miR-488-3p下调 BRCA2蛋白促进乳腺癌细胞系MCF7的侵袭与增殖

目的探讨miR-488-3p的表达与乳腺癌患者临床特征的相关性,及通过抑制易感基因(BRCA2)促进乳腺癌细胞侵袭、增殖、迁移及细胞周期在S期聚集的作用。方法用RT-qPCR检测乳腺癌组织、远端转移肿瘤组织和未转移肿瘤组织miR-488-3p的表达;检验BRCA2是否为miR-488-3p的潜在靶基因;RT-qPCR检测乳腺癌组织BRCA2 mRNA表达量;Western blot检测乳腺癌肿瘤组织BRCA2蛋白表达;用CCK8法检测吸光光度值;用流式细胞计量术检测细胞周期S期的细胞比值;用Tranwell小室法检测乳腺癌细胞系MCF7的侵袭、增殖、迁移及S期的聚集;构建乳腺癌异种移植裸鼠模型,检测裸鼠肿瘤体积和重量及miR-488-3p在miR-488-3p模拟物转染组裸鼠肿瘤组织中的表达量。结果在乳腺癌细胞miR-488-3p表达显著增高(P0.01);在远端转移肿瘤组织中明显高表达(P0.01);miR-488-3p与淋巴结转移及TNM分期表达呈明显相关(P0.05);miR-488-3p能抑制BRCA2的mRNA翻译及其蛋白表达。BRCA2对乳腺癌有抑制效果,可促进乳腺癌细胞MCF7的侵袭、增殖、迁移及在细胞周期S期聚集。上述作用可被BRCA2抑制;在裸鼠体内,miR-488-3p能促进MCF7细胞的增殖。结论 miR-488-3p抑制BRCA2,促进乳腺癌细胞增殖,有可能成为乳腺癌诊疗的新靶向。     

miR-874-3p靶向结合SDC1抑制胶质瘤血管生成拟态

目的本研究旨在探讨miR-874-3p调控胶质瘤血管生成拟态的潜在分子机制。方法应用实时定量PCR检测miR-874-3p在胶质瘤细胞系U87细胞中的表达水平;应用双荧光素酶报告基因分析系统检测miR-874-3p和SDC1的结合作用;应用CCK-8法、transwell法、体外管形成实验检测miR-874-3p或SDC1表达变化对U87细胞增殖、迁移、侵袭和管形成能力的影响。结果 miR-874-3p在U87细胞中低表达,过表达miR-874-3p显著抑制U87细胞的增殖、迁移、侵袭和管形成能力。SDC1在U87细胞中的表达上调,沉默SDC1显著抑制U87细胞增殖、迁移、侵袭和管形成能力。miR-874-3p靶向SDC1 3'UTR。结论 miR-874-3p通过靶向结合SDC1抑制胶质瘤血管生成拟态。     

CDKN2B-AS1靶向miR-411-3p调节乳腺癌细胞的生物学行为

目的探究CDKN2B-AS1靶向miR-411-3p对乳腺癌MCF-7细胞的生物学行为的影响.方法将sh-CDKN2B-AS1、miR-411 inhibitor转染于MCF-7,再共同转染于MCF-7.检测各组细胞增殖、迁移、侵袭及蛋白表达.MCF-7及转染sh-CDKN2B-AS1的MCF-7接种于小鼠体内,为Ctrl及sh-CDK组,检测肿瘤组织CDKN2B-AS1、miR-411-3p、Ki67及VEGF.结果miR-411-3p是CDKN2B-AS1的靶向位点,相比于Ctrl组,sh-CDKN2B-AS1组CDKN2B-AS1、VEGF及P38表达量降低;miR-411-3p,ki67、HIF-1 a,Caspase-3表达量上升,细胞增殖数、侵袭数及迁移率降低(P均<0.05).与Ctrl组比较,sh-CDKN2B-AS1组肿瘤质量降低,肿瘤组织CDKN2B-AS1、ki67、VEGF表达量降低,miR-411-3p表达量上升(P均<0.05).结论抑制CDKN2B-AS1表达可靶向提升miR-411-3p水平,从而抑制乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭及移植瘤生长.     

