异丙酚预处理对大鼠海马神经元凋亡的影响

目的探讨异丙酚预处理对缺氧/复氧后大鼠海马神经元凋亡的影响。方法取离体培养的大鼠海马神经元,随机分成5组:正常组(A)组。CoCl2组(B)组:加入300μmol·L-1(下同)CoCl2处理4h,然后更换正常的培养基培养24h,之后更换无血清的培养基培养。脂肪乳组(C)组:加入10%脂肪乳剂90μl预处理1h后同B组。异丙酚组(D)组:加入100μmol·L-1异丙酚1h后同B组。7-NI组(E)组:如D组,但加入CoCl2的同时加入3·3μl7-NI(25g·L-1)处理4h。MTT法测定细胞增殖,流式细胞技术测定细胞的凋亡。RT-PCR技术检测神经型一氧化氮合酶和凋亡相关基因的表达情况。结果脂肪乳组与CoCl2组比较,各项指标相似(P>0·05);异丙酚可增加神经元的增殖能力,减少凋亡(P<0·05或P<0·01),上调神经型一氧化氮合酶和凋亡抑制基因bcl-2的表达,下调促凋亡基因cyclinD1的表达。而这些调节作用可被神经型一氧化氮合酶抑制剂7-NI抑制(P<0·05或P<0·01)。结论100μmol·L-1异丙酚预处理对缺氧/复氧后大鼠海马神经元有保护作用,神经型一氧化氮合酶和凋亡相关基因在其中起重要作用。     

二苯乙烯苷对缺糖缺氧致海马神经元凋亡的影响*

目的观察中药何首乌有效成分2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(2,3,5,4'-tetrahydrox-ystilbene-2-O-β-D-glucoside,简称二苯乙烯苷,TSG)对缺糖、缺氧诱导的大鼠海马神经元细胞凋亡的影响.方法采用新生Wistar大鼠进行海马神经元细胞的原代培养,用连二亚硫酸钠合并无糖培养基处理细胞建立体外缺糖、缺氧模型,用酶标仪测定细胞乳酸脱氢酶(LDH)的漏出率,TUNEL法检测细胞凋亡,并观察TSG对缺糖、缺氧诱导的细胞凋亡的拮抗作用.结果模型组与对照组相比,LDH漏出率明显升高、出现了凋亡细胞,胞核致密并有凋亡小体产生.与模型组相比,TSG 10,50和100μmol·L-1能够明显抑制LDH的漏出,降低神经细胞的凋亡率,凋亡细胞数量、面积及灰度均下降.结论TSG可以抑制缺糖、缺氧诱导的神经元细胞凋亡,对缺血性脑病的治疗具有一定的应用前景.     

细胞凋亡研究中的一些热点问题

本文评述了当前细胞凋亡研究中存在的普遍问题和主要热点领域 ,并重点论述了半胱天冬酶 - 3( caspase- 3)和 Bcl- 2之间的相互关系 ,对细胞凋亡调控研究的现状以及以凋亡机制中关键性蛋白为靶标的新药设计等热点领域最新进展 .     

雌激素对NMDA诱导离体大鼠海马神经元凋亡的作用

目的观察雌激素对NMDA诱导离体海马神经元凋亡的作用,探讨雌激素的神经保护作用机制。方法用形态学鉴定和细胞死亡率的测定以及Western blot方法分析雌激素对NMDA诱导神经元凋亡的作用。结果培养的神经细胞经形态学鉴定绝大多数是神经元,占总细胞数目的81·3%,凋亡细胞百分数为15·1%,NMDA(300μmol·L-1+甘氨酸5μmol·L-1)能明显诱导神经元凋亡,凋亡发生数为31·6%(与对照组相比P<0·05),雌激素(300μmol·L-1)能明显拮抗NMDA的凋亡毒性作用,凋亡发生数为18·2%(与对照组相比P>0·05)。MTT实验测定细胞生存率:NMDA组为70·2%(与对照组相比P<0·05),NMDA+雌激素组为89·7%(与对照组相比P>0·05)。蛋白印迹也显示,caspase-3的活性能被雌激素所抑制。结论雌激素具有神经保护作用,作用机制可能通过抑制凋亡相关酶的活性来实现。实验结果为开发雌激素的临床应用和寻找神经保护作用药物提供实验参考依据。     

