VEGF对大鼠慢性高眼压视网膜神经节细胞的作用

目的：探讨血管内皮生长因子（vascular endothelium growth factor, VEGF）对大鼠视网膜色素上皮生长因子（pigment epithelium-derived factor, PEDF）表达的影响及VEGF对慢性高眼压条件下神经节细胞（retinal ganglion cells, RGCs）的保护作用和可能途径。方法：雌性SD大鼠30只,随机分为高眼压＋VEGF组A(包括A3d,A14d)、高眼压＋安慰剂组B(包括B3d,B14d)和正常＋VEGF组C(包括C3d,C14d),A、B组模型制作应用巩膜浅层静脉烧烙法建立慢性高眼压模型,C组只剪开球结膜,不烧烙巩膜浅静脉。A、C组在模型建立后即刻用10μL微注射器于大鼠角膜缘后2mm处刺入玻璃体腔,抽出玻璃体2μL,再向玻璃体腔内注射2μL（0.05μg/μL）重组大鼠VEGF,B组同法注入等量的去离子水。在3d和14d后处死动物,取眼球,冰冻切片,免疫组织化学法观察视网膜PEDF的表达,用TUNEL染色检测各组视网膜神经节细胞的凋亡,免疫荧光双标观察PEDF染色阳性的细胞是何细胞。结果：术后眼压明显升高(P<0.05),术后3d和14d的眼压无显著性差异。视网膜PEDF染色阳性细胞,B组多于A组,A组多于C组;TUNEL荧光染色显示VEGF高眼压组RGCs的凋亡明显的少于高眼压组。 结论：玻璃体腔注射VEGF可减少高眼压视网膜神经节细胞的凋亡。     

黄芪多糖对急性高眼压诱导大鼠视网膜神经节细胞的保护作用

背景青光眼患者视神经保护的问题日益引起关注。黄芪多糖（APS）是黄芪的主要活性成分,可增加再生神经蛋白的表达并促进损伤的周围神经修复,但其对视网膜神经节细胞（RGCs）再生作用的研究少见报道。目的探讨APS对急性高眼压状态下RGCs的保护作用。方法采用抽签法将40只SPF级sD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、低剂量APS组和高剂量APS组,每组各10只。低剂量APS组和高剂量APS组大鼠自实验开始每日分别给予APS500mg／kg、2000mg／kg（均溶于2．5ml生理盐水）灌胃,模型对照组仅给予2．5ml生理盐水灌胃,正常对照组不做任何处理。用药2周后,除正常对照组外,其余3个组均抽取0．2ml房水继而单眼前房注射等体积甲基纤维素使眼压升高至22mmHg（1mmHg=0．133kPa）以上制作急性高眼压模型。造模后5d,过量麻醉法处死动物,摘除该眼球制作视网膜石蜡切片,常规组织病理学观察视网膜的形态结构变化,采用免疫组织化学法检测caspase-3蛋白在大鼠视网膜中的表达,采用TUNEL染色法观察和计算各组大鼠RGCs的凋亡率。ImageProPlus5．1软件测量各组大鼠视网膜厚度和神经纤维层厚度。结果大鼠成模后5d,模型对照组、低剂量APS组和高剂量APS组大鼠的眼压均明显高于正常对照组,差异均有统计学意义（t=-8．900、-10．700、-11．300,P〈0．01）。正常对照组大鼠视网膜形态正常;模型对照组大鼠视网膜水肿,细胞排列紊乱;低剂量APS组视网膜可见空泡样变性,但视网膜细胞排列较模型对照组整齐,视网膜水肿减轻;高剂量APS组视网膜水肿较明显。低剂量APS组视网膜厚度、外颗粒层及视神经纤维层厚度值均明显低于模型对照组,差异均有统计学意义（t=-23．700、-14．770、-11．640,P〈0．01）,但高剂量APS组外颗粒层及视神经纤维层厚度与模型对照组比较差异均无统计学意义（t=-0．780、-0．460,P〉0．05）。低剂量APS组大鼠caspase-3蛋白阳性RGCs百分比及RGCs凋亡百分率均明显低于模型对照组（caspase-3蛋白：F=87．710,P=0．001;RGCs凋亡：F=272．840,P〈0．01）,差异均有统计学意义（t=-11．700、-8．600,P〈0．01）,高剂量APS组与模型对照组比较caspase-3蛋白阳性RGCs百分比及RGCs凋亡百分率的差异均有统计学意义（t=-7．900、-6．400,P〈0．05）。结论500mg／kgAPS可有效抑制急性高眼压模型大鼠的视网膜水肿及RGCs的凋亡率,对急性高眼压大鼠的RGCs有保护作用。     

