补肾益气和血方对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜腺体凋亡的影响

目的 观察补肾益气和血方对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜腺体凋亡的影响. 方法 复制小鼠胚泡着床障碍模型,分为对照组、模型组和治疗组,每组30只.观察小鼠妊娠率和着床胚泡数,分析子宫内膜腺体的凋亡情况,检测子宫内膜腺体的增殖细胞核抗原(PCNA)、bax、bcl-2和激活型Caspase-3蛋白表达情况. 结果 模型组妊娠率和平均着床胚泡数均显著降低,治疗组两者均较模型组显著提高(P<0.05或P<0.01).模型组子宫内膜腺体增殖指数(PI)明显高于对照组(P<0.01),而凋亡指数(AI)则明显低于对照组(P<0.05);治疗组与模型组比较,腺体PI明显降低而AI明显增高(P<0.01),两者与对照组比较差异均无统计学意义.模型组子宫内膜腺体中bax和激活型Caspase-3蛋白显著低于对照组(P<0.01);治疗组两者则显著高于模型组(P<0.01);治疗组与对照组差异无统计学意义. 结论 促进子宫内膜腺体中bax蛋白的表达和Caspase-3的激活,调节植入窗期腺体细胞增殖和凋亡的平衡,可能是补肾益气和血方促进子宫内膜接受性建立和改善胚泡着床障碍的机制之一.     

补肾益气和血方对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜P21表达的影响

目的：观察补肾益气和血方对胚泡着床障碍小鼠着床部位子宫内膜中周期素依赖的蛋白激酶抑制物P21和增殖细胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen,PCNA)表达的影响。方法：采用免疫印迹法观察胚泡植入 ［即妊娠第6天(pregnancy day 6,Pd6),Pd7和Pd8］时P21在整个子宫中的表达,采用免疫组化法进一步定位观察着床部位子宫内膜中PCNA和P21的表达。结果：与对照组相比,模型组子宫内膜PCNA和P21的出现和消失在时间和空间上均明显滞后；补肾益气和血方能促进PCNA和P21及时有序地表达或消失,从而改善胚泡着床障碍小鼠子宫内膜的蜕膜反应。结论：补肾益气和血方可通过促进子宫内膜的蜕膜反应来改善胚泡着床,其作用机制与其促进子宫内膜PCNA和P21时空有序地表达和消失密切相关。     

补肾安胎方调节胚泡着床障碍小鼠雌、孕激素的实验研究

目的观察补肾安胎方对着床障碍小鼠妊娠率和着床点数的影响.方法将妊娠小鼠随机分为3组,于妊娠第1天正常组和模型组灌胃自来水,中药组灌胃补肾安胎方;于妊娠第3、4天每天2次正常组皮下注射溶剂,模型组和中药组分别注射吲哚美辛（4.33 mg/kg）造成小鼠胚泡着床障碍的动物模型,妊娠第5、8天留取血清;采用放免法检测3组小鼠雌、孕激素含量;妊娠第8天观察比较3组小鼠妊娠率、妊娠小鼠着床点数;采用免疫组化技术检测子宫雌、孕激素受体表达水平.结果（1）小鼠妊娠率和胚泡着床点数：模型组（27.3%、5.3±0.7）显著低于正常组（90.9%、13.3±2.8,P＜0.01）,中药组（72.7%、10.7±2.2）较模型组显著增高（P＜0.05）.（2）血清雌激素水平：妊娠第5、8天时中药组均高于模型组（P＜0.05或P＜0.01）,第8天时高于正常组（P＜0.01）.（3）血清孕激素水平：妊娠第5、8天时模型组、中药组均低于正常组（P＜0.05或P＜0.01）,但第8天中药组显著高于模型组（P＜0.01）.（4）免疫组织化学结果：中药组雌、孕激素受体表达显著高于模型组.结论补肾安胎方能提高吲哚美辛诱导着床障碍小鼠妊娠率和着床点数,其机制可能与该方能改善甾体激素水平,促进子宫内膜雌、孕激素受体的表达有关.     

