胶质源性神经营养因子对损伤的培养大鼠背根神经节的作用

目的　应用体外培养海人藻酸 (KA)兴奋性毒素损伤的细胞模型 ,研究 GDNF对损伤的背根节神经元的不同作用 ,为进一步研究 GDNF对神经元作用机制 ,表达产生及检测方法提供思路 .方法　采用原代培养的方法 ,用 N1无血清分离培养背根节神经元 ,再用 5μm ol· L- 1 KA作用 6～ 8h ,加上含有 GDNF的无血清培养基 ,继续培养 2 4h,然后用MTT法检测反映细胞的活性 ,胎盘蓝染色记数、细胞总蛋白测定以及形态学观察突起的生长状况 .结果　 1细胞活性 A值 :GDNF+KA(0 .0 32 8± 0 .0 0 6 ) ,KA(0 .0 2 85± 0 .0 0 75 ) ,GDNF (0 .0 398± 0 .0 0 2 ) ,Blank(0 .0 41± 0 .0 0 2 ) (P<0 .0 5 ) ;2活细胞数相应为 GDNF+KA (6 0± 4.4) ,KA(35 .7±2 .2 ) ,GDNF (5 9.3± 3.6 ) ,Blank (5 7.7± 2 .9) ;3细胞的总蛋白分别为 GDNF+KA (70 .3± 9.2 ) (P<0 .0 1) ,KA (49.0± 3.7) ,GDNF (75 .0± 7.3) ,Blank (6 8.0± 5 .5 ) (P<0 .0 1) ;4突起长度 :实验组与对照组不明显 ,GDNF组与空白对照组不明显 .结论　在正常无血清体外培养情况下 GDNF对DRG神经元作用不明显 ,在 KA兴奋性毒素损伤后 ,对细胞的活性、存活及总蛋白合成有明显的保护作用 ,但对突起的生长则没有明显的促进作用 .     

胶质细胞源性神经营养因子对大鼠脊髓损伤后功能和体质量的影响

&&胶质细胞源性神经营养因子对大鼠脊髓损伤后功能和体质量的影响@宋海涛 @贾连顺 @陈哲宇 @沈强 @路长林 @强华&&&&&&&&     

胶质源性神经营养因子对脊髓损伤后前角运动神经 …

目的：探讨胶质细胞源性神经营养因子（ＧＤＮＦ）对唯物事运动神经元的保护作用。方法：大鼠分为假手术组、生理盐水（ＮＳ）组和ＧＤＮＦ组,改良Ａｌｌｅｎ法撞击致伤Ｔ１２脊髓,蛛网膜下腔分别给予ＮＳ和ＧＤＮＦ,分别取不同时间的伤段脊髓进行切片,应用酶组织化学染色方法显示脊髓前角外侧核运动神经元中胆碱酯酶（ＣｈＥ）和酸性磷酸酶（ＡＣＰ）活性,并结合计算机进行图像分析。结果：ＧＤＮＦ组较ＮＳ组ＣｈＥ活性显著增     

脂质体介导胶质细胞源性神经营养因子基因转染对大鼠脊髓损伤后神经功能的影响

目的　探讨阳离子脂质体介导的胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)基因体内转染对大鼠脊髓损伤后后肢运动功能恢复的影响。方法　雄性成年SD大鼠 30只 ,随机均分为绿色荧光蛋白 (GFP)对照组及GDNF治疗组。采用改良Nystr m法经后路压迫大鼠胸段脊髓模型 ,以直接注射法将脂质体DC Chol和重组质粒 pEGFP GDNFcDNA混合后注入大鼠损伤脊髓。HE染色观察伤后 4周伤段脊髓残存组织的面积 ,采用斜板试验和运动功能评分观察大鼠后肢运动功能的恢复情况。结果　大鼠脊髓损伤后 1～ 4周 ,GDNF治疗组后肢运动功能评分明显高于GFP对照组 ,两组间差异有显著性 (P <0 .0 5 )。伤后 4周 ,GDNF组伤段残存脊髓组织的面积大于对照组 (P <0 .0 1)。结论　脂质体介导GDNF基因体内转染能明显减少脊髓损伤后伤区的坏死和萎缩 ,并促进大鼠后肢运动功能的恢复     