miR-1468-3p靶向JAK2调控乳腺癌细胞的凋亡

目的探讨miR-1468-3p分子通过Janus激酶2(JAK2)蛋白调控乳腺癌细胞的凋亡。方法运用TargetScan在线分析miR-1468-3p与JAK2的相关性;将JAK2的3′UTR构建进PmirGLO质粒,利用luciferase assay检测miR-1468-3p是否靶向调控JAK2;用脂质体梯度转染miR-1468-3P mimics或miR-1468-3P inhibitor转入乳腺癌MCF7细胞,通过Western blot检测JAK2的表达量和乳腺癌MCF7细胞凋亡标志蛋白表达情况。结果通过TargetScan分析,miR-1468-3p在3个区域与JAK2具有较高匹配度;通过luciferase assay发现,miR-1468-3p靶向JAK2的3′UTR;梯度转染miR-1468-3P mimics时,JAK2的表达量梯度下降,细胞凋亡标志蛋白cleaved-caspase3/caspase3、cleaved-caspase9/caspase9、BAX表达量上升,Bcl-2表达量下降(P<0.05);而用梯度转染miR-1468-3P inhibitor进乳腺癌MCF7细胞时,JAK2的表达量梯度上升,cleaved-caspase3/caspase3、cleaved-caspase9/caspase9和BAX表达量下降,Bcl-2表达量上升(P<0.05)。结论 miR-1468-3p能通过降低JAK2的表达来促进乳腺癌MCF7细胞的凋亡。     

miR-425-5p靶向FOXJ3对乳腺癌细胞的作用研究

目的 探讨微小RNA-425-5p(miR-425-5p)靶向FOXJ3对乳腺癌细胞的作用.方法 用Lipofiectamine2000分别将miR-425-5p inhibitor及NC转染至MDA-MB-231乳腺癌细胞作为miR-425-5p inhibitor组和NC组,不做任何处理的为对照组.通过RT-qPC...     

CircBIRC6调节miR-138-5p/RRM2轴对乳腺癌细胞恶性生物学行为的影响

目的 探讨环状非编码RNA(Circ)BIRC6调节微小RNA(miR)-138-5p/核糖核苷酸还原酶小亚基M2(RRM2)轴对乳腺癌（BC）细胞恶性生物学行为的影响。方法 qRT-PCR检测BC组织及癌旁组织、人乳腺上皮细胞系（MCF-10A）以及BC细胞系（MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-468和MDA-MB-453）中CircBIRC6、miR-138-5p、RRM2 mRNA表达水平;免疫组化法检测RRM2表达;以MCF-7细胞为研究对象,分别转染干扰CircBIRC6质粒（si CircBIRC6）、阴性对照（si NC）至细胞,记为si CircBIRC6组、si NC组;将si CircBIRC6分别与miR-138-5p抑制剂（miR-138-5pinhibitor）、阴性对照（inhibitorNC）共转染至细胞,标记为siCircBIRC6+miR-138-5pinhibitor组、si CircBIRC6+inhibitor NC组,同时以未转染的MCF-7细胞作为对照组,CCK-8、划痕实验及Transwell实验分别检测增殖、迁移率及侵袭变化...     

miR-143-3p靶向IL-6R/STAT3通路抑制IL-6诱导的人肺微血管内皮细胞血管生成

目的探究miR-143-3p在IL-6诱导的人肺微血管内皮细胞(HLMVEC)血管生成中的作用和机制。方法首先使用100 ng/ml重组IL-6蛋白处理HLMVEC细胞,管腔形成实验分析IL-6对细胞管腔形成数目的影响,Real-time PCR检测IL-6对miR-143-3p和VEGF mRNA表达的影响。Western blot检测VEGF蛋白水平的变化。然后使用miR-143-3p mimics过表达miR-143-3p,按照上述方法检测miR-143-3p对IL-6诱导的管腔形成数目、VEGF mRNA和蛋白表达的影响。此外,使用双荧光素酶报告基因检测法分析miR-143-3p和IL-6R的关系,Real-time PCR检测miR-143-3p过表达对IL-6R mRNA表达的影响,Western blot检测IL-6R、STAT3和磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白水平的变化。结果 IL-6能够增加管腔形成数目和VEGF的表达,降低miR-143-3p的表达。过表达miR-143-3p能够抑制IL-6诱导的管腔形成、VEGF、IL-6R和p-STAT3的表达水平,但是不影响STAT3的表达。此外还发现IL-6R是miR-143-3p的一个靶基因。结论 miR-143-3p能够抑制IL-6诱导的内皮细胞血管生成,这可能是通过抑制IL-6R/STAT3通路发挥作用的。     

