雄激素受体反义RNA抑制前列腺癌细胞LNCaP致瘤性的研究

目的　观察雄激素受体 (Androgenreceptor ,AR)反义RNA对前列腺癌细胞LNCaP致瘤性的影响。方法　分别用细胞平板克隆形成试验及裸鼠接种实验观察前列腺癌细胞LNCaP、LNCaPNeo和LNCaPas AR 细胞致瘤性的变化。结果　LNCaPas AR细胞的克隆形成效率显著低于LNCaPNeo细胞 (P <0 .0 1)。LNCaPas AR细胞在雄性裸鼠体内形成的瘤体体积明显小于LNCaPNeo细胞并且形成瘤体的时间延长。结论　雄激素受体反义RNA可抑制前列腺癌细胞LNCaP成瘤能力。     

大黄素抑制人口腔鳞癌细胞Tca8113增殖及细胞周期进程的实验研究

目的探讨大黄素对人口腔鳞癌细胞体外生长增殖及细胞周期改变的影响。方法采用2.5、5.0、10、20、40、60和80 μmol/L
大黄素分别干预体外培养的口腔鳞癌细胞Tca8113,作用24、48和72 h后,并设含0.1%二甲基亚砜的培养液作为对照组,通过
MTT检测不同浓度大黄素干预对于口腔鳞癌细胞Tca8113的增殖作用;以FCM检测不同浓度大黄素干预对于口腔鳞癌细胞周
期的影响;结合Western blotting 方法分析大黄素干预后对口腔鳞癌细胞周期相关蛋白CDK2、Cyclin E和P21 表达水平的变
化。结果大黄素能够在72 h内明显抑制Tca8113细胞生长以及增殖行为。MTT结果显示,随作用时间从24、48到72 h,大黄素
对于Tca8113细胞的抑制效应呈明显的时间—浓度依赖关系;由细胞周期检测结果显示,大黄素作用使口腔鳞癌Tca8113细胞
周期表现为G0~G1期细胞时相阻滞;蛋白免疫印迹则表明经大黄素干预口腔鳞癌Tca8113 细胞的细胞周期相关蛋白CDK2、
Cyclin E和P21表达水平明显降低,与空白对照组相比较,具有显著的统计学差异（P<0.05）。结论大黄素能够明确抑制人口腔鳞
癌细胞Tca8113的生长增殖以及影响其细胞分裂周期,这可能与抑制细胞周期调控信号通路中分子的活化与转导有关。
     

过表达精子相关抗原9对前列腺癌细胞PC3生物学行为的影响

目的 研究精子相关抗原9(sperm-associated antigen 9,SPAG9)对前列腺癌细胞增殖、细胞周期、侵袭转移等生物学行为的影响,探讨可能的分子机制.方法 前列腺细胞PC3中转染SPAG9后,qRT-PCR和Western blot检测转染后细胞SPAG9的表达变化;CCK-8检测SPAG9对PC3细胞增殖的影响;流式细胞术检测SPAG9对PC3细胞周期的作用;Transwell实验检测转染SPAG9对PC3细胞体外迁移能力的影响.结果 qRT-PCR检测结果表明SPAG9组的SPAG9的相对表达量(20.776 3±3.080 9)明显高于对照组(1.010 2±0.178 4)(P ＜0.01).Western blot结果显示在前列腺癌细胞PC3中过表达SPAG9后成功.CCK-8实验表明SPAG9促进细胞增殖;流式细胞术检测结果表明过表达SPAG9使PC3细胞周期加快;在Transwell迁移实验中,SPAG9转染细胞后,SPAG9组穿膜细胞数为(88.078 ±4.509)/视野,对照组穿膜细胞数为(54.333 ±4.582)/视野,SPAG9组细胞迁移能力明显高于对照组(P ＜0.05).结论 SPAG9促进前列腺癌细胞PC3的增殖、细胞周期及侵袭转移等生物学行为,并可能通过ERK和JNK信号通路发挥这些作用.     

