HIF-1α的RNA干涉可引起缺氧条件下人角膜上皮细胞VEGF表达下调和PEDF表达上调

目的探讨shRNA干扰HIF-1α表达对缺氧条件下人角膜上皮细胞(h CEC)血管内皮生长因子(VEGF)和色素上皮衍生因子(PEDF)表达的影响。方法针对HIF-1αmRNA序列靶点设计及合成3个小发夹RNA(shRNA),分别在体外转染自发永生化人角膜上皮细胞(S-ihCEC),转染后的S-ihCEC在1 mmol/L Co Cl2中缺氧诱导培养6 h,实时定量PCR检测HIF-1α、VEGF、PEDF的mRNA表达,Western blot法检测HIF-1α、VEGF的蛋白表达,ELISA检测PEDF的水平。结果与缺氧组比较,转染HIF-1αshRNA的S-ihCEC中HIF-1αmRNA表达下调、HIF-1α蛋白表达下调,VEGF mRNA表达下调、VEGF蛋白表达下调,PEDF mRNA表达上调(1. 22±0. 18)倍,PEDF水平升高。结论针对HIF-1α的shRNA能有效干扰S-ihCEC中HIF-1α的表达,并下调VEGF表达、上调PEDF的表达。     

HIF-1α基因RNA干扰对肝癌HepG2细胞VEGF表达的抑制

缺氧诱导因子-1(HIF-1)是细胞缺氧反应网络的关键调节转录因子,而HIF-1α是决定HIF-1 活性的亚单位.HIF-1能在缺氧条件下促进血管内皮生长因子(VEGF) 依赖性的肿瘤血管形成.本研究构建了针对HIF-1α的pSUPER-EGFP siRNA表达载体,抑制HepG2细胞HIF-1α的表达.RT-PCR和Western blot蛋白印迹检测结果显示,RNA干扰能明显抑制HIF-1α的表达;在缺氧培养条件下,HepG2细胞中VEGF有较高的表达,当HIF-1α基因表达被有效抑制,VEGF mRNA和蛋白质的表达随之大幅下降.本研究结果表明,HIF-1α是血管生成因子VEGF表达的调节因子,通过RNA干扰导致的HIF-1α基因抑制,能下调VEGF的表达,提示HIF-1α基因可作为抗抑制VEGF依赖性的肿瘤血管生成的一个靶点.     

HIF-1基因RNA干扰对肝癌HepG2细胞VEGF表达的抑制

缺氧诱导因子-1(HIF-1)是细胞缺氧反应网络的关键调节转录因子,而HIF-1α是决定HIF-1活性的亚单位。HIF-1能在缺氧条件下促进血管内皮生长因子(VEGF)依赖性的肿瘤血管形成。本研究构建了针对HIF-1α的pSUPER-EGFP siRNA表达载体,抑制HepG2细胞HIF-1α的表达。RT-PCR和Western blot蛋白印迹检测结果显示,RNA干扰能明显抑制HIF-1α的表达;在缺氧培养条件下,HepG2细胞中VEGF有较高的表达,当HIF-1α基因表达被有效抑制,VEGF mRNA和蛋白质的表达随之大幅下降。本研究结果表明,HIF-1α是血管生成因子VEGF表达的调节因子,通过RNA干扰导致的HIF-1α基因抑制,能下调VEGF的表达,提示HIF-1α基因可作为抗抑制VEGF依赖性的肿瘤血管生成的一个靶点。     