TGF-β2反义寡核苷酸抑制抗青光眼术后滤过泡瘢痕的实验研究

目的观察TGF-β2反义寡核苷酸对青光眼滤过术后结膜囊成纤维细胞的转化、增生的影响。方法制备兔青光眼滤过手术模型。右眼结膜下注射TGF—β2反义寡核苷酸（A组）；左眼分别注射TGF-β2错义寡核苷酸（B组）、PBS（C组），于造模后第4、7、14、28d取术区结膜囊标本进行免疫组织化学染色和电镜观察。结果A组眼压术后第14d和第21d比B组（P〈0．01）和C组（P〈0．05）显著降低；滤泡平均生存时间A组（17．2d）较B组（14．5d）、C组（13．5d）明显延长（P〈0．05）；A组α—SMA和PCNA阳性成纤维细胞数明显少于B、C组；成纤维细胞的超微结构A组和B、C组比较无明显区别。结论TGF-β2反义寡核苷酸可降低兔青光眼滤过术后眼压，延长滤泡生存时间，抑制兔青光眼滤过术后结膜囊成纤维细胞的转化、增生。     

活血化瘀汤对急性高眼压模型大鼠视网膜谷氨酸转运体表达的影响

背景高眼压及缺血缺氧可使眼内谷氨酸的浓度增加,对视网膜神经节细胞（RGCs）造成兴奋性损伤,诱导其凋亡。国内外已进行了大量的谷氨酸兴奋性损伤的防护研究,但目前尚未见从细胞和分子水平对中药复方进行相关研究的报道。目的探讨活血化瘀汤方剂对急性高眼压模型大鼠视网膜谷氨酸转运体L-谷氨酸／L-天门冬氨酸转运体（GLAST）表达的影响。方法健康Wistar大鼠45只,随机分为正常对照组（5只）、单纯加压组（20只）、活血化瘀汤治疗组（20只）,后2组随机取一侧眼制作急性高眼压模型,活血化瘀汤治疗组于造模后即刻给予活血化瘀汤灌胃治疗,分别于给药后1、3、7、14d各时间点随机处死5只大鼠,单纯加压组分别在相同时间点随机处死5只大鼠,并获取其视网膜组织。用实时定量聚合酶链反应（real—time PCR）法检测3组大鼠视网膜中GLAST的表达变化,并对不同时间点视网膜组织行透射电镜及光学显微镜观察。结果急性高眼压损伤后3d,光学显微镜下可见视网膜变薄,14d时视网膜变得更薄,内层较显著,RGCs数量减少。透射电镜下,急性高眼压损伤后1d可见RGCs细胞器变性、肿胀,14d时出现部分细胞凋亡。Real—time PCR结果显示,单纯加压组及活血化瘀汤治疗组视网膜中GLAST mRNA的表达量在造模后1d快速上调,与正常对照组大鼠比较差异有统计学意义（P〈0．05）;3d时单纯加压组大鼠视网膜中GLAST mRNA表达量下降,与活血化瘀汤治疗组比较差异有统计学意义（P〈0．05）;7d及1dd时单纯加压组与活血化瘀汤治疗组大鼠视网膜中GLAST mRNA的表达量均恢复至正常水平,2组间差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论活血化瘀汤方剂有可能通过增强GLAST的表达减轻急性高眼压对大鼠视网膜的损伤。     

