatin A,TSA)联合肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)相关凋亡诱导配体(TNF related apoptosis inducing ligand,TRAIL)对肝癌细胞Bel7402增殖凋亡的影响及其机制.方法 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)染色法分别检测TSA、TRAIL及低浓度TSA联合TRAIL处理Bel7402细胞的生长抑制率;4,6-二脒基-2-苯基吲哚二盐酸盐(DAPI)染色法对药物联合处理后的细胞进行凋亡形态学观察;免疫细胞化学和Western blot技术观察药物联合作用后p65蛋白在细胞中表达和定位的变化.结果 不同浓度TSA作用6、12和24 h对人肝癌Bel7402细胞的增殖没有明显抑制作用,而作用48 h后的细胞增殖抑制率明显升高,和对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);不同浓度TRAIL处理Bel7402细胞存活率没有明显改变;低浓度TSA(20 ng/ml)预处理能够增加Bel7402细胞对TRAIL治疗的敏感度,TSA预处理联合TRAIL(100ng/ml)作用细胞24 h后,细胞生存率为(57.1±5.4)％,和单独药物处理组及对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);DAPI染色显示TSA和TRAIL联合作用后Bel7402细胞有核凋亡出现.荧光显微镜观察证明单独应用TSA(200 ng/ml)或TRAIL(100 ng/ml)处理的细胞p65蛋白有部分核内移位,而两种药物联合应用导致p65蛋白表达量降低,并且发生明显的核内转移和集聚.结论 低浓度TSA能够增加肝癌Bel7402细胞对TRAIL的敏感度;其机制可能是两种药物联合应用降低p65的表达和活性,从而诱导Bel7402细胞凋亡.     

5-杂氮-2′-脱氧胞苷对人鼻咽癌裸鼠移植瘤的抑制作用

背景与目的:5-杂氮-2′-脱氧胞苷是DNA甲基转移酶抑制剂,能使因甲基化而失活的抑癌基因重新激活,进而抑制肿瘤的生长。本文观察了5-杂氮-2′-脱氧胞苷对人鼻咽癌细胞及其裸鼠移植瘤的抑制作用,探讨其抗肿瘤效应及可能的机理,寻找鼻咽癌治疗的新靶点。方法:用5-杂氮-2′-脱氧胞苷处理人鼻咽癌细胞,观察其对细胞生长的抑制及死亡相关蛋白激酶基因(death-associated proteinkinase,DAPK)甲基化情况。建立人鼻咽癌移植瘤裸鼠模型,用5-杂氮-2′-脱氧胞苷处理裸鼠,观察移植瘤的生长情况,并用RT-PCR和免疫组织化学技术检测DAPK基因mRNA及蛋白表达的变化。结果:未经5-杂氮-2′-脱氧胞苷处理的CNE细胞中DAPKmRNA不表达。经5-杂氮-2′-脱氧胞苷处理后,不同药物浓度组的细胞中均有DAPKmRNA表达,且表达随浓度增高而增强。5-杂氮-2′-脱氧胞苷对人鼻咽癌细胞及其裸鼠移植瘤的生长均有明显的抑制作用,且能使失活的DAPK基因重新激活。药物作用4周后,用药组裸鼠体重(22.35±2.02)g与对照组(21.68±2.14)g之间无显著性差异(t=0.011,P>0.05),用药组肿瘤的体积(195.32±27.57)mm3较对照组(343.67±23.08)mm3明显减小,两者之间有显著性差异(t=10.11,P﹤0.01)。在鼻咽癌移植瘤中,对照组DAPK均不表达,而用药组出现表达。结论:5-杂氮-2′-脱氧胞苷对人鼻咽癌细胞及其裸鼠移植瘤的抑制作用可能是因为其使因甲基化而失活的抑癌基因DAPK再转录,诱导该基因的表达,从而抑制肿瘤细胞的生长和增殖。     