红景天苷上调HIF-1α减轻高糖诱导的大鼠肾小球内皮细胞损伤

目的:观察体外不同浓度葡萄糖对大鼠肾小球内皮细胞(rRGECs)表达低氧诱导因子1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子A(VEGFA)及血管内皮钙黏素(VE-cadherin)的影响,探讨红景天苷减轻高糖诱导rRGECs损伤的作用及可能相关机制。方法:体外培养rRGECs,分为正常糖组、高糖(20、30和50 mmol/L)组、高渗组及红景天苷+高糖组。采用MTT法检测rRGECs的活力;RT-qPCR法检测rRGECs内HIF-1α、VEGFA及VE-cadherin的mRNA表达;Western blot法检测rRGECs内HIF-1α蛋白的表达。结果:与正常糖组相比,培养24 h后,高糖(20mmol/L)组rRGECs HIF-1α的mRNA及蛋白表达均上调(P 0.05);培养120 h后,高糖组HIF-1αmRNA表达下调(P 0.05)。与正常糖组相比,培养24 h和120 h后,高糖组rRGECs内VE-cadherin的mRNA表达下调(P 0.05)。与正常糖组相比,培养24 h后,高糖组rRGECs内VEGFA的mRNA表达上调(P 0.05);培养120 h后,高糖组rRGECs内VEGFA的mRNA表达下调(P 0.05)。与正常糖组相比,培养24 h和120 h后,高渗组rRGECs内HIF-1α、VE-cadherin及VEGFA的mRNA表达无变化。与高糖组相比,培养24 h后,红景天苷(50μmol/L)组rRGECs的活力增加(P 0.01),且细胞内HIF-1α和VE-cadherin的mRNA及HIF-1α蛋白表达均上调(P 0.05)。结论:体外高糖培养能影响rRGECs表达HIF-1α,可能与细胞活力、葡萄糖的浓度、作用时间及HIF/VEGF通路有关。红景天苷能减轻高糖诱导的rRGECs损伤,其机制可能与增加rRGECs内HIF-1α的表达有关。     

低氧及一氧化氮对SW480细胞缺氧诱导因子-1α、VEGF及iNOS 表达的初步研究

目的：观察一氧化氮(NO)对低氧培养的人结肠腺癌细胞株SW480中缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的影响。方法： 运用免疫细胞化学检测HIF-1α、VEGF、iNOS蛋白表达，Western blot检测HIF-1α蛋白表达。原位杂交法检测HIF-1α mRNA表达。结果： 免疫细胞化学染色图像分析结果显示：低氧组细胞HIF-1α、VEGF和iNOS蛋白表达水平显著高于常氧组(P<0.01，P<0.01，P<0.05)和低氧＋genistein（三羟基异黄酮）组（P<0.01，P<0.05，P<0.05）。低氧条件下，SNP（硝普钠）显著抑制HIF-1α、VEGF蛋白的表达,但对iNOS表达无明显影响；NOC5（NO发生剂）诱导HIF-1α、VEGF、iNOS蛋白的表达；NO抑制剂L-NAME(N-硝基精氨酸甲酯)则抑制3者的表达。 Western blot结果显示：低氧培养条件下，HIF-1α呈强表达，给予genistein能显著抑制其表达；而给予SNP和L-NAME后，蛋白表达量减少，给予NOC5，则蛋白表达增强。原位杂交结果显示：常氧组、低氧组及低氧＋genistein组、低氧＋SNP组、低氧＋NOC5组、低氧＋L-NAME组HIF-1α mRNA表达A值组间均无显著差异。结论： 低氧诱导SW480细胞HIF-1α蛋白表达量增高，从而上调VEGF和iNOS表达。低氧条件下，NO供体SNP抑制SW480细胞HIF-1α蛋白及VEGF表达，而另一种供体NOC5则促进HIF-1α表达，两种供体对HIF-1表达的影响可能存在不同的机制。     

HIF-1α介导低氧诱导的内皮细胞Brm表达上调的机制研究

目的:本研究拟探讨低氧诱导因子1α(HIF-1α)在低氧诱导的血管内皮细胞Brm表达上调中的作用及机制,为低氧性肺动脉高压的防治提供理论依据。方法:在内皮细胞中过表达或siRNA干扰HIF-1α的表达,并给予1%低氧处理24 h后,运用萤光素酶报告基因检测方法检测Brm启动子的转录活性,运用RT-qPCR检测Brm的mRNA表达水平,运用Western blot检测Brm的蛋白表达水平。运用ChIP技术检测低氧条件下HIF-1α与Brm启动子区域的结合变化情况。结果:过表达HIF-1α可显著上调Brm的启动子活性、mRNA及蛋白表达,而siRNA干扰HIF-1α可显著抑制Brm的启动子活性、mRNA及蛋白表达,ChIP实验揭示低氧可显著增强HIF-1α与Brm启动子的结合。结论:低氧上调内皮细胞中Brm的表达依赖HIF-1α的转录调控作用。     