慢性高眼压大鼠模型视网膜中Brn-3a表达的动态变化

背景Brn-3a是最近发现的一种视网膜神经节细胞（RGCs）特异性标记物。高眼压的视功能损害主要与RGCs损伤有关,但高眼压大鼠视网膜损伤与Brn-3a表达的关系尚不清楚。目的观察慢性高眼压大鼠不同时期眼压、视网膜的形态学和Brn-3a表达的变化。方法将35只健康成年SD大鼠用随机数字表法随机分为正常对照组5只和模型组30只,术前测量眼压。模型组大鼠一侧眼用Shareef—Sharma手术方法建立慢性高眼压模型,对侧眼只切开结膜,不烙闭巩膜表层静脉作为伪手术眼。按照术后不同处理时间随机将模型组分为术后1、3、5、7、14、28d组共6个亚组,每组5只。分别于术前及术后30min,1、3、7、14、28d用Tono—Pen接触式眼压笔测量双眼眼压。各模型组于术后各相应时间点与正常对照组分别取5只大鼠过量麻醉处死,制作视网膜石蜡切片行常规组织病理学检查,评价视网膜形态变化,用甲苯胺蓝染色法计数RGCs,采用免疫组织化学法检测各时间点各组大鼠Brn-3a在RGCs中的表达。结果高眼压模型组大鼠术后各时间点眼压均明显高于术前,差异有统计学意义（F=95．631,P=0．001）,术后28d时眼压是正常对照组大鼠眼压的1．59倍。与伪手术眼相比,模型眼术后各时间点眼压均明显升高,差异均有统计学意义（q=18．418、15．261、10．987、6．931、4．975、2．962,P〈0．05）。正常对照组RGCs数量为（29．08±1．98）个／高倍视野,造模后3、5、7、14、28d组大鼠RGCs计数逐渐下降,差异均有统计学意义（t=5．943、8．034、15．023、17．004、19．371,P〈0．05）。免疫组织化学染色表明,随着造模时间的延长,各组Brn-3a阳性RGCs数量逐渐下降,差异有统计学意义（F=127．583,P=0．000）。结论采用Shareef—Sharma法可成功建立大鼠慢性高眼压动物模型,其眼压为中等程度升高;高眼压持续时间越长,RGCs的丢失越多。Brn-3a仅在RGCs层表达,随眼压持续时间的增加,Brn-3a的表达减少。     

环孢素A壳聚糖纳米微粒防治增生性玻璃体视网膜病变

目的评价环孢素A（CsA）壳聚糖纳米微粒抑制增生性玻璃体视网膜病变（PVR）的有效性和安全性。方法20只健康中华大耳白兔制作的PVR动物模型随机分为4组：A组玻璃体腔内注入0．1mL平衡液，B组玻璃体腔内注入0．1mL壳聚糖溶液（含壳聚糖2mg），C组玻璃体腔内注入0．1mL CsA溶液（含CsA0．1mg），D组玻璃体腔内注入0．1mLCsA壳聚糖纳米粒（含CsA0．1mg）。以检眼镜、电生理、光镜和电镜观察视网膜变化情况。结果玻璃体腔注药2周及4周后D组PVR等级均明显较A、B、C三组轻，组间差异具有统计学意义（P〈0．05）；而A组与B组、B组与C组之间比较差异无统计学意义（P〉0．05）。D组注药前与注药后4周暗适应闪光ERGb波振幅的差异无统计学意义（P〉0．05）；D组注药后视网膜组织病理及超微结构未发现明显异常。结论一次性兔眼玻璃体腔注入CsA壳聚糖纳米微粒（含CsA0．1mg）能明显抑制或延缓PVR的发生，并具有生物相容性及安全性。     

抗树突状细胞单克隆抗体对大鼠角膜移植术后植片内IFN-γmRNA表达和血清IL-2水平的影响

目的用抗树突状细胞单克隆抗体（anti—dendritic cell monoclonal antibody，DC—McAb）抑制树突状细胞（dendritic cell，DC），观察其对大鼠角膜移植排斥反应及植片内IFN-γ mRNA的表达、血清IL-2水平的影响。方法以Wistar大鼠为供体，SD大鼠为受体，分A：对照组：A0：阳性对照组；B：腹腔给药组；C：结膜下给药组；D：保留受体上皮瓣组。A、A0、B、C组予常规穿透角膜移植术．D组保留受体上皮瓣。每组术前3d及术日，术后第1、第2、第3、第5、第7、第9、第11天给药，A组：腹腔注射灭菌注射用水0．5ml，A0组：腹腔注射小鼠抗大鼠IgG 0．1ml＋灭菌注射用水0．4m1．B、D组：DC—McAb 0．1ml＋灭菌注射用水0．4ml，C组：结膜下注射DC—McAb 0．05ml。术后裂隙灯显微镜观察排斥反应情况，记录各组角膜发生排斥反应的时间。A、B、C、D组分别于术后第3、第7、第14和第21天采血清．ELISA法测IL-2水平。A、B组术后第7天取角膜植片，RT—PCR法检测IFN-γmRNA的表达情况。结果A组术后（7．63±0．74）d出现排斥反应，A0组（7．50±0．54）d，与A组相比差异无显著性（P〉0．05）；B组（17．11±1．17）d、C组（13．86±0．69）d、D组（17．88±0．84）d，与A组相比差异有显著性（P〈0．01）；C组与B、D组相比，差异有显著性（P〈0．01）；B组与D组相比，差异无显著性（P〉0．05）。A组角膜植片IFN-γmRNA可检测到有较高表达，B组的表达量很少或检测不到，两组之间的差异较为明显。正常SD大鼠血清IL-2浓度为（35．18±2．59）pg／ml，移植术后3d略有升高，7d时明显升高，14d时IL-2的水平达高峰，21d时下降，B、C、D组升高幅度与A组相比明显减少（P〈0．05），C组与B、D组相比升高幅度较大（P〈0．05），B、D两组之间无明显差异（P〉0．05）。结论抗树突状细胞单克隆抗体可抑制大鼠角膜移植排斥反应，延?     