乙酰辅酶A羧化酶2通过调控细胞周期促进肝癌细胞增殖

目的 研究乙酰辅酶A羧化酶2（acetyl-co carboxylase 2,ACC2）对肝癌细胞增殖、迁移能力的影响以及其潜在的作用机制。方法 通过TCGA、GEO、CPTAC数据库对ACC2在肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）患者肝脏组织中的表达和预后价值进行分析。采用CRISPR-Cas9系统构建了ACC2敲低肝癌细胞系,观察肝癌细胞增殖、迁移能力以及细胞周期的变化,Western blot实验检测细胞周期相关蛋白的表达。结果 ACC2在肝癌组织中低表达（P<0.05）且与预后不良相关（P<0.05）。体外细胞功能学实验表明降低ACC2表达显著促进肝癌细胞增殖、迁移能力（P<0.05）。细胞周期流式分析显示敲低ACC2促进肝癌细胞周期G1/S期的转变（P<0.05）,细胞周期相关蛋白中CyclinE2和p21的表达降低,而CyclinA2和p-RB的表达升高。结论 ACC2可以促进肝癌细胞增殖和迁移的能力,对细胞增殖的促进作用是通过加速肝癌细胞周期G1向S期的转化实现的。     

去除雄激素对前列腺癌中凋亡抑制蛋白Bcl-2和Bcl-XL表达的影响

目的：探讨去除雄激素对人前列腺癌（PCa)细胞中凋亡抑制蛋白Bcl-2和Bcl-XL蛋白表达的影响。方法：采用雄激素依赖PCa细胞株LNCaP为研究对象,雄激素非依赖PCa细胞株PC－3为对照;以Western印迹法检测去除雄激素后Bcl-2和Bcl-XL蛋白的表达。结果：在LNCaP中去除雄激素12h后Bcl-2蛋白的表达开始升高,到24h最明显,而去除雄激素10h后Bcl-XL蛋白表达开始降低,在24h达最低,而在PC－3中去除雄激素前后未见Bcl-2和Bcl-XL蛋白表达改变,结论：去除雄激素可促PCa细胞中Bcl-XL蛋白表达降低,可能是手术或药物去势治疗前列腺癌的机制之一,Bcl-2蛋白的表达升高可能和后期PCa雄激素非依赖性生长有关。     

前癃通胶囊对人前列腺组织细胞凋亡及细胞周期的影响

目的探讨前癃通胶囊对人前列腺组织细胞凋亡指数及细胞周期的影响。方法 1.采用组织细胞培养法,体外对良性前列腺增生BPH患者的前列腺组织块进行培养。2.采用TUNEL法和流式细胞术(FCM),检测前癃通对体外培养BPH患者前列腺组织细胞凋亡指数和细胞周期的影响。结果前癃通能促进细胞凋亡,对细胞凋亡的促进作用有明显的量效关系,差异有统计学意义(P<0.01)。同时前癃通胶囊使前列腺组织细胞的G0/G1期细胞数增加,对细胞周期的影响同样有出明显的量效关系。高、中剂量组与低剂量组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论前癃通对前列腺组织能促进细胞凋亡,同时使细胞周期发生G0/G1期阻滞,从而抑制前列腺增生。     

miR-144对甲状腺乳头状癌细胞增殖及细胞周期的影响

目的：研究甲状腺乳头状癌（PTC）细胞株中miR-144的表达水平,探讨miR-144不同表达水平对甲状腺癌细胞增殖能力及细胞周期的影响。方法：通过qPCR检测人PTC细胞K1、TPC-1和人甲状腺细胞Nthy-ori 3-1中miR-144的表达水平。K1细胞分别转染miR-144 mimics、miR-144 inhibitor及阴性对照（NC）。应用MTT增殖实验、克隆形成实验和流式细胞术分别检测miR-144不同表达水平对K1细胞生物学功能的影响。Western blot检测细胞周期蛋白Cyclin D1的表达情况。结果：PTC细胞中miR-144相对表达量与正常甲状腺细胞相比显著降低（P＜0.05）,其中K1细胞中miR-144的表达量最低。在K1细胞株中过表达miR-144后,细胞的增殖能力、单克隆形成能力显著下降,并且Cyclin D1表达水平降低,细胞被阻滞在G0/G1期（P＜0.05）。而miR-144表达下调则得到相反的结果。结论：miR-144在PTC细胞中低表达。通过抑制PTC细胞增殖、阻滞细胞周期,miR-144可能在PTC的发生发展中扮演抑癌基因的角色。     