补肾固黄汤改善胚泡着床障碍小鼠子宫内膜组织形态的实验研究

目的 观察中药补肾固黄汤对胚泡着床障碍小鼠子官内膜组织学形态的影响.方法 将45只雌性昆明小鼠随机分为中药组、模型组、正常组.中药组在孕前预防性行补肾固黄汤灌胃2次,孕后每天灌服补肾固黄汤;其余两组给予等体积生理盐水.妊娠第4天中药组、模型组皮下注射米非司酮溶液造成小鼠胚泡着床障碍.妊娠第5天,收集各组小鼠子宫,应用光学显微镜观察小鼠子宫内膜组织形态学变化.结果 妊娠第5天,模型组小鼠子宫内膜腺体数量少、腺腔小而直,间质细胞体积小,间质紧密;而正常组则表现为腺体数目多,腺腔扩张、弯曲,腺腔、官腔均有较多分泌物,间质疏松、水肿;中药组与正常组相似.结论 补肾固黄汤可以改善胚泡着床障碍小鼠子宫内膜组织学形态,从而提高子官内膜容受性.     

保胎液对胚泡着床障碍小鼠雌孕激素的影响

目的:观察保胎液对胚泡着床障碍模型小鼠的雌、孕激素的影响.方法:采用米非司酮小鼠胚泡着床障碍模型.将孕鼠随机分为正常组、模型组、西药对照组和中药(高、中、低3种剂量)治疗组.从妊娠第1天起分别给予生理盐水、地屈孕酮和保胎液(高中低3种剂量)灌胃治疗.于妊娠第4天上午皮下注射米非司酮,每只0.08 mg.正常组不予任何处理.于妊娠第5天处死小鼠留取血清,运用罗氏电化学发光法检测血清雌激素(E2)和孕激素(P)的含量.结果:与模型组比较,保胎液各治疗组均有利于改善血清雌孕激素水平(P＜0.05),与西药对照组比较无统计学意义(P＞0.05).结论:保胎液可以调节血清雌激素(E2)和孕激素(P)的含量,从而改善着床障碍小鼠子宫内膜容受性,促进胚泡着床.     

健胎液对胚泡着床障碍小鼠胚泡着床作用的研究

探讨健胎液(药物:桑寄生、丹参、当归、黄芪、川芎)对胚泡着床障碍小鼠胚泡着床及子宫内膜发育的影响.采用米非司酮诱导的小鼠胚泡着床障碍模型,予健胎液治疗,于妊娠第8天处死小鼠,观察胚泡着床率、平均着床胚泡数以及子宫内膜和卵巢的形态结构变化.结果:中药组着床率和平均着床胚泡数较模型组显著提高,与正常组无显著差异;模型组子宫内膜发育不良,中药组子宫内膜的发育与正常组相似;三组小鼠卵巢的形态结构变化无显著差异.提示健胎液能促进胚泡着床障碍小鼠胚泡着床,改善子宫内膜的发育.     

针刺对胚泡着床障碍大鼠胚泡着床及发育的影响

目的:探讨针刺提高辅助生殖技术成功率的作用机制。方法:将孕鼠随机分为正常组、模型组及针刺组。模型组和针刺组均采用米非司酮造模,针刺组自妊娠第1天连续接受1w针刺治疗。观察各组大鼠妊娠率及平均着床胚泡数,比较其子宫、卵巢重量及单个胚泡大小、重量的差异;并用光镜观察各组大鼠子宫内膜及卵巢的形态结构差异。结果:针刺组妊娠率及平均着床胚泡数较模型组显著提高(P<0.01);模型组子宫、卵巢重量等均较正常组及针刺组轻,且子宫内膜发育不良;针刺组子宫内膜发育与正常组相似。结论:针刺可在一定程度上逆转米非司酮抗着床的作用,促进大鼠胚泡着床及胚泡发育。     