透明质酸酶对外伤性玻璃体积血转归的影响

目的探讨透明质酸酶对兔眼外伤性玻璃体积血转归的影响。方法28只新西兰白兔,右眼为外伤性玻璃体积血模型,左眼为空白对照眼。1d后随机分为实验组和阳性对照组,每组14只兔（14只眼）。实验组玻璃体腔注射透明质酸酶0．002umol／（min·L）,阳性对照组玻璃体腔注射0．1mL BSS。分别于给药后1、3、7、14、21、28d测量眼压,行裂隙灯及眼底检查。每组抽取2只实验兔行眼球摘除,抽取玻璃体液测定碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的质量浓度,取眼球壁行组织病理学检查。结果给药14d后,实验组的玻璃体混浊程度明显低于阳性对照组,各组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。给药后1d、3d,实验组眼压和空白对照组眼压比较差异均有统计学意义（P〈0．05）,与阳性对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。随着时间推移,玻璃体中bFGF的质量浓度均增高,阳性对照组增高更明显。组织病理学检查见实验组和阳性对照组视网膜均出现了水肿和神经节细胞空泡样变、内界膜增厚等改变,但实验组较阳性对照组形成增生膜少。结论透明质酸酶20IU于兔眼玻璃体腔内注射对视网膜无毒性作用,可加速外伤性玻璃体积血的消散,造成眼压一过性降低。     

Caspase-3抑制剂Z-DEVD—FMK对兔外伤性视神经的保护作用

目的观察caspase-3抑制剂Z—DEVD—FMK对兔外伤性视神经损伤后的神经保护作用。方法中国纯种大耳白兔104只,从中随机选取8只兔（16只眼）作为空白对照组（N组,不作任何处理）,其余96只（192只眼）作为实验组,实验组再分为玻璃体腔注射组和眼周注射组．每组48只（96只眼）。玻璃体腔注射组中每只兔的右眼为caspase-3抑制剂注射组（A组）,左眼为玻璃体腔DMSO液注射组（B组）。眼周注射组中每只兔的右眼为球周caspase-3抑制剂注射组（C组）,左眼为球周DMSO液注射组（D组）。又根据给药后不同的观察时间将每组分为1d组、4d组、7d组、10d组、14d组、21d组六个亚组,每个亚组8只眼。应用液压冲击颅脑损伤仪（fluid percussion brain ijury device,FPI）建立免视神经损伤动物模型,分别于术后第1、第4、第7、第10、第14、第21天进行闪光视觉诱发电位（flash—visual evoked potential．F—VEP）、眼眶核磁共振（nuclear magnetic resonance imaging,MRI）检查,并应用TUNEL技术检测视网膜神经节细胞（retinal ganglion cell,RGC）的凋亡。数据采用SPSS12．0统计软件,行单因素以及析因方差分析。结果①F—VEP：在术后第7、第10、第14和第21天,A组和C组的主波潜伏期逐渐缩短．振幅逐渐升高．与B组和D组相比差异均有统计学意义（P〈0．05）。A组和C组主波潜伏期在术后第4天虽然仍在延长,但与B组和D组比较差异有统计学意义（P〈0．05）,A组伤后第21天的潜伏期和振幅分别为（65．46±6．97）ms和（6．75±2．75）mV,C组分别为（72．06±6．57）ms和（6．02±1．98）mV．两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。空白对照组潜伏期和振幅与其他各组的相应时间点比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）。②MRI：A组和C组的视神经MRI可见,伤后第7天粗大的视神经开始消退,至第14、第21天水肿     