PCa患者前列腺与睾丸组织中AR表达相关性

目的探讨雄激素受体（AR）在前列腺癌（PCa）患者前列腺组织与睾丸组织中的表达情况。方法16例PCa患者,于前列腺切除术（或前列腺穿刺活检）后行双侧睾丸切除,按临床分期、病理分级、年龄分组,采用免疫组化方法分析各组织AR表达情况。结果前列腺组织AR表达：早期组表达低于晚期组（P〈0.05）;低分化组表达高于其它病理分级组间（P〈0.01）;AR表达与临床分期及病理分级正相关（P〈0.05）。睾丸组织中早期组AR表达高于晚期（P〈0.05）,AR表达与临床分期负相关（P〈0.05）;前列腺与睾丸组织AR表达间无相关性（P〉0.05）。结论 PCa患者前列腺与睾丸组织间AR表达彼此独立;前列腺AR阳性表达程度与PCa分级、分期有关,其睾丸AR阳性表达程度PCa分期有关,对判断PCa生物学行为有参考价值。     

大蒜素对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡及细胞周期的影响

[目的]研究大蒜素对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡以及细胞周期的影响并初探其机制。[方法]取对数生长期Tca8113细胞设空白对照组、大蒜素（50、25、12.5 μg/mL）组和顺铂（40 μg/mL）组,给药48 h后流式细胞术分析细胞周期的改变并检测细胞凋亡状况,逆转录聚合酶链式反应法（RT-PCR）检测B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）mRNA、Bcl-2相关X蛋白（Bax）mRNA表达,蛋白免疫印迹法检测细胞周期相关调控蛋白周期蛋白（cyclin B1、cyclin D1）和周期蛋白依赖性激酶（CDK1、CDK2）表达。[结果]与空白对照组比较,大蒜素（50、25 μg/mL）组细胞周期G₂/M期比例显著提高（P<0.05）,细胞凋亡率显著升高（P<0.01）,Bcl-2 mRNA表达显著下调且Bax mRNA表达显著上调（P<0.05或P<0.01）,Bax/Bcl-2值显著提高（P<0.01）,cyclin B1蛋白和CDK1蛋白显著上调、cyclin D1蛋白和CDK2蛋白显著下调（P<0.05或P<0.01）。[结论]大蒜素具有促进人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡、阻滞细胞有丝分裂的作用,其机制可能与大蒜素影响凋亡相关调控基因及细胞周期相关调控蛋白表达有关。     

多西他赛对雄激素依赖型及非依赖亚型前列腺癌细胞中C-jun与雄激素受体相互作用的影响

目的研究C-jun和雄激素受体（AR)在多西他赛处理的前列腺癌LNCaP细胞及其非雄激素依赖亚型LNCaP-bic细胞中的
相互作用。方法采用多西紫杉醇处理雄激素依赖型LNCaP前列腺癌细胞及其亚型雄激素非依赖型LNCaP-bic细胞,采用荧光
素酶分析检测AR及AP-1基因的表达,利用Western blotting,免疫沉淀方法分析C-jun以及AR的蛋白表达和相互作用。结果
经多西他赛处理后,LNCaP-bic以及其父代LNCaP细胞AR和C-jun在基因表达水平均得到增强。Western blotting提示
LNCaP-bic细胞中C-jun的磷酸化水平高于LNCaP细胞,同时其PSA蛋白表达也更强。免疫沉淀结果提示多西他赛使
LNCaP-bic细胞株中的AR和C-jun有更高的相关作用。结论多西他赛可以激活AR非配体依赖的转录功能,AR和C-jun之间
的相互作用可能影响多西他赛对前列腺癌的化疗结果。
     