circDNMT1调节miR-377-3p/PUM1轴对三阴性乳腺癌细胞增殖、凋亡和上皮-间质转化的影响

目的 探讨circDNMT1调节miR-377-3p/PUM1轴对三阴性乳腺癌（TNBC）细胞增殖、凋亡和上皮-间质转化（EMT的影响。方法 收集儋州市人民医院2018年至2021年收治的24例TNBC患者的TNBC组织和其邻近正常组织,采用qRT-PCR、Western blot法分别检测组织及小鼠正常乳腺上皮细胞系HC11和TNBC细胞系4T1、Eph41424、JC中circDNMT1表达、miR-377-3p表达、PUM1蛋白表达。将4T1细胞分为4T1组（未转染）、si-NC组（转染si-NC）、si-DNMT1组（转染si-DNMT1）、si-DNMT1+anti-NC组（同时转染si-DNMT1和anti-NC）、si-DNMT1+anti-miR-377-3p组（同时转染si-DNMT1和anti-miR-377-3p）,qRT-PCR检测各组4T1细胞中circDNMT1、miR-377-3p表达;CCK-8检测各组4T1细胞增殖情况;流式细胞术检测各组4T1细胞凋亡情况;Western blot检测各组4T1细胞PUM1、EMT相关蛋白及凋亡相关蛋白表达;Targe...     

miR-495-3p / WIF1 / Wnt 信号通路轴调节视网膜母细胞瘤细胞 增殖、 迁移和侵袭

目的 分析 miR-495-3p / Wnt 抑制因子 (Wnt inhibitor factor 1, WIF1) / Wnt 信号通路轴调节视网 膜母细胞瘤 (retinoblastoma, RB) 细胞增殖、 迁移和侵袭。 方法 生物信息学分析 WIF1 的差异表达及与 临床不良表型之间的关系, 并预测 miRNA 靶标; 双荧光酶素报告实验验证。 构建稳定过表达 WIF1 的 RB 细胞 (Vector 组、 WIF1 组)。 构建稳定过表达 miR-495-3p 的 RB 细胞 (miR-NC 组、 miR-495-3p 组和 miR495-3p + WIF1 组)。 Western 印迹检测 WIF1 蛋白及 Wnt 通路相关蛋白表达, 并进行体外功能试验。 裸鼠移 植瘤实验分析移植瘤体积重量。 免疫组化分析 WIF1 在 RB 组织中水平。 结果 WIF1 低表达, 与迁移、 侵袭 有关, 为 miR-495-3p 靶标, 双荧光酶素报告实验证实 WIF1 是 miR-495-3p 作用靶点。 WIF1 过表达抑制细胞增 殖、 迁移和侵袭, 影响细胞周期, 诱导凋亡。 体内实验显示 WIF1 在 RB 组织中过表达, 其过表达抑制瘤体生 长。 过表达 WIF1 下调 β-catenin、 c-Myc 蛋白水平 (P< 0. 05)。 过表达 miR-495-3p 下调 WIF1 蛋白水平, 上调 β-catenin 和 c-Myc 蛋白水平, 促进细胞增殖迁移、 迁移和侵袭, 抑制细胞凋亡 (P< 0. 05), 增加 WIF1 表达 可逆转 miR-495-3p 的作用 (P< 0. 05)。 结论 miR-495-3p 靶向 WIF1 通过 Wnt 信号通路抑制 RB 细胞增殖、 迁移和侵袭, 并诱导凋亡。     

miR-7-5p和miR-152-3p联合调控Wnt/β-catenin通路对乳腺癌细胞上皮-间质转化及化疗耐药的影响

目的 探讨miR-7-5p和miR-152-3p协同抑制乳腺癌细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)进程及紫杉醇耐药的分子机制.方法 采用生物信息学软件预测miR-7-5p和miR-152-3p的靶基因,双荧光素酶报告基因检测两者与TCF4的靶向关系;Weste...     

circZMIZ1调节miR-214-3p/GPX4轴对前列腺癌细胞铁死亡的影响

目的：探究circZMIZ1对前列腺癌(PCa)细胞铁死亡的影响及分子机制。方法：比较人正常前列腺上皮细胞(RWPE-1)和PCa细胞系(22Rv1、VCaP、PC3和DU145)中circZMIZ1、miR-214-3p以及谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的mRNA和蛋白表达;通过双荧光素酶报告基因、RNA pull-down和RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)实验验证PC3细胞中circZMIZ1、miR-214-3p和GPX4的调控关系。PC3细胞转染si-NC、si-circZMIZ1、inhibitor-NC、miR-214-3p inhibitor后,检测细胞中circZMIZ1、miR-214-3p和GPX4的表达、细胞增殖、LDH活性、细胞凋亡以及细胞内亚铁离子(Fe²⁺)含量和丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)水平,细胞内活性氧(ROS)水平。构建PCa裸鼠皮下移植瘤模型,观察肿瘤生长情况,检测肿瘤组织中Ki-67、GPX4、circZMIZ1、miR-214-3p表达情况。结果：与RWPE-1细胞相比,PCa细胞系(22Rv1、VCaP、PC3...     

