Bowman-Birk蛋白酶抑制剂的固相合成及酶抑制动力学评价

目的考察合成的Bowman-Birk蛋白酶抑制剂(CTKSIPPQC)的抑制效果,计算其抑制常数Ki。方法采用Fmoc固相化学合成方法,采用Phenomenex C-5(0.46cm×25cm)反相柱和MALTI-TOF鉴定并纯化后经CytofluorTM微孔板发光检测仪测定Bowman-Birk蛋白酶抑制剂的抑制常数Ki。结论 Bowman-Birk蛋白酶抑制剂的Ki值为959.30±71.77nM(n=8),对胰蛋白酶具有显著的抑制效果。     

丝氨酸蛋白酶抑制剂活性测定紫外光谱法的建立

目的  建立一种丝氨酸蛋白酶抑制剂活性测定方法。方法  采用温控紫外分光光度计同时测定2种丝氨酸蛋白酶抑制剂,重组Textilinin-1（recombinant Textilinin-1,Rtxln-1）与抑肽酶（aprotinin,AP）的抑制常数。优化活性测定方法的线性范围和孵育温度。应用此方法对Rtxln-1和AP进行活性测定,并对活性测定方法进行验证。结果  该方法的标准曲线拟合度决定系数≥0.98,测定Rtxln-1和AP的线性范围分别为10～50、0.056～0.560 nmol/L。Rtxln-1孵育温度为37 ℃,精密度的变异系数≤5%。结论  建立的丝氨酸蛋白酶抑制剂活性测定方法特异性高、拟合度优,对Rtxln-1活性测定的精密度好,可用于AP、Rtxln-1等胰蛋白酶抑制剂的生物学活性的测定,也可用于广泛的丝氨酸蛋白酶抑制剂的活性测定。     

向日葵胰蛋白酶抑制剂SFTI的合成及酶抑制动力学研究

目的 考察合成的向日葵胰蛋白酶抑制剂的抑制效果,计算其抑制常数Ki.方法 采用Fmoc固相化学合成方法,反相柱纯化后用CytofluorTM微孔板发光检测仪测定向日葵胰蛋白酶抑制剂的抑制常数.结果与结论 向日葵胰蛋白酶抑制剂的Ki值为2.2nM±0.5(n=8),抑制效果良好.     

弹性蛋白酶抑制剂Fw99468抑制动力学的研究

弹性蛋白酶抑制剂Fw99468是小单孢菌FIM99468发酵产生的次级代谢产物.在37℃,0.05M Tris-HCl(pH7.6)缓冲液中,它对弹性蛋白酶具有抑制作用.在抑制剂浓度较小(0mM～0.013mM)的情况下,抑制剂与酶的结合呈直线关系,随着抑制剂浓度的提高,抑制活力曲线则出现漂移.根据Dixon图和Lineweaver-Burk图的研究,该抑制剂对弹性蛋白酶呈竞争性抑制,抑制常数Ki=3.5×10-5M.     

汞和金属离子及多硫化物对木瓜蛋白酶活性的抑制作用

目的半胱氨酸蛋白酶参与了很多动植物生理过程和病理过程,是Hg2＋及其化合物作用的潜在靶点。木瓜蛋白酶是半胱氨酸蛋白酶家族中最具代表性、研究最为广泛深入的一种蛋白酶,本文以木瓜蛋白酶为模型, 研究了汞等金属离子及其化合物对半胱氨酸蛋白酶活性的抑制作用。结果 Hg2＋对木瓜蛋白酶活性的抑制能力很强（Ki=2×10^-7 mol·L^-1）。过量的还原型谷胱甘肽和半胱氨酸能够恢复木瓜蛋白酶的活性。多种金属离子（Cu^2＋、Ag^＋、Au^3＋、Zn^2＋、Cd^2＋、Fe^3＋、Mn^2＋、Pb^2＋、Yb^3＋）对木瓜蛋白酶的活性具有抑制能力,而且抑制能力与金属离子自身的软硬度具有良好的相关性。研究结果表明 Hg2＋ 可能作用于木瓜蛋白酶的活性中心。此外,本文首次研究了汞多硫化物复合物对木瓜蛋白酶活性的抑制作用,发现其表观抑制常数（Ki= 7×10^-6 mol·L^-1）与柳硫汞（Ki=2.7×10^-6mol·L^-1）十分接近,而且其caco-2细胞单层的表观渗透能力（1.9×10^-5cm/s） 也较好。结论汞多硫化物复合物可能通过与半胱氨酸蛋白酶或者其它含巯基蛋白分子作用,发挥生物学活性。本文的研究工作可能有助于阐明汞化合物（ 特别是朱砂等不溶性汞化合物） 的毒理及药理作用的机制。     

抑肽酶的临床应用

抑肽酶(aprotinin)是一种碱性多肽，为非特异性蛋白酶抑制剂，能抑制多种含有丝氨酸活性基因的蛋白酶。近年来，抑肽酶不再局限应用于治疗急性胰腺炎，已被大量应用于临床，尤其止血效果更佳，现将近年来有关抑肽酶临床应用报道作一综述。     