氯胺酮诱导大鼠海马神经元凋亡及机制

目的 研究氯胺酮对SD大鼠海马神经元的凋亡诱导作用,并探究其作用机制.方法 培养SD大鼠海马神经元细胞,将对数生长期的大鼠海马神经元分为对照组(不加氯胺酮)和实验组(加氯胺酮且其终浓度分别为10、20 μmol/L).24h后,缩胆囊素8肽(CCK-8)法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测蛋白phospho-细胞外信号调节蛋白激酶(P-ERK)、Bax、Bcl-2的表达.结果 10、20 μmol/L实验组神经元的存活率分别为(73.7±1.5)％和(58.2±2.4)％,明显低于对照组的(97.2±1.8)％(P＜0.05);凋亡率分别为(24.5±7.4)％和(34.7±4.9)％,明显高于对照组的(4.7±2.3)％(P＜0.05);P-ERK、Bax表达量增加,Bcl-2表达量减少.结论 氯胺酮能够诱导大鼠海马神经元凋亡,可能是通过激活P-ERK、改变Bax/Bcl-2比值实现的.     

抗肿瘤药物新靶点半胱天冬酶-10

细胞凋亡过程是依赖天冬氨酸特异性的半胱氨酸蛋白酶（半胱天冬酶）产生的级联反应。半胱天冬酶-10是凋亡途径中关键的启动子，能够通过寡聚而自身切割活化，并能激活下游其他半胱天冬酶，参与细胞凋亡过程。半胱天冬酶-10基因突变及其它表达异常可导致细胞凋亡和增殖失调，从而参与某些肿瘤和免疫系统疾病的发生和发展。半胱天冬酶-10有可能是抗肿瘤药物的新靶点。     

氯胺酮对大鼠学习记忆功能及海马神经元的影响

目的了解多次氯胺酮给药对学习记忆功能的影响及机制。方法SD大鼠30只随机分为高剂量组、低剂量组和1个对照组,高、低剂量组大鼠分别予以氯胺酮50和10 mg/kg腹腔注射给药,1次/d,连续7 d。对照组予以等量生理盐水。用水迷宫测试各组大鼠寻找隐匿台的逃避潜伏期和空间搜索能力,原位检测海马神经元凋亡情况,电子显微镜观察神经元超微结构变化。结果高剂量组逃避潜伏期显著延长(P<0.01),并且空间搜索能力明显降低(P<0.01);高剂量组海马神经元凋亡指数显著高于对照组(P<0.01);电子显微镜显示高剂量组海马神经元有明显变性。结论多次使用氯胺酮对学习记忆有损害,这种损害作用可能与海马神经元病变有关。     

半胱氨酸蛋白酶-3及-9表达上调介导糖尿病大鼠心肌细胞凋亡及抗氧化剂α-硫辛酸的保护作用

目的探讨天冬氨酸特异性的半胱氨酸蛋白酶（caspase）表达上调对高血糖诱导的心肌细胞凋亡的影响及抗氧化剂α-硫辛酸的防治效果。方法链脲佐菌素（STZ）建立糖尿病大鼠动物模型,实验动物分为糖尿病组、对照组、α-硫辛酸组,分第4周、第8周、第12周3个阶段进行观察。免疫组化染色测定糖尿病大鼠心脏caspase-3、-9mRNA和蛋白质表达的变化。结果糖尿病组第4周、第8周、第12周大鼠心脏caspase-3、-9mRNA和蛋白质表达均高于对照组（P〈0．05）,随病程延长两者表达增加（P〈0．05）,两者表达变化趋势一致;与糖尿病组比较,α-硫辛酸组在各时间段Caspase-3、-9mRNA和蛋白质表达均下降（P〈0．05）。结论高血糖可以诱导caspase-3、-9表达的增加从而导致心肌细胞的凋亡,抗氧化剂可以下调caspase-3、-9表达,减弱心肌细胞的凋亡。     