寄生助孕冲剂对胚泡着床障碍小鼠HOXA10表达的影响

目的 观察寄生助孕冲剂对胚泡着床障碍模型小鼠HOXA10表达的影响.方法 将孕鼠随机分为正常组、模型组、西药对照组和中药（高、中、低剂量）治疗组,从妊娠第1天起分别给予生理盐水、地屈孕酮和寄生助孕冲剂（高中低剂量）灌胃治疗.妊娠第4天上午皮下注射米非司酮0.08mg/只,正常组不予任何处理.妊娠第5天处死小鼠留取子宫组织,运用实时荧光定量PCR法检测内膜中HOXA-10的含量.结果 与模型组比较,中药（高、中剂量）治疗组均有利于提高HOXA-10的表达（P〈0.05）.结论 寄生助孕冲剂可以提高同源框基因10的表达量,从而改善着床障碍小鼠子宫内膜容受性,促进胚泡着床.     

安坤种子丸对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜HOXa-10表达的影响

目的:观察安坤种子丸对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜HOXa-10表达的影响,探讨其对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜容受性的影响及其机制。方法:将有规律动情周期的雌性小鼠随机分为正常组、模型组和中药组,每组25只。先期用安坤种子丸对中药组小鼠进行灌胃,雌、雄合笼后观察雌鼠阴栓率,妊娠第4天对中药组和模型组小鼠颈背部皮下注射米非司酮进行干预,制成胚泡着床障碍模型;于妊娠第5、6天处死小鼠,留取子宫标本。采用Q-PCR技术和免疫组化方法检测小鼠子宫内膜HOXa-10基因及蛋白的表达;同时制备HE切片以观察各组小鼠子宫内膜形态结构的变化,统计分析各组间妊娠率、平均着床胚泡数及着床率等指标的变化。结果:安坤种子丸可以提高胚泡着床障碍小鼠子宫内膜HOXa-10基因及蛋白的表达,妊娠率、平均着床胚泡数及着床率等指标虽低于正常组,但高于模型组。结论:安坤种子丸可能通过提高雌鼠子宫内膜上HOXa-10基因及蛋白的表达,一定程度上改善着床障碍小鼠子宫内膜容受性,促进胚泡着床。     

补肾安胎方对胚泡着床障碍模型小鼠着床局部PGI2及其核受体的影响

目的 观察补肾安胎方对胚泡着床障碍小鼠着床局部前列环素I2（PGI2）及其核受体过氧化物酶体增殖激活因子受体δ（PPARδ）表达的影响。方法 将妊娠小鼠随机分为正常组、模型组和中药组(每天灌服补肾安胎液12.4 g/kg）,在妊娠第4、5、6、8天取3组小鼠妊娠子宫,采用放射免疫法测定PGI2含量,RT-PCR和免疫组织化学方法检测PPARδ mRNA及蛋白的表达。结果 模型组小鼠子宫内膜着床点PGI2含量明显低于正常组（P＜0.01）,而中药组PGI2含量较模型组显著增高（P＜0.01）。模型组小鼠子宫内膜中PPARδ的表达均滞后于正常组（P＜0.05）;小鼠子宫内膜中PGI2含量和PPARδ的表达正常组和中药组组间比较,差异无统计学意义。结论 补肾安胎方可能通过促进胚泡着床局部的PGI2及其核受体PPARδ的表达来改善胚泡着床障碍小鼠的胚泡着床。     

补肾解毒活血法与益气补血法对骨髓抑制小鼠造血功能影响的比较研究

目的:比较补肾解毒活血法与益气补血法对环磷酰胺(CTX)所致骨髓抑制小鼠造血功能的影响及其作用机制的不同特点.方法:昆明种小鼠80只,随机分为4组,正常对照组、模型组、补肾解毒活血组(20.55 g·kg -1·d-1)和益气补血组(17.47 g·kg-1·d-1).采用CTX 100 mg·kg-1 ip,连续3d,制成骨髓抑制小鼠模型.各组于造模完成后次日开始ig连续10d.分别于造模前及造模后1,3,5,7,10,14 d动态检测外周血象;于末次给药次日后进行骨髓有核细胞计数(BMNC)及粒-单核系集落形成单位( CFU-GM)、红系集落形成单位(CFU-E)、和红系爆式集落形成单位(BFU-E)集落计数.结果:补肾解毒活血方和益气补血方均可明显升高模型小鼠的WBC,PLT,BMNC,可促进造血祖细胞(HPC)增殖,CFU-GM,CFU-E,BFU-E集落数均显著高于模型组(P＜0.01);补肾解毒活血方对血小板的恢复优于益气补血方.结论:补肾解毒活血方和益气补血方均可促进骨髓造血祖细胞集落生成,具有减轻和改善化疗后骨髓抑制的效果,而前者尤可减轻血小板减少、促进其恢复;其作用机制可能在骨髓细胞分化过程或造血微环境等途径上有不同.     

