基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路研究黄连素对小鼠巨噬细胞极化的干预作用

目的:基于Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子κB(NF-κB)信号通路研究黄连素对小鼠巨噬细胞极化的影响。方法:以小鼠巨噬细胞RAW264.7为对象,以阿托伐他汀钙为阳性对照,经脂多糖(LPS)诱导以复制炎症细胞模型,采用酶联免疫吸附测定法检测低、中、高剂量黄连素(5、10、20μmol/L)作用24 h后细胞培养液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、NF-κB含量,采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测细胞中TLR4、MyD88 mRNA的表达水平,采用Western blotting法检测细胞中TLR4、MyD88、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、CD206蛋白的表达水平。结果:与空白对照组比较,LPS诱导组细胞培养液中TNF-α、IL-6、NF-κB含量,细胞中TLR4、MyD88 mRNA的相对表达量以及TLR4、MyD88、iNOS蛋白相对表达量均显著升高(P<0.05)。与LPS诱导组比较,阿托伐他汀钙组和黄连素中、高剂量组TNF-α、IL-6含量,TRL4、MyD88 mRNA及其蛋白的相对表达量以及各给药组NF-κB含量和i NOS蛋白的相对表达量均显著降低,且黄连素高剂量组NF-κB含量显著低于阿托伐他汀钙组(P<0.05);阿托伐他汀钙组和黄连素高剂量组CD206蛋白的相对表达量均显著升高,且黄连素高剂量组CD206蛋白的相对表达量显著高于阿托伐他汀钙组(P<0.05)。结论:不同剂量的黄连素均可不同程度地干预小鼠巨噬细胞极化,其机制可能与调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关。     

脂氧素A4受体激动剂及白介素-1β在Toll样受体2/髓样分化因子88/核因子-κB信号通路对哮喘小鼠气道炎症的调控作用

目的:研究脂氧素(LX)A4受体激动剂及白介素-1β抗体在Toll样受体2(TLR2)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子-κB（NF-κB)信号通路中对哮喘小鼠气道炎症的调控机制。方法:以卵清蛋白(OVA)致敏激发法制备小鼠哮喘模型,60只二级雄性Balb/c小鼠随机分为6组,分别给予脂氧素A4受体激动剂(BML-111)、白介素(IL)-1β抗体、BML-111载体、兔IgG治疗。末次激发后留取血清和肺组织标本,光镜下观察支气管周围炎症浸润情况;测定血清IL-1β、IL-4、IL-8、干扰素(IFN)-γ水平;检测肺组织TLR2、MyD88、NF-κB的表达。结果:OVA致敏的小鼠血清IL-1β、IL-4、IL-8水平升高,IFN-γ浓度降低; OVA致敏导致明显的支气管周围炎症细胞浸润,使支气管炎症分级指数有明显提高;BML-111或IL-1β抗体治疗均能明显阻止上述OVA介导的炎症变化(χ2=28.14,P<0.01)。OVA致敏使肺组织TLR2、MyD88 表达及NF-κB活性升高,BML-111及抗IL-1β抗体可抑制由OVA引发的上述表达变化。结论:OVA可诱导产生气道炎症,这一作用可能受TLR2/MyD88/NF-κB信号通路调控,IL-1β在这一过程中起了至关重要的作用。BML-111和IL-1β抗体可能通过对TLR2/MyD88/NF-κB信号通路的负调控而实现抑制OVA诱发的呼吸道炎症的作用。     