腹腔注射银杏叶提取物促进大鼠视神经钳夹伤后视网膜神经节细胞存活

目的探讨银杏叶提取物GBE50（Ginkgo biloba extract 50）对大鼠视神经钳夹伤后视网膜神经节细胞（RGCs）的保护作用。方法65只SD大鼠随机等分为正常对照组、假手术组、模型组、模型＋生理盐水（NS）组、模型＋GBE 50组,每只鼠的右眼用于实验。正常对照组不作任何处理;假手术组仅分离暴露视神经;其余3个组分离暴露视神经并进行钳夹：模型＋NS组和模型＋GBE 50组分别于实验前1周每日腹腔注射相应体积NS和0．35％GBE 50（100mg／kg）,术后继续给药4周;术后4d,各组随机处死3只大鼠作凋亡RGCs的TUNEL荧光标记;术后4周后处死所有大鼠作光镜检查并计数视网膜垂直经线RGCs。结果正常对照组和假手术组未见TUNEL阳性RGCs;其余3组均见TUNEL阳性RGCs,但模型＋GBE 50组较前两组少。术后4周RGCs数目：模型组（131±10个）、模型＋NS组（137±13个）、模型＋GBE 50组（198±15个）均少于正常对照组和假手术组（P〈0．05）;模型组与模型＋NS组差异无统计学意义（P〉0．05）;但模型＋GBE 50组显著多于模型组和模型＋NS组（P〈0．05）。结论腹腔注射银杏叶提取物GBE 50能部分抑制大鼠视神经钳夹后RGCs凋亡,具有一定的RGCs保护作用。     

替普瑞酮对大鼠慢性高眼压视网膜HSP70表达的影响

目的：研究慢性高眼压大鼠视网膜HSP70表达的变化及替普瑞酮的影响。方法：Wistar大鼠70只随机分为3组：空白对照组10只;慢性高眼压模型组30只;慢性高眼压模型＋GGA组30只。采用烧灼巩膜浅层静脉的方法制备大鼠慢性高眼压模型。模型成功后给予替普瑞酮800mg／（kg·d）每目灌胃。应用免疫组织化学方法观察应用及未应用替普瑞酮的慢性高眼压大鼠视网膜不同时点的差异及HSP70表达的变化。结果：平均眼压高于正常眼压40％的手术眼为造模成功。与正常对照组相比,慢性高眼压大鼠应用与未应用替普瑞酮者,视网膜均随着高眼压时间的延长逐渐出现形态学变化,于高眼压的21d和28d视网膜变薄,节细胞数量减少;在此过程中,HSP70表达增多。慢性高眼压大鼠视网膜应用替普瑞酮者与未应用提普瑞酮者相比,其形态学变化较小,而HSPT0表达则明显增多,两者差异具有统计学意义（P〈0．01）。结论：替普瑞酮通过上调HSP70表达发挥对慢性高眼压视网膜的保护作用。     

Nestin在高眼压大鼠视网膜神经胶质细胞中的表达

目的探讨第六类中间丝蛋白nestin在高眼压大鼠视网膜神经胶质细胞中的表达情况及意义。方法42只SD大鼠采用烧灼右眼涡静脉的方法制作高眼压模型为模型组,剪开左眼结膜作为假手术组。测量并记录眼压,计数术后不同时间点视网膜神经节细胞（RGCs）数。Westernblot半定量分析术后视网膜内nestin蛋白含量。免疫电镜检测nestin在高眼压大鼠视网膜Mailer细胞上的诱导表达。行nestin／谷氨酰胺合成酶（GS）或nestin／胶质纤维酸性蛋白（GFAP）免疫荧光双标,共焦显微镜观察nestin／GFAP在Mailer细胞上的表达情况。结果术后各时间点模型组与假手术组眼压的差异有统计学意义（P〈0．05）。术后1～3周模型组RGCs数量显著减少,与假手术组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。免疫荧光结果显示术后2h～3周,模型组nestin在Maller细胞上表达的荧光强度逐渐增强,与假手术组比较差异有统计学意义。Westernblot半定量分析结果与免疫荧光染色结果一致。免疫电镜结果进一步证实眼压升高后Mailer细胞上出现nestin的诱导表达。结论Nestin在Maller细胞上的诱导表达是Mailer细胞对眼压升高产生的一种反应,nestin的表达量与病程进展相一致。眼压升高时,nestin在Mailer细胞上诱导表达,尤其在足板处的强烈表达,可能对RGCs具有保护作用。Nestin有望成为一种新的研究视网膜损伤的生物标记物。     