胶质细胞源性神经营养因子家族在大鼠坐骨神经慢性压榨损伤中的作用

目的研究大鼠坐骨神经慢性压榨损伤(chronic constrictive injury,CCI)中胶质细胞源性神经营养因子(glialcell line-derived neurotrophic factor,GDNF)和神经细胞黏附分子(neural cell adhesion molecule,NCAM)表达的变化,以及鞘内注射NCAM相似肽c3d、NCAM反义寡核甘酸(Anti)对神经病理性疼痛(neuropathic pain,NP)的影响,探讨GDNF、NCAM在NP中的作用及可能机制。方法实验1:成年雄性SD大鼠42只,随机分为2组(每组21只):疼痛组和对照组。疼痛组大鼠行左侧坐骨神经结扎术,建立CCI模型,对照组行假手术。分别于术前1 d和术后1、3、5、7、14、21 d测机械痛阈(mechanicalwithdrawl threshold,MWT)和热痛阈(thermal withdrawal latency,TWL)。采用免疫组织化学染色和RT-PCR技术检测背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)中GDNF和NCAM的表达变化。实验2:成年雄性SD大鼠24只,随机分为4组(每组6只):生理盐水(normal saline,NS)对照组、NS+GDNF组、c3d+GDNF组、Anti-NCAM+GDNF组。各组大鼠于建立CCI模型后3 d鞘内注射上述制剂,观察其痛阈变化。结果实验1:与对照组相比,疼痛组大鼠术前1 d、术后1、21 d MWT和TWL差异无统计学意义(P>0.05);术后3、5、7、14 d MWT和TWL均降低,其中术后7 d阈值最低(P<0.01);术后3、5、7、14 d GDNF和NCAM的表达均升高,其中7 d表达最高(P<0.01)。实验2:与NS对照组相比,NS+GDNF组、c3d+GDNF组MWT和TWL明显降低(P<0.01),Anti-NCAM+GDNF组差异无统计学意义(P>0.05);NS+GDNF组、c3d+GDNF组与给药前相比,MWT和TWL明显降低(P<0.01);Anti-NCAM+GDNF组差异无统计学意义(P>0.05)。结论大鼠CCI后出现痛阈下降,DRG中GDNF和NCAM表达增高;外源性GDNF可缓解NP,阻断NCAM表达可消减GDNF的镇痛作用,提示GDNF和NCAM信号通路参与了NP的发生和调节。     

GDNF在慢性收缩性损伤大鼠脊髓背根神经节中的蛋白表达

目的探讨胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）在慢性收缩性损伤（CCI）所致神经病理性疼痛大鼠的L4背根神经节中的蛋白表达。方法实验1：24只SD大鼠,随机分为正常组（Naive组）、假手术组（Sham组）和CCI组（每组n=8）。Naive组不做任何手术;Sham组仅暴露坐骨神经;CCI组按Bennett法结扎右侧坐骨神经主干制备CCI模型。分别测定Sham组和CCI组术前2天（基础值）及术后第1、3、5、7、14、21天（Naive组则在相对应的时间点）大鼠同侧（本实验为右侧）后足机械缩足反射阈值（MWT）和热缩足反射潜伏期（PWL）。实验2：18只SD大鼠随机分为正常组（Naive组）、假手术组（Sham组）和CCI组（每组n=6）。CCI组制备CCI模型,术后第7天处死大鼠,取同侧L4背根神经节;Naive组不做任何手术,直接取右侧L4背根神经节;Sham组仅暴露坐骨神经,术后第7天处死大鼠,直接取右侧L4背根神经节。采用Western blot法检测脊髓L4背根神经节GDNF的蛋白表达。结果实验1：与Sham组相比,CCI组大鼠从术后第3天开始至术后21天内各时间点MWT和PWL均显著降低（P〈0.05或P〈0.01）。实验2：与Sham组相比,CCI组在L4背根神经节的GDNF表达明显减少（P〈0.01）。结论CCI大鼠的L4背根神经节的GDNF表达减少,可能参与CCI所致神经病理性疼痛的发病机制。     