慈菇抑制剂的制备、固定化及其应用

本文介绍一种制备慈菇抑制剂的简便方法。用ABSE—交联琼脂固定慈菇抑制剂,并研究此固定化抑制剂对某些蛋白酶抑制活力的变化。此外,探讨了在某些蛋白酶分离、纯化中应用的可能性。自从牛胰Kumitz抑制剂[商品名:抑肽酶,Trasylol]应用于临床,治疗急性胰腺炎、烧伤等疾病取得明显疗效以来,蛋白酶抑制剂的研究进一步受到各方面的重视。至今发现的蛋白酶抑制剂已有几十种之多。其中丝氨酸蛋白酶抑制剂多数只能抑制胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的活力。有的还能抑制血清激肽释放酶。但能抑制组织激肽释放酶的却很少。张先扬、戚正武从慈菇中分离、纯化、结晶了慈菇抑制剂。它不但能抑制胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶,还能抑制组织激肽释放酶。因此与其他来源的丝氨酸蛋白酶抑制剂相比较,有其更多的应用价值。本文在前文工作的基础上,比较简便的方法纯化、结晶,并制备了固定化慈菇抑制剂。研究了此固定化慈菇抑制剂对某些蛋白酶抑制活力的变化。并进一步应用于某些蛋白酶制剂的提取、纯化。有关这方面的研究,在国内尚未见有报道。     

乌司他丁的临床应用

<正>乌司他丁(UTI)是从健康成年男性新鲜尿液中分离纯化出来的一种糖蛋白,属蛋白酶抑制剂,对胰蛋白酶、α糜蛋白酶等丝氨酸蛋白酶及粒细胞弹性蛋白酶、透明质酸酶、巯基酶、纤溶酶等多种酶有抑制作用;另具有稳定溶酶体膜、抑制溶酶体酶的释放、抑制心肌抑制因子产生,清除氧自由基及     

跨膜丝氨酸蛋白酶TMPRSS2在SARS-Cov-2感染人体中的作用

跨膜丝氨酸蛋白酶2(Transmembrane serine protease 2,TMPRSS2)是一种雄激素依赖性表达的丝氨酸蛋白酶,以往报道其在肿瘤转移侵袭和病毒感染中具有重要的病理学功能。严重急性呼吸综合征冠状病毒2(Severe acute respiratory syndrome corona virus 2,SARS-CoV-2)进入宿主细胞是其传播和致病的前提,TMPRSS2可通过激活冠状病毒刺突糖蛋白从而介导病毒侵入宿主细胞,因此被认为是干预冠状病毒感染的潜在靶点。现有报告的TMPRSS2的有效抑制剂都是针对丝氨酸蛋白酶家族的广谱性药物,因此新型TMPRSS2特异性抑制分子亟需被挖掘和开发。文章综述了TMPRSS2的生物学特性和病理学功能研究概况,重点对TMPRSS2在人致病性冠状病毒感染中的普遍性功能以及TMPRSS2抑制剂的最新研究动态作一概述,以此强调靶向TMPRSS2有希望成为一种预防和限制新型冠状病毒早期感染和传播的新策略。     

丝氨酸蛋白酶抑制剂的研究进展

目的对丝氨酸蛋白酶抑制剂的结构、功能等以及在黄粉虫中参与多种丝氨酸蛋白酶(serine protease,SP)级联的活性调控机制的研究进展进行综述。方法参考国外29篇文献,简述其结构、功能、与其相关的疾病及其研究的模式生物进行总结。结果丝氨酸蛋白酶抑制剂(serpin)是蛋白酶抑制因子中最大也是最重要的超家族,具有一定的特殊结构,serpin使用自杀底物原理与靶酶形成稳定的共价复合物,导致靶酶失活。该类型蛋白超家族成员遗传性结构或异常分泌将导致许多疾病的发生。在黄粉虫中丝氨酸蛋白酶抑制剂参与多种丝氨酸蛋白酶(serine protease,SP)级联的活性调控。结论目前对其生物学特性以及结构与功能关系的研究较多,对于临床应用及其模式生物的研究有待于更深入的研究。     

四种药物对人脑醛糖还原酶的抑制作用

从人脑提纯了醛糖还原酶,应用酶动力学的方法研究了四种药物对此酶的抑制作用。结果表明索比尼尔,阿司他丁和苯巴比妥是人脑醛糖还原酶的完全性非竞争性抑制剂,四甲烯戊二酸是此酶的部分性非竞争性抑制剂。从抑制曲线及四种药物的抑制常数(Ki)可知,索比尼尔是人脑醛糖还原酶最有效的抑制剂,阿司他丁次之。根据苯巴比妥的Ki和它的毒性作用推测,此药似不宜以醛糖作为原酶的抑制剂应用于临床。     

Wee1蛋白激酶的研究及进展

Wee1蛋白激酶是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族的一员,其主要通过抑制Cdc2的活性对细胞周期进行调控,进而抑制细胞进行有丝分裂。本文将对Wee1蛋白酶的作用机制、活性调节等内容进行阐述,并对研究前景进行展望。     

SerpinA3在早发子痫前期胎盘组织中表达的意义

<正>子痫前期(PE)是导致围产期母儿死亡的主要原因,该病的发生与早期绒毛外滋养细胞的浅层侵袭有关。丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serpins)超家族参与许多基本的生命活动。SerpinA3编码α1-抗胰凝乳蛋白酶,它是人血浆中主要的蛋白酶抑制剂,SerpinA3中和炎症反应,抑制基质裂解,抑制     

Weel蛋白激酶的研究及进展

Weel蛋白激酶是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族的一员,其主要通过抑制Cdc2的活性对细胞周期进行调控,进而抑制细胞进行有丝分裂.本文将对Weel蛋白酶的作用机制、活性调节等内容进行阐述,并对研究前景进行展望.     