漆树酸对人前列腺癌细胞 LNCaP 细胞周期的影响及机制

目的：观察漆树酸对人前列腺癌细胞 LNCaP 细胞周期的影响并分析其机制。方法人前列腺癌细胞 LNCaP 经漆树酸处理后,MTS 法观察不同时间、不同浓度的漆树酸对细胞增殖率的影响,流式细胞术分析细胞周期变化,Western blot 方法观察漆树酸作用后细胞周期相关因子 CDK4、CDK6、cyclin D1和 P27蛋白水平的表达变化。结果（1）漆树酸时间和浓度依赖性地抑制细胞增殖;（2）经漆树酸处理后的细胞出现生长抑制,细胞主要阻滞在 G0／G1期;（3）漆树酸作用细胞后,CDK4、CDK6、cyclin D1蛋白表达水平低于溶剂对照组,而 P27蛋白表达水平高于溶剂对照组。结论漆树酸可抑制 LNCaP 细胞增殖,其机制可能是与细胞周期相关蛋白 P27的上调, CDK4、CDK6、cyclin D1表达下调有关,导致细胞阻滞在 G0／G1期。     

奥沙利铂对人舌鳞癌CAL27细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的：探讨奥沙利铂（Oxaliplatin）对人舌鳞状细胞癌（简称舌鳞癌）CAL27细胞增殖和凋亡的影响,并阐明其潜在作用机制。方法：采用不同浓度（0、10、20、40和80 mg·L^-1）Oxaliplatin处理CAL27细胞,分别作为对照组和10、20、40及80 mg·L^-1 Oxaliplatin组,采用结晶紫染色法观察各组CAL27细胞形态表现,CCK-8法检测各组CAL27细胞增殖率,流式细胞术检测不同细胞周期CAL27细胞百分比和凋亡率,实时荧光定量PCR法检测各组CAL27细胞中周期蛋白依赖性激酶2（CDK2）和细胞周期蛋白E（cyclin E）mRNA表达水平,Western blotting法检测各组CAL27细胞中抗凋亡蛋白survivin和促凋亡蛋白Bax的表达水平。结果：与对照组比较,40 mg·L^-1 Oxaliplatin组CAL27细胞出现一定程度的皱缩,80 mg·L^-1 Oxaliplatin组CAL27细胞明显失去原有形态,细胞间连接丧失。与对照组比较,10、20、40和80 mg·L^-1 Oxaliplatin组CAL27细胞增殖率明显降低（P<0.05或P<0.01）。与对照组比较,40 mg·L^-1 Oxaliplatin组G₀/G₁期CAL27细胞百分比明显升高（P<0.01）,CDK2和cyclin E mRNA表达水平明显降低（P<0.05）。与对照组比较,40与80 mg·L^-1 Oxaliplatin组CAL27细胞凋亡率明显升高（P<0.01）。与对照组比较,40和80 mg·L^-1 Oxaliplatin组CAL27细胞中survivin蛋白表达水平明显降低（P<0.01）,Bax蛋白表达水平则明显升高（P<0.05或P<0.01）。结论：Oxaliplatin能够抑制CAL27细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与细胞发生G₀/G₁期阻滞以及survivin蛋白表达水平降低和Bax蛋白表达水平升高有关。     

E6-AP对前列腺癌细胞株LNCaP细胞增殖和细胞周期的影响

目的:研究E6相关蛋白(E6-AP)对前列腺癌细胞增殖和细胞周期的影响,阐明E6-AP在雄激素受体通路中的作用机制及在前列腺癌发生发展中的作用.方法:采用电穿孔方法制备tTA及E6-AP稳定转染细胞株;利用强力霉素(DOX)的调节作用,通过MTT实验观察E6-AP过表达及低表达对LNCaP细胞增殖的影响;利用流式细胞仪...     