蓝萼甲素对人肺癌A549细胞的作用及其机制

<正>蓝萼甲素(glaucocalyxin A)是由唇形科香茶菜属植物香茶菜Rabdosia amethystoieds(Benth)Ham中分离提取出的二萜化合物,可抑制SiHa、Hela、HL-60等细胞株增殖[1]。本文研究了蓝萼甲素对人肺腺癌A549细胞增殖的影响,并初步探讨其机制。1材料与方法1.1材料蓝萼甲素(glaucocalyxin A),购自上海艾汇生物科技有限公司。Hoechst凋亡检测试剂盒、PARP,cleavedcaspase-3和caspase-8抗体购自上海碧云天生物公司,     

芬太尼和脂多糖迟发预处理对缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的 诱导大鼠心肌迟发预处理保护作用,测定心肌细胞凋亡率、Caspase、细胞色素C的变化.探讨DPC对心肌细胞凋亡的影响及作用机制.方法 健康SD大鼠32只,随机分为4组,每组8只.芬太尼组(A组):大鼠腹腔注射芬太尼,24小时后建垃缺血再灌注损伤模型;脂多糖组(B组):腹腔注射脂多糖,24小时后处理同A组.生理盐水组(C组):腹腔注射生理盐水,24小时后处理同A组.对照组(D组):不注射任何药物,24小时后处理同A组.TUNEL法检测心肌细胞凋亡;caspase-3试剂盒测定其活性;Western blot法检测细胞色素C.结果 HE染色:损伤重区域的心肌仍保存细胞轮廓,横纹不清或消失,收缩带形成.损伤轻区域细胞轮廓清晰.横纹不消失.TUNEL染色:散在的细胞核呈棕色凋亡细胞.A组和B组心肌细胞凋亡毕分别为(9±3)%和(11±3)%低于C组(17±5)%;A组和B组caspase-3活性(分别为0.43±0.11和0.40±0.13)低于C组(0.75±0.23);A组和B组细胞色素C蛋白表达(分别为0.67±0.11和0.63±0.18)低于C组(0.98±0.19),均有显著差异(P＜0.05).结论 芬太尼、脂多糖诱导的迟发预处理中存在心肌细胞凋亡.且心肌细胞凋亡率、细胞色素C、Caspase-3降低.     

不同浓度CB2受体激动剂预处理对大鼠海马神经元凋亡的保护作用及机制

目的探讨CB2受体激动剂AM1241预处理对缺氧/复氧后大鼠海马神经元凋亡的影响。方法离体培养的大鼠海马神经元,随机分成6组:对照组(Con组),细胞未做特殊处理。CoCl_2组:300μM CoCl_2预处理4 h后,正常培养基继续培养24 h,然后用无血清培养基培养。AM1241 1μmol/L组、AM1241 3μmol/L组、AM1241 5μmol/L组、AM1241 10μmol/L组:培养孔中分别加入浓度为1、3、5、10μM AM1241处理2 h后,加入300μM的Co Cl2处理4 h,然后更换正常的培养基培养24 h,之后更换无血清的培养基培养。MTT法测定细胞增殖,RT-PCR技术检测bcl-2、caspase-3、iNOS mRNA的表达。结果与AM1241 1μmol/L组和AM12413μmol/L比较,AM1241 5μmol/L组和AM1241 10μmol/L组预处理明显增加海马神经元的增殖能力(P<0.05或P<0.01),上调bcl-2 mRNA的表达,下调促凋亡基因caspase-3和iNOS mRNA的表达(P<0.05或P<0.01)。结论 5μM和10μM AM1241预处理通过对凋亡相关基因的调控,对缺氧/复氧后的海马神经元有保护作用。     