基于TLR2/MyD88/NF-κB信号通路探讨加味少腹逐瘀汤对寒湿瘀结证子宫内膜异位症痛经小鼠腹腔炎症微环境干预作用

目的 探讨加味少腹逐瘀汤对寒湿瘀结证子宫内膜异位症痛经小鼠腹腔炎症微环境的干预机制。方法 构建动物模型后随机分组。以自主活动次数、粪便含水率、热痛潜伏期评价证候;以子宫及异位病灶大小评价疗效;HE染色比较病理变化;免疫组化检测异位组织中NF-κB的表达及其入核情况;qPCR法和Western blot测定病灶中TLR2、MyD88、NF-κB的mRNA和蛋白表达;ELISA检测TNF-α、IL-6、PGE2、E2、P。结果 与假手术组对比,模型小鼠自主活动减少,热痛潜伏期缩短,粪便含水率增加;子宫体积增大,腹腔可见明显异位灶且HE染色显示炎症浸润;免疫组化显示NF-κB表达增加;异位组织TLR2、MyD88、NF-κB mRNA及蛋白表达增加,外周血TNF-α、IL-6、PGE2、E2增高,P下降。与模型组相比,各治疗组子宫体积减小、异位灶重量减轻、疼痛潜伏期延长;中药高剂量组小鼠自主活动次数增加、粪便含水率减少;药物干预后炎症反应改善、NF-κB表达下降;TLR2、MyD88、NF-κB的mRNA及蛋白表达降低;且外周血TNF-α、IL-6、PGE2、E2降低、P升高。结论 加味少腹...     

TLR/MyD 88/NF-κB信号通路参与不同疾病作用机制研究进展

TLR/MyD88/NF-κB信号通路是机体炎症体系中的重要途径,其广泛存在于各种组织细胞中,参与多种疾病的发生与调控,如自身免疫性疾病、炎症性疾病、感染性疾病、过敏性疾病等。Toll样受体(TLR)是一种跨膜蛋白,能够识别多种类型的病原相关分子模式(如脂多糖、尿酸钠晶体、病毒双链RNA等),引起机体炎症免疫应答,而所有的TLR都能激活MyD88依赖性途径,从而活化NF-κB,最终导致炎症介质和细胞因子的释放,起到抗炎免疫调节作用。目前,对TLR/MyD88/NF-κB信号通路的研究较为深入,同时也取得了一定的进展。该文将从TLR/MyD88/NF-κB信号通路在机体中的作用机制入手,对其在不同疾病中的调控作用进行综述。     

麻杏石甘汤对流感病毒肺部感染小鼠肺组织TLR2/4-MyD88信号通路蛋白表达的效应机制

目的：探讨麻杏石甘汤对流感病毒肺部感染模型肺组织TLR2/4-MyD88信号通路蛋白表达的效应机制。方法：选取80只SPF级Balb/c小鼠为研究对象，根据随机数字表法分为对照组、模型组、奥司他韦组、麻杏石甘汤组，每组20只。比较各组肺组织TLR2、TLR4、MyD88、NF-κB水平。结果：给药后3 d，与对照组相比，模型组TLR2、TLR4、NF-κB水平升高；与模型组相比，给药组TLR2水平降低，奥司他韦组和麻杏石甘汤组TLR4水平降低，麻杏石甘汤组NF-κB水平降低（P<0.05）。给药后7 d，与对照组相比，模型组TLR4、MyD88水平升高；与模型组相比，麻杏石甘汤组TLR4、MyD88水平降低，奥司他韦组MyD88水平降低（P<0.05）。结论：麻杏石甘汤通过调节TLR2/4-MyD88信号通路蛋白表达水平起到流感病毒肺部感染抗病毒的作用。     

甘草酸对慢性肾脏病大鼠心肌HMGB1/TLR4/NF-κB/HIF-1α信号通路的影响

目的 探讨应用甘草酸（Gly）治疗时对慢性肾脏病（CKD）大鼠心室肌高迁移率族蛋白B1/Toll样受体4/核因子κB/缺氧诱导因子1α(HMGB1/TLR4/NF-κB/HIF-1α)信号通路的影响。方法 将38只Wistar大鼠按随机数字表法分为4组：假手术（Sham）组、Sham+Gly组、CKD组、CKD+Gly组，5/6肾切除制备CKD模型，Gly腹腔注射给药（80 mg/kg）。4周后行血流动力学及心脏彩超观察各组大鼠心脏功能；心室取血检测生化指标；心肌组织取材检测HMGB1、TLR4、NF-κB、HIF-1α蛋白表达的变化。结果 与Sham组相比，CKD组肌酐、尿酸、尿素氮和血清镁水平增高（P<0.05），血压升高，舒张期室间隔厚度、收缩期左心室内径增加，左心室射血分数降低，E/A比值降低，肺动脉血流加速时间延长（P<0.05）;HE染色可见心肌细胞肥大，Masson染色见心肌纤维化程度增加（P<0.05），心肌组织HMGB1、NF-κB、HIF-1α蛋白表达水平上调（P<0.05）。与CKD组相比，CKD+Gly组收缩期室间隔厚度增加，左心室射血分...     