重组人促红细胞生成素对心梗大鼠HIF-1α与Survivin表达的影响

目的探讨重组人促红细胞生成素(rHuEPO)对心梗大鼠心肌缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)与生存素(Survivin)表达的影响。方法 45只SD大鼠,随机分为假手术组、心肌梗死组和rHuEPO治疗组。用Western blot方法检测各组大鼠梗死区周围心肌中HIF-1α与Survivin的表达水平,RT-PCR方法检测梗死区周围心肌HIF-1αmRNA与Survivin mRNA表达变化。结果心肌梗死组大鼠心肌梗死区周围心肌HIF-1α蛋白与mRNA的表达水平显著高于假手术组,而Survivin蛋白与mRNA的表达水平则显著降低(P0.01);与心肌梗死组相比,rHuEPO治疗组心肌梗死区周围心肌HIF-1α蛋白与mRNA的表达水平明显降低,而Survivin蛋白与mRNA的表达水平则显著升高(P0.01)。结论 rHuEPO能够抑制心梗大鼠心肌梗死区周围心肌HIF-1α过表达并上调Survivin的表达。     

HIF-1α介导人参皂甙Rb1对缺氧心肌细胞葡萄糖代谢的调节

目的:探讨人参皂甙Rb1(Gs-Rb1)是否通过缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和(或)AMP激活的蛋白激酶α(AMPKα)调节缺氧心肌细胞的葡萄糖代谢而改善其生存能力。方法:将乳鼠心肌细胞随机分为对照组、缺氧组(1%O_2、94%N_2和5%CO_2)和缺氧干预组(即Gs-Rb1组、Ara-A组、Gs-Rb1+Ara-A组、YC-1组、Gs-Rb1+YC-1组、Ara-A+YC-1组和Gs-Rb1+YC-1+Ara-A组),Gs-Rb1、Ara-A和YC-1浓度分别为200μmol/L、500μmol/L和5μmol/L,均干预8 h。MTT法检测细胞存活率;Western blot法半定量检测AMPKα、p-AMPKα、HIF-1α和葡萄糖转运体4(GLUT-4)的蛋白水平;ELISA检测己糖激酶(HK)、磷酸果糖激酶(PFK)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性。结果:Gs-Rb1显著改善缺氧心肌细胞的生存能力,该作用可被Ara-A和YC-1抑制,且YC-1和Ara-A具有协同效应。Gs-Rb1增加缺氧心肌细胞AMPK活性的效应可被Ara-A或YC-1抑制。Ara-A和YC-1能不同程度抑制Gs-Rb1上调缺氧心肌细胞HIF-1α表达的效应。Gs-Rb1显著上调缺氧心肌细胞膜GLUT-4的表达,但该作用可被Ara-A或YC-1抑制,Ara-A和YC-1联用时尤为显著。Gs-Rb1显著增加缺氧心肌细胞HK、PFK和LDH等的活性,但该作用可被Ara-A和YC-1抑制,且YC-1和Ara-A具有协同抑制效应。结论:人参皂甙Rb1改善缺氧心肌细胞生存能力与其促进葡萄糖摄取和增强葡萄糖糖酵解有关,这些效应可被HIF-1α和(或)AMPK调节,且HIF-1α和AMPK对此的调节具有协同作用。     

HIF-1α过表达慢病毒载体的构建及对心肌细胞Notch配体Jagged1表达的影响

目的构建低氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)过表达重组慢病毒质粒并包装病毒,将病毒感染乳鼠心肌细胞,分析其对Notch配体Jagged1表达的影响。方法从cDNA文库中PCR扩增人HIF-1α编码序列并克隆入酶切线性化慢病毒载体GV218,转化感受态大肠杆菌细胞筛选出阳性克隆并测序鉴定。将HIF-1α过表达慢病毒质粒与病毒包装辅助质粒共转染工具细胞HEK293T,包装出慢病毒颗粒。原代分离SD乳大鼠心肌细胞,将HIF-1α过表达慢病毒感染心肌细胞,定量PCR分析Jagged1 mRNA水平的变化。结果成功扩增HIF-1α编码序列并正确连接入线性化载体GV218,获得阳性转化子并测序无误。将转化子质粒与病毒包装辅助质粒共转染HEK293T后,获得滴度为1×10~8TU/ml的慢病毒颗粒,Western blot法检测到HIF-1α-GFP融合蛋白。重组慢病毒感染乳鼠心肌细胞后,胞核中见GFP信号。与对照组相比,HIF-1α过表达5天后显著上调Jagged1 mRNA的水平。结论心肌细胞中HIF-1α可诱导Jagged1的表达。HIF-1α过表达重组慢病毒载体的成功构建,为研究缺血缺氧性心肌损伤反应的分子机制奠定了基础。     