缺血预适应对HK-2细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及相关基因表达的调节

目的探讨缺血预适应对HK-2(人类肾小管上皮细胞)细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及机制。方法用300μmol.L-1CoCl2预处理HK-2细胞2h,然后更换正常的培养基培养24h后用无血清的培养基培养,建立预适应的细胞模型。MTT法测定细胞增殖,流式细胞技术测定细胞的凋亡,RT-PCR技术检测诱导型一氧化氮合酶(inducible ni-tric oxide synthase,iNOS)和凋亡相关基因的表达情况。结果 300μmol.L-1CoCl2预处理可以明显增加HK-2细胞在无血清刺激下的增殖能力,减少凋亡(P<0.05或0.01)。预适应可以上调iNOS和凋亡抑制基因Bcl-2的表达,下调凋亡促进基因Caspase-9的表达,而这些调节作用可被iNOS的抑制剂氨基胍(AG)抑制(P<0.05)。结论 300μmol.L-1CoCl2预处理HK-2细胞2h可以模拟预适应的保护作用;iNOS和凋亡相关基因在预适应中起到重要的作用。     

白藜芦醇预处理对局灶性脑缺血/再灌注大鼠海马CA1区神经元凋亡的保护作用和机制

目的探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)预处理对局灶性脑缺血/再灌注大鼠海马CA1区神经元凋亡的保护作用及其机制。方法♂SD大鼠60只,随机分为假手术组(Sham)、缺血/再灌注组(I/R)、白藜芦醇预处理组(Res+I/R),每组20只。采用线栓法阻断大脑中动脉血供90 min,拔出栓线造成局部脑区缺血/再灌注损伤。Res+I/R组缺血前1 h腹腔注射白藜芦醇(30 mg·kg-1)。缺血/再灌注后第5天,TUNEL法原位标记海马CA1区凋亡的神经元细胞,免疫组化法检测海马CA1区PI3K、p-Akt及Caspase-3的表达。结果 TUNEL染色结果显示,与I/R组相比较,白藜芦醇预处理明显减少脑缺血/再灌注损伤所引起的大鼠海马CA1区神经元凋亡(P<0.05);免疫组织化学结果显示,与I/R组相比,白藜芦醇预处理使海马CA1区PI3K、p-Akt表达明显增多(P<0.05),Caspase-3表达明显减少(P<0.05)。结论缺血前1 h白藜芦醇预处理对局灶性脑缺血大鼠海马CA1区神经元凋亡具有保护作用,其主要作用机制可能是通过激活PI3K-Akt信号通路进而抑制凋亡相关蛋白Caspase-3的表达有关。     

重复无创肢体缺血预适应对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的研究重复多次无创肢体缺血预适应对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法 SD大鼠24只随机分为对照组、单次无创肢体预适应(LPC)组、反复无创后肢缺血预适应(RLPC)组各8只,观察重复无创性肢体缺血预适应对大鼠心脏缺血再灌注损伤的作用。通过颈动脉插管法测定大鼠的平均动脉压(MAP),肢体Ⅱ导联记录心电图以分析心率、心律失常情况。实验结束后采血测定血清中的丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的活性,留取心脏染色测定各组梗死面积。结果与对照组相比,LPC组和RLPC组可以减小梗死面积,减轻心律失常情况,血清MDA浓度降低,SOD,GSH-PX的活性增加。但LPC组和RLPC组差异无统计学意义。结论 RLPC对大鼠缺血再灌注损伤的保护作用与LPC相似。     

