狂犬病固定毒aG株在Vero细胞上的传代适应研究

目的为研制安全,有效和使用方便的Veto细胞狂犬疫苗提供基础资料。方法对狂犬病固定毒3aG株在Yero细胞上的传代适应性进行了研究,同时进行了狂犬病毒在Veto细胞上繁殖最适条件的选择实验。结果狂犬病固定毒3aG株在Veto细胞上多次传代后得到高滴度表达毒力可达8．3LogLD50/ml,具有较好的抗原性及免疫原性,并且确定了狂犬病病毒在Vero细胞上繁殖的最适条件,即种毒量在0．1—0．01LD50／cell之间病毒滴度最高。蛄论3aG-V毒株在Veto细胞上繁殖可维持相当长时间,并可进行多次加液,检测证实多次收获毒液毒力均达到疫苗制造要求。     

Vero细胞培养特性的研究

目的 :探索 Vero细胞生物学性状及培养特性。方法 :采用细胞培养和生物学技术。结果 :Vero细胞生长迅速 ,培养时间长 ,可控制外源因子污染 ,1 50代次 Vero细胞遗传性状稳定 ,未见核变异及致瘤发生。结论 :Vero细胞是一株安全的生物制品细胞基质     

Vero细胞培养特性的研究

目的：探索Ｖｅｒｏ细胞生物学性状及培养特性。方法：采用细胞培养和生物学技术。结果：Ｖｅｒｏ细胞生长迅速,培养时间长,可控制外源因子污染,１５０代次Ｖｅｒｏ细胞遗传性状稳定,未见核变异及致瘤发生。结论：Ｖｅｒｏ细胞是一株安全的生物制品细胞基质。     

单纯疱疹病毒Ⅱ型在Vero细胞中培养与增殖特性的研究

目的研究单纯疱疹病毒Ⅱ型（HSV-2）在非洲绿猴肾细胞（Vero细胞）中培养及增殖的合适条件。方法把HSV-2接种于Vero细胞中培养和传代,于不同时间收获病毒液并测毒力,进行不同培养条件的摸索。结果pH值、残留牛血清是HSV-2在Vero细胞培养的影响因素,最佳收毒时间为36-72h。在Vero细胞上培养病毒3-5代,病毒毒力较高。结论建立了单纯疱疹病毒Ⅱ型在Vero细胞上培养增殖的初步方法,为下一步建立HSV-2的潜伏与激发细胞模型打下基础。     

感染Vero细胞中SARS病原体的电镜观察

目的 用透射电子显微镜(TEM)观察严重急性呼吸综合征(SARS)患者感染的Vero细胞，为SARS病原体的分离鉴定提供形态学资料。方法 标本为上海市疾病控制中心送检的SARS患者鼻咽拭子接种感染的Vero细胞．对培养液负染色标本和vero细胞超薄切片标本进行TEM观察。结果 在负染色标本和超薄切片标本中均可观察到病毒．病毒颗粒为圆形或椭圆形，外周有冠状排列的纤突，病毒颗粒直径约80～160nm，纤突长度约20～40nm、感染细胞的病毒颗粒分布在细胞质中，主要在内质网和空泡内，可见群集的大小较一致的病毒颗粒。结论 本例电镜所见病毒颗粒大小、形态与文献报道的SARs冠状病毒(SARS—CoV)相符。     

一氧化氮对HSV—1在HeLa细胞和Vero—E6细胞中增殖的影响

以硝普钠作一氧化氮供体,观察不同剂量一氧化氮存在条件下ＨＳＶ－１在ＨｅＬａ细胞和Ｖｅｒｏ－Ｅ６细胞中增殖情况。结果表明：一氧化氮对ＨＳＶ－１在Ｖｅｒｏ－Ｅ６细胞中增殖有明显抑制作用,而对ＨＳＶ－１在ＨｅＬａ细胞中增殖无明显影响。提示一氧化氮的抗病毒作用存在着细胞性差异。     

汉坦病毒H8205株IL-2/G1融合基因在Vero细胞中的稳定表达

目的 探讨外源性IL-2／G1融合基因在非洲绿猴肾细胞(Vero)获得稳定表达的可行性,为汉坦病毒基因工程疫苗的研制提供一定的实验基础。方法将汉坦病毒H8205株G1的cDNA重组人源IL-2基因后克隆到真核表达载体pcDNA3．1／His,形成重组真核表达质粒pcDNA3．1／His-IL-2-G1,在脂质体介导下,将其导入Vero细胞,通过G418筛选获得阳性克隆,并继续培养6周,然后通过间接免疫荧光、ELSIA、SDS-PAGE电泳等方法检测IL-2-G1基因在Vero细胞中的稳定表达情况。结果成功构建重组质粒pcDNA3．1／His-IL-2-G1,其片段插入方向正确。经间接免疫荧光和SDS-PAGE电泳证实,转染了真核表达质粒pcDNA31／His-IL-2-G1后在Vero细胞培养上清和胞浆中有融合蛋白的表达,其相对分子量为78000u,与预期的相符合。经人IL-2 ELISA检测试剂盒检测证实在培养上清和细胞裂解物所表达的融合蛋白有IL-2特性。结论在脂质体介导下,外源性IL-2／G1融合基因能够成功导入Vero细胞并获得稳定表达。     

