EB病毒活化端粒酶与p16INK4A/E2F1调控的关系

目的 探讨EB病毒诱导人鼻咽上皮细胞永生化过程中，EB病毒活化端粒酶与EB病毒介导的细胞周期紊乱的关系。方法 利用Western Blotting检测p16^INK4A和E2F1蛋白表达情况；利用hTERT—SEAP报道基因和端粒酶PCR—ELISA分别检测hTERT表达和端粒酶活性。结果 EB病毒下调p16^INK4A表达，并上调E2F1表达；与之相关，EB病毒诱导hTERT表达，并活化端粒酶活性。结论 初步揭示EB病毒通过细胞周期紊乱活化端粒酶活性而诱导人鼻咽上皮细胞永生化的作用。     

RNA干扰对肾癌细胞端粒酶活性及增殖、凋亡的影响

目的 探讨针对人端粒酶RNA（hTR）及其催化亚基（hTERT）的小干扰RNA（siRNA）对肾癌细胞端粒酶活性及其增殖、凋亡的影响。方法 将hTR-siRNA、hTERT-siRNA（100nmol／L）单独或联合转染人肾癌786—0细胞,采用RT-PCR法检测hTR、hTERT mRNA表达,TRAP-ELISA法检测端粒酶活性,MTT法检测细胞增殖,免疫组化TUNEL法检测细胞凋亡。结果 （1）hTR-siRNA可显著降低786—0细胞hTR mRNA表达（P〈0．01）,hTERT-siRNA可显著降低hTERT mRNA表达（P〈0．01）,但彼此互不影响。（2）二者均能显著抑制端粒酶活性（P〈0．01,P〈0．01）,并增加786—0细胞增殖抑制率及凋亡细胞阳性率（P〈0．01,P〈0．01）。二者联合应用与单独应用差异亦无显著性（P〉0．05）。结论 hTR、hTERT siRNA通过抑制各自基因表达,抑制人肾癌细胞端粒酶活性,进而抑制增殖、促进凋亡。     

肺癌组织中端粒酶基因与端粒酶活性关系的研究

目的 探讨肺癌组织中端粒酶基因hTR、hTERT与端粒酶活性的表达是否与肺癌的发生发展有关，深入了解端粒酶基因对端粒酶活性的调控是在基因水平还是在转录水平。方法 采用TRAP－PCR和RT－PCR方法分别检测68例肺癌组织及相应癌旁肺组织中端粒酶活性、端粒酶基因hTR和hTERP的表达。结果 68例肺癌组织中端粒酶阳性率为79．4％（54／68）,hTR阳性率为98．5％（67／68）,hTERT阳性率为91．2％（62／68）。68例癌旁组织中无一例表达端粒酶阳性，但大多数癌旁组织均表达hTR(62/68,91.2%)，仅7例hTERT表达阳性（10．3％），与hTR相比，hTERT同端粒酶具有更高的一致性，其一致率为89．0％（121／136），而ThTR与端粒酶的一致率为43．4％（59／136）。结论 端粒酶的活性可能在肺癌发生发展中起重要的作用。hTR与hTERT可能是在转录后或翻译后水平对端粒酶进行调控的。     

端粒酶亚单位调控端粒酶活性与肿瘤细胞凋亡的研究

 作为维持染色体两端端粒 (Telomere)长度的端粒酶 (Telomerase)与细胞永生化、恶性变有密切关系。在人体绝大多数恶性肿瘤细胞中端粒酶活性增高 ,而在正常体细胞中一般为阴性。端粒酶活性受包括 5种端粒酶亚单位在内的体内外多种因素的调控。端粒酶活性下调 ,可诱导恶性肿瘤细胞出现凋亡。这为以端粒酶为靶点的肿瘤基因治疗提供了新突破点。近年发现 ,端粒酶活性下调诱导的凋亡调控机制涉及体内更为复杂的因素。本文就该领域内最新研究作一综述。     

卵巢癌及其癌旁正常组织端粒长度、端粒酶活性的测定及意义

目的端粒酶的激活与肿瘤增殖密切相关，本实验旨在评价卵巢癌及其癌旁正常组织端粒长度、端粒酶活性及意义．方法，用Southern印迹杂交法测定卵巢癌及癌旁正常组织端粒长度，TRAP-PCR-银染法测定端粒酶活性的改变、RT-PCR扩增端粒酶基因hTERT的表达．结果：卵巢癌组织与癌旁正常组织中hTERT的mRNA表达与端粒酶活性表达一致，卵巢癌组织中84．0％（42／50）有端粒酶活性表达，而在卵巢癌旁正常组织中只有8．0％（4／50）有端粒酶活性表达。不同卵巢癌组织的端粒长度差异无统计学意义，卵巢癌组织端粒长度短于癌旁正常组织，但差异无统计学意义．结论：检测端粒酶活性可用于卵巢癌临床诊断，端粒的长度不能精确地反映端粒酶活性．     

双向凝胶电泳图像分析方法的建立

目的: 建立一套双向凝胶电泳图像分析方法,为下一步差别蛋白的鉴定提供依据.方法:采用一步法分别提取人永生化食管上皮细胞系SHEE和由SHEE转化而来的食管癌细胞系SHEEC的可溶性总蛋白.经双向凝胶电泳分离后,应用Bio-Rad公司的双向电泳凝胶图像分析软件PDQuest 6.2分析SHEE与SHEEC之间可溶性总蛋白的差异表达情况.结果:SHEE和SHEEC细胞的双向电泳图谱经背景消减、点检测和匹配后,获得了各自的差异蛋白点.其中有7个蛋白点只出现在SHEE细胞中,有2个蛋白点只出现在SHEEC细胞中.结论:利用PDQuest 6.2凝胶图像分析软件可快速有效地对两个密切相关的生物系统之间蛋白质样品双向凝胶电泳结果的差别进行分析处理.     

E6/E7 genes of human papilloma virus type 18 induced immortalization of human fetal esophageal epithelium

To study the role played by human papilloma virus (HPV) in carcinogenesis, immortalized esophageal epithelial cells were induced by E6 and E7 genes of HPV type 18 and the biological behavior was studied. Human fetal esophageal epithelial cells were transfected with recombined HPV18E6E7AAV and were cultured and passaged in medium M199. In both the 10th passage (SHEE10) and the 31st passage (SHEE31), their proliferative rates by flow cytometry and their abilities to grow and form colonies in soft agar, or to form tumors in SCID mice were examined. The HPV18 genes of E6E7 and its expression were determined using PCR methods. Cellular telomerase activity was detected by TRAP and chromosomes were analyzed by standard method. Immortalized cell lines of esophageal epithelium induced by the HPV18E6E7 were successfully established and cultured for >100 passages over 4 years. The result of PCR showed that the E6E7 gene of HPV18 was detectable in both cell clones. Both of them were unable to grow in soft-agarose medium and failed to produce tumors in SCID mice. Flow cytometry demonstrated an average of 43% proliferation index in SHEE31, but 28% in SHEE10. Telomerase activity was clearly identified in SHEE31 but not in SHEE10. Cytogenetic analysis demonstrated progression of chromosomal abnormalities with increasing trisome. Our data indicated that genes E6/E7 of the HPV18 were capable of inducing immortalization in fetal esophageal epithelial cells. The immortal phenotype requires both activation of telomerase and genetic alterations that abrogate normal differentiation and promote cellular proliferation. This cell line can assist us to characterize the role played by HPV in carcinogenesis.