栀子苷对缺氧/复氧小胶质细胞TLR4通路的影响

目的研究缺氧/复氧对原代培养的小胶质细胞TLR4受体及其通路中MyD88、NF-κBp65、p-ERK1/2、p-IκBα和p38的影响和不同浓度栀子苷的干预作用,以揭示栀子苷治疗脑缺血的分子生物学机制。方法原代培养小胶质细胞,采用缺氧/复氧的方式制备模型,用栀子苷125、250和500μmol.L-1 3个浓度梯度进行干预,用逆转录聚合酶链反应检测小胶质细胞TLR4 mRNA的表达,Western blot检测TLR4、p-IκBα、p38、p-ERK1/2蛋白,免疫荧光双染观察MyD88和NF-κB;结果缺氧/复氧激活了TLR4通路,并通过MyD88依赖途径激活了下游蛋白MyD88、NF-κBp65、p-ERK1/2、p-IκBα和p38;栀子苷250和500μmol.L-1组抑制了通路蛋白的活性;结论缺氧/复氧使TLR4通路蛋白磷酸化激活。栀子苷通过对TLR4通路蛋白的抑制发挥抗炎效应,促进脑缺血的恢复。     

红景天苷对脂多糖诱导的小鼠心肌损伤保护作用的研究

目的:研究红景天苷对脂多糖诱导的小鼠心肌损伤的保护作用及其机制。方法:选取雄性Balb/c小鼠50只,随机分为对照组、模型组、地塞米松组、红景天苷低、高剂量组。地塞米松和红景天苷高、低剂量连续灌胃7 d,每天1次,最后一次灌胃后1 h,除对照组外,其余各组腹腔注射LPS,12 h后处死,取血和心脏。结果:红景天苷组小鼠心肌病理改变明显减轻于模型组;相比于模型组,红景天苷组能减少血清中TNF-α、IL-6的含量;减少心肌组织中TLR4、My D88和NF-κBp65蛋白的表达。结论:红景天苷减轻脂多糖诱导的小鼠心肌损伤,其机制可能通过调节TLR4/My D88/NF-κBp65信号通路,抑制炎症反应。     

低剂量氯胺酮对MPTP诱导帕金森病小鼠神经功能及炎性因子的影响#br# #br#

摘要：目的　探讨低剂量氯胺酮对MPTP诱导帕金森病（PD）小鼠神经功能及神经炎症的影响。方法　50只C57BL/6小鼠按照随机数字表法分为NC组、PD组、PD+Keta-L组、PD+Keta-M组和PD+Keta-H组,每组10只。PD+Keta-L、PD+Keta-M、PD+Keta-H组分别用25、50和75 mg/kg的氯胺酮腹腔注射处理,每天1次,共2 d,而后PD组及PD+Keta-L、PD+Keta-M、PD+Keta-H组腹腔注射MPTP 20 mg/kg,每天1次,连续20 d,建立亚急性PD小鼠模型。观察各组小鼠步态、改良神经功能缺损评分（MNSS）;HE染色观察脑部神经细胞形态变化;免疫组化法检测神经细胞酪氨酸羟化酶（TH）表达,原位缺口末端标记（TUNEL）法检测神经细胞凋亡情况;酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测脑组织肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-6、IL-1β水平;Western blot法检测脑组织Toll样受体4（TLR4）、髓样分化因子88（MyD88）、核因子（NF）-κB p65蛋白水平。结果　与NC组相比,PD组步态异常,MNSS评分、脑组织神经细胞凋亡率以及TNF-α、IL-6、IL-1β水平升高,TH阳性细胞比例降低（P＜0.05）;与PD组相比,PD+Keta-L组步态改善,MNSS评分、神经细胞凋亡率、TNF-α、IL-6、IL-1β水平降低,TH阳性细胞比例升高（P＜0.05）,PD+Keta-M、PD+Keta-L组与PD组比较差异无统计学意义。PD组中TLR4、NF-κB p65和MyD88表达显著高于NC组,与PD组相比,PD+Keta-L组TLR4、NF-κB p65和MyD88均显著降低,PD+Keta-M组仅TLR4及MyD88降低（均P＜0.05）,而PD+Keta-H组无明显变化（P＞0.05）。结论　低剂量氯胺酮对PD小鼠具有一定神经保护作用。     