miRNA-21在激素非依赖前列腺癌细胞系PC3中的表达及对其增殖和侵袭性影响

目的：探讨miRNA-21在激素非依赖前列腺癌细胞系PC3中的表达及对其细胞增殖和侵袭性的影响。方法：应用RT-PCR检查激素非依赖前列腺癌细胞系PC3在转染miRNA-21抑制剂后miRNA-21的表达情况;用CCK-8和Transwell小室分别检测转染miRNA-21抑制剂后PC3细胞的增殖与侵袭能力。结果：RT-PCR显示,转染组miRNA-21的表达低于空白转染对照组（ P＜0．05）;CCK-8和Transwell小室检测结果显示,转染组PC3细胞体外增殖及侵袭力明显降低（ P＜0．01）。结论：降低miRNA-21在激素非依赖前列腺癌细胞系PC3中的表达可抑制其增殖及侵袭力,这个发现为临床治疗非依赖性前列腺癌增殖及侵袭提供了新思路和方法。     

环孢素对体外培养人系膜细胞增殖、凋亡及细胞周期影响的研究

目的 观察环孢素A对系膜细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响.方法 对体外培养的人肾小球系膜细胞分别加入0.01,0.1,1,2,5 μmol/L的环孢素A,药物作用24 h,48 h,72 h后用MTT法检测细胞增殖,药物作用48 h后采用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,同时每种方法均设立对照组(不加药物干预组).结果 ①环孢素A能时间、剂量依赖性地抑制系膜细胞增殖,以72 h抑制作用最为明显;不同药物浓度在作用24 h,48 h,72 h后,系膜细胞增殖与对照相比差异均具有统计学意义(P<0.05);②环孢素A可阻滞细胞周期,使G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,且随着药物浓度的增加,G0/G1期所占百分比逐渐增高,S期所占百分比逐渐降低,且其差异与对照相比具有统计学意义(P<0.05);③高浓度环孢素A可促进系膜细胞的凋亡.结论 环孢素A可显著抑制系膜细胞增殖,使系膜细胞阻滞于G0/G1期;并且环孢素A有诱导系膜细胞凋亡的作用.     

人骨形成蛋白-2对人脑胶质瘤细胞周期和增殖的影响

目的 探讨人骨形成蛋白（ｒｈＢＭＰ－２）对体内,外人脑胶质瘤ＳＨＧ４４细胞周期和增殖的影响。方法 体外培养人脑胶质瘤细胞,绘制ｒｈＢＭＰ－２作用前、后的ＳＨＧ４４细胞生长曲线,ＭＴＴ法测定ｒｈＢＭＰ－２对ＳＨＧ４４细胞的增殖影响;以流式细胞仪、电镜和琼脂糖凝胶电泳分别检测其细胞周期、超微结构和ＤＮＡ片段改变,观察局部注射ｒｈＢＭＰ－２对裸鼠皮下ＳＨＧ４４胶质瘤增长的影响,结果 ｒｈＢＭＰ－２可抑制     

二甲基阿米洛利对人肺癌细胞增殖及细胞周期相关蛋白的影响

目的 研究二甲基阿米洛利(dimethyl amiloride,DMA)对人高转移巨细胞肺癌细胞PGCL3增殖的作用及对细胞周期相关蛋白的影响.方法 不同浓度的DMA作用于PGCL3细胞,用MTT法检测对细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测DMA对PGCL3细胞周期的影响;Western blot检测DMA对细胞p21、cyclinA、细胞周期依赖激酶2(cell cycle depend on kinase 2,CDK2)、cyclinB1和细胞分裂周期基因25B(cell dividecycle 25B,Cdc25B)蛋白表达以及CDK2和Cdc25B蛋白活性的影响.结果 DMA可抑制PGCL3细胞的增殖,并呈时间和浓度依赖性.DMA阻滞细胞于G2/M期和S期,上调p21蛋白表达,下调cyclinB1蛋白表达,降低CDK2和Cdc25B蛋白活性,但对cyclinA、CDK2和Cdc25B蛋白表达水平无影响.结论 DMA可抑制人肺癌细胞增殖,并改变某些细胞周期相关蛋白的袁达和活性,这可能是其抑制肿瘤的机制之一.     