神经干细胞移植对大鼠脊髓损伤后GDNF基因表达的影响及意义

目的:探讨神经干细胞(NSC)移植对大鼠脊髓损伤后胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)表达的影响及其意义。方法:NSC提取自新生Wistar大鼠的海马区,经培养、鉴定。制作大鼠脊髓损伤(SCI)模型,于伤后第7d移植NSC。实验分为3组:NSC移植组(A组)、DMEM填充组(B组)、正常对照组(C组)。应用RT-PCR法和免疫组化法观察细胞移植后不同时间点GDNF基因的表达变化。结果:RT-PCR结果分析,移植术后第1,3,5d,A组GDNF mRNA的表达量明显高于B组,差别有显著性意义(P<0.05)。组化结果分析,移植术后第7,14,28d GDNF的表达量明显高于B组,差别有显著性意义(P<0.05)。结论:NSC在移植后可上调神经营养因子GDNF基因的表达,是修复脊髓损伤的机制之一。     

胶质细胞源性神经营养因子对脊髓损伤后皮质脊髓束再生的保护作用

目的:观察外源性胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对大鼠损伤脊髓皮质脊髓束再生的影响.方法:利用Nystrm法制备大鼠胸髓压迫损伤模型.蛛网膜下腔置管至损伤局部,连续1周给予GDNF.应用辣根过氧化物酶 (HRP)顺行追踪技术和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、神经中丝(NF)免疫组化活性的变化来评价外源性GDNF对伤区皮质脊髓束和轴突再生的影响.结果:脊髓损伤后4周GDNF治疗组GFAP表达较对照组明显减少,NF标记轴突数显著多于对照组,皮质脊髓束部分再生并通过损伤区至远端0.5 cm.结论:外源性GDNF局部给药能减少胶质细胞增生,促进脊髓损伤大鼠皮质脊髓束轴突再生和神经骨架蛋白的修复.     

胶质细胞源性神经营养因子在脊髓损伤中的相关作用研究

脊髓损伤(Spinal cord injury,SCI)包括原发性和继发性损伤,致使神经元损伤死亡、轴突断裂及脊髓内环境恶化等多种病理改变,这使得神经元存活修复和轴突再生难度增大.胶质细胞源性神经营养因子(Glial cell linederived neurotrophic factor,GDNF)是转化生长因子-β...     

胶质细胞源性神经营养因子

胶质细胞源性神经营养因子 (ＧＤＮＦ) ,1933年始由大鼠胶质瘤细胞系Ｂ4 9中分离出来 ,是一种含有134个氨基酸残基的同二聚体蛋白质 ,分子量为33— 35ＫＤ ,7个保守的半胱氨酸残基在分子中的位置与转化生长因子—β(ＴＧＥ—β)超家族相同 ,因而被看作是ＴＧＦ—β超家族的一员 ,人和大鼠的ＧＤＮＦｍ93%的同源性〔1〕。ＧＤＮＦ在神经系统中有广泛的分布 ,ＲＴ—ＰＣＲ法显示ＧＤＮＦ的ＲＮＡ定位于接受多巴胺 (ＤＡ)能神经之投射的纹状体、苍白球腹侧区、嗅结节、梨状区 ,在非ＤＡ能脑区的小脑原基、出生前脊髓背梭、新生大鼠丘脑、基底前…     

Differential expression of alpha-adrenoceptor subtypes in rat dorsal root ganglion after chronic constriction injury

Summary： mRNAs of alpha-adrenoceptor （α-AR） subtypes are found in neurons in dorsal root ganglion （DRG） and change after peripheral nerve injury. In this study, the distribution of α-AR subtype proteins was studied in L5 DRG of normal rats and rats with chronic constriction injury of sciatic nerve （CCI）. Using immunofluorescence technique, it was found that α1A-, α1B-, and α2A-AR proteins were expressed in large, medium, and small size neurons in normal DRG, and significantly increased in all size neurons 14 days after CCI. α1D- and α2C-AR was also expressed in all size neurons in normal DRG. However, α1D-AR was significantly increased and α2C-AR was decreased in small size neurons 14 days post CCI. α2B-AR neurons were not detectable in normal and CCI DRG. Co-expression of α1A- and α2A-AR in the same neuron was observed in normal DRG and increased post CCI. Collectively, these results indicated that there is distinct distribution of α-AR subtypes in DRG neurons, and the distribution and levels of expression of α-AR subtypes change differently after CCI. The up-regulation of α-AR subtypes in DRG neurons may play an important role in the process of generating and transmitting neuropathic pain.     