基于TLR4/NF-κB/IL-1β通路研究人参皂苷Rg3对缓解慢性炎症痛的作用机制

目的 研究人参皂苷Rg3缓解慢性炎症痛的作用机制。方法 采用脚掌注射完全弗氏佐剂构建慢性炎症痛小鼠模型，鞘内注射人参皂苷Rg3进行脊髓给药。采用完全随机方法分为对照组、模型组和人参皂苷Rg3组，每组10只。连续给药3 d后观察小鼠足肿胀、痛觉行为及体能变化；采用免疫印迹法检测各组小鼠脊髓组织蛋白表达量。结果 给予完全弗氏佐剂干预后，小鼠各项指标均有不同程度变化，脊髓组织星形胶质细胞标志物——神经胶质纤维酸性蛋白、白细胞介素1β(IL-1β)、细胞Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88和核因子κB(NF-κB)蛋白表达水平均增加。人参皂苷Rg3鞘内给药后，减少了小鼠自发缩足次数，提高了机械痛阈值，延长了转棒停留时间及运动距离，使神经胶质纤维酸性蛋白、IL-1β、TLR4、髓样分化因子88、NF-κB蛋白表达水平被抑制。结论 人参皂苷Rg3通过降低TLR4/NF-κB/IL-1β炎症信号缓解慢性炎症痛。     

丹酚酸B通过抑制NLRP3炎症小体priming阶段减轻缺氧诱导大鼠心肌细胞损伤

目的探究丹酚酸B(Sal B)能否通过调控NLRP3炎症小体priming阶段减轻缺氧诱导大鼠心肌细胞损伤。方法CCK8法检测不同浓度丹酚酸B对大鼠H9C2细胞生长的影响,并挑选出合适的丹酚酸B实验浓度;微孔板、ELISA法检测缺氧造模后实验组,不同浓度给药组,以及抑制剂组LDH/cTn/IL-1β的分泌水平;qPCR以及蛋白质免疫印迹法检测造模后实验组,不同浓度给药组以及抑制剂组TLR4/Myd88/IRAK1/NF-κB/NLRP3基因以及蛋白表达水平。结果经过缺氧处理后,H9C2细胞活性下降,LDH/cTn/IL-1β分泌量升高,TLR4/Myd88/IRAK1/NF-κB/NLRP3在mRNA水平以及蛋白表达上调;与模型组相比,丹酚酸B预处理24h后,H9C2细胞活性增加,LDH/cTn/IL-1β分泌量下降,TLR4/Myd88/IRAK1/NF-κB/NLRP3 mRNA水平以及蛋白表达水平降低。结论丹酚酸B可以通过调控NLRP3炎症小体priming阶段,减轻缺氧诱导的大鼠心肌细胞损伤。     