曲古抑菌素A通过上调KLF4表达诱导人子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡

目的:观察组蛋白乙酰基转移酶(histone deacetylase,HDAC)抑制剂曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡的影响,并研究其与Krupell样因子4(Krupell-like factor 4,KLF4)的关系。方法:0、50、100、200、300、500ng/ml TSA作用于Ishikawa细胞24 h,或100 ng/ml TSA作用于Ishikawa细胞0、4、8、12、24、48 h,流式细胞术检测Ishikawa细胞凋亡情况,qRT-PCR检测Ishikawa细胞中KLF4 mRNA的表达情况;将KLF4真核表达载体pcDNA3-KLF4转染Ishikawa细胞,流式细胞术检测Ishikawa细胞凋亡情况。结果:100 ng/ml TSA作用于Ishikawa细胞24 h后,Ishikawa细胞的凋亡率显著高于对照组[(30.6±4.5)%vs(7.53±0.93)%,P<0.05];不同质量浓度TSA处理Ishikawa细胞24 h后或100 ng/ml TSA作用Ishikawa细胞不同时间后,KLF4 mRNA表达水平以剂量依赖和时间依赖方式明显增高(P<0.05);pcDNA3-KLF4转染后Ishikawa细胞凋亡率显著增加[(27.3±2.7)%vs(4.53±1.75)%,P<0.05]。结论:TSA能通过诱导子宫内膜癌Ishikawa细胞中KLF4的表达,促进Ishikawa细胞发生凋亡。     

曲古抑菌素A对食管鳞癌细胞迁移影响机制探讨

目的组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitors,HDACIs)是一类新型的抗肿瘤药物,抑制食管鳞癌细胞增殖并促进其凋亡,但对食管鳞癌细胞迁移的影响及机制尚不清楚。本研究旨在探讨HDACIs曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对食管鳞癌细胞迁移能力的影响及其可能的机制。方法培养食管鳞癌细胞KYSE-150和EC9706。单独TSA以及联合NF-κB抑制剂BAY 11-7082、PI3K/Akt信号通路阻断剂LY 294002对食管鳞癌细胞进行处理,Transwell法检测食管鳞癌细胞迁移能力,分为NC组(对照组)、TSA组(200nmol/L TSA组)、BAY组(10μmol/L BAY 11-7082组)、TSA+BAY组(200nmol/L TSA+10μmol/L BAY 11-7082组)、LY组(10μmol/L LY 294002组)和TSA+LY组(200nmol/L TSA+10μmol/L LY 294002组)。蛋白质印迹法检测TSA处理后Vimentin、p-p65和p-Akt等蛋白的表达水平,以及TSA联合BAY、LY后Vimentin、p-p65、p-Akt等蛋白的表达情况。多组间均值差异比较采用两因素析因方差分析,两独立组比较采用t检验。结果 Transwell实验结果表明,TSA处理食管鳞癌细胞24h后细胞迁移能力增加,与对照组比较,KYSE-150细胞中,差异有统计学意义,t=13.687,P<0.01;EC9706细胞中,差异有统计学意义,t=11.917,P<0.01。TSA+BAY组与TSA组比较,迁移能力减弱,KYSE-150细胞中,F=169.896,P<0.01;EC9706细胞中,F=248.813,P<0.01。TSA+LY组与TSA组比较,迁移能力减弱,KYSE-150细胞中,F=56.019,P<0.01;EC9706细胞中,F=93.108,P<0.01。蛋白质印迹实验结果表明,TSA使KYSE-150细胞中Vimentin(t=13.156,P<0.01)、Slug(t=43.866,P<0.01)、p-p65/p65(t=28.866,P<0.01)以及EC9706细胞中Vimentin(t=43.565,P<0.01)、Slug(t=20.810,P<0.01)、p-p65/p65(t=73.525,P<0.01)蛋白表达水平升高,TSA+BAY组与TSA组比较,使KYSE-150细胞中Vimentin(F=49.376,P<0.05)、Slug(F=19.636,P<0.05)、p-p65/p65(F=19.636,P<0.05)以及EC9706细胞中Vimentin(F=14.297,P<0.05)、Slug(F=77.817,P<0.05)、p-p65/p65(F=14.137,P<0.05)蛋白表达水平降低;TSA+LY组与TSA组比较,使KYSE-150细胞中Vimentin(F=110.413,P<0.05)、Slug(F=19.636,P<0.05)、p-p65/p65(F=59.929,P<0.05)、p-pAkt/Akt(F=184.615,P<0.05)以及EC9706细胞中Vimentin(F=94.270,P<0.05)、Slug(F=77.817,P<0.05)、p-p65/p65(F=54.267,P<0.05)、p-pAkt/Akt(F=100.043,P<0.05)蛋白表达水平降低。结论 TSA通过激活PI3K/Akt信号通路,进而调节下游信号分子NF-κB亚基p65,促进食管鳞癌细胞迁移。     