甲磺酸加贝酯药理作用的分子机制及应用概况

<正>甲磺酸加贝酯(Gabexate mesilate,GM)是一种人工合成的非肽类丝氨酸蛋白酶抑制剂,相对分子质量为417,能有效抑制胰蛋白酶、血纤维蛋白溶酶、血浆激肽释放酶、凝血酶及补体酯酶C1的活性。该药投入临床使用已近30年,最初其适     

促凋亡蛋白Omi/HtrA2与细胞凋亡相关疾病

Omi／HtrA2是一种丝氨酸蛋白酶，定位于线粒体，具有调节凋亡的功能。Omi／HtrA2最早是因与凋亡抑制蛋白（IAPs）有结合能力并拮抗IAPs而被分离确定的，与细菌内蛋白酶HtrA2（high—temperature requirement）同源。近年来研究发现，Omi／HtrA2具有多种生物学功能，与多种细胞凋亡相关疾病的发生、发展有关。     

乌司他丁临床研究进展

1909年欧洲首先报道人体尿液存在着胰蛋白酶抑制剂,后来从健康男性尿中分离纯化而得到乌司他丁(ulinastatin)。这是由143个氨基酸组成、分子量约为67 000的一种酸性糖蛋白。对胰蛋白酶、α-糜蛋白酶等丝氨酸蛋白酶及粒细胞弹性蛋白酶、透明质酸酶、巯基酶、纤溶酶等多种酶有抑制作用,另具有稳定溶酶体膜、抑制溶酶体酶的释放、抑制心肌抑制因子     

二肽肽酶I研究进展

二肽肽酶I（dipeptidyl peptidase I，DPPI）也叫组织蛋白酶C（cathepsin C），是溶酶体内一种重要的内切蛋白酶。研冤表明，DPPI参与多种细胞（T细胞、肥大细胞等）颗粒内丝氨酸蛋白酶的翻译后处理和激活，以及其他蛋白的降解过程，从而在机体的细胞免疫、炎症反应等一系列病理生理过程中起到重要作用。人DPPI基因的突变失活与三种罕见的遗传病（帕．勒氏综合征等）密切相关。对DPPI的选择性抑制有希望成为一种有效的治疗手段，用于免疫调节、慢性炎症和细胞毒淋巴细胞瘤等疾病。     

胰蛋白酶样的丝氨酸蛋白酶抑制剂的治疗作用

含有195丝氨酸、57组氨酸和102门冬氨酸催化部位的丝氨酸蛋白酶与生物反应的控制有关。肠激酶、凝血酶、纤溶酶、类胰蛋白酶、位酶和血浆激肽释放酶等胰蛋白酶样的丝氨酸蛋白酶能识别碱性氨基酸残基，选择性水解肽的C末端，对维持活体协内环境稳定起着重要作用。这些丝氨酸蛋白酶能控制血液凝聚、血纤蛋白溶解、激肽一激肽释放酶和补体系统，而微肽一微肽释放酶和补体系统与炎症及免疫反应有密切关系。在正常情况下，人体自身的内源性蛋白酶抑制剂（PI）能保护蛋白酶所致的潜在的破坏作用。若PI浓度下降，则破坏了蛋白酶和抗蛋白酶之间的…     

人巨细胞病毒蛋白酶及其抑制剂的研究进展

人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）属于β家族疱疹病毒,ＨＣＭＶ蛋白酶在装配蛋白产生和病毒壳体成熟中具有重要作用,抑制ＨＣＭＶ蛋白酶可产生抗疱疹病毒药物,ＨＣＭＶ蛋白酶属丝氨酸蛋白酶类,以均二聚体为其唯一活性形式,其活性位点催化三联体的构成与典型的已知丝氨酸蛋白酶有明显不同。晶体结构数据显示ＨＣＭＶ蛋白酶单体只有一个结构域,由一个丝氨酸（Ｓｅｒ１３２）和两个组氨酸（Ｈｉｓ６３和Ｈｉｓ１５７）构成催化三联体,ＨＣＭＶ蛋白酶对序列Ｐ５－Ｐ５′肽段（ＧＶＶＮＡ／ＳＣＲＬＡ）水解活性最级;仍维持显著活性的最小肽段为Ｐ４－Ｐ４′。目前有关ＨＣＭＶ蛋白酶抑制剂的研究报道还比较少,其中以底物抑制剂较引人注目。