羧甲基茯苓多糖对溃疡性结肠炎大鼠的研究

目的 研究羧甲基茯苓多糖通过调控Toll样受体4/髓样分化因子88/核转录因子-κB（TLR4/MyD88/NF-κB）信号通路对溃疡性结肠炎大鼠的改善作用。方法 从40只SPF级大鼠中随机分出8只大鼠作为正常组,其余大鼠用2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）联合乙醇造模法建立大鼠溃疡性结肠炎模型,造模成功后大鼠随机分为模型组、对照组和低、高剂量实验组。低、高剂量实验组分别给予0.5%羧甲基茯苓多糖混悬液2 mL和1.5%CMP混悬液2 mL,灌胃;对照组给予0.5 g·kg^-1柳氮磺吡啶灌胃;正常组和模型组每日灌胃给予等量的生理盐水,连续给药14 d。末次给药结束后,测定大鼠体质量、脾质量、结肠长度和质量,用自动化血液学分析仪分析血液参数,用酶联免疫吸附（ELISA）法检测各组大鼠血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）和白细胞介素-12（IL-12）水平;用蛋白质印迹法检测TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关蛋白TLR4、MyD88和NF-κB p65的表达水平。结果 正常组、模型组、对照组和低、高剂量实验组的肠质量分别为（1....     

羟氯喹抑制TLR9/MyD88/NF-κB通路减轻系统性红斑狼疮小鼠肾损伤作用

目的 探讨羟氯喹对系统性红斑狼疮小鼠肾损伤的影响,并基于Toll样受体9/髓样分化因子88/核因子-κB(TLR9/MyD88/NF-κB)信号通路探索其潜在机制。方法 采用ip降植烷的方法构建系统性红斑狼疮雌性小鼠模型,设模型组、羟氯喹（ig 80 mg/kg）组、TLR9抑制剂（ODN2088,ip 4 mg/kg）组、羟氯喹+ODN2088组,另设对照组,每组8只。分别1次/d连续给药5周后采集标本,称体质量、肾脏质量并计算肾脏指数（RI）,检测24 h尿蛋白量（24 h-UTP）和血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）水平;苏木精–伊红染色法（HE）和Masson染色观察肾组织病变和纤维化程度,进行病理评分和胶原容积分数（CVF）;检测肾组织干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)水平;RT-PCR法和Western blotting法检测肾组织TLR9、MyD88、NF-κB p65 mRNA和蛋白表达。结果 与模型组比较,羟氯喹组、ODN2088组和HCQ+ODN2088组小鼠体质量显著升高,RI、24 ...     

金茵清热口服液对人PBMC中TLR2信号通路的调节机制研究

目的：研究金茵清热口服液（JYQR）对人外周血单个核细胞（PBMC）中Toll样2受体（TLR2）信号通路免疫调节作用机制。方法：体外分离、培养人PBMC,设空白对照组和JYQR组,JYQR组加入JYQR刺激PBMC,与空白组经37℃,5% CO₂培养24 h后,分别提取各组PBMC中总RNA、总蛋白、细胞上清液,RT-PCR和Western Blot法检测空白对照组和JYQR组PBMC中相关信号分子TLR2、MyD88、IRAK4、TRAF6、IRF3 mRNA和蛋白的表达情况,ELISA法检测细胞因子IL-1α、IL-6、TNF-α、IFN-α的分泌水平;分别设空白对照组：不作处理;JYQR组：JYQR 2.015 mg·mL^-1;TLR2激动剂组：Pam3CSK4 300 ng·mL^-1;TLR2抑制剂组：OxPAPC 30 μg·mL^-1+JYQR 2.015 mg·mL^-14组,提取核蛋白和浆蛋白,Western Blot法检测IRF3和NF-κB p65的核转位情况。结果：与空白对照组相比,JYQR组中TLR2、IRAK4、TRAF6、IRF3 mRNA表达水平分别上调5.93倍、1.77倍、2.95倍、1.43倍（^*P<0.05,^**P<0.01）;MyD88、TRAF6蛋白的表达分别上调1.26倍、1.24倍（^*P<0.05）,IRAK4和IRF3的相对表达水平差异无统计学意义;细胞因子IL-1α、IL-6的表达下调55%、61%,TNF-α、IFN-α的分泌水平上调4.3倍、2.9倍（^*P<0.05,^**P<0.01）。JYQR预处理PBMC后,IRF3及NF-κB核转位增加,但是经过TLR2抑制剂预处理后,IRF3和NF-κB的核转位减弱;相反,TLR2激动剂预处理可以进一步上调IRF3和NF-κB的核转位。结论：金茵清热口服液对人PBMC中TLR2信号通路的作用机制可能是通过MyD88依赖型信号通路激活中、下游的IRAK4、TRAF6、IRF3以及NF-κB调控终端效应因子发挥免疫调节作用。     