流行性出血热病毒在Vero—E6细胞内的增殖特性研究

采用病毒盲传的方法，检测流行性出血热（EHF）早期患者血液标本中的EHF病毒，阳性率为79．7％（145／182）。病毒抗原量随盲传时间延长而增加，病毒增殖高峰期在其感染细胞后的9－13d。细胞感染病毒后出现空泡样变，粗面内质网扩张，并在感染细胞内找到病毒颗粒和病毒包涵体。以上结果为研究EHF病毒的增殖特征提供了新的依据，并指出病毒盲传的方法是提高临床标本中病毒检出率的有益方法。     

悬浮驯化Vero细胞制备及其在大流行流感病毒株培养的初步应用

目的 悬浮驯化培养Vero细胞(Vero simian kidney epithelial,Vero),并用于流感病毒H5N1及H7N9 Vero细胞高产重配株的制备.方法 使用自配的Vero细胞悬浮培养基(Vero cells suspension media 1,VSM-1)在搅拌瓶中驯化贴壁Vero细胞适应悬浮培...     

VERO细胞狂犬病疫苗免疫效果的观察

目的 比较氢氧化铝佐剂和无佐剂Vero细胞狂犬病疫苗免疫效果的影响。方法 以常规免疫程序用氢氧化铝佐剂与无佐剂两种疫苗分别免疫豚鼠。并分别于3、7、14、30、60、90、180和360d采血并以小鼠中和法测定不同时间抗体水平。结果 氢氧化铝佐剂组和无佐剂组，抗体出现时间不一致，无佐剂组稍早，阳转率于第3d已为5．0％，而佐剂组为0，两组于第60d皆达到100．0％；抗体水平两组也稍有差别，无佐剂组较高，但比较差异无显著性，在第60d达到高峰，第90d逐渐下降。结论 初步显示，无佐剂Vero细胞狂犬疫苗免疫效果较佐剂组稍好。     

改变Vero细胞培养条件对狂犬病毒收率的影响

目的为了获得较大的狂犬病毒收获量。方法利用15L培养瓶旋转培养Vero细胞，观察不同培养条件下。对细胞形态及病毒释放的影响。结果发现在改变培养条件的情况下，多加入199培养基，不影响细胞的生长及狂犬病毒的毒力滴度(LD50)，而增加了狂犬病毒收获量。结论此方法可以增加狂大病毒收率。     

生物反应器培养Vero细胞的生长代谢与限制因素研究

目的研究生物反应嚣大规模培养Vero细胞生产疫苗细胞生长代谢与限制因素。方法采用微载体培养系统进行细胞培养，同时进行细胞记数、消化和贴壁实验。结果细胞培养过程中测得饱和溶解氧浓度系数（Cm）为0．197mM，体积氧解析系数（Kla）为0，0158min^-1，同时随着葡萄糖消耗、乳酸生成，细胞停止生长并开始死亡。结论利用生物反应嚣培养细胞时细胞代谢与细胞密度、搅拌速率、温度通气流量、葡萄糖消耗、乳酸生成等有直接关系。     

阴道镜诊断宫颈人乳头状瘤病毒感染的临床分析

目的:探讨阴道镜在宫颈人乳头状瘤病毒感染诊断中的临床应用价值。方法:2006年1月至2007年12月,在本院妇科门诊行阴道镜检查的患者,以其宫颈组织学检查结果为标准,对阴道镜检查结果进行分析。结果:病理学级别越高,宫颈SPI感染阳性率越高。阴道镜诊断宫颈SPI的敏感性为84.8%,特异性为97.5%,阳性预测值为70.9%,阴性预测值为98.9%。结论:阴道镜对诊断宫颈SPI有较重要的临床价值。     

狂犬病毒非临床型感染初探

目的：探讨狂犬病毒非临床型感染的可能性。方法：收集病例资料和检测暴露人群血清中的狂犬病毒抗体。结果：(1)收集到的2例患者，在被犬咬伤，愈后又复发不良反应，同时伴有血清中狂犬病毒抗体4倍增长的现象；(2)检测的暴露人群49例中(无疫苗接种史)，检出狂犬病毒抗体7例(14．28％)。结论：狂犬病毒可以引起非临床型感染即隐性感染(亚临床感染)。     