胶质细胞源性神经营养因子及其受体与疼痛

胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)是转化生长因子β(transforminggrowth fartor-β,TGF-β)超家族成员,具有多种重要的生物学活性,不仅特异性地促进多巴胺能神经元的存活,还对外周神经系统及非神经系统具有广泛的作用。文中就近年来对GDNF及其受体在神经系统中的作用,特别是痛觉调制中作用的国内外研究进展作一综述。     

艾司西酞普兰对抑郁模型大鼠海马胶质细胞源性神经营养因子及细胞凋亡相关因子表达的影响

目的 探讨艾司西酞普兰对抑郁模型大鼠海马胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)及细胞凋亡相关因子表达的影响.方法 雄性SD大鼠按随机数字表分为对照组(A)、对照加药组(B)、抑郁组(C)和抑郁加药组(D),以慢性轻度不可预见性的应激结合孤养建立抑郁动物模型,应激同时B、D组予艾司西酞普兰(10 mg/kg)干预,A、C组予等体积生理盐水灌胃处理,共28 d.TUNEL法检测海马细胞凋亡情况,用实时荧光PCR方法检测海马GDNF、Bax、Bcl-2、Caspase3 mRNA的表达.结果 ①与A组[(12.0±1.83)个]比,C组[(19.3±1.77)个]海马细胞凋亡数显著增加(P＜0.01),而B组[(11.9±1.91)个]细胞凋亡数无明显差异(P＞0.05);与C组比,D组[(12.7±1.77)个]细胞凋亡数显著减少(P＜0.01).②与A组比,C组海马GDNF、Bcl-2 mRNA表达减少(P＜0.01),Bax、Caspase3 mRNA表达增加(P＜0.01);与C组比,D组GDNF、Bcl-2 mRNA表达增加(P＜0.01),Bax、Caspase3 mRNA表达降低(P＜0.01).结论 艾司西酞普兰可改善抑郁大鼠的抑郁行为及预防海马细胞凋亡,其机制可能是通过增加海马GDNF mRNA的表达,上调Bcl-2及下调Bax、Caspase3 mRNA的表达有关.     

神经干细胞联合胶质细胞源性神经营养因子脑内移植治疗帕金森病的实验研究

目的：探讨胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF）对脑内移植神经干细胞（neural stem cells,NSCs）的存活、分化及对帕金森病（Parkinson＇s disease,PD）模型大鼠的治疗作用.方法：采用原代培养胚胎14.5天的胎鼠腹侧中脑NSCs,单独或经GDNF预处理后移植入PD模型大鼠的纹状体,观察NSCs在纹状体的分化情况,以及PD模型大鼠旋转行为的变化.结果：联合GDNF移植NSCs比单纯移植的NSCs较多的转化为多巴胺能神经元,并能够改善PD模型大鼠的旋转行为.结论：GDNF可以促进中脑来源的NSCs向多巴胺能神经元转化,并对PD模型大鼠有较好的治疗作用.     

胶质细胞源性神经营养因子在肠易激综合征大鼠模型中的表达

目的:探讨胶质细胞性神经营养因子(GDNF)在肠易激综合征(IBS)大鼠模型中的表达及其作用。方法:45只大鼠随机分为ISB1组、ISB2组及空白对照组,ISB1组、ISB2组分别采用乙酸及慢性激怒的方法制造肠易激综合征大鼠模型,空白对照组不做任何处理,采用免疫组化的方法检测3组大鼠结肠肌间神经丛内GDNF蛋白的表达,并进行比较。结果:ISB1组GDNF表达明显高于ISB2组和空白对照组(P<0.05),而ISB2组与空白对照组GDNF的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:GD-NF在炎症后肠易激综合征中的表达增加,提示神经元及神经胶质细胞对GDNF需求增加,推测GDNF对结肠肌间神经丛内神经元起保护和促进再生的作用,继而参与调解肠道炎症过程,且可能有保护和促进感染后肠易激综合征肠粘膜恢复的作用。     