5-氮杂-2'-脱氧胞苷序贯顺铂对MDA-MB-231细胞的影响

目的 探讨5-氮杂-2'-脱氧胞苷(DAC)、顺铂(PDD)序贯应用对人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231体外增殖、周期及凋亡的影响.方法 实验分4组:对照组、DAC组(5μmol/L DAC处理)、PDD组(15 μmol/L PDD处理)、DAC序贯PDD组(2.5μmol/L DAC处理24h,再用8μmol/L PDD处理48 h).分别用MTT法、流式细胞仪测定各组MDA-MB-231细胞的增殖、周期及凋亡,并用金氏公式来评价两药联合效应.结果 DAC序贯PDD组较DAC组、PDD组增殖抑制率高(P＜0.01).DAC序贯PDD组48 h、72 h的q值分别为1.12、1.17,两药联合有增效作用.DAC序贯PDD组G1、S期细胞减少,G2/M期细胞增多,DAC序贯PDD组较DAC组、PDD组细胞凋亡率高(P＜0.01).结论 低剂量的DAC与PDD序贯应用可以抑制人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,促进MDA-MB-231细胞凋亡.     

5-氮-2＇-脱氧胞苷诱导膀胱癌BIU87细胞凋亡的研究

目的：研究5-氮-2＇-脱氧胞苷（5-Aza-2＇-decxycytidine,5-Aza-CdR）对膀胱癌BIU87细胞凋亡的影响。方法：以不同浓度的5-氮-2＇-脱氧胞苷作用于膀胱癌BIU87细胞,以四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞的增殖程度,AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞仪（flow cytometry,FCM）检测凋亡率,AO荧光染色对细胞凋亡形态学观察,同时应用Western blot检测膀胱癌BIU87细胞RASSF1A蛋白表达的改变。结果：BIU87细胞加入（0.1、0.5、1.0、5.0）nmol/L的5-Aza-CdR后与对照组相比各组BIU87细胞增长速度减慢。不同浓度的5-Aza-CdR可以显著降低BIU87细胞的存活率,与对照相组比差异显著（P〈0.05）。BIU87细胞的凋亡率逐渐增高且与5-Aza-CdR呈浓度依赖关系（P〈0.05）。荧光显微镜下见典型的凋亡形态学改变,随5-Aza-CdR浓度的升高BIU87细胞RASSF1A蛋白的表达也升高。结论：5-Aza-CdR可能通过对RASSF1A基因的再表达而抑制肿瘤细胞的生长,从而诱导膀胱癌BIU87细胞凋亡的增加。     

5-氮杂-2'-脱氧胞苷对肝癌细胞HepG2凋亡及其PEG10基因表达的影响

目的 探讨去甲基化药物5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人肝癌细胞系HepG2凋亡及其PEG10基因表达调控的影响,进一步探讨肝癌的发病机制及5-Aza-CdR治疗肝癌的可行性.方法 用浓度为50 μmol/L的5-Aza-CdR分别处理HepG2细胞24、48、72 h,hoechst 33342/PI双染荧光显微镜检测HepG2细胞凋亡情况.RT-PCR、Western blot法分别检测PEG10 mRNA和蛋白表达水平的变化.结果 与对照组相比,5-Aza-CdR作用24、48、72 h后,HepG2细胞的凋亡率明显升高,PEG10 mRNA和蛋白表达水平显著下降,并呈现时间依赖性(P＜0.05).结论 5-Aza-CdR可促进HepG2细胞凋亡并抑制PEG10基因的表达.     