氨基胍对大鼠慢性高眼压视网膜PI-3K表达的影响

目的研究慢性高眼压过程中大鼠视网膜磷脂酰肌醇-3-激酶（PI-3K）表达的变化及应用氨基胍对其表达的影响，探讨氨基胍对慢性高眼压视网膜的保护作用。方法应用免疫组织化学、RT-PCR和Westernblot的方法，观察应用及未应用氨基胍的慢性高眼压大鼠视网膜在不同时点的差异及PI-3K表达的变化。结果与正常对照组相比，慢性高眼压大鼠应用与未应用氨基胍者，视网膜均随着高眼压时间的延长逐渐出现形态学变化，于高眼压的第21d视网膜变薄，节细胞数量减少；在此过程中，PI-3K表达增多。慢性高眼压大鼠的视网膜应用氨基胍者与未应用氨基胍者相比，其形态学变化较小，而PI-3K表达则明显增多，两者差异具有统计学意义（P〈0．01）。结论PI-3K是慢性高眼压视网膜损伤过程中的保护性因素，氨基胍通过上调其表达发挥对视网膜的保护作用。     

大鼠高眼压模型中热休克蛋白27抗体及视网膜神经节细胞凋亡的研究

背景 青光眼是一组以视网膜神经节细胞( RGCs)慢性丢失为特征的常见致盲性眼病.目前青光眼的发病机制尚不完全清楚,热休克蛋白27 (HSP27)抗体可能与青光眼视神经病变有关系. 目的 通过建立大鼠高眼压模型,检测血清中HSP27抗体的表达及RGCs的凋亡,了解HSP27抗体与眼压及RGCs凋亡的关系.方法 将51只Wistar大鼠按随机数字表法随机分为高眼压组34只和伪手术对照组17只,均取右眼为实验眼,左眼为对照眼.采用双极水下电凝器电凝高眼压组大鼠右眼巩膜表面3组静脉,建立高眼压动物模型.伪手术对照组大鼠右眼只剪开上方球结膜,不做电凝.分别于术后1、2、4、6、8周处死高眼压组大鼠6、6、6、8、8只,伪手术对照组大鼠3、3、3、4、4只.处死前测大鼠双眼眼压,并收集血清1 ml测定大鼠血清HSP27抗体.10只大鼠(2个组各时间点各1只)实验眼剥离视网膜,经匀浆后提取视网膜蛋白质用于Western blot分析.摘除剩余41只大鼠双侧眼球,制作石蜡切片.TUNEL法检测视网膜组织切片中RGCs的凋亡情况.结果 大鼠造模后3d,1、2、4、6、8周实验眼眼压较术前均明显增高,各时间点的总体比较差异有统计学意义( F=318.502,P＜0.01),但伪手术对照组手术前后眼压变化差异无统计学意义(F=2.076,P＞0.05).高眼压组大鼠实验眼视网膜HSP27蛋白水平与伪手术对照组大鼠实验眼比较均有升高.高眼压组大鼠术后1、2、4、6、8周血清中HSP27抗体各时间点总体比较差异有统计学意义(F=154.221,P＜0.01),随着造模时间的延长,血清HSP27抗体呈逐渐升高的趋势,而伪手术对照组手术前后HSP27抗体的变化差异无统计学意义( F=0.422,P＞0.05).高眼压组造模后实验眼不同时间点RGCs凋亡阳性细胞率比较差异有统计学意义(x2=856.12,P＜0.05).高眼压组不同时间点RGCs凋亡阳性细胞率均较伪手术对照组高(P＜0.05).结论 随着眼压的升高以及高眼压持续时间的延长,大鼠血清中的HSP27抗体水平逐渐升高,视网膜在高眼压状态下HSP27表达上调.逐渐升高的HSP27抗体水平与RGCs凋亡增加的趋势一致.     