补肾益气活血方对胎儿生长受限孕鼠胎盘滋养细胞凋亡的影响

目的观察补肾益气活血方对胎儿生长受限(fetal growth restriction,FGR)孕鼠胎盘滋养细胞凋亡的影响,探讨该方治疗FGR的机制。方法采用被动吸烟法建立大鼠FGR模型,将32只孕鼠随机分为正常组、模型组、中药组(采用补肾益气活血方治疗)、西药组(采用精氨酸治疗)。运用HE染色观察各组胎盘的组织学变化,TUNNEL法检测胎盘滋养细胞的凋亡及RT-PCR、免疫组化检测胎盘滋养细胞Bcl-2、Bax的表达。结果模型组胎盘绒毛出现血液淤积及缺血,中药可明显改善FGR胎盘绒毛的微循环,而西药组则部分改善。正常组、模型组、中药组、西药组的绒毛两层合体细胞凋亡指数中位数依次为45%、75%、57%、70%,正常组和中药组的凋亡指数均低于模型组(P0.01),西药组与模型组比较差异无统计学意义。各组胎盘Bcl-2、Bax的mRNA和蛋白表达比较,差异均无统计学意义。结论补肾益气活血方可改善FGR胎盘微循环,防止FGR胎盘滋养细胞的过度凋亡,但其并非通过经典的Bax/Bcl-2凋亡途径起作用,其作用途径仍待探讨。     

补肾安胎方及其不同组分对胚泡着床障碍小鼠雌、孕激素及其受体的影响

目的比较补肾安胎方、补肾方及活血方对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜容受性的影响及其机制。方法采用吲哚美辛诱导小鼠胚泡着床障碍模型,从妊娠第1天起分别予补肾安胎方、补肾方、活血方治疗。于妊娠第5、6天处死小鼠,留取血清及子宫标本。采用放射免疫法检测血清雌激素(E2)和孕激素(P)的含量;采用免疫组织化学方法检测子宫雌、孕激素受体(ER、PR)的表达。结果补肾安胎方可以提高妊娠第6天血清P及E2水平,并且促进着床位点ER及PR的表达。而补肾方和活血方虽有轻度促进ER、PR表达作用,但其治疗作用弱于补肾安胎方。结论将补肾法和活血法结合起来的补肾安胎方可以通过对E2、P、ER、PR的影响,从更大程度上改善着床障碍小鼠子宫内膜容受性,促进胚泡着床。     

补肾益气活血方药对胎儿宫内生长迟缓胎鼠脑葡萄糖转运蛋白基因表达的影响

目的:探讨补肾益气活血方药防治胎儿宫内生长迟缓(IUGR)的分子机制。方法:以被动吸烟法建立 IUGR 的动物模型,分为正常对照组(正常组)、IUGR 组、中药治疗组(中药组)、及左旋精氨酸治疗组(精氨酸组)。检测了各组胎鼠脑的重量、胎鼠血清葡萄糖水平以及胎鼠脑中葡萄糖转运蛋白(GLUT)家族中 GLUT_1、GLUT_3 mRNA 水平和蛋白浓度,其中 mRNA 水平和蛋白浓度分别利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和 Western blot 的方法进行检测。结果:IUGR 组和精氨酸组脑的重量、胎鼠血清葡萄糠水平较中药组和正常组明显降低(P<0.05),而中药组和正常组之间无明显差异。胎脑 GLUT_1 mRNA 水平在 IU-GR 组中明显升高,其余三组间无明显差异;而 GLUT_3 mRNA 水平在中药组中明显高于 IUGR 组(0.9458±0.1448 vs 0.7951±0.1534 P=0.0365)。GLUT_3和 GLUT_1(55KD)的蛋白浓度在 IUGR 组及精氨酸组中都明显降低,中药组和正常组之间差异无显著性。GLUT_1(45KD)的蛋白浓度在4组之间均无差异。结论:胎鼠血...     