5-杂氮-2′-脱氧胞苷对人鼻咽癌裸鼠移植瘤的抑制作用

背景与目的:5-杂氮-2′-脱氧胞苷是DNA甲基转移酶抑制剂,能使因甲基化而失活的抑癌基因重新激活,进而抑制肿瘤的生长。本文观察了5-杂氮-2′-脱氧胞苷对人鼻咽癌细胞及其裸鼠移植瘤的抑制作用,探讨其抗肿瘤效应及可能的机理,寻找鼻咽癌治疗的新靶点。方法:用5-杂氮-2′-脱氧胞苷处理人鼻咽癌细胞,观察其对细胞生长的抑制及死亡相关蛋白激酶基因(death-associated proteinkinase,DAPK)甲基化情况。建立人鼻咽癌移植瘤裸鼠模型,用5-杂氮-2′-脱氧胞苷处理裸鼠,观察移植瘤的生长情况,并用RT-PCR和免疫组织化学技术检测DAPK基因mRNA及蛋白表达的变化。结果:未经5-杂氮-2′-脱氧胞苷处理的CNE细胞中DAPKmRNA不表达。经5-杂氮-2′-脱氧胞苷处理后,不同药物浓度组的细胞中均有DAPKmRNA表达,且表达随浓度增高而增强。5-杂氮-2′-脱氧胞苷对人鼻咽癌细胞及其裸鼠移植瘤的生长均有明显的抑制作用,且能使失活的DAPK基因重新激活。药物作用4周后,用药组裸鼠体重(22.35±2.02)g与对照组(21.68±2.14)g之间无显著性差异(t=0.011,P>0.05),用药组肿瘤的体积(195.32±27.57)mm3较对照组(343.67±23.08)mm3明显减小,两者之间有显著性差异(t=10.11,P﹤0.01)。在鼻咽癌移植瘤中,对照组DAPK均不表达,而用药组出现表达。结论:5-杂氮-2′-脱氧胞苷对人鼻咽癌细胞及其裸鼠移植瘤的抑制作用可能是因为其使因甲基化而失活的抑癌基因DAPK再转录,诱导该基因的表达,从而抑制肿瘤细胞的生长和增殖。     

曲古抑菌素A联合多西他赛促进肺腺癌细胞的凋亡及其可能的分子机制

目的:研究曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)联合多西他赛(docetaxel,Doc)对肺腺癌细胞A549凋亡的影响及其分子机制。方法:TSA单独或联合Doc处理A549细胞,MTT法检测A549细胞的增殖,光学显微镜下观察A549细胞的形态学变化,Hoechst 33258染色及流式细胞术检测A549细胞的凋亡,流式细胞术检测细胞周期的变化,Western blotting检测乙酰化-α-微管蛋白(acetyl-α-tubulin)、survivin蛋白的表达及caspase-3的活化。结果:10μg/ml Doc、250 nmol/L TSA单独或联合作用均能时间依赖性地抑制A549细胞的增殖,联合作用的抑制率显著高于Doc或TSA单独作用[(65.6±3.1)%vs(30.6±2.1)%、(23.3±1.9)%,P<0.05]。TSA、Doc单独或联合用药均可使A549细胞凋亡率增加,联合作用的凋亡率显著高于单独作用[(58±3.6)%vs(17±2.2)%、(14±1.6)%,P<0.05]。联合作用比单独作用使A549细胞更明显地阻滞于G2/M期[(32.4±3.1)%vs(23.5±2.3)%、(10.5±1.5)%,P<0.05]。TSA联合Doc可进一步增加acetyl-α-tubulin表达、减少sur-vivin蛋白的表达,并促进casapase-3的活化(均P<0.05)。结论:TSA联合Doc能够抑制A549细胞的增殖、促进细胞的凋亡,其机制可能与上调acetyl-α-tubulin的表达、抑制survivin的表达以及促进caspase-3活化有关。     

5-氮-2''''-脱氧胞苷诱导膀胱癌EJ细胞凋亡研究

[目的]探讨5-氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)诱导膀胱癌EJ细胞凋亡机制.[方法]以不同浓度的5-Aza-CdR作用于膀胱癌FJ细胞,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖程度,原位凋亡细胞检测技术(TUNEL)和流式细胞术(FCM)检测5-Aza-CdR对膀胱癌EJ细胞凋亡和细胞周期的影响.[结果]EJ细胞加入不同浓度的5-Aza-CdR(0.625,1.25,2.50,5.00 mg/ml),与对照组相比各组FJ细胞增长速度减慢.与对照组相比,不同浓度的各组5-Aza-CdR(0.625,1.25,2.50,5.00 mg/ml)可以显著降低EJ细胞的增殖比和增高EJ细胞的凋亡指数(P＜0.05),且与5-Aza-CdR呈浓度依赖关系(P＜0.05);不同浓度的5-Aza-CdR作用FJ细胞后G0/G1期细胞明显增加(P＜0.05).[结论]5-氮-2'-脱氧胞苷诱导膀胱癌FJ细胞凋亡并使EJ细胞阻滞于G0/G1期,从而抑制膀胱癌FJ细胞的增殖.