巨噬细胞移动抑制因子siRNA对肺泡上皮细胞Toll样受体及其下游信号转导通路的影响

目的:研究巨噬细胞移动抑制因子siRNA对脂多糖刺激的肺泡上皮细胞Toll样受体(TLR)及其下游信号转导通路的影响和作用机制.方法:用LPS刺激A549细胞,脂质体法分别将巨噬细胞移动抑制因子(MIF) siRNA和非特异性siRNA加入A549细胞进行干预.RTPCR法检测MIF和TLR2、TLR4 mRNA的表达,Western Blot法分析TLR下游信号转导通路元件髓样分化因子88 (MyD88)和干扰素调节因子3(IRF3)蛋白表达,细胞免疫荧光法观察NF-κB核迁移,ELISA法测定细胞培养上清炎症介质TNF-α、IL-1β、IL-6,免疫介质IFN-β分泌水平.结果:MIF siRNA对LPS刺激诱导的MIF和TLR2、TLR4 mRNA高表达有显著的下调作用和部分阻断NF-κB(p65)核迁移.LPS刺激诱导后,MIF siRNA显著降低MyD88蛋白表达和炎症介质TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌水平,但MIF siRNA对IRF3蛋白表达和免疫介质IFN-β分泌水平无影响.结论:MIF siRNA能抑制A549细胞的炎症介质TNF-α、IL-1β、IL-6过度分泌,其机制可能是MIF siRNA降低了LPS刺激A549细胞诱导的MIF和TLR2、TLR4高表达,及阻断TLR下游信号转导通路元件MyD88和NF-κB核迁移.     

Baicalin inhibits streptozotocin-induced neuroinflammation in Alzheimer' s disease rat model by TLR4/MyD88/NF-κB pathway北大核心CSCD

Aim To investigate the effects of baicalin on the inflammatory response and Toll-like receptor 4 (TLR4)/myeloid differentiation factor 88 (MyD 88)/nuclear factor kappa B (N F-K B) signaling pathway in Alzheimer' s disease (AD) rat model induced by lateral ventricular injection of streptozotocin (STZ). Methods The AD animal model was constructed by lateral ventricular injection of STZ in SD rats, and divided into sham operation group, model group, low-dose (60 mg -1 • kg-1 • d-1 ) baicalin group, high-dose (120 mg-1 • kg-1 • d-1 ) baicalin group and minocycline group (36 mg-1 • kg-1 • d-1 ). The learning and memory ability of rats were assessed by Morris water maze. The mRNA expressions of tumor necrosis Factor-α(TNF-α), interleukin-6 (IL-6), interleukin-1β(IL-1β) were detected by real-time quantitative PCR, the protein expressions of TLR4, MyD88, N F-Κ B p65, p-NF-κB p65 and nucleus/cytoplasm NF-ΚB p65 were detected by Western blot, and NF-ΚB p65 transfering from cytoplasm to nucleus and the activation of microglia were measured by immunofluorescence. Results Compared with the sham operation group, animals in the model group showed decreased learning and memory capacity, increased mRNA expression of TNF-α, IL-6 and IL-1κ, up-regulated protein expressions of TLR4 and MyD88, the ratio of p-NF-κB p65/NF-κB p65 and the nucleus/cytoplasm ratio of NF-ΚB p65, enhanced expression of NF-KB p65 in nucleus and the activation of microglias. Compared with the model group, baicalin group and minocycline group improved the learning and memory capacity of AD rats, decreased the mRNA expression of TNF-α, IL-6 and IL-1β, down-regulated the protein expressions of TLR4 and MyD88, the p-NF-ΚB P65/NF-KB p65 ratio and the nucleus/cytoplasm ratio of NF-KB p65, and reduced the expression of NF-KB p65 in nucleus and the activation of microglias. Conclusion Baicalin may exert neuroprotective effects by inhibiting the TLR4/MyD88/NF-KB signaling pathway and neuroinflammation response in the AD brain. © 2023 Publication Centre of Anhui Medical University. All rights reserved.     