献血人群中HCV感染与HLA-II类基因的相关性研究

目的人类白细胞抗原（HLA）在机体抗病毒免疫中起重要作用,探讨献血人群中丙型肝炎病毒（HCV）感染与HLA-II类基因的相关性。方法选择2011年10月至2013年10月在浙江省血液中心献血的人员中HCVRNA阳性的样本45例,同时以健康人群为对照,其中HLA-DRB1位点对照样本8333例,HLA-DRB1位点对照样本72例,用PCR-SBT方法测定献血者HLA-II类基因中DRB1和DQB1等位基因情况。结果HLA-DRB1基因的DRB1*01:02（P=0.0394,OR=23.4,95%CI=2.89～189.1）,DRB1*13:01（P=0.0095,OR=5.60,95%CI：1.74～18.00）;HLA-DQB1基因的DQB1*03:03（P=0.0402,OR=0.45,95%CI：0.21～0.94）,DQB1*06:01（P=0.0456,OR=2.47,95%CI：1.05～5.83）,这些基因位点的多态性在HCVRNA阳性献血者中的频率与健康对照人群比较有统计学差异。结论在献血人群中HCV感染与HLA-II类基因中部分多态性位点有相关性。     

EB病毒感染对儿童传染性单核细胞增多症T细胞亚群的影响

目的 观察EB病毒(EBV)感染对儿童传染性单核细胞增多症(IM)T细胞亚群的影响.方法 选取2013年1月至2016年1月陕西省汉中市人民医院儿科收治的80例IM患儿作为研究对象,所有患儿均接受抗病毒治疗,观察患儿治疗后的EBV-DNA转阴率.比较EBV-DNA阳性及阴性患儿的T细胞亚群分布,分析EBV-DNA未转阴的相关因素.结果 经过治疗后,67例(83.75％)患儿EBV-DNA转阴.治疗后,EBV-DNA阴性组CD3±和CD8+比例低于EBV-DNA阳性组,CD4+比例和CD4+/CD8+高于EBV-DNA阳性组,差异有统计学意义(P＜0.05).对患儿EBV-DNA未转阴的相关因素进行分析:性别、白细胞计数(WBC)及淋巴细胞计数与EBV-DNA转阴无相关性(P＞0.05),干扰素的使用、年龄及初始Ct与EBV-DNA未转阴具有相关性(P＜0.05).结论 EB病毒感染可以引起IM患儿T细胞亚群的紊乱,临床上应采取积极的抗病毒治疗.     

孟鲁司特治疗病毒感染婴幼儿喘息的临床研究

目的 观察孟鲁司特治疗病毒感染婴幼儿喘息的临床疗效.方法 选取2011年3月-2012年3月收治的病毒性感染所致喘息患儿共142例,随机分为观察组70例和对照组72例,对照组患儿采用常规抗病毒、雾化吸入及对症治疗,喘息严重的患儿给予甲基强的松龙2mg/kg·次,每天1-2次静脉滴注.观察组在上述治疗基础上加服孟鲁司特,超过1岁的患儿每次给予4mg,每晚顿服;＜1岁的患儿则隔日服药,每次同样给予4mg,治疗7后天比较疗效.结果 观察组患儿的治疗有效率为87.1％,明显高于对照组的73.6％（P＜0.05）;观察组治愈的患儿占37.1％,明显高于对照组的15.3％（P＜0.05）;观察组患儿的咳喘消失时间[（6.1±0.7）d]和肺部啰音消失时间[（5.4±0.7）d）]均明显短于时照组[（7.2±1.2）d、（6.4±1.0）d,P＜0.05].另外,观察组需要使用全身性激素超过3天的病例只有11例,明显少于对照组的24例（P＜0.05）;观察组患儿的住院时间[（6.9±1.6）d]也明显短于对照组[（7.8±1.3）d,P＜0.05].结论 孟鲁斯特用于病毒性感染合并喘息的婴幼儿,可以明显提高治疗有效率和治愈率,缩短临床症状改善时间和患儿住院时间,同时还可以减少全身性激素使用时间,提高治疗的安全性,值得临床推广应用.     

狂犬病毒隐性感染者生存状况研究

目的:查明人群中是否真正存在狂犬病毒隐性感染者。方法:检测有暴露史的自愿者体内的狂犬病毒抗体、随访调查其生存状况和抗体的消长情况,并与狂犬病死亡者的一些情况进行比较分析。结果:有暴露史222例自愿者中检出隐性感染者45例,其中密切接触者23例,被咬伤者22例,其体内的狂犬病毒抗体逐年下降,2006年其检测阳性率为0;这些隐性感染者的感染期绝大部分已超过我市狂犬病患者的最长潜伏期。结论:我们检出的45例感染者是真正意义上的隐性感染,而非潜伏期内感染。