地高辛对缺氧诱导的乳腺癌细胞上皮间质转化和侵袭的影响

 目的:本研究旨在探究地高辛对缺氧诱导乳腺癌细胞上皮间质转化、迁移和侵袭能力的影响,并探讨其分子机制。方法:选取人乳腺癌MCF-7细胞作为研究对象,采用CoCl₂模拟化学缺氧条件,采用细胞划痕实验测量细胞迁移率,采用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭力,采用Western blot方法检测人乳腺癌MCF-7细胞缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、Snail、E-cadherin和vimentin蛋白表达的变化。结果:缺氧使MCF-7细胞从多角形上皮形态转变成梭形间质细胞形态,细胞间隙增大,而在地高辛作用下缺氧的MCF-7细胞未发生明显的上皮间质转化。细胞划痕实验和Transwell侵袭实验结果显示,经CoCl₂处理的MCF-7细胞的迁移和侵袭能力均显著增强(P<0.01),地高辛可抑制CoCl₂诱导的细胞迁移和侵袭(P<0.01)。与control组相比,CoCl₂组细胞的HIF-1α、Snail和vimentin蛋白表达水平显著升高(P<0.01),E-cadherin的蛋白表达水平显著降低(P<0.01);CoCl₂+digoxin组细胞的HIF-1α、E-cadherin和vimentin蛋白表达水平与control组相比差异均无统计学显著性,Snail蛋白表达水平虽略高于control组(P<0.05),但与CoCl₂组细胞相比显著降低(P<0.01)。结论:地高辛可通过下调HIF-1α和Snail蛋白表达抑制缺氧诱导的MCF-7细胞上皮间质转化和侵袭。     

神经调节蛋白1诱导小鼠胚胎干细胞向心肌细胞的分化及其机制探讨

背景：前期研究发现神经调节蛋白1早期干预能够诱导胚胎干细胞向心肌细胞分化。 目的：进一步观察神经调节蛋白1诱导小鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化的途径。 方法：分别观察胚胎干细胞自发与在神经调节蛋白1诱导情况下向心肌细胞的分化,RT-PCR检测胚胎干细胞自发与诱导分化下心肌特异性早期转录因子GATA-4、Nkx2.5 mRNA的表达,细胞免疫组织化学检测胚胎干细胞自发与诱导分化下心肌肌钙蛋白T及磷酸化蛋白激酶B的表达,Western blot半定量分析自发与诱导分化下心肌细胞磷酸化蛋白激酶B的表达。 结果与结论：神经调节蛋白1诱导心肌分化率显著高于自发心肌分化率。神经调节蛋白1呈剂量依赖性上调GATA-4、Nkx2.5 mRNA表达;表皮生长因子样受体拮抗剂及磷脂酰肌醇-3激酶抑制剂阻断了神经调节蛋白1对Nkx2.5 mRNA的表达上调作用。Western blot分析显示神经调节蛋白1诱导组拟胚体中自发性搏动心肌细胞团磷酸化蛋白激酶B的相对表达高于自发心肌分化组。提示神经调节蛋白1可能通过磷脂酰肌醇3激酶/磷酸化蛋白激酶B信号通路诱导胚胎干细胞向心肌细胞分化。     