安子合剂对抗磷脂抗体阳性流产小鼠TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响

目的:研究安子合剂对抗磷脂抗体(APA)阳性流产小鼠Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(My D88)/核因子κB(NF-κB)信号通路的影响,探讨其抗APA阳性流产作用机制。方法:将BALB/c小鼠(♀)随机分为空白对照组、模型组、阿司匹林组(阳性对照,0.019 5 g/kg)和安子合剂低、中、高剂量组(37.7、75.4、150.8 g/kg,以生药计),每组10只。除空白对照组外,其余各组小鼠均以人β2-糖蛋白Ⅰ为诱导剂建立APA阳性流产模型。从妊娠第1天起,各给药组小鼠ig相应药物,空白对照组和模型组小鼠ig等体积生理盐水,每天1次,连续9 d。分别采用实时荧光定量聚合酶链反应法和免疫组化法测定胎盘组织TLR4、髓样分化蛋白2(MD2)、My D88、NF-κB m RNA及其蛋白表达水平。结果:与空白对照组比较,模型组小鼠胎盘组织TLR4、MD2、My D88、NF-κB m RNA及其蛋白表达水平均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,阿司匹林组和安子合剂低、中剂量组小鼠胎盘组织TLR4、MD2、My D88 m RNA及其蛋白表达水平,安子合剂高剂量组小鼠胎盘组织TLR4蛋白表达水平,以及各给药组小鼠胎盘组织NF-κB蛋白表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01);安子合剂低剂量组小鼠胎盘组织TLR4、MD2 m RNA表达水平和MD2、My D88蛋白表达水平较阿司匹林组更低(P<0.05或P<0.01)。结论:安子合剂可抑制APA阳性流产小鼠TLR4/My D88/NF-κB信号通路转导,这可能是其抗APA阳性流产的作用机制之一。     

丹参酮ⅡA磺酸钠联合阿托伐他汀对冠心病患者外周血单个核细胞TLR4、MyD88、NF-κB表达的影响

目的：观察冠心病患者外周血单个核细胞 TLR4、MyD88、NF-κB 的表达,分析丹参酮ⅡA 磺酸钠联合阿托伐他汀对其表达的影响,以 TLR4炎症信号通路为靶点探讨丹参酮ⅡA 磺酸钠治疗冠心病的可能机制。方法选取诊治的冠心病患者160例,同期进行健康体检的正常人100例作为对照。采用 Real time-PCR 和 Western blot 测定外周血单个核细胞 TLR4、MyD88、NF-κB mRNA 和蛋白表达,采用酶联免疫吸附实验（ELISA）测定血清高敏 C-反应蛋白（hs-CRP）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平。160例冠心病患者随机分为观察 A 组和观察 B 组,每组80例。观察 A 组在常规治疗基础上给予阿托伐他汀治疗,观察 B 组在观察 A 组基础上加用丹参酮ⅡA 磺酸钠注射液,疗程均为30 d,比较2组 TLR4、MyD88、NF-κB mRNA 和蛋白表达、hs-CRP、TNF-α水平。结果与对照组比较,冠心病患者组 TLR4、MyD88、NF-κB mRNA 和蛋白表达、hs-CRP、TNF-α水平显著升高（ P ﹤0.05）。TLR4、MyD88、NF-κB 蛋白表达与 hs-CRP、TNF-α呈正相关（ r ＝0.761和0.802,0.699和0.774,0.835和0.749,P 均﹤0.05）。与治疗前比较,治疗后观察 A 组和观察 B 组 TLR4、MyD88、NF-κB mRNA 和蛋白表达、hs-CRP、TNF-α水平均显著降低（ P ﹤0.05）;但观察 B 组降低程度更明显（ P ﹤0.05）。结论丹参酮ⅡA 磺酸钠联合阿托伐他汀通过抑制外周血单个核细胞 TLR4炎症信号通路的激活发挥抗炎作用,可能是丹参酮ⅡA 磺酸钠发挥治疗作用的机制之一。     