CircCRIM1调节miR-129-5p/MDM2轴对卵巢癌细胞紫杉醇耐药性的影响

目的 研究环状RNA半胱氨酸丰富跨膜BMP调节因子1(CircCRIM1)调节miR-129-5p/鼠双微体基因2(MDM2)轴对卵巢癌细胞紫杉醇耐药性的影响。方法 以实时荧光定量PCR检测人卵巢癌细胞株SKOV3及其紫杉醇耐药细胞株SKOV3-TR30中miR-129-5p与CircCRIM1、MDM2表达。体外培养的SKOV3-TR30细胞随机分为对照组、紫杉醇组、紫杉醇+阴性对照组、紫杉醇+CircCRIM1敲低组、紫杉醇+CircCRIM1敲低+miR-129-5p inhibitor组,分组转染处理后,以实时荧光定量PCR检测各组细胞miR-129-5p及CircCRIM1、MDM2、多药耐药相关蛋白3(MRP3)、P-糖蛋白（P-gp）表达;以MTT法和流式细胞实验检测各组细胞增殖率、凋亡率;以免疫印记法检测各组细胞MDM2、P-gp、MRP3及凋亡蛋白（Bcl-2、Bax、caspase-3）表达;以双荧光素酶报告基因实验检测SKOV3-TR30中CircCRIM1对miR-129-5p的靶向调节及miR-129-5p对MDM2的靶向调节。结果 与SKOV3细胞相比,SK...     

白头翁皂苷A通过调控miR-24-3p/RNF2的表达影响乳腺癌细胞增殖及放射敏感性

目的:探讨白头翁皂苷A对乳腺癌细胞增殖及放射敏感性的影响及其作用机制。方法:用浓度为0、5、10、15和20 mg/L的白头翁皂苷A作用于人乳腺癌MCF-7细胞,并转染微小RNA-24-3p(miR-24-3p)过表达载体或抑制表达载体。用MTT法检测细胞活力的变化;集落形成实验检测细胞放射敏感性;RT-qPCR分析miR-24-3p和环指蛋白2(RNF2)的mRNA表达水平;Western blot检测RNF2的蛋白表达;萤光素酶报告基因实验检测miR-24-3p和RNF2的靶向关系。结果:与对照组(0 mg/L)相比,5、10、15和20 mg/L的白头翁皂苷A组MCF-7细胞的增殖抑制率显著升高(P<0.05),白头翁皂苷A处理的MCF-7细胞经射线照射后存活分数显著降低,RNF2表达水平显著降低(P<0.05);miR-24-3p靶向负调控RNF2。白头翁皂苷A和miR-24-3p同时处理的MCF-7细胞经射线照射后,存活曲线下移;抑制miR-24-3p表达可逆转白头翁皂苷A对MCF-7细胞的增殖抑制和放射增敏作用。结论:白头翁皂苷A可能通过miR-24-3p/RN...     