siRNA敲减缺氧诱导因子1α表达对口腔鳞癌细胞活力及癌胚抗原相关细胞黏附分子1表达的影响

目的:探究缺氧诱导因子1α(HIF-1α)与口腔鳞癌细胞活力和凋亡的关系以及作用机制。方法:采用RT-PCR和Western blot检测口腔鳞癌细胞系Tca8113和CAL27以及正常口腔上皮细胞NOK中HIF-1α和癌胚抗原相关细胞黏附分子1(CEACAM1)的mRNA和蛋白表达量; RNA干扰技术沉默口腔鳞癌CAL27细胞中HIF-1α的表达,实验分为空白对照组、无义对照组和siRNA-HIF1-α组,MTT实验检测敲减HIF-1α表达对细胞活力的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率的变化,Western blot检测HIF-1α、P21、血管内皮生长因子(VEGF)、Bcl-2和Bax的蛋白水平。结果:HIF-1α和CEACAM1在口腔鳞癌细胞中的表达量显著高于正常口腔细胞(P 0. 05),且二者表达量呈正相关; HIF-1α和CEACAM1在CAL27细胞中的表达量显著高于Tca8113细胞(P 0. 05)。siRNA-HIF-1α组细胞中的HIF-1α蛋白表达量显著低于空白对照组(P 0. 05)。敲减HIF-1α表达显著抑制CAL27细胞的活力(P 0. 05),促进其凋亡(P 0. 05),显著增加P21和Bax的蛋白水平(P 0. 05),明显降低VEGF和Bcl-2的蛋白水平(P 0. 05)。结论:HIF-1α在口腔鳞癌中高表达,干扰HIF-1α的表达可显著抑制细胞的活力,促进其凋亡。这可能是通过调控HIF-1α下游靶基因的表达以及肿瘤血管的生成来发挥作用的。     

红景天苷通过PI(3)K/Akt激活HIF-1α表达抑制缺氧诱导的心肌细胞凋亡

目的:探讨红景天苷激活HIF-1α表达,抑制缺氧诱导的心肌细胞凋亡的可能的信号通路.方法:将原代培养的心肌细胞分为4组:正常对照组、缺氧组、缺氧 100 mg/L红景天苷组、缺氧 100 mg/L红景天苷 LY294002组.MTT法测定细胞存活率,Hoechst33258染色、DNA-ladder检测细胞凋亡,通过免疫荧光染色、Western blot检测细胞Akt、磷酸化Akt、HIF-1α的表达.结果:LY294002处理后,红景天苷对缺氧诱导的心肌细胞凋亡的保护作用被明显减弱,细胞存活率明显下降(P<0.01),细胞凋亡比率明显增加(P<0.01),琼脂糖凝胶电泳特异性"ladder"灰度明显加深,磷酸化Akt、HIF-1α2种蛋白表达水平明显降低.结论:红景天苷对缺氧诱导的心肌细胞凋亡的抑制作用,其机制可能是通过PI(3)K/Akt信号通路激活HIF-1α的表达有关.     

缺氧诱导骨肉瘤U2OS细胞分泌IL-11的机制研究

目的探讨缺氧诱导骨肉瘤U2OS细胞分泌IL-11的分子机制。方法体外缺氧(1%O2)环境下培养人骨肉瘤U2OS细胞系,同时加入HIF-1α抑制剂孵育,或预先加入不同信号通路抑制剂处理,Western blot检测HIF-1α的蛋白水平,定量PCR检测IL-11的mRNA水平,ELISA检测IL-11的蛋白水平。结果与正常氧环境培养的U2OS细胞相比,缺氧显著诱导U2OS细胞上调HIF-1α的表达,同时促进IL-11的mRNA水平和蛋白水平增加,并具有时间依赖性;加入HIF-1α抑制剂后可显著抑制缺氧诱导的HIF-1α表达以及IL-11的mRNA和蛋白水平;加入JNK信号抑制剂亦显著抑制缺氧诱导的IL-11表达和分泌,上述差异均具有统计学意义(P 0. 05)。但HIF-1α的表达无显著变化,差异无统计学意义(P 0. 05)。结论缺氧可通过HIF-1α-JNK信号诱导骨肉瘤U2OS细胞分泌IL-11,从而促进骨肉瘤的发生发展。     