三七皂苷R1对LPS诱导的小鼠心肌损伤的保护作用

目的探讨三七皂苷R1(Notoginsenoside R1)对内毒素诱导的C57BL/6J小鼠心肌损伤的保护作用,阐明其抗心肌炎症的作用机制。方法 C57BL/6J小鼠预防性给予三七皂苷R1 3 d后,注射LPS(10 mg.kg-1,ip)建立急性内毒素心肌损伤模型。采用超声心动测定射血分数(EF),缩短分数(FS)等指标,观察小鼠心功能;采用免疫组化检测心室肌中ED-1+和CD11b+炎性细胞的浸润情况;Western blot检测IκBα和NF-κB p65的表达变化;应用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测心肌组织匀浆中TNF-α、IL-1β和VCAM-1、ICAM-1的表达水平。结果超声心动显示,与模型组(LPS组)相比三七皂苷R1能明显抑制LPS诱导的小鼠的左心室收缩功能减弱的情况;免疫组化可观察到R1有效抑制了ED-1+和CD11b+细胞的侵入;Western blot法显示R1对IκBα的降解具有抑制作用,同时对由此产生的NF-κB的活化也具有抑制作用;ELISA实验显示与模型组相比,R1明显降低了组织中TNF-α、IL-1β的浓度,抑制心肌组织中VCAM-1和ICAM-1的表达。结论三七皂苷R1对LPS引起的心肌炎症具有明显的抑制作用,能有效改善由此导致的心肌损伤。     

人参皂苷Rg1调控TLR4/NF-κB信号通路抗重症肺炎大鼠心肌组织损伤的机制探讨

目的　探讨人参皂苷Rg1对重症肺炎大鼠心肌组织损伤的影响及其机制。方法　将40只大鼠以气管注入肺炎克雷伯菌液法构建重症肺炎模型后,将其均分为模型组和低、中、高剂量药物组;另取10只未处理大鼠作为对照组。低、中、高剂量药物组大鼠以2.5、5和10 mg/kg人参皂苷Rg1灌胃,模型组和对照组大鼠以等量生理盐水灌胃,每日1次,持续14 d。苏木精-伊红染色法观察大鼠心肌组织病理形态并行积分统计;采用心脏彩超检测大鼠心功能指标,包括左室舒张压（LVDP）、左室舒张末压（LVEDP）、左室最大舒张速率（-dP/dtmax）和左室最大收缩速率（+dP/dtmax）值;酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测血清中B型钠尿肽（BNP）、肌钙蛋白I（cTnI）和肌酸激酶同工酶MB（CK-MB）含量;实时荧光定量PCR（qPCR）法检测心肌组织中白细胞介素（IL）-6、IL-1β和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测心肌组织中凋亡相关蛋白活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶3（cleaved caspase-3）和非活性态（procaspase-3）、Bcl-2、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、Toll样受体4（TLR4）、髓样分化因子88（MyD88）、核因子-κB（NF-κB）p65和磷酸化（p）-NF-κB p65蛋白表达水平。结果　对照组大鼠心肌组织结构正常,模型组大鼠心肌组织中心肌细胞排列紊乱且肿胀变形,肌纤维部分断裂且伴随有炎性细胞浸润;相对模型组,低、中、高剂量药物组大鼠心肌组织中上述细胞形态变化明显改善。与对照组比较,模型组大鼠心肌组织病理积分,LVEDP水平,BNP、cTnI、CK-MB含量和IL-6、IL-1β、TNF-α mRNA水平,cleaved caspase-3/procaspase-3和Bax/Bcl-2比值以及TLR4、MyD88、p-NF-κB p65蛋白表达水平均明显升高,而LVDP、-dP/dtmax和+dP/dtmax水平明显降低（P＜0.05）;以人参皂苷Rg1灌胃干预后可呈剂量依赖性逆转建模引起的上述变化（P＜0.05）。结论　人参皂苷Rg1可通过减轻炎症反应和心肌细胞凋亡保护重症肺炎大鼠心肌组织,其作用机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路活化有关。