胶质细胞源性神经营养因子在链霉菌的分泌表达

目的：构建胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）表达质粒，实现GDNF在链霉菌的分泌表达。方法：从人基因组中克隆GDNF成熟肽编码基因，与链霉菌酪蛋白酶melC1启动子和信号肽DNA序列融合。melC1信号肽DNA与GDNF融合后地翻译框呆的漂移，且GDNF的转录受控于melC1启动子。融合基因与链霉菌载体pIJ702连接并转化Slividans TK24原生质体。结果：经抗性筛选及限制性酶切分析获得重组质粒pIJMC。携带pIJMG的链霉菌培养上清存在约15000的特异性表达带，与GDNF成熟肽的分子质量吻合。结论：GDNF在MelC1信号肽指导下可以在链霉菌分泌表达。     

不同浓度GDNF诱导神经干细胞向多巴胺能神经元分化研究

目的观察不同浓度胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对神经干细胞(NSCs)向多巴胺(DA)能神经元分化的影响。方法取新生鼠脑组织体外分离培养NSCs,第2代NSCs诱导培养基中分别加入0、5、10、20 ng/mL GDNF进行诱导。用逆转录-聚合酶链反应检测诱导后细胞酪氨酸羟化酶(TH)mRNA的表达,免疫细胞化学染色鉴定NSCs,检测NSCs向DA能神经元分化率。结果各诱导组均表达TH mRNA。神经球具有自我更新和表达巢蛋白的能力,诱导分化后的细胞能表达神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞特异性抗原。与空白对照组比较,GDNF诱导组TH阳性细胞率均明显升高(P<0.05);且10、20ng/mL GDNF诱导组升高幅度明显高于5 ng/mL GDNF诱导组(P<0.05),10、20 ng/mL GDNF诱导组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论从新生鼠脑组织分离出NSCs。不同浓度的GDNF均能促进NSCs向DA能神经元分化,GDNF浓度从10ng/mL提高到20 ng/mL时TH阳性细胞率无明显变化。     

Transplantation of neural stem cells overexpressing glial cell line-derived neurotrophic factor enhances Akt and Erk1/2 signaling and neurogenesis in rats after stroke

Background Our previous studies have indicated that the beneficial effects of grafting neural stem cells (NSCs) overexpressing glial cell line-derived neurotrophic factor (GDNF) in rats after stroke.However,the underlying mechanisms are highly debatable.In this study,we investigated whether neurogenesis,Akt,and extracellular signalregulated kinase 1/2 (Erk1/2) signaling were involved in this process.Methods Transient ischemic stroke were induced by occluding middle cerebral artery for 2 hours and reperfusion.At 3 days after reperfusion,GDNF/NSCs,NSCs,and vehicle were administered.Immunohistochemical staining was used to evaluate neurogenesis by nestin antibody; phosphorylation of Akt and Erk1/2 was investigated by Western blotting analysis.Results Transplantation of GDNF/NSCs and NSCs significantly increased nestin-positive cells compared to control group (vehicle) from 1 to 7 weeks after reperfusion,and GDNF/NSCs showed stronger effect than NSCs at 2 and 3 weeks after reperfusion.Meanwhile,enhanced phosphorylation level of Erk1/2 was observed in the GDNF/NSCs and NSCs groups compared with control group,and phosphorylation level of Erk1/2 in GDNF/NSCs group was remarkably higher than that of NSCs group at any given time.In contrast,expression of mitogen-activated protein kinase phosphatase-1 (MKP-1),known as inhibitor of Erk1/2 signaling,was significantly decreased in the GDNF/NSCs and NSCs groups compared with the control group.Moreover,much enhanced and prolonged phosphorylation level of Akt of GDNF/NSCs group was detected compared with control and NSCs group.Conclusion Grafting GDNF/NSCs enhances neurogenesis and activates Akt and Erk1/2 signaling,that may provide the potential for GDNF/NSCs in stroke treatment.