miR-24-3p靶向HIF-1α体外调节AngiotensinⅡ诱导的小鼠血管平滑肌细胞增殖、凋亡、迁移

目的:探讨miR-24-3p靶向HIF-1α对血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ)体外诱导的小鼠血管平滑肌细胞增殖、凋亡及迁移的影响。方法:分离C57BL/6小鼠原代动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)体外培养,分为对照组和诱导组,诱导组用10^-8mol/L AngiotensinⅡ诱导VSMCs,采用qRT-PCR法检测miR-24-3p和HIF-1α表达,运用生物信息学预测和荧光素酶实验验证miR-24-3p和HIF-1α的靶向关系;体外原代培养VSMCs分为对照组,诱导组,诱导组+mimic,诱导组+pc-HIF-1α,采用Western blot法检测各组的HIF-1α蛋白表达水平,Colony forming法检测细胞增殖,Hoechest法检测细胞凋亡,划痕实验和Transwell小室迁移实验检测细胞迁移侵袭。结果:诱导组miR-24-3p mRNA的表达极显著低于对照组,HIF-1α的表达极显著高于对照组(P<0.01);HIF-1α是miR-24-3p的预测靶点;与对照组相比,诱导组和诱导组+pc-HIF-1α组HIF-1α的表达极显著增加,...     

自噬抑制剂促进缺氧诱导的大鼠乳鼠心肌细胞凋亡

目的探讨抑制自噬后对大鼠乳鼠心肌细胞缺氧诱导的促凋亡蛋白Bim、caspase-3表达的影响及低氧诱导因子1(HIF-1)的调控作用。方法体外培养1～3 d龄SD大鼠心肌细胞建立缺氧模型,检测缺氧0、2、4、8、14和24 h时自噬情况,取自噬显著升高的时间点细胞作为单纯缺氧组(anoxia组),缺氧前用10 mmol/L3-甲基腺嘌呤(3MA)预处理心肌细胞1h作为缺氧+3-甲基腺嘌呤组(anoxia+3MA组),设立正常对照组(control组)。倒置显微镜下观察各组心肌细胞的搏动频率和异常节律;全自动血液生化分析仪检测乳酸脱氢酶LDH的活性;Western blot检测各组中LC3-Ⅱ/Ⅰ、Bim、caspase-3和HIF-1蛋白表达情况。结果抑制自噬后心肌细胞搏动频率明显减弱并可见异常节律、LDH释放增加(P0.05),同时Bim和caspase-3表达明显升高(P0.05);缺氧+3MA组中HIF-1蛋白表达明显低于单纯缺氧组(P0.05)。结论自噬抑制剂抑制自噬后导致缺氧诱导的大鼠乳鼠心肌细胞凋亡增加,HIF-1正调控缺氧诱导的自噬抵抗凋亡发挥心肌保护作用。     

自噬抑制剂促进缺氧诱导的大鼠乳鼠心肌细胞凋亡简

 目的 探讨抑制自噬后对大鼠乳鼠心肌细胞缺氧诱导的促凋亡蛋白Bim、caspase-3表达的影响及低氧诱导因子1（HIF-1）的调控作用。方法 体外培养1～3d 龄SD大鼠心肌细胞建立缺氧模型,检测缺氧0、2、4、8、14和24h时自噬情况,取自噬显著升高的时间点细胞作为单纯缺氧组（anoxia组）,缺氧前用10mmol/L3-甲基腺嘌呤（3MA）预处理心肌细胞1h作为缺氧+3-甲基腺嘌呤组（anoxia+3MA组）,设立正常对照组（control组）。倒置显微镜下观察各组心肌细胞的搏动频率和异常节律;全自动血液生化分析仪检测乳酸脱氢酶LDH的活性;Western blot检测各组中LC3-II/ I、Bim、caspase-3和HIF-1蛋白表达情况。结果 抑制自噬后心肌细胞搏动频率明显减弱并可见异常节律、LDH释放增加（P<0.05）,同时Bim和caspase-3表达明显升高（P<0.05）;缺氧+3MA组中HIF-1蛋白表达明显低于单纯缺氧组（P<0.05）。结论 自噬抑制剂抑制自噬后导致缺氧诱导的大鼠乳鼠心肌细胞凋亡增加,HIF-1正调控缺氧诱导的自噬抵抗凋亡发挥心肌保护作用。     