缺血预适应对肢体缺血-再灌注后骨骼肌损伤和细胞凋亡的影响

目的 探讨缺血预适心(IPC)对肢体缺血-再灌注(LI-R)损伤后骨骼肌的保护机制.方法 雄性Wistar大鼠24只随机分为对照(C)组,缺血-再灌注(I-R)组和缺血预适应(IPC+I-R)组,每组8只.分别测定血浆乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)的含量;测定竹骼肌组织中ROS、MDA、Ca~(2+)、Na~+-K~+-ATP酶、Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-P_x)、还原型谷胱甘肽(GSH)的含量,采用免疫组织化学方法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达.采用原位末端标记法(TUNEL)检测凋亡指数(AI).结果 与I-R组比较,IPC+I-R组血浆LDH,CK、ROS、MDA及骨骼肌组织中ROS、MDA、Ca~(2+)含量下降,骨骼肌组织中Na~+-K~+-ATP酶、Ca~(2+)-Mg~(26)-ATP酶、GSH-Px、GSH、水平升高,骨骼肌组织Bax、Caspase-3表达明显减弱,Bcl-2表达增强,Bcl-2/Bax比值升高,AI下降.结论 IPC可能通过减少自由基生成和提高自由基清除酶的活性,降低钙超载抑制骨骼肌细胞的凋亡对LI-R后骨骼肌产生保护作用.     

右美托咪定联合缺血预处理对心脏疾病患者非心脏手术心肌和肾损伤的保护作用

目的探讨右美托咪定联合缺血预处理对心脏疾病患者非心脏手术心肌和肾损伤的保护作用。方法选取2017年5月至2019年1月在我院拟行手术治疗的86例伴有心脏疾病的患者,采用随机数表法分为观察组(43例)及对照组(43例),所有患者均使用静吸复合全麻,观察组采用右美托咪定联合缺血预处理,对照组使用生理盐水。比较两组术中不良心血管事件的发生率,围手术期肌钙蛋白(cTnI)和肌酐(CR)水平,术后心肾不良反应发生率。结果两组术中低血压、高血压、心动过缓的发生率比较差异无统计学意义(P>0.05),观察组心动过速(2.33%vs.18.60%,χ^2=6.08,P=0.02)及心肌缺血(11.63%vs.53.49%,χ^2=17.16,P<0.01)的发生率低于对照组。入室时两组cTnI及Cr水平比较差异无统计学意义(P>0.05),术后两组cTnI及Cr水平均较入室时显著提高(P<0.05);观察组在术后1 h、8 h、24 h的cTnI水平显著低于对照组(P<0.05或P<0.01),在术后8 h、24 h的Cr水平低于对照组(P<0.01)。观察组术后急性肾损伤(AKI)(20.93%vs.44.19%)及室性心律失常(39.53%vs.83.72%)的发生率显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论右美托咪定联合缺血预处理可有效保护心脏患者非心脏手术中的心肾功能。     

灯盏花素联合缺血预适应对兔心肌缺血再灌注细胞凋亡的保护机制

目的:探讨灯盏花素联合缺血预适应对心肌缺血再灌注细胞凋亡的保护作用机制。方法:采用在体兔结扎心肌左旋支建立缺血再灌注损伤模型。采用免疫组化法检测心肌梗死危险区组织细胞色素C、Caspace-3、bcl-2蛋白表达。结果:灯盏花素联合预适应组心肌酶释放较缺血再灌注组明显降低(P<0.01),bcl-2蛋白表达显著增加(P<0.01),细胞色素C及Caspace-3蛋白表达明显减少(P<0.01)。结论:灯盏花素联合缺血预适应可通过减轻细胞色素C的释放,上调Bcl-2表达,下调Capase-3表达从而抑制心肌细胞凋亡。     

氯通道阻断剂对NO诱导离体大鼠海马神经元凋亡的保护作用

目的观察氯通道阻断剂SITS和DIDS对NO诱导的大鼠离体海马神经元凋亡的保护作用。方法离体培养12d的SD大鼠海马神经元,随机分为正常对照组、NO处理组、NO处理后使用氯通道阻断剂组,对各组神经元分别在相应的时间点进行Hoechst荧光染色观察凋亡细胞数和MTT实验定量检测神经元的存活率,Western blot分析凋亡信号分子Caspase-3的变化。结果SITS和DIDS呈剂量依赖性地抑制NO诱导的神经元损伤,并能抑制损伤所引起的Caspase-3的激活,提高神经元的存活率。结论氯通道阻断剂对NO诱导的大鼠海马神经元凋亡有一定的保护作用。