补肾活血方对缺血再灌注脑损伤小鼠学习记忆功能及海马神经细胞凋亡的影响

目的：观察补肾活血方对缺血再灌注脑损伤小鼠学习记忆功能及海马神经细胞凋亡的影响。方法：采用双侧颈总动脉夹闭反复缺血再灌术,建立脑缺血学习记忆障碍及海马神经细胞凋亡小鼠模型。以Morris水迷宫测试小鼠学习记忆功能;HE及尼氏染色光镜观察皮层及海马病理形态改变;碘化丙啶（PI）与Hoechst 33342及流式细胞仪检测凋亡细胞,与阿尼西坦及灯盏花注射液对照,观察小鼠学习记忆功能及海马神经细胞凋亡的变化及补肾活血方对其影响。结果;模型组小鼠记忆能力潜伏期较正常对照组及假手术组延长（P＜0.05);皮层及海马神经细胞出现退化、变性、坏死等病理改变;海马神经细胞凋亡百分率升高,术后6h达到高峰（P＜0.01)。补肾活血方能缩短小鼠潜伏期（P＜0.05);降低海马神经细胞凋亡百分率,与模型组比较,差异有显著性(P<0.05)。结论：补肾活血方具有改善缺血再灌注脑损作小鼠学习记忆功能及减轻缺血再灌注后海马神经细胞凋亡的作用。     

基于Ang/Tie-2信号通路研究补肾活血方导法调控大鼠种植窗期子宫组织血管生成的助孕机制＊

目的 基于Ang/Tie-2信号通路，探讨补肾活血方孕前导法给药调控肾虚血瘀-胚胎着床障碍病证结合模型大鼠种植窗期子宫组织血管生成的助孕机制。方法 阴道涂片HE染色法观察，选取动情周期规律的健康未交配雌性SD大鼠60只，随机分为5组：空白组、模型组、阿司匹林组、补肾活血方高剂量组、补肾活血方低剂量组，动情前期时入组，分组给药并合笼，于妊娠第5天处死，腹主动脉采血后，迅速剖取子宫并制片，采用光镜观察各组大鼠子宫内膜组织形态，采用免疫组化法（IHC）检测各组大鼠子宫组织中VEGF、FLK-1表达水平及螺旋动脉数量，采用Western-Blot检测各组大鼠子宫组织中Ang-1、Ang-2、Tie-2蛋白表达水平，采用Real-Time PCR检测各组大鼠子宫组织中Ang-1、Ang-2、Tie-2 mRNA表达水平。结果 给药组能明显改善肾虚血瘀-胚胎着床障碍病证结合模型大鼠种植窗期子宫内膜组织形态，并接近空白组水平；模型组大鼠子宫湿重、子宫脏器指数、螺旋动脉数量、VEGF、FLK-1及子宫组织Tie-2蛋白表达、Ang-1mRNA、Ang-2mRNA和Tie-2mRNA表达等均较空白组降低（P < 0.05）；补肾活血方高剂量组大鼠妊娠第5天子宫组织VEGF、FLK-1、螺旋动脉数量、Ang-1蛋白、Tie-2蛋白及Ang-1mRNA、Tie-2mRNA表达量较模型组明显增加（P< 0.01）。结论 补肾活血方孕前导法给药，改善肾虚血瘀-胚胎着床障碍病证结合模型大鼠种植窗期子宫内膜组织形态，促进子宫组织血管生成，改善组织血瘀状态，促进胚胎着床，可能与其提高大鼠子宫组织VEGF、FLK-1、Ang-1、Tie-2表达水平，并维持Ang-2正常表达有关。