超声联合载色素上皮源性因子免疫纳米脂质体靶向治疗脉络膜新生血管

目的研究超声联合载色素上皮源性因子（PEDF）免疫纳米脂质体对脉络膜新生血管（CNV）的靶向治疗作用。方法以CNV内皮细胞上血管内皮生长因子受体-2（VEGFR-2）为靶向位点,将其配体寡肽连接到纳米脂质体上,再反向装载PEDF,制备能与CNV内皮细胞特异性结合的免疫纳米脂质体。对48只BN大鼠右眼行半导体倍频激光（波长为532nm）光凝术建立CNV模型。光凝后7d,实验组鼠尾静脉分别注射游离PEDF、载PEDF脂质体、载PEDF免疫脂质体,联合眼局部超声波辐照20s,并设立玻璃体腔注射PEDF组和对照组。光凝后14d,脉络膜巩膜冰冻切片观察免疫脂质体对CNV的靶向性。FITC-右旋糖酐标记脉络膜巩膜铺片行新生血管定量分析。结果载PEDF免疫脂质体可特异性靶向结合CNV。CNV与FITC标记的PEDF免疫纳米脂质体结合而呈现绿色荧光,正常脉络膜血管不显现荧光。玻璃体腔注射PEDF组及鼠尾静脉注射游离PEDF、载PEDF脂质体、载PEDF免疫脂质体组CNV面积均较对照组减少,差异有统计学意义（P〈0.05）。超声联合PEDF免疫纳米脂质体组对CNV的抑制作用强于玻璃体腔注射PEDF组（P〈0.05）。结论动物实验证实PEDF免疫纳米脂质体可特异性结合CNV细胞,超声可增强PEDF免疫纳米脂质体对CNV的抑制作用,该方法有望为眼新生血管的治疗提供新途径。     

美金胺对急性高眼压大鼠视网膜神经节细胞保护作用的实验研究

目的探讨美金胺对急性高眼压大鼠视网膜神经节细胞（retinal ganglion cells，RGCs）的保护作用。方法以生理盐水在前房内加压灌注制作大鼠急性高眼压模型，然后腹腔内注射美金胺或生理盐水，分为美金胺治疗组和急性高眼压对照组各20只，另设健康对照组大鼠8只。采用免疫组织化学法和脱氧核苷酸末端转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸末端标记法（terminal deoxynucleotidyl transferase mediated 2＇-deoxyuridine 5＇-triphosphate-biotin nick end labeling，TUNEL），检测大鼠RGCs caspase-3和凋亡细胞的表达。结果健康对照组无caspase-3与凋亡细胞表达。急性高眼压对照组在高眼压6h后视网膜出现凋亡细胞，逐渐增加至24h达高峰，后逐渐减少，72h时仅有少数凋亡细胞；caspase-3表达改变与凋亡细胞表达相似。美金胺治疗组的变化规律同急性高眼压对照组。急性高眼压6，24和72h后凋亡细胞与caspase-3的表达在3组间的差异均有统计学意义（P值均〈0．01）。结论细胞凋亡可能在视网膜急性高眼压损伤过程中起重要作用，美金胺对RGCs具有保护作用。     

色素上皮衍生因子对高氧诱导的新生鼠视网膜病变的影响

目的观察色素上皮衍生因子（PEDF）对高氧诱导的新生鼠视网膜病变模型的影响。方法出生7dWistar大鼠50只,分为空气组、空气PEDF组、高氧组、高氧PBS组和高氧PEDF组5组。氧箱内饲养5d建立高氧诱导的新生鼠视网膜病变模型,12、14、16d时腹腔内注射PEDF或PBS。在鼠龄17d时,进行视网膜形态学及组织病理学检测,以及血管直径测量、周边视网膜血管覆盖率测定及视网膜新生血管计数。结果视网膜铺片可见高氧组、高氧PBS组较空气组、空气PEDF组新生血管丛增多,高氧PEDF组较高氧组、高氧PBS组视网膜新生血管减少。组织病理学检测突破视网膜内界膜的视网膜新生血管计数可见高氧PEDF组视网膜血管直径明显高于高氧组（P〈0.01）、与空气组比较差异无统计学意义（P〉0.05）;高氧组周边视网膜血管覆盖率明显高于高氧PEDF组（P〈0.01）、与空气组相比差异无统计学意义（P〉0.05）;高氧组视网膜新生血管数量明显高于高氧PEDF组（P〈0.01）、与空气组相比差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 PEDF对高氧诱导的新生鼠视网膜病变模型具有抑制作用。