miR-342-3p 在乳腺癌中的表达及其与临床病理特征、 远期预后的相关性

目的研究 miR-342-3p 在乳腺癌中表达及其与临床病理特征、 远期预后的相关性。方法选择 2014 年 1 月 ~ 2015 年 2 月期间在南平市第一医院接受乳腺癌根治术的患者作为乳腺癌组, 同期接受手术切 除的乳腺良性肿瘤患者作为对照组, 检测乳腺癌组织及乳腺良性肿瘤组织中 miR-342-3p 的表达水平, 随访 乳腺癌患者的总生存 (OS) 及无病生存 (DFS), 采用 Kaplan-Meier 曲线分析 miR-342-3p 的表达水平与 OS、 DFS 的关系, 采用 COX 比例风险模型分析 OS、 DFS 的影响因素。 在乳腺癌 MCF7 细胞中转染 miR-NC 序列及 miR-342-3p 模拟物, 检测细胞活力水平及 AKT2、 Bcl2L1、 FOXQ1 的表达水平。结果乳腺癌组织 中 miR-342-3p 的表达水平明显低于乳腺良性肿瘤组织 (P< 0. 05), 且不同 T 分期、 淋巴结转移、 分子分 型、 Ki-67 表达的乳腺癌组织间比较, miR-342-3p 表达水平有显著差异 (P< 0. 05)。 Kaplan-Meier 曲线分析 显示, 相比于 miR-342-3p 高表达患者, miR-342-3p 低表达患者的 DFS 和 OS 均缩短。 COX 比例风险模型分 析显示, 淋巴结转移、 Ki-67 表达、 miR-342-3p 表达是乳腺癌患者 DFS 和 OS 的影响因素。 miR-342-3p 高表 达的乳腺癌组织中 AKT2、 Bcl2L1、 FOXQ1 的表达水平低于 miR-342-3p 低表达的乳腺癌组织。 miR-342-3p 组 MCF7 细胞中细胞活力及 AKT2、 Bcl2L1、 FOXQ1 的表达水平均低于 miR-NC 组。结论乳腺癌中 miR-342-5p 低表达且其低表达与病理特征恶化有关, miR-342-5p 低表达是乳腺癌患者预后的影响因素, AKT2、 Bcl2L1、 FOXQ1 可能是 miR-342-5p 参与乳腺癌发展的潜在分子机制。     

HER2高表达胃癌细胞中miR-4728-3p表达及生物信息学分析

目的 探讨HER2高表达的胃癌细胞中miR-4728-3p表达状况及其调控靶基因所涉及的信号通路,旨在初步分析miR-4728-3p在胃癌中的作用机制及其与HER2的相关性.方法 首先采用Real-time PCR技术检测胃癌细胞株NCI-N87中miR-4728-3p及HER2 mRNA,然后通过miRanda、DIANA-microT、Targetscan和Targetmine软件预测miR-4728可能的靶基因,并通过DAVID数据库进行靶基因功能富集分析及信号转导通路富集分析.结果 miR-4728-3p及HER2 mRNA在胃癌细胞中均高表达,二者呈正相关(r=0.990,P=0.000).miR-4728-3p预测靶基因共有54个,靶基因功能主要富集于转录活性调节(P=0.014)、DNA结合(P=0.019)及蛋白质磷酸化氨基酸结合(P=0.036)等分子功能,RNA聚合酶Ⅱ启动子的转录调控(P=0.001)、转录调控(P=0.003)及细胞内信号级联(P=0.021)等生物学过程以及轴突部分(P=0.008)等细胞组分上;信号转导通路则主要富集于肿瘤通路(P=0.013)和卵母细胞减数分裂通路(P=0.041).结论 miR-4728-3p在HER2高表达的胃癌细胞中表达上调,二者表达呈正相关;生物信息学分析提示miR-4728-3p通过调控其靶基因参与胃癌的发生发展.     

circHIPK3通过调控miR-124-3p/EZH2促进食管鳞状细胞癌细胞恶性生物学行为

目的 探讨circHIPK3对食管鳞状细胞癌细胞增殖与迁移的影响及其机制.方法 采用qRT-PCR法检测circHIPK3在42对食管鳞状细胞癌组织和配对癌旁组织以及食管鳞状细胞癌细胞KYSE-410和KYSE-510与人食管上皮细胞HET-1A中的表达;采用shRNA慢病毒干扰circHIPK3表达;采用CCK-8法...     

lncRNA PURPL通过调控miR-367-3p/MTA3轴抑制肾癌细胞的增殖和侵袭

目的 观察lncRNA PURPL在肾癌组织中的表达,探讨PURPL/miR-367-3p/MTA3分子轴对肾癌细胞增殖和侵袭的影响及可能的机制.方法 采用qRT-PCR检测PURPL在肾癌组织和不同肾癌细胞系中的表达.选择PURPL表达最低的肾癌细胞系,分别感染阴性对照慢病毒(对照组)和PURPL慢病毒(PURPL组...     

miR-141-3p对卵巢癌的作用及其机制

目的:探究miR-141-3p在卵巢癌中的作用及其相关的分子机制.方法:实时荧光定量PCR检测30例卵巢囊肿和30例卵巢癌组织中miR-141-3p和表皮生长因子受体(EGFR)的表达水平.将SKOV3细胞分为NC组(无转染的SKOV3细胞),miR-141-3p组(SKOV3细胞转染miR-141-3p),LV-EG...