血小板微粒通过激活单核细胞HIF-1α促进血管生成的作用

目的:探讨血小板微粒(PMP)通过单核细胞促进血管生成的作用及机制。方法:制备人PMP,采用基质胶栓实验检测PMP对体内新生血管形成的影响。在体外常氧和缺氧条件下,使PMP与人单核细胞系THP-1结合,ELISA法检测血管内皮生长因子(VEGF)的分泌水平,RT-qPCR检测THP-1细胞VEGF和低氧诱导因子1α(HIF-1α)mRNA的表达,转录活性实验检测THP-1细胞HIF-1α的转录活性;利用共培养系统检测PMP与THP-1细胞相互作用对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)体外管腔形成的影响。结果:PMP诱导在体基质胶栓表面形成新生血管,HIF-1α选择性抑制剂chetomin可明显减弱该效应(P0.01)。在常氧和缺氧条件下,PMP均呈剂量依赖性地促进THP-1细胞表达和释放VEGF,上调HIF-1αmRNA的表达并增强其转录活性;阻断PMP与THP-1细胞的相互作用可以抑制THP-1细胞HIF-1α的转录活性以及VEGF的生成。PMP激活的单核细胞可促进HUVECs在体外基质胶上形成管腔,chetomin干预导致管腔的数量明显减少。结论:PMP通过激活单核细胞的HIF-1α诱导其释放VEGF,导致新生血管的形成,这可能是PMP促进动脉粥样硬化血管生成的一种新机制。     

miR-138-5p靶向HIF-1α影响人白血病K562细胞增殖和侵袭转移

目的探索miR-138-5p与缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对人白血病K562细胞增殖和侵袭转移的影响。方法以体外培养的人白血病K562细胞为研究对象,将其分为K562组、miR-138 mimic组、pc-HIF-1α组和mimic+pc-HIF-1α组。荧光素酶报告实验确认miR-138-5p与HIF-1α的靶向关系;qRT-PCR法检测miR-138-5p和HIF-1α的mRNA水平;Western blot检测HIF-1α的蛋白水平;CCK-8检测细胞存活率;Transwell检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;Western blot检测增殖和上皮间质转化(EMT)相关蛋白表达水平。结果miR-138-5p能靶向HIF-1α,与K562组相比,miR-138 mimic组HIF-1α的mRNA和蛋白水平均显著较低(P<0.01),而pc-HIF-1α组HIF-1α的蛋白水平则显著较高(P<0.01);同时,与pc-HIF-1α组相比,mimic+pc-HIF-1α组HIF-1α的蛋白表达显著较低(P<0.01)。与K562组相比,miR-138 mimic组细胞增殖倍数、细胞迁移和侵袭能力均显著较低(P<0.01),pc-HIF-1α组则显著较高(P<0.01);与pc-HIF-1α组相比,mimic+pc-HIF-1α组细胞增殖倍数、细胞迁移和侵袭能力均显著较低(P<0.01)。同时,mimic+pc-HIF-1α能部分逆转pc-HIF-1α对肿瘤细胞增殖和EMT能力的上调作用(P<0.01)。结论miR-138-5p可通过靶向HIF-1α,进而降低人白血病K652细胞增殖和侵袭转移能力。     

在CoCl_2模拟低氧条件下HIF-1α直接调控PPARγ2的表达

目的探讨在Co Cl2模拟低氧条件下,低氧诱导因子1α(HIF-1α)对于过氧化物酶体增殖物激活受体γ2(PPARγ2)是否具有调控作用。方法用real time PCR和Western blot检测Co Cl2模拟低氧条件下PPARγ2和低氧诱导因子1α(HIF-1α)mRNA及蛋白表达。用双荧光报告系统检测HIF-1α对于PPARγ调控的剂量依赖性,并通过染色质免疫共沉淀技术进一步验证。结果 Co Cl2模拟低氧条件下PPARγ2和HIF-1α的mRNA及蛋白表达水平均随着诱导时间的增加而增加。过表达HIF-1α导致PPARγ2表达上调(P0.01),而抑制HIF-1α则导致PPARγ2表达下调(P0.05)。HIF-1α对PPARγ2基因的表达具有正调控作用,通过结合于PPARγ2上游调控区特定的低氧应答元件(HRE)而调控其表达。结论 PPARγ2通过HIF-1α依赖的途径在Co Cl2模拟的低氧条件下发挥低氧适应作用。