新城疫病毒对TSCCa细胞survivin表达及细胞周期的影响

目的 研究新城疫病毒(NDV)对人舌鳞癌TSCCa细胞survivin表达及细胞周期的影响.方法 通过NDV体外感染人舌鳞癌TSCCa细胞,MTT方法 检测TSCCa细胞的生长情况;采用RT-PCR和Western bloting检测survivin表达变化;流式细胞术分析检测NDV感染后TSCCa细胞分裂周期各时相的变化及细胞凋亡情况.结果 NDV感染后TSCCa细胞降低survivin表达,细胞凋亡率增加,S和G2/M期细胞减少,增殖指数(PI)降低,与阴性对照组比较有显著性差异(P<0.01).结论 NDV感染可抑制TSCCa细胞survivin的表达,影响细胞周期,诱导细胞凋亡.     

雄激素受体反义RNA对前列腺癌细胞LNCaP生长特性的影响

目的　观察雄激素受体 (Androgenreceptor ,AR)反义RNA对前列腺癌细胞LNCaP生长特性的影响。方法　用含不同浓度雄激素培养基培养前列腺癌细胞LNCaP、LNCaPas AR(基因组DNA中整合了AR反义RNA逆转录病毒载体的LNCaP细胞 )和LNCaPNeo(基因组DNA中整合了空逆转录病毒载体的LNCaP细胞 ) ,用台盘蓝染色细胞计数法及3 H 胸腺嘧啶核苷掺入试验观察体外细胞增殖状况。结果　在 1nmol/L合成雄激素R1881、10nmol/L 17β 雌二醇和 1nmol/L孕酮浓度下 ,与LNCaPNeo和LNCaP相比 ,LNCaPas AR生长显著受抑制 (P <0 0 5 ) ,LNCaPNeo与LNCaP细胞增殖无显著性差异 (P >0 0 5 )。3 H 胸腺嘧啶核苷掺入试验表明LNCaPas AR的DNA合成明显抑制率非常显著地高于对照组LNCaPNeoDNA合成抑制率 (P <0 0 1) ,显微镜下观察见LNCaP和LNCaPNeo生长状态良好 ,而LNCaPas AR细胞稀疏且有较多细胞死亡。结论　雄激素受体反义RNA可以改变LNCaP细胞的雄激素非依赖性特征 ,抑制前列腺癌细胞LNCaP对激素的增殖反应     

人疱疹病毒6B感染对Molt3细胞增殖和细胞周期的影响

目的 :研究人疱疹病毒(human herpesvirus,HHV)6B感染T淋巴细胞系Molt3后对其细胞增殖和周期的影响。方法 :HHV-6B感染Molt3细胞后,倒置显微镜观察细胞形态变化,PCR鉴定Molt3细胞中HHV-6 U22基因,间接免疫荧光及Western blot检测HHV-6蛋白表达;MTT检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期变化,荧光定量PCR检测细胞周期相关蛋白m RNA水平变化。结果:HHV-6B感染48 h后,Molt3细胞出现典型细胞病变。PCR检测到感染组细胞中含有HHV-6 U22基因,间接免疫荧光及Western blot均检测到HHV-6蛋白表达。MTT显示HHV-6B能明显抑制Molt3细胞的增殖。HHV-6B感染后Molt3细胞周期发生改变,与对照组相比,感染组细胞G1期增多,S期和G2期减少。实时荧光定量PCR表明HHV-6B感染后cyclin E1m RNA水平降低,p53 m RNA水平升高。结论:HHV-6B能够有效感染Molt3细胞引起典型的细胞病变效应,HHV-6B感染使细胞周期阻滞在G1期从而抑制细胞增殖。